本發(fā)明屬于化學(xué)、化妝品和醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種黃酮類化合物及其制備方法及其應(yīng)用，特別是一種(Z，E)5-OH-3-(苯基衍生物-次甲基)-二氫黃酮-7-O-糖苷及其制備方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：
黃酮類化合物在自然界中種類繁多，含量豐富，提取制備工藝簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉。由于天然黃酮系植物酶的次生代謝產(chǎn)物，多含有酚羥基。由于酚羥基分布不均勻，分占兩個(gè)苯環(huán)，未形成鄰二酚OH，抗氧化性作用較弱，代表性的化合物如橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷、地奧司明、野漆樹苷、芹菜素、橙皮素、柚皮素、甲基橙皮苷。即使含有鄰二酚羥基，由于兩個(gè)苯環(huán)具有較好的共平面性，分子與分子易于層層排列，形成結(jié)晶，水溶性低，生物利用度低下，抗氧化能力有限。代表性化合物有黃芩苷、蘆丁、燈盞花素、金銀花苷、黃芩素、木犀草素。茶多酚中兒茶素的混合物，結(jié)構(gòu)近似，物理化學(xué)性質(zhì)接近，分離較為困難。且活性較強(qiáng)的兒茶酚中表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)、表兒茶素沒食子酸酯(ECG)，因分子中含有酯鍵，性質(zhì)不穩(wěn)定，應(yīng)用受到限制。
橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷、地奧司明、野漆樹苷、芹菜素、橙皮素、柚皮素、甲基橙皮苷、黃芩苷、蘆丁、燈盞花素、金銀花苷、黃芩素、木犀草素等黃酮類化合物，在抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒、抗腫瘤、擴(kuò)張心腦血管等作用的強(qiáng)弱，主要依賴于水溶性和清除氧自由基的能力。因此，如何來提高其在上述各領(lǐng)域中的應(yīng)用效率。首先，引入大的基團(tuán)，增加空間位阻，破環(huán)分子中兩個(gè)苯環(huán)的共平面性，進(jìn)而增加水溶性；其次，增加酚羥基的基團(tuán)和雙鍵數(shù)目，可以提高抗氧化性；再者增加酚羥基和其他極性基團(tuán)，也能提高分子的極性，增加水溶性；最后，引入甲氧基，氯素等小極性基團(tuán)，可以延緩代謝，延長(zhǎng)作用時(shí)間。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
：
本發(fā)明就是要提供一種(Z，E)5-OH-3-(苯基衍生物-次甲基)-二氫黃酮-7-O-糖苷及其制備方法及其應(yīng)用；是以5-OH二氫黃酮-7-O-糖苷為原料，通過aldol condensation反應(yīng)，在3-位引入較大的基團(tuán)，破環(huán)分子的平面性，得到水溶性較好或酚羥基較多的化合物，提高黃酮類化合物水溶性及抗氧化性，較EGCG、ECG中酯鍵穩(wěn)定性高的化合物，提高清除氧自由基的能力或更好的生物利用度，以其具有較佳的抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒、抗癌、抗菌、心腦血管保護(hù)的化合物，能廣泛應(yīng)用于食品、化妝品、藥品等工業(yè)中。
發(fā)明所述的技術(shù)方案為，
本發(fā)明(Z，E)5-OH-3-(苯基衍生物-次甲基)-二氫黃酮-7-O-糖苷，其結(jié)構(gòu)通式如(Ⅰ)所示，
其中：R1可為葡萄糖基(-glucose)、蕓香糖基(-[[6-O-(6-Deoxy-alpha-L-mannopyranosyl)-beta-D-glucopyranosyl]oxy])、新橙皮糖基(-[[2-O-(6-Deoxy-alpha-L-mannopyranosyl)-beta-D-glucopyranosyl]oxy])、葡萄糖醛酸基(7-beta-D-glucopyranose acid)；R2可為-H、-OH、-OCH3；R3可為-OH、-OCH3、-O-glucose、-O-glucuronic、-O-neohesperidose、-F、-Cl、-Br中單基團(tuán)或多基團(tuán)；R4可為-H、-OH、-OCH3，-Cl、-Br、-NO2、-COOH、亞甲二氧基中單基團(tuán)或多基團(tuán)。
本發(fā)明(Z，E)5-OH-3-(苯基衍生物-次甲基)-二氫黃酮-7-O-糖苷的制備方法，其是以5-OH二氫黃酮-7-O-糖苷為原料，在極性溶劑中，以有機(jī)堿和有機(jī)酸為催化劑，與苯甲醛衍生物通過aldol condensation反應(yīng)制得，其中5-OH二氫黃酮-7-O-糖苷與苯甲醛衍生物的質(zhì)量摩爾比例為3:1-1:3。
進(jìn)一步的控制所述的反應(yīng)溫度在室溫至120℃。
本發(fā)明所述的5-OH二氫黃酮-7-O-糖苷，其結(jié)構(gòu)式見(II)，
其中：R1、R2、R3與結(jié)構(gòu)(I)中的R1、R2、R3基團(tuán)含義相同，代表性化合物有橙皮苷(Cas:520-26-3)、柚皮苷(CAS:10236-47-2)、新橙皮苷(CAS:13241-33-3)、甲基橙皮苷、二氫黃芩苷、二氫燈盞花素、圣草酚-7-O-glucose、橙皮素-7-O-glucose、柚皮素-7-O-glucose、二氫野黃芩素、二氫漢黃芩苷。
本發(fā)明所述的苯甲醛衍生物，見結(jié)構(gòu)式(III)
其中：R4與結(jié)構(gòu)(I)中的R4基團(tuán)含義相同。
本發(fā)明所述的極性溶劑為DMSO、DMF、THF、醇類中任意一種或幾種；所述的醇類為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇中任意一種。
本發(fā)明所述的有機(jī)堿為二甲胺、二乙胺、四氫吡咯、哌啶、哌嗪、嗎啉中任意一種；進(jìn)一步的優(yōu)選為四氫吡咯。
本發(fā)明所述的有機(jī)酸，為甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、苯甲酸、苯乙酸、苯丙酸，乳酸、琥珀酸、酒石酸中任意一種，進(jìn)一步的優(yōu)選為冰醋酸。
本發(fā)明一種(Z，E)5-OH-3-(苯基衍生物-次甲基)-二氫黃酮-7-O-糖苷，應(yīng)用于抗炎、抗氧化食品、化妝品組合物及抗菌、抗腫瘤、心腦血管保護(hù)的藥物的組合物。
本發(fā)明所述的(Z，E)-5-OH-3-(苯基衍生物-次甲基)-二氫黃酮-7-O-糖苷為一種藥物組合物。
本發(fā)明反應(yīng)條件溫和，可在醇、THF、DMSO、DMF中進(jìn)行，aldol condensation反應(yīng)部位單一，產(chǎn)物易于提純，整個(gè)制備工藝簡(jiǎn)單，有利于工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明所述的化合物，水溶性、醇溶性、抗氧化能增加，在抗菌、抗炎、抗氧化、抗病毒、心腦血管保護(hù)等保護(hù)，較原有的黃酮具有先天優(yōu)勢(shì)，更易制備成合適的制劑，使其具有進(jìn)一步應(yīng)用于食品、藥品、化妝品領(lǐng)域，具有潛在的臨床應(yīng)用前景及潛在的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
如果苯甲醛衍生物中含有鹵素，有利提高親脂性，進(jìn)中樞能力增強(qiáng)，在中樞系統(tǒng)發(fā)揮作用也將增加；如果苯甲醛衍生物含有-COOH、-CH2-N(CH3)2、-SO3H、-OSO3H可以提高極性，并且通過酸或堿制備相應(yīng)的鹽，進(jìn)一步增加水溶性；如果苯甲醛上的-NH2、-OH預(yù)先制備成?；铮诳s合產(chǎn)物中含有這些?；鶊F(tuán)，可以延緩代謝速度，有利于增加作用時(shí)間。
本發(fā)明的原理：
需要指出的是，理論上是生成反式(E)，但由于二氫黃酮分子中2-位為苯基或苯基衍生物，4-位為吡咯基團(tuán)，其基團(tuán)較大，當(dāng)在二氫黃酮3-位引入較大基團(tuán)，其空間位阻的特別明顯，導(dǎo)致新成鍵難以自由旋轉(zhuǎn)，生成兩種中間體產(chǎn)物，反應(yīng)分子式如下：
兩種中間體產(chǎn)物脫水亦形成順反兩種異構(gòu)體，反應(yīng)式如下：
由于糖苷極性較大，采用硅膠柱不易將上述兩種化合物分離開來；最后需要指出的醛基的正電性越高，越容易參與反應(yīng)；當(dāng)用無機(jī)堿，容易引起二氫黃酮開環(huán)，生成查爾酮，查爾酮難以進(jìn)行上述反應(yīng)。
具體實(shí)施方式：
本發(fā)明實(shí)施例公開了(Z，E)5-OH-二氫黃酮7-O-糖苷-3-次甲基苯衍生物的制備的方法；本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。
實(shí)施例1：3-(4-羥基苯次甲基)-橙皮苷的制備：
稱取含量為95％的橙皮苷1.0 g，對(duì)羥基苯甲醛0.20 g，加入DMSO 3.0 mL四氫吡咯137μL，冰醋酸100μL，70℃攪拌反應(yīng)24h，加入硅膠拌樣，以氯仿-甲醇梯度洗脫，得黃色粉末775 mg，為3-(4-羥基苯次甲基)-橙皮苷(cpd 1)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ12.63(d,1H：5-OH)，10.27(s,1H：3'-OH)，9.17(s,1H：15-OH)，[8.32+7.94(d,1H：11-H)]，7.27-7.31(2H：13-H+17-H)，6.75-7.00(m,5H:14-H+16-H+2'-H+5'-H+6'-H)，6.66(d,1H：2-H)，6.05-6.12(dd,J＝2.0,2H：H-6+H-8)，3.74(s,3H：4'-OCH3)，5.36(1H：Gly-1”)，4.90(1H：Rha-1”')，1.10(dd,3H：Rha-6”')；13C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ185.81(d,C-4)，165.97(d,C-7)，164.34(C-9)，160.46(C-5)，148.55(C-4')，147.75(C-3')，133.42(C-1')，130.38(C-3)，118.93(C-6')，115.01(C-2')，112.85(C-5')，103.94(C-10)，97.29(C-6)，96.80(C-8)，79.62(C-2)，55.94(4'-OCH3)；159.91(C-15)、139.62(C-11)、127.87(C-13+C-17)、124.76(C-12)，116.56(C-14+C-16)；Gly：101.09(Gly-1”)、73.51(Gly-2”)、76.82(Gly-3”)、71.19(Gly-4”)、76.04(Gly-5”)、66.65(Gly-6”)；Rha：99.87(Rha-1”')、70.09(Rha-2”')、70.64(Rha-3”')、72.65(Rha-4”')、68.80(Rha-5”')、18.29(Rha-6”')。MS(ES-)3.25e5，m/z：714.15[M]-，608.96[M-(4-OH-C6H4-CH-)]-，405.48[M-Gly-Rha]-，301.90[M-Gly-Rha-(4-OH-C6H4-CH-)+2H+]-，300.58(100％)[M-Gly-Rha-(4-OH-C6H4-CH-)+H+]-；MS(ES+)4.856e，m/z：737.57[M+Na+]，738.55[M+H++Na+]，739.49[M+2H++Na+]，475.45[M-Rha-(4-OH-C6H4-)+H+]，476.45(100％)M-Rha-(4-OH-C6H4-)+2H+]，477.36[M-Rha-(4-OH-C6H4-)+3H+]，407.31[M-Rha-Gly+2H+]，calc.for：C35H38O16，反應(yīng)式如下：
實(shí)施例2：3-(3,4-羥基苯次甲基)-橙皮苷的制備：
稱取含量為95％的橙皮苷1.5 g，加入四氫吡咯200μL，DMSO 4.0 mL溶解，加入冰醋酸150μL，于60℃攪拌反應(yīng)3h后，分次加入3,4-羥基苯甲醛0.25 g，8h內(nèi)加完，繼續(xù)反應(yīng)3h，加入硅膠拌樣，以氯仿-甲醇梯度洗脫，得黃色粉末803mg，為3-(3,4-羥基苯次甲基)-橙皮苷(cpd 2)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ12.63(d,1H：5-OH)，9.17(s,1H：3'-OH)，[8.31+7.85(d，1H：11-H)]，6.99–6.70(m,6H：2'-H+5'-H+6'-H+13-H+16-H+17-H)，6.56(d,1H：2-H)，6.09(d,2H：6-H+8-H)，5.37(s,1H：2-H)，3.74(s,3H：4'-OCH3)；5.37(s,1H：Gly-1”'-H)，4.95(d,1H：Rha-1”'-H)，1.10(d,3H：Rha-6”')。13C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ185.79(C-4)，165.92(C-7)，164.34(C-9)，160.20(C-5)，149.21(C-4')，148.51(C-3')，147.14(C-15)，146.07(C-14)，139.97(C-11)，130.34(C-1')，130.21(C-3)，127.77(C-12)，125.20(C-17)，124.44(C-6')，118.23(C-16)，116.49(C-13)，114.99(C-2')，112.70(C-5')，103.89(C-10)，97.29(C-6)，96.81(C-8)，79.83(C-2)，55.95(4'-OCH3)；101.10(Gly-1”)，73.52(Gly-2”)，76.04(Gly-3”)，71.21(Gly-4”)，76.71(Gly-5”)，66.81(Gly-6”)；99.86(Rha-1”')，70.64(Rha-2”')，70.79(Rha-3”')，72.57(Rha-4”')，68.78(Rha-5”'),18.32(Rha-6”')。MS(ES-)8.18e6，m/z：729.64(100％)[M-H]-，730.65[M]-，731.6[M+H]-；MS(ES+)1.17e7，m/z：753.58(100％)[M+Na+]，754.31[M+H++Na+]，755.63[M+2H++Na+]。calc.for：C35H38O17，反應(yīng)式如下：
實(shí)施例3：3-(3,4-羥基苯次甲基)-柚皮苷的制備
稱取含量為98％的柚皮苷1.5g，加入四氫吡咯200μL，DMSO 4.0 mL溶解，加入冰醋酸150μL，于60℃攪拌反應(yīng)3h后，分次加入3，4-羥基苯甲醛0.30 g，8h內(nèi)加完，繼續(xù)反應(yīng)3h，加入硅膠拌樣，以氯仿-甲醇梯度洗脫，得黃色粉末845mg，為3-(3,4-羥基苯次甲基)-柚皮苷(cpd 3)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ12.70(d,1H：5-OH)，9.65(br,1H：15-OH)，9.13(br,1H：14-OH)，[8.31+7.85(d,1H：11-H)]，7.17-7.30(2H：13-H+17-H),6.68-6.90(m,5H：2'-H+3'-H+5'-H+6'-H+16-H)，6.50-6.65(d,1H：2-H)，5.32(1H：2-H)；5.0-5.20(2H：Gly-1”'-H+Rha-1”'-H)1.17(d,3H：Rha-6”')。13C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ185.76(C-4)，165.27(C-7)，164.14(C-9)，160.12(C-5)，158.24(C-4')，133.48 C-3)，129.23(C-1')，128.93((C-2'+C-6')，116.24(C-3'+C-5')，103.86(C-10)，97.31(C-6)，96.65(C-8)，79.63(C-2)；146.54(C-15)，146.08(C-14)，139.97(C-11)，127.74(C-12)，125.15(C-17)，116.17(C-16)，115.27(C-13)；Gly：101.20(Gly-1”)，77.54(Gly-2”)，77.31(Gly-3”)，72.28(Gly-4”)，76.63(Gly-5”)，60.79(Gly-6”)；Rha：100.91(Rha-1”')，70.02(Rha-2”')，70.87(Rha-3”')，72.34(Rha-4”')，68.78(Rha-5”')，18.49(Rha-6”')。MS(ES-)3.51e，m/z：699.82(100％)[M-H]-，700.78[M]-，701.77[M+H]-；MS(ES+)1.90e7，m/z：723.77[M+Na+]，724.72[M+H++Na+]，475.53(100％)[M+3H+-C14H12O3]，476.52M+4H+-C14H12O3]，497.55[M+Na++2H+-C14H12O3]，498.51[M+Na++3H+-C14H12O3]，499.48[M+Na++4H+-C14H12O3]。(calc.for：C34H36O16)，反應(yīng)式如下：
需要指出的是質(zhì)譜裂解規(guī)律可能如下：
實(shí)施例4：3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-橙皮苷的制備，
稱取含量為95％的橙皮苷1.5 g 3,4-二甲氧基苯甲醛0.402g，加入無水DMSO 4.5ml，
加入四氫吡咯200μL，加入冰醋酸150μL，于70℃攪拌反應(yīng)12h后，加入硅膠拌樣，以氯仿-甲醇梯度洗脫，得黃色粉末1045 mg，為3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-橙皮苷(cpd 4)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ12.63(d，1H：5-OH)，9.19(s,1H：3'-OH)，[8.32+7.99(d，1H：11-H)],7.10–6.80(m,6H：2'-H+5'-H+6'-H+13-H+16-H+17-H),6.65(d,1H：2-H),6.20-6.00(d,2H：6-H+8-H)，3.74(s,3H：4'-OCH3)，3.80(s,3H：15-OCH3)，3.64(s,3H：14-OCH3)；5.35(s,1H：Gly-1”'-H)，4.95(d,1H：Rha-1”'-H)，1.10(d,3H：Rha-6”')。13C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ185.62(d，C-4)，166.13(C-7)，164.37(C-9)，160.30(C-5)，149.12(C-4')，148.66(C-3')，130.57(C-1')，128.85(C-3)，124.42(C-6')，115.21(C-2')，112.74(C-5')，103.94(C-10)，97.20(C-6)，96.77(C-8)，79.63(C-2)，55.98(4'-OCH3)；151.36(C-15)，147.20(C-14)，139.54(C-11)，126.38(C-12)，119.24(C-17)，114.40(C-16)，122.35(C-16)，55.80(14-OCH3)，56.12(15-OCH3)；101.11(Gly-1”)，73.52(Gly-2”)，76.06(Gly-3”)，71.19(Gly-4”)，76.82(Gly-5”)，66.63(Gly-6”)；99.88(Rha-1”')，70.10(Rha-2”')，70.79(Rha-3”')，72.58(Rha-4”')，68.80(Rha-5”')，18.30(d，Rha-6”')。MS(ES-)3.65e6，m/z：757.69(100％)[M-H]-，739.69[M+Na+-3CH3]-，713.32[M-3CH3]-，699.42[M-2CH3-OCH3+H+]-，698.50[M-2CH3-OCH3]-，610.34[M-Rha-H]-；MS(ES+)6.41e5，m/z：781.61(100％)[M+Na+]，782.60[M+H++Na+]，783.52[M+2H++Na+]，759.85[M+H+]，759.85[M+H+]，613.54[M-Rha+2H+]。(calc.for：C37H42O17)，反應(yīng)式如下：
實(shí)施例5：3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷的制備：
稱取含量為98％的柚皮苷1.0 g，加入DMSO 4 mL溶解，3,4-二甲氧基苯甲醛0.35 g，四氫吡咯210μL，加入冰醋酸160μL，60℃密閉攪拌反應(yīng)20h，加入正丁醇60ml，加入0.5％鹽酸水溶液60 mL稀釋，棄去水液，用水15ml分次洗脫正丁醇層，旋干，以甲醇溶劑，硅膠拌樣，氯仿-甲醇梯度洗脫，得黃色粉末896mg，為3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷(cpd 5)。1H NMR(400 MHz,DMSO)δ12.63(d，1H：5-OH)，9.69(s,1H：3'-OH)，[8.30+7.99(d，1H：11-H)],7.30–7.23(2H：13-H+17-H),7.10–6.70(m,5H：2'-H+3'-H+5'-H+6'-H+16-H),6.65(d,1H：2-H),6.20-5.90(d,2H：6-H+8-H)，3.79(s,3H：15-OCH3)，3.61(s,3H：14-OCH3)；5.30(s,1H：Gly-1”'-H)，5.07(1H：Rha-1”'-H)，1.15(d,3H：Rha-6”')。13C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ185.49(d,C-4)，165.67(C-7)，164.29(C-9)，160.20(C-5)，158.52(C-4')，133.50(C-3)，129.53(C-1')，128.79(C-2'+C-6')，116.27(C-3'+C-5')，103.35(C-10)，97.33(C-6)，96.57(C-8)，78.02(C-2)；151.35(C-15)，149.09(C-14)，139.58(C-11)，126.37(C-12)，125.18(C-16)，112.38(C-16)，111.20.35(C-13)，55.72(14-OCH3)，56.12(15-OCH3)；101.12(Gly-1”)，77.51(Gly-2”)，76.60(Gly-3”)，72.27(Gly-4”)，77.32(Gly-5”)，60.82(Gly-6”)；100.00(Rha-1”')，70.05(Rha-2”')，70.87(Rha-3”')，72.32(Rha-4”')，68.80(Rha-5”'),18.45(d，Rha-6”')；MS(ES-)1.03e7，m/z：727.66(100％)[M-H]-，728.54[M]-，729.60[M+H]-，730.51[M+2H]-；MS(ES+)1.04e6，m/z：751.52(100％)[M+Na+]，752.54[M+H++Na+]，753.59[M+2H++Na+]，754.67[M+3H++Na+]，767.53[M+K+]，768.52[M+H++K+]，730.56[M+2H+]，728.20[M+]，700.45[M-2CH3+2H+]。(calc.for：C37H42O17)，反應(yīng)式如下：
實(shí)施例6：3-(4-N,N二甲基苯次甲基)-橙皮苷的制備：
稱取含量為95％的橙皮苷1.5 g，4-N,N二甲基苯0.402 g，加入無水DMSO 5.0 mL，四氫吡咯170μL，加入冰醋酸150μL，充氮?dú)獗Ｗo(hù)下，于70℃攪拌反應(yīng)24 h后，加入硅膠拌樣，以氯仿-甲醇梯度洗脫，得紅色粉末0.762 mg，為3-(4-N,N二甲基苯次甲基)-橙皮苷(cpd 6)。1H NMR(400 MHz,DMSO-d6)δ12.86(d，1H：5-OH)，9.14(s,1H：3'-OH)，7.93(s，1H：11-H),δ7.29(2H：13-H+17-H),6.98–6.77(m,3H：2'-H+5'-H+6'-H)，6.74(2H：14-H+16-H)，6.60(s,1H：2-H)，6.12-6.00(3H：6-H+8-H)3.74(s,3H：4'-OCH3)，2.99(s,6H：15-N(CH3)2)，5.37(s,1H：Gly-1”'-H)，4.94(dd,1H：Rha-1”'-H)，1.10(d,3H：Rha-6”')。13C NMR(100 MHz,DMSO-d6)δ185.37(C-4)，165.63(C-7)，164.06(C-9)，160.10(C-5)，148.50(C-4')，147.10(C-3')，133.59(C-1')，130.68(C-3)，118.87(C-6')，115.13(C-2')，112.67(C-5')，103.85(C-10)，97.21(C-6)，96.81(C-8)，79.83(C-2)，55.95(4'-OCH3)；152.14(C-15)，140.19(C-11)，125.05(C-13+C17)，120.084(C-12)，112.37(C-14+C16)；Gly：101.11(Gly-1”)，73.52(Gly-2”)，76.83(Gly-3”)，71.22(Gly-4”)，76.97(Gly-5”)，66.82(Gly-6”)；Rha：99.87(Rha-1”')，70.19(Rha-2”')，70.64(Rha-3”')，72.63(Rha-4”')，68.78(Rha-5”')，18.32(Rha-6”')。MS(ES-)1.57e6，m/z：740.64(100％)[M-H]-，741.54[M]-，742.51[M+H]-，714.61[M-2CH3+3H]-；MS(ES+)4.67e5，m/z：764.60(100％)[M+Na+]，765.63[M+H++Na+]，766.53[M+2H++Na+]，742.57[M+H+]，773.42[M+H+]，744.23[M+2H+]，728.713[M-CH3+2H+]，701.71[M-CH3+2H+-CO]，701.71[M+H+]。(calc.for：C37H43 N O15)，反應(yīng)式如下：
實(shí)施例7：3-(3,4-二甲氧基苯亞甲基)-柚皮苷的制備，
照實(shí)施例5，將溶劑DMSO換成THF，THF量為20ml，溫度為60℃，其它條件不變，反應(yīng)時(shí)間為36h，反應(yīng)完畢旋干，加入甲醇溶解，硅膠拌樣，以氯仿-甲醇梯度洗脫，得3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷黃色粉末782 mg。
實(shí)施例8：3-(3,4-二甲氧基苯亞甲基)-柚皮苷的制備，
照實(shí)施例5，將溶劑DMSO換成丙三醇-甲醇(3:1)混合溶液20ml，溫度為80℃，其它條件不變，反應(yīng)時(shí)間為10h，反應(yīng)完畢,加入正丁醇80ml，加入0.5％鹽酸水溶液60 mL稀釋，棄去水液，用水15ml分次洗脫正丁醇層，旋干，以甲醇溶劑，硅膠拌樣，氯仿-甲醇梯度洗脫，得3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷黃色粉末672mg。
實(shí)施例9：3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷的制備，
照實(shí)施例5，將溶劑DMSO換成乙二醇溶劑12ml，將四氫吡咯換成哌啶，哌啶量為240μL溫度為80℃，其它條件不變，反應(yīng)時(shí)間為15h，反應(yīng)完畢,加入正丁醇80ml，加入0.5％鹽酸水溶液60 mL稀釋，棄去水液，水15ml分次洗脫正丁醇層，旋干，以甲醇溶劑，硅膠拌樣，氯仿-甲醇梯度洗脫，得3-(3,4-二甲氧基苯亞甲基)-柚皮苷黃色粉末512mg。
實(shí)施例10：3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷的制備，
照實(shí)施例5，將溶劑DMSO換成DMF，將四氫吡咯換成二乙胺，二乙胺量為230μL，冰乙酸用量為300μL，溫度為90℃，其它條件不變，反應(yīng)完畢,加入正丁醇80ml，加入水溶液60 mL稀釋，棄去水液，水15ml分次洗脫正丁醇層，旋干，以甲醇溶劑，硅膠拌樣，氯仿-甲醇梯度洗脫，得3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷黃色粉末486mg。
實(shí)施例11：3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷的制備，
照實(shí)施例5，將冰乙酸換成乳酸，其它條件不變，得3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷黃色粉末742mg。
實(shí)施例12：3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷的制備，
照實(shí)施例5，將冰乙酸換成丙酸，其它條件不變，得3-(3,4-二甲氧基苯次甲基)-柚皮苷黃色粉末796mg。
實(shí)施例13：3-(4-Cl苯次甲基)-柚皮苷的制備，
照實(shí)施例5，將3,4-二甲氧基苯甲醛換成4-Cl苯甲醛，溫度降為常溫?cái)嚢璺磻?yīng)，反應(yīng)時(shí)間為72h，其它條件不變，反應(yīng)完畢,加入硅膠拌樣，氯仿-甲醇梯度洗脫，得3-(4-Cl苯次甲基)-柚皮苷黃色粉末922 mg(cpd 7)。702.17[M-]，(calc.for：C34H35ClO14)。
實(shí)施例14：3-(3,4,5-三甲氧基苯次甲基)-橙皮苷的制備，
照實(shí)施例4，將3,4-二甲氧基苯甲醛換成3,4,5-三甲氧基苯甲醛，反應(yīng)時(shí)間為72h，其它條件不變，反應(yīng)完畢,加入硅膠拌樣，氯仿-甲醇梯度洗脫，得3-(3,4,5-三甲氧基苯次甲基)-橙皮苷黃色粉末786 mg(cpd 8)。788.25[M-]，(calc.for：C38H44O18)。
下述實(shí)施例主要是對(duì)本發(fā)明所述的5-OH-3-(苯基衍生物-次甲基)-二氫黃酮-7-O-糖苷，應(yīng)用于抗炎、抗氧化食品、化妝品組合物及抗菌、抗腫瘤、心腦血管保護(hù)的藥物的組合物的使用情況的說明。
實(shí)施例15：
本實(shí)施例的目的是測(cè)定其結(jié)構(gòu)修飾產(chǎn)物后溶解度的變化，以橙皮苷、柚皮苷及其結(jié)構(gòu)修飾產(chǎn)物為例說明。根據(jù)藥典對(duì)極易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、難溶的規(guī)定。取供實(shí)驗(yàn)化合物10mg，用移液槍或移液管加入不同溶劑，密閉超聲20s，密閉放置1h后觀察溶解現(xiàn)象，如果不溶，繼續(xù)增加溶劑體積用量，重復(fù)上述操作記錄溶液體積用量。根據(jù)藥典規(guī)定，判斷化合物溶解性能，見表1，
表1橙皮苷、甲基橙皮苷、柚皮苷及其結(jié)構(gòu)修飾產(chǎn)物在不同溶劑中溶解度對(duì)照
說明：表1表明橙皮苷經(jīng)過結(jié)構(gòu)3-次甲基苯衍生物的結(jié)構(gòu)修飾，新引入的D環(huán)，含有極性基團(tuán)，如羥基、胺基，甲氧基等，增大了同溶劑的作用力；此外，因空間位阻作用，B、D環(huán)發(fā)生發(fā)生扭曲，共平面變差，結(jié)晶形成難度增加，顯著增加了溶解性，溶解性能優(yōu)良。當(dāng)然，也給純化帶來困難，不易結(jié)晶來提純。此外，含有羥基的苯甲醛與橙皮苷縮合，對(duì)橙皮苷一定的增溶作用，另其在水中、醇中、丙酮中有一定溶解度。
實(shí)施例16：
本實(shí)施方式的目的：是初步評(píng)價(jià)結(jié)構(gòu)修飾產(chǎn)物對(duì)抗氧化能力的影響：采用DPPH法和Fenton反應(yīng)法，以橙皮苷、柚皮苷及其結(jié)構(gòu)修飾產(chǎn)物為例說明。
對(duì)DPPH·清除試驗(yàn)：DPPH·是一種穩(wěn)定的自由基，其醇溶液呈深紫色，在517nm處有一吸收峰。反應(yīng)系統(tǒng)中的自由基清除劑可以和DPPH的單電子配對(duì)而使A517nm降低，因此，根據(jù)A517nm的變化來檢測(cè)自由基的清除情況，評(píng)價(jià)樣品的抗氧化能力。甲基橙皮苷設(shè)置6個(gè)梯度的濃度，為5、10、15、20、25、30、60μg/mL的樣品50％乙醇溶液，取2.0 mL樣品，加人1.0mLDPPH甲醇溶液(3.0×10-4 mol/L)，混合30min后在520nm處測(cè)定各樣品吸光值(Ai)，每份樣品平行操作3次，最后取其平均值。DPPH·自由基清除率K按公式計(jì)算：K(％)＝[1-(Ai-Aj)/Ac]×100式中：Ac為2.0 mL50％乙醇加入1.0mL DPPH甲醇溶液(3.0×10-4 mol/L)混合后的吸光度，Aj為2.0mL樣品加入1.0mL甲醇混合后的吸光度。待測(cè)樣品簡(jiǎn)寫不變，樣品如下：橙皮苷、柚皮苷、cpd 1-8，結(jié)果見表2：
表2橙皮苷、甲基橙皮苷、柚皮苷及其結(jié)構(gòu)修飾產(chǎn)物的抗DPPH·的能力
說明：清除DPPH·自由基的劑量，主要和供電子有關(guān)，增加雙鍵，對(duì)抗氧化能力略有增加，增加能夠和羰基共軛的羥基，胺基，可以顯著提升抗氧化能力。如3,4-二羥基，抗氧化能力增加了近1倍。特別是隨濃度增加，溶解度較大，共軛能力增加的，其抗氧化能力的優(yōu)勢(shì)更加明顯。
對(duì)·OH清除試驗(yàn)：參照Fenton反應(yīng)，利用H202，與Fe2+混合產(chǎn)生·OH，但·OH活性很高，存活時(shí)間短，在體系內(nèi)加入水楊酸，能與·0H有效結(jié)合，產(chǎn)生有色化合物，在產(chǎn)物在510nm下有強(qiáng)吸收。若在體系中加入抗氧化物質(zhì)，便會(huì)與水楊酸競(jìng)爭(zhēng)·OH，從而使有色物質(zhì)減少。在固定反應(yīng)時(shí)間的前提下，向相同的反應(yīng)體系(8.8mmo1/L的H202溶液2mL，9mmol/L的FeSO4溶液2mL，9mo1/L的水楊酸-乙醇溶液2mL)加入不同濃度的甲基橙皮苷溶液2 mL。最后加H202開始反應(yīng)，37℃反應(yīng)0.5h，以蒸餾水為參比，與試劑的空白液做比對(duì)，在510 nm處測(cè)量各濃度下的吸光度，便能測(cè)定甲基橙皮苷溶液對(duì)·OH的清除作用，其清除率計(jì)算公式：清除率(％)＝[1-(Ax-Axo)/Ao]×100％式中：Ao為空白對(duì)照液的吸光度；Ax為加入樣品溶液后的吸光度；Axo為不加顯色劑H202樣品溶液本底的吸光度。待測(cè)樣品不變。結(jié)果見表3：
表3橙皮苷、甲基橙皮苷、柚皮苷及其結(jié)構(gòu)修飾產(chǎn)物的抗·OH的能力
說明：從表3表明，橙皮苷、柚皮苷分子中引入供電子基，可以提高其清除自由基的能力，特別是3-(3,4-羥基苯次甲基)-柚皮苷、3-(3,4-羥基苯次甲基)-橙皮苷抗氧化能力遠(yuǎn)高于甲基橙皮苷，可以代替后者，可作為食品、藥品、化妝品中抗氧劑。
實(shí)施例17
本實(shí)施例的目的：初步評(píng)價(jià)結(jié)構(gòu)修飾產(chǎn)物對(duì)抗炎化能力的影響：采用二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)法，以橙皮苷、柚皮苷及其結(jié)構(gòu)修飾產(chǎn)物為例說明。
二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹：取昆明種小鼠132只,按體重隨機(jī)分為22組,每組6只,雌雄各半,即模型組(灌服0.5％CMC液0.4mL/20g)，陽(yáng)性藥組(萘普生45mg/kg)，橙皮苷、柚皮苷、cpd1-8化合物各為兩組(分別灌服0.6％及0.3％藥品)。以上各組小鼠每日給藥1次/d,連續(xù)5 d,于末次給藥后30min,于小鼠右耳前后兩面均勻涂抹二甲苯50μL,右耳作對(duì)照,致炎后30min脫頸椎處死小鼠,以7mm直徑打孔器取下耳緣左、右片,分別用電子天平稱重,以左、右耳片重量差表示腫脹度,并計(jì)算抑制率(％)＝(模型組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/模型組平均腫脹度×100％。進(jìn)行組間顯著差比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4：
表4橙皮苷、柚皮苷衍生物對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳腫脹的影響
與陰性組比*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001
說明，本發(fā)明所述黃酮類化合物，對(duì)抗炎化能力的影響顯著。