專(zhuān)利名稱(chēng)：用于制備構(gòu)樹(shù)提取物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于制備構(gòu)樹(shù)(Broussonetia kazinoki)提取物的方法。
背景技術(shù)：
黑色素是一種黑褐色的色素，起阻擋紫外線(xiàn)的作用，從而具有從紫外線(xiàn)中保護(hù)皮膚的功能。因此，當(dāng)皮膚被暴露于紫外線(xiàn)中時(shí)，體內(nèi)將產(chǎn)生大量的黑色素，以保護(hù)皮膚。膚色取決于黑色素的含量。黑色素的含量越多，皮膚則越黑。因此，黑色素的大量生成將引發(fā)疹斑、色斑、雀斑、黑斑等。因此，能夠抑制黑色素生成的物質(zhì)將具有美白皮膚的效果。酪氨酸酶(Tyrosinase)是一種酶,其能使酪氨酸轉(zhuǎn)化成多巴(dopa),相繼被氧化成多巴奎寧(dopa quinine)。然后，多巴奎寧被聚合而形成黑色素。換言之，酪氨酸酶起能
夠催化黑色素生成的酶的作用，從而能抑制酪氨酸酶的物質(zhì)可以具有美白皮膚的效果。
發(fā)明內(nèi)容
摶術(shù)問(wèn)是頁(yè)本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供用于制備構(gòu)樹(shù)提取物的方法，所述構(gòu)樹(shù)提取物含有高純度且展示出顯著的穩(wěn)定性的活性成分。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供通過(guò)上述方法制得的構(gòu)樹(shù)提取物，所述構(gòu)樹(shù)提取物含有高純度的、用于美白皮膚的活性成分，而且對(duì)黑色素生成和酪氨酸酶的活性有顯著的抑制效果。此外，本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供皮膚外用組合物，所述組合物含有所述構(gòu)樹(shù)提取物，并且具有顯著的美白皮膚的效果。技術(shù)方案在一方面，本發(fā)明提供用于制備構(gòu)樹(shù)提取物的方法，所述方法包括如下步驟(I)用溶劑對(duì)構(gòu)樹(shù)進(jìn)行提?。?2)將來(lái)自步驟(I)的構(gòu)樹(shù)提取物靜置；和(3)使來(lái)自步驟(2)的構(gòu)樹(shù)提取物進(jìn)行結(jié)晶。在另一方面，本發(fā)明提供通過(guò)上述方法制得的、用于美白皮膚的構(gòu)樹(shù)提取物。在另一方面，本發(fā)明提供含有所述構(gòu)樹(shù)提取物的皮膚外用組合物。
_0] 有益.效果根據(jù)本發(fā)明的一方面，用來(lái)制備構(gòu)樹(shù)提取物的方法可以制備含有一種活性成分的構(gòu)樹(shù)提取物，所述活性成分展示高濃度和顯著的穩(wěn)定性。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，通過(guò)上述方法可以制備構(gòu)樹(shù)提取物，而且所述構(gòu)樹(shù)提取物具有顯著的美白皮膚的效果，同時(shí)展示顯著的穩(wěn)定性。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，皮膚外用組合物含有所述構(gòu)樹(shù)提取物，并且具有顯著的美白皮膚的效果。
圖I為展示構(gòu)樹(shù)提取物的構(gòu)樹(shù)醇(kazinol) C的含量(％)與抑制酪氨酸酶的效果(%)之間關(guān)系的圖表。
圖2為展示能用來(lái)表明在高速逆流色譜法(HSCCC)分離物中含有構(gòu)樹(shù)醇C的高效液相色譜分析法(HPLC analysis)的結(jié)果。
具體實(shí)施例方式這里使用的術(shù)語(yǔ)“提取物”是指，用任何方法從自然物質(zhì)中提取成分而獲得的任何物質(zhì)。所述提取物包括，通過(guò)使用水或有機(jī)溶劑從天然物質(zhì)中提取的可溶于所述溶劑的成分，以及從天然物質(zhì)中提取的特定成分(如油類(lèi))中獲得的物質(zhì)。這里使用的“皮膚”不僅包括覆蓋動(dòng)物的臉或身體表面的組織，而且還包括頭皮和毛發(fā)。下面將詳細(xì)地描述本發(fā)明。
眾所周知，構(gòu)樹(shù)提取物包含作為美白皮膚的活性成分的構(gòu)樹(shù)醇F，所述構(gòu)樹(shù)醇F將通過(guò)抑制酪氨酸酶的活性來(lái)展示其美白皮膚的效果。已知，構(gòu)樹(shù)提取物所含的構(gòu)樹(shù)醇C與曲酸(kojic acid)相比具有顯著的抑制酪氨酸酶的效果。然而，所述用于美白皮膚的活性成分具有不穩(wěn)定的活性，這使得所述提取物難以用于商業(yè)化。因此，如有能夠用來(lái)制備構(gòu)樹(shù)提取物的方法，所述構(gòu)樹(shù)提取物含有高純度的且具有穩(wěn)定性的、美白皮膚的活性成分，便能制備對(duì)抑制酪氨酸酶的活性具有更為良好的效果的構(gòu)樹(shù)提取物，并且易于實(shí)現(xiàn)商業(yè)化。在一方面，本發(fā)明提供用于制備構(gòu)樹(shù)提取物的方法，所述方法包括如下步驟(I)用溶劑對(duì)構(gòu)樹(shù)進(jìn)行提??；(2)將來(lái)自步驟(I)的構(gòu)樹(shù)提取物靜置；和(3)使來(lái)自步驟(2)的構(gòu)樹(shù)提取物進(jìn)行結(jié)晶。 本發(fā)明的方法所用的構(gòu)樹(shù)是屬蕁麻目桑科植物。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，構(gòu)樹(shù)包括小構(gòu)樹(shù)(Broussonetia kazinoki Siebold)、白花堯花(Wikstroemia trichotoma)或黃瑞香(Edgeworthia papyrifera)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，構(gòu)樹(shù)可以為I 3年生的構(gòu)樹(shù)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，構(gòu)樹(shù)包括構(gòu)樹(shù)的任何部位中的一個(gè)或多個(gè)部位。例如，本發(fā)明中所用的構(gòu)樹(shù)可以包括構(gòu)樹(shù)的葉、花、莖、枝干、根部、果實(shí)和種子。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，構(gòu)樹(shù)可以為構(gòu)樹(shù)的根皮。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，用所述溶劑提取構(gòu)樹(shù)的步驟之前，用于制備構(gòu)樹(shù)提取物的方法可以進(jìn)一步包括，通過(guò)清洗、干燥并切割來(lái)制備構(gòu)樹(shù)的步驟。具體地，用于制備構(gòu)樹(shù)的步驟可以包括如下過(guò)程收集構(gòu)樹(shù)，切割收集的構(gòu)樹(shù)中的根部并剝離根皮；用水清洗所剝下的根皮；在通風(fēng)良好的地方，將清洗過(guò)的根皮進(jìn)行干燥5 7天；和以10 20cm的長(zhǎng)度切割所述干燥過(guò)的根皮。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，所述用于制備構(gòu)樹(shù)提取物的方法包括用溶劑提取構(gòu)樹(shù)的步驟。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述溶劑包括有機(jī)溶劑，特別地，包括乙醇、乙醚、乙酸乙酯、丙酮或氯仿，但不限于這些溶劑。所述乙醇包括C1-C5低級(jí)醇，其包括選自甲醇、乙醇、異丙醇、正丙醇、正丁醇和異丁醇中的任意一種物質(zhì)或者其中兩種或兩種以上物質(zhì)的混合物，但不限于這些溶劑。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所用的所述溶劑的用量可以為相當(dāng)于構(gòu)樹(shù)重量的5 20倍。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，在50 100°C之間所述提取可以進(jìn)行I 10小時(shí)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，在60 90°C之間所述提取可以進(jìn)行3 8小時(shí)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，在60 80°C之間所述提取可以進(jìn)行4 6小時(shí)。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，用所述溶劑提取構(gòu)樹(shù)的步驟之后，用于制備構(gòu)樹(shù)提取物的方法可以進(jìn)一步包括，過(guò)濾所述構(gòu)樹(shù)提取物的步驟，以去除不溶性成分。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述過(guò)濾可以用濾紙來(lái)實(shí)現(xiàn)。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，過(guò)濾構(gòu)樹(shù)提取物的步驟之后，用于制備構(gòu)樹(shù)提取物的方法可以進(jìn)一步包括，將過(guò)濾所得的構(gòu)樹(shù)提取物進(jìn)行濃縮的步驟。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，可以在不超過(guò)80°C的溫度下進(jìn)行所述濃縮，具體為不超過(guò)60°C，直至所述提取物的體積達(dá)到濃縮前體積的1/10 1/20。在本發(fā)明的一方面，所述用于制備構(gòu)樹(shù)提取物的方法可以包括，將所述構(gòu)樹(shù)提取物處于靜置的步驟。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，將所述構(gòu)樹(shù)提取物處于靜置的步驟可以在-5 25°C之間進(jìn)行I 40小時(shí)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，將所述構(gòu)樹(shù)提取物處于靜置的步驟可以在O 20°C之間進(jìn)行5 30小時(shí)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，將所述構(gòu)樹(shù)提取物處于靜置的步驟可以在O 15°C之間進(jìn)行10 25小時(shí)。通過(guò)在低溫下使所述構(gòu)樹(shù)提取物處于靜置來(lái)沉淀雜質(zhì)，而且所沉淀的成分是在所述溶劑中溶解度低的物質(zhì)且不會(huì)·影響所述構(gòu)樹(shù)提取物的效果，如抑制黑色素生成或抑制酪氨酸酶的效果。從而，會(huì)進(jìn)一步提高所述構(gòu)樹(shù)提取物的效果，如抑制黑色素生成或抑制酪氨酸酶的效果。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，將所述構(gòu)樹(shù)提取物處于靜置的步驟之后，用于制備所述構(gòu)樹(shù)提取物的方法可以進(jìn)一步包括，過(guò)濾所述構(gòu)樹(shù)提取物的步驟，以去除所沉淀的不溶性成分。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述過(guò)濾可以用濾紙來(lái)實(shí)現(xiàn)。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，用于制備所述構(gòu)樹(shù)提取物的方法可以進(jìn)一步包括，將所過(guò)濾的構(gòu)樹(shù)提取物進(jìn)行再濃縮的過(guò)程。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，可以在不超過(guò)80°C的溫度下進(jìn)行所述再濃縮，具體為不超過(guò)60°C，直至所述提取物的體積達(dá)到再濃縮之前體積的 1/2 1/3。在本發(fā)明的一方面，用于制備所述構(gòu)樹(shù)提取物的方法可以包括，使所述構(gòu)樹(shù)提取物進(jìn)行結(jié)晶的步驟。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，通過(guò)將所述構(gòu)樹(shù)提取物置于5 15°C的水中攪拌I 20小時(shí)來(lái)實(shí)現(xiàn)所述結(jié)晶。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，通過(guò)將所述構(gòu)樹(shù)提取物置于O 10°C的水中攪拌I 15小時(shí)來(lái)實(shí)現(xiàn)所述結(jié)晶。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，通過(guò)將所述構(gòu)樹(shù)提取物置于O 7°C的水中攪拌I 10小時(shí)來(lái)實(shí)現(xiàn)所述結(jié)晶。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，水可以為相當(dāng)于所述構(gòu)樹(shù)提取物體積的5 30倍的純凈水，具體為10 20倍。當(dāng)添加的水越多且水溫越低，所述構(gòu)樹(shù)提取物越容易形成結(jié)晶。通過(guò)實(shí)現(xiàn)上述結(jié)晶的過(guò)程，將進(jìn)一步提高所述構(gòu)樹(shù)提取物的效果，如抑制酪氨酸酶的效果。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，將所述構(gòu)樹(shù)提取物進(jìn)行結(jié)晶的步驟之后，用于制備所述構(gòu)樹(shù)提取物的方法可以進(jìn)一步包括，將所述構(gòu)樹(shù)提取物處于靜置的步驟。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，在O 10°C的溫度下所述靜置可以進(jìn)行10 30小時(shí)。此過(guò)程能促進(jìn)所述提取物中沉淀物的生成。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，用于制備所述構(gòu)樹(shù)提取物的方法可以包括，將所述構(gòu)樹(shù)提取物處于靜置后形成沉淀物時(shí)，去除上層溶液并收集所述結(jié)晶的構(gòu)樹(shù)提取物的步驟。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，收集所述結(jié)晶的構(gòu)樹(shù)提取物的步驟之后，用于制備所述構(gòu)樹(shù)提取物的方法可以進(jìn)一步包括，將所述構(gòu)樹(shù)提取物進(jìn)行干燥以獲得粉末的步驟。通過(guò)用任何常用的干燥方法進(jìn)行所述干燥，優(yōu)選為冷凍干燥法。CN 102946894 A書(shū)明說(shuō)4/19 頁(yè)
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，使所述構(gòu)樹(shù)提取物進(jìn)行結(jié)晶的步驟之后，用于制備所述構(gòu)樹(shù)提取物的方法可以進(jìn)一步包括，將所述構(gòu)樹(shù)提取物加載至載體上的步驟。通過(guò)實(shí)現(xiàn)上述加載步驟，可以提高所述構(gòu)樹(shù)提取物中活性成分的活性的穩(wěn)定性。所述活性成分包括能展示美白皮膚的效果的成分。具體地，所述活性成分可以為構(gòu)樹(shù)醇C。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述載體包括選自聚乳酸(PLA)、聚己二酸乙二醇酯(PEA)，聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)，聚甲基丙烯酸丁酯(PBMA)，三甲胺甲基丙烯酸乙酯 (TMAEMA),固體脂質(zhì)納米粒(SLN)和二氧化硅中的一種物質(zhì)或者其中兩種或兩種以上物質(zhì)的混合物。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，所述載體包括聚乳酸(PLA)、聚甲基丙烯酸丁酯/ 三甲胺甲基丙烯酸乙酯(PBMA/TMAEMA)共聚物、聚己二酸乙二醇酯(PEA)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、固體脂質(zhì)納米粒(SLN)或二氧化硅。通過(guò)將所述構(gòu)樹(shù)提取物加載至上述載體上， 可以有效并容易地提高其穩(wěn)定性。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所加載的所述構(gòu)樹(shù)提取物的量占所述載體重量的O.01 30wt%。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，所加載的所述構(gòu)樹(shù)提取物的量占所述載體重量的I. O 20wt%。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，所加載的所述構(gòu)樹(shù)提取物的量占所述載體重量的I. O 10wt%。在上述指定的范圍內(nèi)使用所述構(gòu)樹(shù)提取物時(shí)，不僅可以充分地展現(xiàn)本 發(fā)明所預(yù)想的效果，并能同時(shí)滿(mǎn)足所述提取物的穩(wěn)定性和安全性，而且從成本效益方面來(lái)講，最好在上述指定的范圍之內(nèi)使用所述構(gòu)樹(shù)提取物。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，通過(guò)本領(lǐng)域所熟知的任何常用方法，將所述構(gòu)樹(shù)提取物加載至所述載體上。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，使所述構(gòu)樹(shù)提取物進(jìn)行結(jié)晶的步驟之后，用于制備所述構(gòu)樹(shù)提取物的方法可以進(jìn)一步包括，用兩相溶劑體系通過(guò)高速逆流色譜法(HSCCC)從所述構(gòu)樹(shù)提取物中收集美白皮膚的活性成分的步驟。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，所述美白皮膚的活性成分包含構(gòu)樹(shù)醇C。通過(guò)所述方法，利用組合物之間分配系數(shù)的不同，分離并收集所述美白皮膚的活性成分。
為了更精確地進(jìn)行分離，可以從能易于溶解所述美白皮膚的活性成分的溶劑中選取兩相溶劑體系，所述兩相溶劑體系為當(dāng)混合時(shí)能分離成兩相且其中美白皮膚的活性成分的分配系數(shù)接近I的兩相溶劑體系。此時(shí)，其他組合物的分配系數(shù)不能與美白皮膚的活性成分之間的分配系數(shù)重疊。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述兩相溶劑體系中的美白皮膚的活性成分的分配系數(shù)可以為O. 90 I. 10。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，所述兩相溶劑體系中的美白皮膚的活性成分的分配系數(shù)可以為O. 95 I. 05。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，所述兩相溶劑體系中的美白皮膚的活性成分的分配系數(shù)可以為O. 97 I. 03。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述兩相溶劑體系可以包括己烷、乙酸乙酯、甲醇和水。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例中，所述兩相溶劑體系可以包括比例為1-10:1-10:1-10:1-10 的己烷、乙酸乙酯、甲醇和水，具體為1-5:1-5:1-5:1-5，優(yōu)選為1-3:1-3:1-3:1-3。此時(shí)，所述溶劑間的比例可以為重量比或體積比。
在另一方面，本發(fā)明提供通過(guò)上述方法制得的用于美白皮膚的構(gòu)樹(shù)提取物。所述構(gòu)樹(shù)提取物將通過(guò)本發(fā)明的方法制得，所述方法與傳統(tǒng)的提取方法不同，包括在低溫下靜置所述提取物并通過(guò)攪拌而誘導(dǎo)結(jié)晶的步驟。因此，所述構(gòu)樹(shù)提取物可以包含高純度的美6白皮膚的活性成分。所述美白皮膚的活性成分包括構(gòu)樹(shù)醇C。所述構(gòu)樹(shù)提取物與已知具有美白皮膚效果的現(xiàn)有物質(zhì)相比具有更好的抑制黑色素生成和酪氨酸酶活性的效果，而且展不顯著的美白皮膚的效果。
進(jìn)一步，通過(guò)將所述構(gòu)樹(shù)提取物加載至所述載體上的穩(wěn)定化過(guò)程，提高具有不穩(wěn)定活性的用于美白皮膚的活性成分如構(gòu)樹(shù)醇C的穩(wěn)定性，從而所述構(gòu)樹(shù)提取物具有更好的抑制黑色素生成及酪氨酸酶活性的效果，進(jìn)而具有更好的美白皮膚的效果。此外，被加載至載體上的構(gòu)樹(shù)提取物展示出顯著的皮膚安全性，從而可以在皮膚外用組合物中所使用。
在另一方面，本發(fā)明提供含有所述構(gòu)樹(shù)提取物的皮膚外用組合物。所述皮膚外用組合物包含所述構(gòu)樹(shù)提取物，所述構(gòu)樹(shù)提取物含有具有高純度且穩(wěn)定活性的美白皮膚的活性成分，從而所述皮膚外用組合物展示出顯著的抑制黑色素生成及酪氨酸酶活性的效果， 進(jìn)而具有顯著的美白皮膚的效果。此外，所述皮膚外用組合物不會(huì)引起皮膚的異常反應(yīng)，因此可以安全使用。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，含有所述構(gòu)樹(shù)提取物的皮膚外用組合物包括化妝品組合物。
所提供的化妝品組合物可以為適于局部涂抹的任何劑型。例如，所述化妝品組合物可以為溶液、水包油型乳液、油包水型乳液、懸浮液、固體、凝膠、漿糊、泡沫或噴霧形式的組合物。這些劑型可以通過(guò)本領(lǐng)域所熟知的任何常用方法來(lái)制備。
除上述成分外，所述化妝品組合物可以包含其他能提高所述組合物的主效果的且不影響其主效果的成分。本發(fā)明的化妝品組合物可以包括選自維生素、多肽、多糖和鞘脂中的一種物質(zhì)。此外，本發(fā)明的化妝品組合物可以包含保濕劑、潤(rùn)膚劑、表面活性劑、紫外線(xiàn)吸收劑、防腐劑、消毒劑、抗氧化劑、PH調(diào)節(jié)劑、有機(jī)和無(wú)機(jī)顏料、調(diào)味劑、冷卻劑或止汗劑。在不影響本發(fā)明的目的及效果的前提下，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可容易地選擇所述化妝品組合物中的上述組成物的含量。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，含有所述構(gòu)樹(shù)提取物的皮膚外用組合物包含藥物組合物。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述藥物組合物的劑型可以為固體、溶液、懸浮液、乳液、凝膠、漿糊或噴霧劑，但不限于這些劑型。根據(jù)本領(lǐng)域所熟知的任何常用方法，可以通過(guò)使用表面活性劑、賦形劑、保濕劑、乳化劑、懸浮劑、用于滲透壓的鹽或緩沖劑、著色劑、調(diào)味劑、穩(wěn)定劑、防腐劑或其他常用的添加劑來(lái)制備所述藥物組合物的劑型。
本發(fā)明的藥物組合物的活性成分的劑量將根據(jù)受試者的年齡、性別和體重、疾病的病理情況或嚴(yán)重程度、給藥途徑或醫(yī)生的診斷而有所不同。根據(jù)上述因素，本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以確定所述活性成分的劑量，而且所述活性成分的每天哦劑量可以為，例如O.001 50mg/kg/天,優(yōu)選為O. I 5mg/kg/天,但不限于這些劑量。
下面，將通過(guò)實(shí)施例、對(duì)比實(shí)施例、劑型實(shí)施例和測(cè)試實(shí)施例來(lái)更為詳細(xì)地描述本發(fā)明。然而，這些實(shí)施例、對(duì)比實(shí)施例、劑型實(shí)施例和測(cè)試實(shí)施例僅以說(shuō)明為目的，不會(huì)限制本發(fā)明的范圍。
測(cè)試實(shí)施例I :構(gòu)樹(shù)提取物的活件成分的確定
I.構(gòu)樹(shù)醇C的確定
在構(gòu)樹(shù)的乙醇提取物中，通過(guò)質(zhì)譜分析法和NMR分析法確定構(gòu)樹(shù)醇C (分子量:464)，而且所述構(gòu)樹(shù)提取物中的構(gòu)樹(shù)醇C的含量為8 15%。
2.用于評(píng)估抑制酪氨酸酶的效果的方法
在乙醇中，溶解50mg的用來(lái)評(píng)估抑制酪氨酸酶活性的試樣，以制成IOOmg的溶液。 取IOml的所述溶液，其中加入乙醇，制成IOOml的試樣溶液。加入500 μ I的基質(zhì)溶液、 450 μ I的純凈水和50 μ I的所述試樣溶液，并與500 μ I的緩沖液進(jìn)行混合，然后在所述混合物中加入50μ I的酶(酪氨酸酶)溶液。在37°C下，將所得混合物反應(yīng)10分鐘，然后隨即在冰上靜置5分鐘，最后在490nm下測(cè)量吸光度。根據(jù)所述試樣相對(duì)于空白試樣的吸光度， 評(píng)估所述試樣的抑制酪氨酸酶的效果。
3.構(gòu)樹(shù)醇C與抑制酪氨酸酶的效果的關(guān)系
通過(guò)高效液相色譜法(HPLC)分析在所述構(gòu)樹(shù)提取物中構(gòu)樹(shù)醇C的含量，然后按照所述構(gòu)樹(shù)醇C的含量的函數(shù)來(lái)評(píng)估抑制酪氨酸酶的效果。所述評(píng)估結(jié)果在圖I中展示。如圖I所示，當(dāng)所述構(gòu)樹(shù)提取物中的構(gòu)樹(shù)醇C的含量在增加時(shí)，所述抑制酪氨酸酶的效果也在提聞。
測(cè)試實(shí)施例2 :對(duì)抑制酪氨酸酶的效果的評(píng)估
I.根據(jù)提取溶劑對(duì)抑制酪氨酸酶的效果的評(píng)估
通過(guò)清洗，干燥以及切割構(gòu)樹(shù)根皮而制備3個(gè)試樣且分別加入到乙醇(實(shí)施例I)、 乙酸乙酯(對(duì)比實(shí)施例I)以及丙酮(對(duì)比實(shí)施例2)中，并在60 80°C下進(jìn)行提取4 6小時(shí)，然后評(píng)估所述提取物的產(chǎn)率。下一步，根據(jù)測(cè)試實(shí)施例I. 2的方法，評(píng)估所述3個(gè)提取物的抑制酪氨酸酶的效果。下面表I中展示所述評(píng)估的結(jié)果。
[表 I]
權(quán)利要求
1.用于制備構(gòu)樹(shù)提取物的方法，所述方法包括如下步驟 (1)用溶劑對(duì)構(gòu)樹(shù)進(jìn)行提??； (2)將來(lái)自步驟(I)的構(gòu)樹(shù)提取物靜置；和 (3 )使來(lái)自步驟(2 )的構(gòu)樹(shù)提取物進(jìn)行結(jié)晶。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述構(gòu)樹(shù)包括構(gòu)樹(shù)的根皮。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述溶劑包括乙醇。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述提取的步驟在50 100°C的溫度下進(jìn)行I 10小時(shí)。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，將構(gòu)樹(shù)提取物靜置的步驟在-5 25°C的溫度下進(jìn)行I 40小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，使所述構(gòu)樹(shù)提取物進(jìn)行結(jié)晶的步驟包括，在-5 25°C的溫度下將所述構(gòu)樹(shù)提取物在水中攪拌I 20小時(shí)。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，使所述構(gòu)樹(shù)提取物進(jìn)行結(jié)晶的步驟之后，所述方法進(jìn)一步包括，將所述構(gòu)樹(shù)提取物加載至載體上的步驟。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述載體為選自聚乳酸(PLA)、聚己二酸乙二醇酯(PEA)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚甲基丙烯酸丁酯(PBMA)、三甲胺甲基丙烯酸乙酯(TMAEMA)、固體脂質(zhì)納米粒(SLN)和二氧化硅中的一種物質(zhì)或者其中兩種或兩種以上物質(zhì)的混合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所使用的構(gòu)樹(shù)提取物占所述載體重量的O. 01-30wt%o
10.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，使所述構(gòu)樹(shù)提取物進(jìn)行結(jié)晶的步驟之后，所述方法進(jìn)一步包括，用兩相溶劑體系通過(guò)HSCCC (高速逆流色譜法)從所述構(gòu)樹(shù)提取物中獲取美白皮膚的活性成分的步驟。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述美白皮膚的活性成分包含構(gòu)樹(shù)醇C0
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述兩相溶劑體系包括己烷、乙酸乙酯、甲醇和水，其比例為1-10 1-10 1-10 1-10。
13.用于美白皮膚的構(gòu)樹(shù)提取物，該提取物是通過(guò)權(quán)利要求I 12中任何一項(xiàng)所述的方法制得的。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的構(gòu)樹(shù)提取物，其特征在于，所述構(gòu)樹(shù)提取物具有抑制黑色素生成和酪氨酸酶的效果。
15.一種皮膚外用組合物，其含有權(quán)利要求13中所述的構(gòu)樹(shù)提取物。
全文摘要
本發(fā)明提供用于制備構(gòu)樹(shù)提取物的方法，其包括以下步驟用溶劑對(duì)構(gòu)樹(shù)進(jìn)行提??；將從上一步中提取的構(gòu)樹(shù)提取物進(jìn)行分離的步驟；和使從上一步中分離出的構(gòu)樹(shù)提取物進(jìn)行結(jié)晶的過(guò)程。通過(guò)上述制備構(gòu)樹(shù)提取物的方法，可以制備具有顯著的美白皮膚的效果和良好的穩(wěn)定性的構(gòu)樹(shù)提取物。
文檔編號(hào)A61Q19/00GK102946894SQ201180031528
公開(kāi)日2013年2月27日 申請(qǐng)日期2011年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月18日
發(fā)明者林亨峻, 李真锳, 樸宣泳, 安順愛(ài), 李燦雨, 金銀珠, 金俊吾, 韓相勛, 金漢坤 申請(qǐng)人:株式會(huì)社愛(ài)茉莉太平洋