本發(fā)明涉及枸杞根腐病防治生物領(lǐng)域，特別涉及一種枸杞根腐病生防制劑及制備方法。
背景技術(shù)：
青海省是國(guó)家地道中藥材重要產(chǎn)地之一，具有得天獨(dú)厚的自然資源優(yōu)勢(shì)和一定產(chǎn)業(yè)發(fā)展基礎(chǔ)。枸杞是我國(guó)傳統(tǒng)的具有補(bǔ)益功能的名貴中藥材。
青海枸杞種植在2000-3000米以上的世界四大超凈區(qū)之一的青藏高原生長(zhǎng)，種植地海拔高、氣溫低、日照長(zhǎng)、氣候干、光輻射強(qiáng)、晝夜溫差大，植株光合效率高，夜間消耗少，生長(zhǎng)期雨熱同季,空氣相對(duì)濕度低，無(wú)高溫影響，提高了有機(jī)物質(zhì)的積累。種植區(qū)遠(yuǎn)離城鎮(zhèn)、工礦區(qū)，生產(chǎn)環(huán)境潔凈，水體、土壤、大氣未受任何污染，種植區(qū)域相對(duì)獨(dú)立，自成體系，避免了病蟲(chóng)害相互傳播的危害，生產(chǎn)有機(jī)枸杞的基礎(chǔ)條件較好，達(dá)到了國(guó)際同行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。枸杞抗旱、耐鹽域，是理想的經(jīng)濟(jì)和生態(tài)并用樹(shù)種，可鞏固綠洲，改善沙化土地和盆地整體的生態(tài)環(huán)境，改善城市居民生產(chǎn)生活條件，可生長(zhǎng)在沙地，因此可作為水土保持的灌木，在沙漠化防治方面效果突出。
枸杞是我國(guó)傳統(tǒng)有具有補(bǔ)益功能的名貴中藥材，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，枸杞有補(bǔ)肝益腎、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，能有效抵制腫瘤生長(zhǎng)和紅細(xì)胞突變，具有延緩衰老，抗脂肪肝、調(diào)節(jié)血脂和血糖、促進(jìn)造血功能等作用。
青海柴達(dá)木盆地枸杞果實(shí)顆粒大、飽滿，肉質(zhì)核小肥厚，糖份多而甘甜，色澤鮮而亮麗，有利于人體健康的枸杞黃酮和枸杞多糖比異地種植區(qū)高一倍之多。與外產(chǎn)區(qū)比，我省枸杞180-220粒/50g的貢果級(jí)占70％以上(外產(chǎn)區(qū)只占35％)，其中100-130粒/50g的超大果占15％左右(外產(chǎn)區(qū)無(wú)超大果)?？偺呛扛哌_(dá)53.6％-59.6％，而寧夏枸杞總糖含量較之要低，為46.5％。含黃酮30％，總糖12％，多糖10％，氨基酸9.08％，鐵16％，鋅30％。黑果枸杞含17種氨基酸，13種微量元素，其中鈣、鎂、銅、鋅、鐵的含量也遠(yuǎn)高于寧夏枸杞。中科院西北高原生物研究所對(duì)青海德令哈地區(qū)與寧夏中衛(wèi)地區(qū)的枸杞抽樣測(cè)定，我省枸杞營(yíng)養(yǎng)成分、維生素、礦物質(zhì)、氨基酸等含量明顯優(yōu)于寧夏枸杞。
世界枸杞種植95％在我國(guó)，青海枸杞種植面積已居全國(guó)第二，到2020年青海枸杞種植面積達(dá)60萬(wàn)畝，將躍居全國(guó)第一。2012年，青海諾木洪農(nóng)場(chǎng)被吉尼斯世界紀(jì)錄認(rèn)定為“世界海拔最高的連片枸杞種植基地”。柴達(dá)木盆地的綠洲-諾木洪還廣泛分布著至今堪稱國(guó)內(nèi)樹(shù)齡最長(zhǎng)的天然野生枸杞樹(shù)群，有黑果枸杞等6種枸杞屬植物種，在都蘭縣烏龍溝分布有迄今發(fā)現(xiàn)的國(guó)內(nèi)面積最大、最為集中的天然枸杞群落，這些珍貴的天然枸杞種質(zhì)資源，為枸杞新品種培育提供了豐富的遺傳基因。
然而，目前枸杞種植還存在以下問(wèn)題：
枸杞根腐病發(fā)生普遍，危害嚴(yán)重，因病死亡植株每年在2％-6％，最重地發(fā)病達(dá)到40％，死亡率達(dá)25％,給枸杞生產(chǎn)造成很大損失。
根腐病癥狀有以下兩種類型：
根朽型。根或根頸部發(fā)生不同程度腐朽、剝落現(xiàn)象，莖稈維管束變褐色，潮濕時(shí)在病部長(zhǎng)出白色或粉紅色霉層。它又可分小葉型和黃化型兩種。
①小葉型：春季展葉時(shí)間晚，葉小、枝條矮化、花蕾和果實(shí)瘦小，常落蕾，嚴(yán)重時(shí)全株枯死。
②黃化型：葉片黃化，有萎蔫和不萎蔫現(xiàn)象，常大量落葉，嚴(yán)重對(duì)全株枯死，也有落葉后又萌發(fā)新葉，反復(fù)多次后枯死。
腐爛型。根頸或枝稈的皮層變褐色或黑色腐爛，維管束變?yōu)楹稚?。葉尖開(kāi)始時(shí)黃色，逐漸枯焦，向上反卷，當(dāng)腐爛皮層環(huán)繞樹(shù)干時(shí)，病部以上葉全脫落，樹(shù)干枯死，有的則是葉片突然萎蔫枯死，枯葉仍掛在樹(shù)上。這種現(xiàn)象多發(fā)生在7-8月份的高溫季節(jié)。
上述各種類型，也常表現(xiàn)為半邊樹(shù)冠發(fā)病半邊枯萎或僅一枝條發(fā)病和枯萎。有的樹(shù)干病死，而在樹(shù)根頸部又長(zhǎng)出新的蘗生苗。
2、發(fā)病原因：
病原菌隨存活病株越冬，也可隨表土和土中的病株殘?bào)w及病果種子越冬和傳播。病菌從傷口或穿過(guò)組織皮層直接入侵到植物組織內(nèi)部，引起發(fā)病。不同的病原菌和不同的浸染方式，其病害的潛育期也各不相同。在20℃條件下，尖孢鐮刀菌在寄主傷口的條件下致病潛育期3天，而未受傷時(shí)為19天，茄類鐮刀菌依次為5天和19天；同色鐮刀菌在寄主創(chuàng)傷條件下致病潛育期5天。田間積水是增加發(fā)病率的重要原因。通氣性差的土壤比通氣性好的沙壤土增加9％-22.5％；中耕作業(yè)造成根損傷有利于病原菌的入侵。
3、枸杞根腐病
一、病原菌
枸杞(Lyeium barbarum L.)根腐病是一種系統(tǒng)感染病害，病株根和根頸部發(fā)生腐爛，莖桿維管束變褐色。潮濕時(shí)病部偶爾長(zhǎng)出白色或粉紅色霉層(病原菌)。由于根腐，葉片變小，缺少光澤，枝條矮化，果實(shí)瘦?。换蛉~片變黃萎蔫，嚴(yán)重時(shí)植株逐漸枯死。有的病株根頸與枝干的皮層變褐色，腐爛，葉尖變黃，向上卷縮，逐漸焦枯。當(dāng)腐爛皮層環(huán)繞樹(shù)干時(shí)，病部以上樹(shù)干枯死。有的枝葉突然萎蔫干枯，枯葉仍掛在樹(shù)上。枸杞根腐病主要病原菌為3種鐮刀菌，(銳頂鐮刀菌Fusarium acuminatum、串珠鐮刀菌F.monilifome Sheldon及尖孢鐮刀菌F.OxysporumSchlecht)。
致病力強(qiáng)的病原菌可從傷口或表皮直接入侵，而致病力弱的病原菌多從傷口入侵。
枸杞根腐病的發(fā)生與溫、濕度呈正相關(guān)。一般溫度越高、濕度越大，發(fā)病越重。當(dāng)月平均氣溫在21-26℃，田間相對(duì)濕度在大于78％以上時(shí)容易發(fā)病。枸杞不同品種對(duì)根腐病的抗性有顯著差異。
提供一種持續(xù)有效且防治效果好的枸杞根腐病防治藥劑就顯得尤為必要。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于一種枸杞根腐病生防制劑及制備方法，該枸杞根腐病生防制劑的組分由：放線菌中的密旋鏈霉菌、光合細(xì)菌、酵母菌、乳酸菌、枯草芽孢桿菌、解磷菌、纖維素酶活、腐殖酸、凹凸棒等有益微生物菌群以及各種有機(jī)酸植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等代謝產(chǎn)物。并與多種菌株及相關(guān)酶類互不拮抗、相互協(xié)同復(fù)配而制成的一種防止枸杞根腐病的復(fù)合微生物制劑混合物。在環(huán)境20-34度溫度下，微生物制劑在腐殖酸和凹凸棒環(huán)境能夠快速生長(zhǎng)與繁殖，增加了土壤放線菌的數(shù)量，抑制了有害菌鐮刀菌的數(shù)量，達(dá)到了枸杞生長(zhǎng)環(huán)境的微生物環(huán)境的平衡，使枸杞根部不受鐮刀菌腐等有害菌的干擾而健康生長(zhǎng)，同時(shí)提供了19種微量元素，達(dá)到枸杞生長(zhǎng)土壤環(huán)境微生物的平衡，起到了修復(fù)土壤、提高產(chǎn)量的目的，同時(shí)酵母菌、纖維素酶、解磷菌能分解有機(jī)廢物，從而在土壤中加速有機(jī)質(zhì)的分解，將碳、氮、磷、鉀、硫等分解，將大分子蛋白與長(zhǎng)期使用磷酸二銨在土壤中形成的不溶性磷酸鹽轉(zhuǎn)化為作物容易利用的小分子蛋白與可以溶解的磷酸鹽，有利于枸杞吸收，從而增強(qiáng)作物的抗病能力，其中所含的一些功能微生物和微量元素的作用，對(duì)枸杞生長(zhǎng)很有利。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：
一種枸杞根腐病生防制劑，該枸杞根腐病生防制劑的組分按質(zhì)量份數(shù)由密旋鏈霉菌活菌制劑60-70份、光合細(xì)菌5-15份、解磷菌3-4份、枯草芽孢桿菌5-15份、乳酸菌6-10份、酵母菌株3-7份、纖維素酶活1-3份組成。
一種枸杞根腐病生防制劑，各組分的相應(yīng)技術(shù)指標(biāo)為：
一種枸杞根腐病生防制劑的制備方法，該枸杞根腐病生防制劑的制備方法由以下步驟構(gòu)成：
步驟一、將密旋鏈霉菌活菌制劑60-70份、光合細(xì)菌5-15份、解磷菌3-4份、枯草芽孢桿菌5-15份、乳酸菌6-10份、酵母菌株3-7份、纖維素酶活1-3份，稱重后放入攪拌機(jī)中攪拌均勻，得到生物菌劑；
步驟二、將生物菌劑與有機(jī)肥按比例混合：
生物菌劑：有機(jī)肥的比例為1：1～100，充分混勻就得到枸杞根腐病生防制劑。
一種枸杞根腐病生防制劑的制備方法，所述步驟二中，有機(jī)肥為腐熟農(nóng)家肥：腐殖酸：凹凸棒按質(zhì)量比7:2:1混合得到。
進(jìn)一步的，所述枸杞根腐病生防制劑在修復(fù)土壤上的應(yīng)用。
進(jìn)一步的，所述枸杞根腐病生防制劑在增強(qiáng)作物的抗根腐病能力上的應(yīng)用。
相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為：
一種枸杞根腐病生防制劑，其特征在于，該枸杞根腐病生防制劑的組分由：放線菌中的密旋鏈霉菌、光合細(xì)菌、酵母菌、乳酸菌、枯草芽孢桿菌、解磷菌、纖維素酶活、腐殖酸、凹凸棒等有益微生物菌群以及各種有機(jī)酸植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑等代謝產(chǎn)物。并與多種菌株及相關(guān)酶類互不拮抗、相互協(xié)同復(fù)配而制成的一種防止枸杞根腐病的復(fù)合微生物制劑混合物。在環(huán)境20-34度溫度下，微生物制劑在腐殖酸和凹凸棒環(huán)境能夠快速生長(zhǎng)與繁殖，增加了土壤放線菌的數(shù)量，抑制了有害菌鐮刀菌的數(shù)量，達(dá)到了枸杞生長(zhǎng)環(huán)境的微生物環(huán)境的平衡，使枸杞根部不受鐮刀菌腐等有害菌的干擾而健康生長(zhǎng)，同時(shí)提供了19種微量元素，達(dá)到枸杞生長(zhǎng)土壤環(huán)境微生物的平衡，起到了修復(fù)土壤、提高產(chǎn)量的目的，同時(shí)酵母菌、纖維素酶、解磷菌能分解有機(jī)廢物，從而在土壤中加速有機(jī)質(zhì)的分解，將碳、氮、磷、鉀、硫等分解，將大分子蛋白與長(zhǎng)期使用磷酸二銨在土壤中形成的不溶性磷酸鹽轉(zhuǎn)化為作物容易利用的小分子蛋白與可以溶解的磷酸鹽，有利于枸杞吸收，從而增強(qiáng)作物的抗病能力，其中所含的一些功能微生物和微量元素的作用，對(duì)枸杞生長(zhǎng)很有利。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明內(nèi)容做進(jìn)一步詳細(xì)描述：
一種枸杞根腐病生防制劑，該枸杞根腐病生防制劑的組分按質(zhì)量份數(shù)由密旋鏈霉菌活菌制劑60-70份、光合細(xì)菌5-15份、解磷菌3-4份、枯草芽孢桿菌5-15份、乳酸菌6-10份、酵母菌株3-7份、纖維素酶活1-3份組成。
一種枸杞根腐病生防制劑，各組分的相應(yīng)技術(shù)指標(biāo)為：
一種枸杞根腐病生防制劑的制備方法，該枸杞根腐病生防制劑的制備方法由以下步驟構(gòu)成：
步驟一、將密旋鏈霉菌活菌制劑60-70份、光合細(xì)菌5-15份、解磷菌3-4份、枯草芽孢桿菌5-15份、乳酸菌6-10份、酵母菌株3-7份、纖維素酶活1-3份，稱重后放入攪拌機(jī)中攪拌均勻，得到生物菌劑；
步驟二、將生物菌劑與有機(jī)肥按比例混合：
生物菌劑：有機(jī)肥的比例為1：1～100，充分混勻就得到枸杞根腐病生防制劑。
一種枸杞根腐病生防制劑的制備方法，所述步驟二中，有機(jī)肥為腐熟農(nóng)家肥：腐殖酸：凹凸棒按質(zhì)量比7:2:1混合得到。
所述枸杞根腐病生防制劑在修復(fù)土壤上的應(yīng)用。
所述枸杞根腐病生防制劑在增強(qiáng)作物的抗根腐病能力上的應(yīng)用。
實(shí)驗(yàn)例：
設(shè)對(duì)照、孢子粉拌腐殖酸蘸根接種、有機(jī)肥接種3個(gè)處理，每個(gè)處理重復(fù)2次。
孢子粉拌腐殖酸接種：接菌量為1.5g/kg，孢子量為80億。
蘸根接種：將放線菌孢子粉與腐殖酸按質(zhì)量比1:9混勻，加水10-15kg，把枸杞根部蘸后置于避光處，使菌粉均勻包裹枸杞苗外表根后常規(guī)種植。每個(gè)枸杞苗平均接種孢子量為4億，花前測(cè)量平均值，處理的開(kāi)花期比對(duì)照提前6-7天，處理的根系比對(duì)照長(zhǎng)度增長(zhǎng)19％。根數(shù)量增加21.6％，年終增產(chǎn)量19.8％。
下面結(jié)合生防菌對(duì)植株生長(zhǎng)的影響對(duì)本發(fā)明的應(yīng)用原理對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明。
有機(jī)肥接種：1是將該發(fā)明的生防制劑：將1000克+有機(jī)肥(其中有機(jī)質(zhì)大于40％66kg或腐熟農(nóng)家肥1000kg)，攪拌均勻，在第一年播種時(shí)隨有機(jī)肥以基肥形式均勻撒施于地，第二年、第三年生，結(jié)合中耕除草及追肥，將配好菌肥以溝施方式均施入，2是：將1000克配制好的防治枸杞根腐病生物制劑+有機(jī)肥(其中有機(jī)質(zhì)大于40％66kg或腐熟農(nóng)家肥1000kg，攪拌均勻，均勻撒施于666.7平方米的田中，每平方米施入的微生物菌劑量為81億，因枸杞的合理密度為333株/畝，每株占2平方米面積，每株平均擁有有益菌菌量為100億，在酵母菌、乳酸菌、光合菌、纖維素酶酶活在枸杞田中分解有機(jī)質(zhì)，為放線菌提供能量的作用下在田中定植，在合適(溫度、濕度)條件下能夠快速生長(zhǎng)與繁殖，抑制了有害菌的數(shù)量，達(dá)到了枸杞生長(zhǎng)環(huán)境中的微生物的平衡，使枸杞根部不受真菌、鐮刀菌等有害菌的干擾而不生病、達(dá)到枸杞生長(zhǎng)微生物的平衡，起到了修復(fù)土壤微生物菌群、提高產(chǎn)量的目的，同時(shí)酵母菌等菌群能分解有機(jī)廢物，從而在土壤中加速有機(jī)質(zhì)的分解，將碳、氮、磷、鉀、硫等分解，將大分子蛋白轉(zhuǎn)化為作物容易利用的小分子蛋白，易于枸杞吸收，從而增強(qiáng)作物的抗病能力，因每平方米的有益菌增加了81億，同時(shí)施入66kg腐殖酸或1000有效的防止了根(莖)腐病，增產(chǎn)達(dá)到22.3％。
堆肥：將2公斤生防菌加入到1000公斤腐熟牛、羊糞有機(jī)肥(含水量33％-40％)中混合，并攪拌均勻(待用)。
進(jìn)一步需要說(shuō)明的是：本發(fā)明的生防制劑對(duì)人畜無(wú)害，不可與化學(xué)殺菌劑混用，至少前后間隔48小時(shí)后再用。
如果土壤墑情差，施肥后澆水或兌水澆施。避免陽(yáng)光曝曬。
病情嚴(yán)重地塊可適當(dāng)加大劑量，另外需要說(shuō)明的都是：本品不能代替殺菌劑使用。
本發(fā)明所用放線菌菌株均為我國(guó)西部極端生境中篩選的多功能放線菌，由陜西楊陵康照農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司提供。
產(chǎn)品有效成分為鏈霉菌活性孢子。是通過(guò)固態(tài)發(fā)酵制備的連作障礙微生態(tài)修復(fù)劑，所用菌株是從我國(guó)西部極端生境中篩選的多功能放線菌。該菌能產(chǎn)生抑制特定作物土傳病害病原菌的抗生素、分泌植物激素及降解特定作物根泌自毒物質(zhì)，能有效修復(fù)連作作物根區(qū)退化的土壤微生態(tài)環(huán)境，抑制病原菌生長(zhǎng)，減少或消除根泌自毒物質(zhì)，促進(jìn)作物生長(zhǎng)發(fā)育。本品具有促生防病雙重功能，主要用于園藝作物連作障礙的微生物修復(fù)，對(duì)適用作物土傳病害病原菌有專性抑制作用，能有枸杞種植(重茬)土傳病害，增強(qiáng)植株根系和葉片保護(hù)性酶活性，刺激根系生長(zhǎng)，促進(jìn)作物對(duì)養(yǎng)分水分的吸收，提高產(chǎn)量，改進(jìn)品質(zhì)，促進(jìn)早熟。
菌劑的有效成分為放線菌活菌孢子。菌劑不溶于水，與根系周圍土壤直接接觸才能發(fā)揮作用。
菌劑具有調(diào)整根系周圍土壤中微生物數(shù)量種類作用，能抑制有害菌生長(zhǎng)，增加有益菌數(shù)量，減輕土傳病害及連作障礙，刺激根系發(fā)育，促進(jìn)作物生長(zhǎng)，提高產(chǎn)量。
不要單獨(dú)施用菌劑，必須與充分發(fā)酵腐熟的優(yōu)質(zhì)有機(jī)肥、油菜等餅粉或腐殖酸、等肥料配合施用，同步施入NPK復(fù)合肥效果更好。
混合比例，菌劑：有機(jī)肥＝1～100，充分混勻，穴施，4年生枸杞每株650--1000克左右。
菌劑與有機(jī)肥混合施用具有相互增效作用：有機(jī)肥為放線菌提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)放線菌在土壤中繁殖，菌數(shù)愈高，效果愈好；放線菌對(duì)有機(jī)肥的分解有促進(jìn)作用，形成的小分子有機(jī)物對(duì)植物生長(zhǎng)有促進(jìn)作用；菌劑刺激根系發(fā)育，同步施入N、P、K時(shí)，由于作物根系發(fā)達(dá)，可促進(jìn)作物對(duì)土壤中施入的N、P、K及水分的利用能力。
菌劑與有機(jī)肥的配比方法具體為：
菌劑與有機(jī)肥臨用前按1:100比例充分混勻。
方法：菌劑：有機(jī)肥＝1:1逐級(jí)擴(kuò)大，不能把少量菌劑一次加入大量有機(jī)肥中，這樣混不勻影響效果。
例如：200g菌劑+200g有機(jī)肥，充分混勻，得到400g菌肥混合物；400g混合物+400g有機(jī)肥，充分混勻，得到800g菌肥混合物；800g菌肥混合物+800g有機(jī)肥，充分混勻，得到1600g菌肥混合物，依次類推。具體操作必如此細(xì)稱，但應(yīng)當(dāng)逐級(jí)擴(kuò)大，切勿一次加入！且要控制最后的比例。腐殖酸鉀類有機(jī)肥效果好，
另外需要補(bǔ)充說(shuō)明的是：
菌劑不能代替正常施肥，但能通過(guò)促進(jìn)根系發(fā)育提高肥料及水分利用率。
菌劑與復(fù)合肥及有機(jī)肥配合施用效果更好；在水肥條件好及土壤有機(jī)質(zhì)含量較高時(shí)，促生效果更明顯。
菌劑不能與殺菌劑同時(shí)使用。
放線菌適合中性及微堿性土壤。在酸性土壤上施用時(shí)，配合堿性肥料，效果會(huì)更好。
枸杞根腐病普遍發(fā)生.對(duì)其病原進(jìn)行了分離鑒定,常見(jiàn)的典型的有3種病原菌:銳頂鐮刀菌Fusarium acuminatum、串珠鐮刀菌F.monilifomeSheldon及尖孢鐮刀菌F.OxysporumSchlecht)，在PDA培養(yǎng)基上活化備用。
優(yōu)勢(shì)放線菌鑒定
采用酶解法提取放線菌，送南京X生物科技有限公司測(cè)序。發(fā)酵濾液抑菌試驗(yàn)該菌是從供試健株土壤中分離、鑒定的優(yōu)勢(shì)放線菌為密旋鏈霉菌，用優(yōu)勢(shì)放線菌于斜面培養(yǎng)7d，加無(wú)菌水4mL，用竹簽將孢子刮下、攪勻，制成孢子懸液。用1mL無(wú)菌吸管吸取孢子懸液1mL至裝有60mL高氏1號(hào)液體培養(yǎng)基的250mL玻璃瓶中，以4層棉布封口，重復(fù)3瓶。27℃、每分160轉(zhuǎn)的搖床振蕩培養(yǎng)7d后用濾紙過(guò)濾、0.45μm微孔濾膜真空抽濾、0.45μm滅菌微孔濾膜過(guò)濾除菌得發(fā)酵濾液。向已培養(yǎng)鐮刀菌、培養(yǎng)7d)中加入無(wú)菌水4mL，用竹簽將菌絲刮下、攪勻。用1mL無(wú)菌吸管吸取0.1mL菌懸液于PDA菌懸液于改良培養(yǎng)基)平皿上，用刮鏟涂勻。28℃培養(yǎng)4d后，用打孔器制成7mm圓形菌餅，備用。放線菌發(fā)酵濾液與冷卻至50℃左右的PDA(或改良PDA)培養(yǎng)基按體積比1︰4混勻后倒平板,以無(wú)菌水代替放線菌發(fā)酵濾液為對(duì)照。用滅菌竹簽挑取病原菌瓊脂塊置上述平板中央，菌面向下，每處理3次重復(fù)。27℃培養(yǎng)60h，用十字交叉法測(cè)量菌落直徑并計(jì)算抑菌率，其結(jié)果為放線菌54億/克。
尖孢鐮刀菌F.OxysporumSchlecht、銳頂鐮刀菌Fusarium acuminatum、串珠鐮刀菌F.monilifome Sheldon及，在PDA培養(yǎng)基上活化備用。其中尖孢鐮刀菌致病力最強(qiáng)。對(duì)上述病原的生長(zhǎng)溫度，pH值作了室內(nèi)測(cè)定.此病病原菌能隨株，病殘?bào)w和病果種子越冬。枸杞不同品種對(duì)此病抗性有明顯差異，田間積水和根部損傷利于發(fā)病。病株根和根頸部發(fā)生腐爛，莖桿維管束變褐色，潮濕時(shí)病部偶爾長(zhǎng)出白色或粉紅色霉層(病原苗)。由于根腐，葉上樹(shù)干枯死。有的枝葉突然萎蔫干枯，枯葉仍掛在樹(shù)上。上述癥狀在一棵樹(shù)上有的表現(xiàn)為部分主枝發(fā)病，有的樹(shù)干病死后可在根頸部又長(zhǎng)出新枝條。2013年普查枸杞根腐夏季普遍發(fā)生，最輕的病株0.8％，枯死株0.3％；最重的病株40％，枯死株25.5％；平均病株l5％，枯死5％，是枸杞一大病害2013-2016年作者就此病的發(fā)生和防治進(jìn)行了深入研究，結(jié)果如下：
材料與方法，病原菌分離鑒定在青海都蘭縣枸杞園采集不同類型病株的根莖及枝條，沖洗干凈，選病組織經(jīng)消毒后，在馬鈴薯蔗糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基上分離培養(yǎng)。待孢子長(zhǎng)出后用"瓊膠平板表面單孢子挑取法進(jìn)行單孢子分離和培養(yǎng)。分類系統(tǒng)鑒定。種分離物的致病性測(cè)定。
供試菌液的制備 分別將菌種分離物接入鐮刀菌植物接種培養(yǎng)液，在24℃溫箱中培養(yǎng)20天，過(guò)濾后制成各自的接種液。
供試植株 盆栽無(wú)病的實(shí)生枸杞苗。
接種方法 試菌液和對(duì)照(清水)中，白天在室溫下，晚上置24℃溫箱中，5天后統(tǒng)計(jì)各處理發(fā)病株數(shù)。菌液灌根法：將供試菌液澆灌到經(jīng)傷根和未傷根灌200ml，20天后調(diào)查發(fā)病株，記載癥狀，重分離和鑒定。
病原菌越冬及傳播途徑的檢驗(yàn) (一)病殘?bào)w中病原菌越冬檢驗(yàn)于l0月將病殘?bào)w(根、莖)分別置于田間土表和埋于10-20cm深的土壤中，翌年4月分離培養(yǎng),檢驗(yàn)病原菌存活情況。(二)種子及苗木帶菌檢驗(yàn)采病果種子和隨機(jī)抽取苗術(shù)樣株，分離培養(yǎng)。
供試菌液 枸杞根腐病菌尖孢鐮刀菌和銳頂鐮刀菌的等量混合液。接種與調(diào)查，每花盆澆供試菌液200ml，接種第35天調(diào)查。
發(fā)病與中耕傷根的關(guān)系 1.盆栽接種試驗(yàn)：設(shè)傷根和不傷根兩個(gè)處理，每處理2盆4株，重復(fù)4次，處理后35天調(diào)查發(fā)病株率；2.田間試驗(yàn)：選樹(shù)齡10年的枸杞園，設(shè)不傷根，重傷根和常規(guī)中耕法(對(duì)照)3個(gè)處理并觀察相應(yīng)結(jié)果。
大田生物制劑灌根試驗(yàn) 選擇嚴(yán)重度中等的病株和生物菌劑，藥液灌根后40天調(diào)查防治效果。結(jié)果，枸杞根腐病病原菌種類及其致病力結(jié)果表明，枸杞根腐病病原菌為3種典型鐮刀菌；
本發(fā)明生防制劑在使用中將1公斤功能菌加入到2000公斤有機(jī)肥(含水量33％-35％)中混合，并攪拌均勻待用。
菌劑與有機(jī)肥混合施用具有相互增效作用：有機(jī)肥為放線菌提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)放線菌在土壤中繁殖，菌數(shù)愈高，效果愈好；放線菌對(duì)有機(jī)肥的分解有促進(jìn)作用，形成的小分子有機(jī)物對(duì)植物生長(zhǎng)有促進(jìn)作用；菌劑刺激根系發(fā)育，同步施入NPK時(shí)，由于作物根系發(fā)達(dá)，可促進(jìn)作物對(duì)土壤中施入的NPK及水分的利用能力。
本發(fā)明的另一目的在于光合細(xì)菌、酵母菌、乳酸菌、枯草芽孢桿菌、解磷菌、纖維素酶活屬于獨(dú)立營(yíng)養(yǎng)微生物，它能利用土壤接受的太陽(yáng)熱能或以紫外線為能源，將土壤中的硫化氫和碳?xì)浠衔镏械臍浞蛛x出來(lái)，變有害物質(zhì)為無(wú)害物質(zhì)，并以植物根部的分泌物、有機(jī)物、有害氣體(硫化氫等)及二氧化碳、氮等為基質(zhì)，合成糖類、氨基酸、維生素類、氮素化合物和生理活性物質(zhì)等，是肥沃土壤和促進(jìn)動(dòng)植物生長(zhǎng)的主力部隊(duì)。光合菌的代謝物質(zhì)或者被植物直接吸收，成為其它微生物繁殖的養(yǎng)分，能夠增殖光合細(xì)菌，其它的有益微生也會(huì)增殖。例如：解磷菌根菌以光合菌分泌的氨基酸為食餌，它既能溶解不溶性磷，又能與固氮菌共生，使其固氮能力成倍提高。
本發(fā)明的另一目的在于乳酸菌群：乳酸菌(厭氧型)，它以攝取光合細(xì)菌酵母菌產(chǎn)生的糖類等物質(zhì)為基礎(chǔ)，產(chǎn)生乳酸。乳酸具有很強(qiáng)的殺菌能力，能有效抑制有害微生物的活動(dòng)，以及有機(jī)物的急劇腐敗分解。乳酸菌能夠使常態(tài)下不易分解的木質(zhì)素和纖維素等變得容易分解，并且消除未分解有機(jī)物產(chǎn)生的種種弊端，在有機(jī)物發(fā)酵分解上發(fā)揮突擊隊(duì)的重要作用，它將未腐熟的有機(jī)物質(zhì)轉(zhuǎn)化成對(duì)動(dòng)植物有效的養(yǎng)分。乳酸菌還能有效抑制連作障礙產(chǎn)生的致病菌增殖。致病菌活躍，有害線蟲(chóng)會(huì)急劇增加，植物就會(huì)衰弱，乳酸菌抑制了致病菌，有害線蟲(chóng)便會(huì)逐漸消失。
本發(fā)明的另一目的在于凹凸棒對(duì)農(nóng)作物土壤環(huán)境的影響凹凸棒粘土的表面積140m2/g凹凸棒和緩釋肥的完美結(jié)合，極大的減輕了化肥對(duì)土壤的損害，很好的改善了農(nóng)作物生長(zhǎng)的土壤環(huán)境，為其農(nóng)作物的生長(zhǎng)提供充足的養(yǎng)分凹凸棒石具有很強(qiáng)的吸附性，吸水性、催化性和離子交換性，是在一種非常有使用價(jià)值的非金屬礦質(zhì)資源。凹凸棒石獨(dú)特的物理化學(xué)特性，能很好的與緩釋肥集合在一起，既能有效的提高肥料的利用率，又能為其作物的生長(zhǎng)發(fā)育提供有益的Mg2+、Si4+、Al3+、Fe3+其含量為SiO2 55.6-60.5；Al2O33 9.0-10.1；Fe2O35.7-6.7；Na2O0.03-0.11；K2O 0.96-1.30；CaO 0.42-1.95MgO 10.7-11.35；MnO 0.61；TiO2 0.32-0.6微量元素。
本發(fā)明的另一目的在于腐植酸本身就含有植物生長(zhǎng)所需的元素碳、氫、氧、氮等，同時(shí)它又可以提高氮、磷、鉀肥的利用率，所以，腐植酸對(duì)于作物的增產(chǎn)效果是非常明顯的。
產(chǎn)品主要有效成分為鏈霉菌活性孢子。是通過(guò)腐殖酸培養(yǎng)基固態(tài)發(fā)酵制備并與光合細(xì)菌、酵母菌、乳酸菌、枯草芽孢桿菌、解磷菌、纖維素酶活等的共同作用枸杞根腐病、連作障礙微生態(tài)修復(fù)劑，所用菌株是從我國(guó)西部極端生境中篩選的多功能放線菌。該菌能產(chǎn)生抑制特定作物土傳病害病原菌的抗生素、分泌植物激素及降解特定作物根分泌自毒物質(zhì)，能有效修復(fù)連作作物根區(qū)退化的土壤微生態(tài)環(huán)境，抑制病原菌生長(zhǎng)，減少或消除根分泌產(chǎn)生自毒物質(zhì)，促進(jìn)作物生長(zhǎng)發(fā)育。本品具有促生防病雙重功能，主要用于枸杞作根腐病的微生物修復(fù)，對(duì)適用作物土傳病害病原菌有專性抑制作用，能有效預(yù)防和控制草莓、西瓜、甜瓜連茬種植(重茬)土傳病害，增強(qiáng)植株根系和葉片保護(hù)性酶活性，刺激根系生長(zhǎng)，促進(jìn)作物對(duì)養(yǎng)分水分的吸收，提高產(chǎn)量，改進(jìn)品質(zhì)，促進(jìn)早熟。
當(dāng)年種植時(shí)可以將750公斤有機(jī)肥均勻撒施后，旋耕后栽枸杞苗，1年-3年生的每株300-550克溝施或穴施，4年生枸杞每株650克左右，4年以上枸杞每株1000克加氮、磷、鉀。
以上所述，僅為本發(fā)明的具體實(shí)施方式，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何不經(jīng)過(guò)創(chuàng)造性勞動(dòng)想到的變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。因此，本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書(shū)所限定的保護(hù)范圍為準(zhǔn)。