益生菌凝膠及其在糖尿病并發(fā)癥中治療中的應(yīng)用

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，具體涉及一種益生菌凝膠及其在糖尿病并發(fā)癥中治療中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、糖尿病足潰瘍(dfu)是糖尿病患者中普遍存在的嚴(yán)重并發(fā)癥，面臨截肢風(fēng)險(xiǎn)，dfu患者的截肢率比非糖尿病患者高出10到20倍，這主要是由于嚴(yán)重肢體缺血，研究表明，糖尿病缺血肢體中的高血糖水平會(huì)催化大量有毒自由基的產(chǎn)生，這些自由基顯著抑制缺氧誘導(dǎo)因子的活性，從而阻礙轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的組織修復(fù)、細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。

2、目前的血管成形術(shù)在恢復(fù)缺血性足潰瘍患者血液循環(huán)方面的效果往往不理想，例如外科搭橋手術(shù)雖然有效，但會(huì)造成大量創(chuàng)傷，需要較長(zhǎng)的恢復(fù)時(shí)間，并且會(huì)增加感染和血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)。另外，血管成形術(shù)雖然是一種侵入性較小的選擇，但療效較低。而且雖然在特定的嚴(yán)重肢體缺血病例中有效，但是并不普遍適用于所有患者(beckman?ja,schneiderpa,conte?ms.advances?in?revascularization?for?peripheral?artery?disease:revascularization?in?pad.circ?res.2021jun11；128(12):1885-1912.)。

3、益生菌療法在臨床研究中獲得顯著認(rèn)可，尤其是利用工程菌促進(jìn)傷口愈合，weissella?cibaria(wc)是一種用于口腔保健的益生菌，因其抗炎和抗菌特性而受到認(rèn)可，wc可以在局部合成no，有助于調(diào)節(jié)心血管功能并刺激皮膚細(xì)胞活化，從而促進(jìn)血管生成(chen?hh,fu?fs,chen?qw,zhang?y,zhang?xz.two-pronged?microbe?delivery?ofnitric?oxide?and?oxygen?for?diabetic?wound?healing.nano?lett.2023jun?28；23(12):5595-5602.)。然而，單獨(dú)使用wc治療糖尿病缺血性肢體的療效低于理想標(biāo)準(zhǔn)，主要是因?yàn)樘悄虿∪毖灾w中的葡萄糖水平較高，會(huì)催化大量有毒自由基的產(chǎn)生。這些自由基顯著抑制缺氧誘導(dǎo)因子的活性，從而阻礙轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的組織修復(fù)、細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中糖尿病足潰瘍治療中的不足，本發(fā)明提供一種益生菌凝膠及其在糖尿病并發(fā)癥中治療中的應(yīng)用，具體包括一種工程改造的益生菌，所述的益生菌為魏斯氏菌(weissella)，該工程改造的益生菌將去鐵胺與魏斯氏菌結(jié)合，催化共生關(guān)系，通過(guò)no和去鐵胺的協(xié)同雙重作用實(shí)現(xiàn)改善缺血微環(huán)境中的氧化應(yīng)激，刺激內(nèi)皮管狀結(jié)構(gòu)的形成和增殖，進(jìn)而促進(jìn)糖尿病足潰瘍中的局部血運(yùn)重建和傷口愈合，且安全性好。與單獨(dú)使用wc或去鐵胺相比，效果顯著增強(qiáng)，尤其是促進(jìn)huvecs的遷移、傷口愈合以及促進(jìn)局部血管生成方面。具體方案如下：

2、本發(fā)明的第一方面，提供一種工程改造的益生菌，所述的益生菌為魏斯氏菌(weissella)，魏斯氏菌(weissella)與含有去鐵胺的脂質(zhì)體通過(guò)靜電吸附結(jié)合。

3、所述的魏斯氏菌表面帶正電荷。優(yōu)選的，所述的魏斯氏菌表面被聚ethylene亞胺、聚烯丙基胺鹽酸鹽或金屬陽(yáng)離子修飾。

4、優(yōu)選的，所述的金屬陽(yáng)離子包括鋅離子、鈣離子、銅離子、鐵離子、錳離子或鎂離子中的一種或兩種以上。

5、所述的脂質(zhì)體表面帶負(fù)電。優(yōu)選的，所述的脂質(zhì)體中包含聚乳酸羥基乙酸共聚物、聚(d,l-丙交酯-co-乙交酯)-聚乙二醇-羧基、甲氧基聚乙二醇聚乳酸-羥基乙酸共聚物、聚多巴胺或吲哚菁綠-疊氮中的一種或兩種以上。

6、在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述的魏斯氏菌表面被聚烯丙基胺鹽酸鹽修飾，所述的脂質(zhì)體中含有聚乳酸羥基乙酸共聚物。

7、所述的工程改造的魏斯氏菌的水合粒徑為100-150nm。

8、所述的魏斯氏菌包括食竇魏斯氏菌(weissella?cibaria)、綠色魏斯氏菌(weissella?viridescens)、類腸膜魏斯氏菌(weissella?paramesenteroides)、坎氏魏斯氏菌(weissella?kandleri)或赫倫魏斯氏菌(weissella?hellenica)中的一種或兩種以上。

9、在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述的魏斯氏菌為食竇魏斯氏菌(weissellacibaria)。

10、本發(fā)明的第二方面，提供一種第一方面所述的工程改造的益生菌的構(gòu)建方法，所述的構(gòu)建方法包括將魏斯氏菌(weissella)與含有去鐵胺的脂質(zhì)體通過(guò)靜電吸附結(jié)合。

11、優(yōu)選的，將帶有正電荷的魏斯氏菌與含有去鐵胺的脂質(zhì)體在溶劑(例如水)中混合，然后離心(優(yōu)選4000g-8000g下離心1-5min)，獲得工程改造的魏斯氏菌(wc@dpa)。

12、優(yōu)選的，所述的構(gòu)建方法包括：

13、步驟一：修飾魏斯氏菌，以使其表面帶正電荷；

14、步驟二：制備含有去鐵胺的脂質(zhì)體；所述的脂質(zhì)體表面帶負(fù)電荷；

15、步驟三：將步驟一獲得的表面帶正電荷的魏斯氏菌與步驟二獲得的表面帶負(fù)電荷的脂質(zhì)體混合，離心后獲得工程改造的魏斯氏菌(wc@dpa)。

16、所述的步驟二包括：

17、s2.1：將去鐵胺溶解于聚乙烯醇溶液中；

18、s2.2：將s2.1獲得的溶液用含有聚乳酸羥基乙酸共聚物的乙酸乙酯乳化；

19、s2.3：將s2.2獲得的混合物超聲處理，獲得初級(jí)乳液；

20、s2.4：將初級(jí)乳液轉(zhuǎn)移到蔗糖溶液中，再進(jìn)行超聲處理；

21、s2.5：將s2.4獲得的混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，使乙酸乙酯完全蒸發(fā)；

22、s2.6：將s2.5獲得的混合物離心，將沉淀物用去離子水洗滌3次，獲得脂質(zhì)體。

23、所述的超聲的振幅為10％-50％，優(yōu)選為15％-30％，例如10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％。

24、所述的超聲處理中超聲的時(shí)間為80s-200s，優(yōu)選為100s-150s，例如80s、90s、100s、120s、130s、140s、150s、160s、170s、180s、190s、200s。

25、所述的s2.1中聚乙烯醇的濃度為1％-5％，優(yōu)選為2％-5％，例如1％、2％、2.4％、2.8％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％。

26、所述的s2.2中乙酸乙酯中聚乳酸羥基乙酸共聚物的濃度為1％-5％，優(yōu)選為2％-4％，例如1％、2％、3％、4％、5％。

27、所述的s2.4中蔗糖的濃度為10％-60％，優(yōu)選為15％-50％，例如10％、20％、30％、40％、50％、60％。

28、所述的s2.6中離心的離心力為5000g-15000g，優(yōu)選為8000g-12000g，例如5000g、6000g、7000g、8000g、9000g、10000g、11000g、12000g、13000g、14000g、15000g。

29、所述的s2.6中離心的時(shí)間為5min-20min，優(yōu)選為8min-15min，例如5min、6min、7min、8min、9min、10min、11min、12min、13min、14min、15min、16min、17min、18min、19min、20min。

30、在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述的步驟二為：

31、s2.1：將去鐵胺溶解于2.8％的聚乙烯醇溶液中；

32、s2.2：將s2.1獲得的溶液用含有3％的聚乳酸羥基乙酸共聚物的乙酸乙酯乳化；

33、s2.3：將s2.2獲得的混合物以25％振幅超聲處理120s，獲得初級(jí)乳液；

34、s2.4：將初級(jí)乳液轉(zhuǎn)移到20％的蔗糖溶液中，再進(jìn)行超聲處理120s；

35、s2.5：將s2.4獲得的混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，使乙酸乙酯完全蒸發(fā)；

36、s2.6：將s2.5獲得的混合物以9000g離心力離心10min，將沉淀物用去離子水洗滌3次，獲得脂質(zhì)體。

37、所述的步驟三中離心的離心力為4000g-8000g，優(yōu)選的，所述的離心的離心力為5000g-7000g，例如4000g、4500g、5000g、5500g、6000g、6500g、7000g、7500g、8000g。

38、所述的步驟三中離心的時(shí)間為1min-5min，優(yōu)選的，所述的離心的時(shí)間為2min-4min，例如1min、2min、3min、4min、5min。

39、本發(fā)明的第三方面，提供一種益生菌凝膠，所述的益生菌凝膠包括第一方面所述的工程改造的益生菌或第二方面所述的構(gòu)建方法獲得的工程改造的益生菌。

40、所述的益生菌凝膠中包括聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、海藻酸鈉、殼聚糖、甲基丙烯酸羥乙酯、透明質(zhì)酸或其鹽、羧甲基纖維素或明膠中一種或兩種以上，優(yōu)選為透明質(zhì)酸。

41、在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述的益生菌凝膠為用5-20％(例如5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20％)透明質(zhì)酸封裝wc@dpa。

42、本發(fā)明的第四方面，提供一種第三方面所述的益生菌凝膠的制備方法，所述的制備方法包括將第一方面所述的工程改造的益生菌或第二方面所述的構(gòu)建方法獲得的工程改造的益生菌與聚乙烯醇、聚丙烯酰胺、海藻酸鈉、殼聚糖、甲基丙烯酸羥乙酯、透明質(zhì)酸或其鹽、羧甲基纖維素或明膠中一種或兩種以上混合。

43、優(yōu)選的，所述的混合包括攪拌混合。

44、優(yōu)選的，所述混合包括在常溫下混合。

45、所述的制備方法包括去除混合后獲得的混合物中的氣泡，優(yōu)選通過(guò)超聲去除混合物中的氣泡。

46、所述的工程改造的益生菌的濃度為104-1012cfu/ml，優(yōu)選為106-1010cfu/ml，例如104cfu/ml、105cfu/ml、106cfu/ml、107cfu/ml、108cfu/ml、109cfu/ml、1010cfu/ml、1011cfu/ml、1012cfu/ml。

47、在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述的益生菌的濃度為108cfu/ml。

48、在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述的制備方法為將第一方面所述的工程改造的益生菌或第二方面所述的構(gòu)建方法獲得的工程改造的益生菌與透明質(zhì)酸或其鹽混合。

49、在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述的制備方法為將帶正電荷的益生菌(優(yōu)選pah修飾)與dpa和透明質(zhì)酸或其鹽混合。

50、所述益生菌的濃度為104-1012cfu/ml，優(yōu)選為106-1010cfu/ml，例如104cfu/ml、105cfu/ml、106cfu/ml、107cfu/ml、108cfu/ml、109cfu/ml、1010cfu/ml、1011cfu/ml、1012cfu/ml。

51、所述dpa的摩爾量為0.1-5μm，例如0.1、0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5、5μm。

52、所述的透明質(zhì)酸或其鹽的濃度為5-15mg/ml，優(yōu)選為8-12mg/ml，例如5mg/ml、6mg/ml、7mg/ml、8mg/ml、9mg/ml、10mg/ml、11mg/ml、12mg/ml、13mg/ml、14mg/ml、15mg/ml。

53、優(yōu)選的，所述的透明質(zhì)酸或其鹽的濃度為10mg/ml。

54、本發(fā)明的第五方面，提供一種第一方面所述的工程改造的益生菌或第二方面所述的構(gòu)建方法獲得的工程改造的益生菌或第三方面所述益生菌凝膠或第四方面所述制備方法獲得的益生菌凝膠在制備促傷口愈合或促進(jìn)血管生成或抗炎或治療糖尿病并發(fā)癥的藥物中的應(yīng)用。

55、所述的傷口包括慢性傷口和/或非慢性傷口。

56、優(yōu)選的，所述的慢性傷口包括糖尿病足潰瘍。

57、優(yōu)選的，所述的非慢性傷口包括外傷、燒傷、燙傷、壓瘡、潰瘍或皮炎中的一種或兩種以上。

58、在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述的傷口為糖尿病足潰瘍。

59、所述的糖尿病并發(fā)癥包括糖尿病足潰瘍。

60、本發(fā)明的第六方面，提供一種藥物，所述的藥物中包含第一方面所述的工程改造的益生菌或第二方面所述的構(gòu)建方法獲得的工程改造的益生菌或第三方面所述的益生菌凝膠或第四方面所述的制備方法獲得的益生菌凝膠，以及藥學(xué)上可接受的輔料。

61、所述的藥學(xué)上可接受的輔料包括賦形劑、稀釋劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、致濕劑、乳化劑、防腐劑、抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑、崩解劑、表面活性劑、懸浮劑、助懸劑、增溶劑、增稠劑、穩(wěn)定劑、甜味劑以及香料中的一種或兩種以上。

62、所述的藥物可以用于治療人或非人動(dòng)物，例如非人哺乳動(dòng)物。

63、所述的藥物可以采用任何合適的給藥途徑，例如胃腸道給藥(例如口服)或非胃腸道給藥(例如，靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、器官內(nèi)、鼻內(nèi)、眼內(nèi)、滴注、腦內(nèi)、鞘內(nèi)、透皮、直腸內(nèi)等)途徑。

64、所述的藥物可以為任何合適的劑型，例如經(jīng)胃腸道給藥劑型或非經(jīng)胃腸道給藥劑型，優(yōu)選包括但不限于片劑、丸劑、粉劑、顆粒劑、膠囊劑、錠劑、糖漿劑、液體、乳劑、微乳劑、混懸劑、注射劑、噴霧劑、氣霧劑、粉霧劑、洗劑、軟膏劑、硬膏劑、糊劑、貼劑、滴眼劑、滴鼻劑、舌下片劑、栓劑、氣霧劑、泡騰片、滴丸劑、凝膠劑等。

65、所述的藥物的各種劑型可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備。

66、所述的藥物可以含有重量比為0.01-99.5％(具體如，0.01％、0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、99％、99.5％)的第一方面所述的工程改造的益生菌或第二方面所述的構(gòu)建方法獲得的工程改造的益生菌或第三方面所述的益生菌凝膠或第四方面所述的制備方法獲得的益生菌凝膠。

67、所述的藥物具有促傷口愈合、促進(jìn)血管生成或抗炎或治療糖尿病并發(fā)癥中的一種或兩種以上的作用。

68、所述的傷口包括慢性傷口或非慢性傷口。

69、本發(fā)明的第七方面，提供一種含有去鐵胺的脂質(zhì)體，所述的脂質(zhì)體表面帶負(fù)電荷。

70、s2.1：將去鐵胺溶解于聚乙烯醇溶液中；

71、s2.2：將s2.1獲得的溶液用含有聚乳酸羥基乙酸共聚物的乙酸乙酯乳化；

72、s2.3：將s2.2獲得的混合物超聲處理，獲得初級(jí)乳液；

73、s2.4：將初級(jí)乳液轉(zhuǎn)移到蔗糖溶液中，再進(jìn)行超聲處理；

74、s2.5：將s2.4獲得的混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，使乙酸乙酯完全蒸發(fā)；

75、s2.6：將s2.5獲得的混合物離心，將沉淀物用去離子水洗滌3次，獲得脂質(zhì)體。

76、所述超聲的振幅為10％-50％，優(yōu)選為15％-30％，例如10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％。

77、所述超聲的時(shí)間為80s-200s，優(yōu)選為100s-150s，例如80s、90s、100s、120s、130s、140s、150s、160s、170s、180s、190s、200s。

78、所述的s2.1中聚乙烯醇的濃度為1％-5％，優(yōu)選為2％-5％，例如1％、2％、2.4％、2.8％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％。

79、所述的s2.2中乙酸乙酯中聚乳酸羥基乙酸共聚物的濃度為1％-5％，優(yōu)選為2％-4％，例如1％、2％、3％、4％、5％。

80、所述的s2.4中蔗糖的濃度為10％-60％，優(yōu)選為15％-50％，例如10％、20％、30％、40％、50％、60％。

81、所述的s2.6中離心的離心力為5000g-15000g，優(yōu)選為8000g-12000g，例如5000g、6000g、7000g、8000g、9000g、10000g、11000g、12000g、13000g、14000g、15000g。

82、所述的s2.6中離心的時(shí)間為5min-20min，優(yōu)選為8min-15min，例如5min、6min、7min、8min、9min、10min、11min、12min、13min、14min、15min、16min、17min、18min、19min、20min。

83、在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方式中，所述的步驟二為：

84、s2.1：將去鐵胺溶解于2.8％的聚乙烯醇溶液中；

85、s2.2：將s2.1獲得的溶液用含有3％的聚乳酸羥基乙酸共聚物的乙酸乙酯乳化；

86、s2.3：將s2.2獲得的混合物以25％振幅超聲處理120s，獲得初級(jí)乳液；

87、s2.4：將初級(jí)乳液轉(zhuǎn)移到20％的蔗糖溶液中，再進(jìn)行超聲處理120s；

88、s2.5：將s2.4獲得的混合物在室溫下攪拌過(guò)夜，使乙酸乙酯完全蒸發(fā)；

89、s2.6：將s2.5獲得的混合物以9000g離心力離心10min，將沉淀物用去離子水洗滌3次，獲得脂質(zhì)體。

90、本發(fā)明的第八方面，提供一種治療糖尿病足潰瘍的方法，所述的方法包括向有需要的個(gè)體施加有效量的第一方面所述的工程改造的益生菌或第二方面所述的構(gòu)建方法獲得的工程改造的益生菌或第三方面所述的益生菌凝膠或第四方面所述的制備方法獲得的益生菌凝膠或第六方面所述的藥物或第七方面所述的脂質(zhì)體。

91、本發(fā)明的第九方面，提供一種促傷口愈合或促進(jìn)血管生成或抗炎的方法，所述的方法包括向有需要的個(gè)體施加有效量的第一方面所述的工程改造的益生菌或第二方面所述的構(gòu)建方法獲得的工程改造的益生菌或第三方面所述的益生菌凝膠或第四方面所述的制備方法獲得的益生菌凝膠或第六方面所述的藥物或第七方面所述的脂質(zhì)體。

92、本發(fā)明的第十方面，提供一種治療糖尿病并發(fā)癥的方法，所述的方法包括向有需要的個(gè)體施加有效量的第一方面所述的工程改造的益生菌或第二方面所述的構(gòu)建方法獲得的工程改造的益生菌或第三方面所述的益生菌凝膠或第四方面所述的制備方法獲得的益生菌凝膠或第六方面所述的藥物或第七方面所述的脂質(zhì)體。

93、本發(fā)明所述的“藥學(xué)上可接受的”是指既不顯著刺激生物體也不抑制所施用的產(chǎn)品的活性物質(zhì)的生物學(xué)活性及特性。

94、本發(fā)明所述的“治療”表示在疾病已開(kāi)始發(fā)展后減緩、中斷、阻止、控制、停止、減輕、或逆轉(zhuǎn)一種體征、癥狀、失調(diào)、病癥、或疾病的進(jìn)展或嚴(yán)重性，但不一定涉及所有疾病相關(guān)體征、癥狀、病癥、或失調(diào)的完全消除。

95、本發(fā)明所述“有效量”是指在以單個(gè)或多個(gè)劑量給予至個(gè)體或器官之后提供所希望的治療的本發(fā)明的wc@dpa或藥物的量或劑量。

96、本發(fā)明所述的“個(gè)體”可以為人或非人哺乳動(dòng)物，也可以為人或非人哺乳動(dòng)物的細(xì)胞、組織或器官，所述的非人哺乳動(dòng)物可以為野生動(dòng)物、動(dòng)物園動(dòng)物、經(jīng)濟(jì)動(dòng)物、寵物、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物等等。優(yōu)選的，所述的非人哺乳動(dòng)物包括但不限于豬、牛、羊、馬、驢、狐、貉、貂、駱駝、狗、貓、兔、鼠(例如大鼠、小鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠、沙鼠、龍貓、松鼠)或猴等等。

97、本發(fā)明所述的“和/或”包含該術(shù)語(yǔ)所連接的項(xiàng)目的所有組合，應(yīng)視為各個(gè)組合已經(jīng)單獨(dú)地在本文列出。例如，“a和/或b”包含了“a”、“a和b”以及“b”。又例如，“a、b和/或c”包含了“a”、“b”、“c”、“a和b”、“a和c”、“b和c”以及“a和b和c”。

98、有益效果

99、(1)本發(fā)明提供一種工程改造的益生菌，所述的益生菌為魏斯氏菌，具體的魏斯氏菌為weissella?cibaria(wc)，工程改造的wc表面與包含去鐵胺的脂質(zhì)體結(jié)合，形成wc@dpa，經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，將去鐵胺制備成脂質(zhì)體形式不會(huì)影響去鐵胺的釋放，脂質(zhì)體對(duì)wc的修飾不影響wc的正常生長(zhǎng)和功能。

100、(2)wc@dpa通過(guò)釋放no和去鐵胺發(fā)揮雙重作用，將工程改造的wc@dpa制備成凝膠，并驗(yàn)證wc@dpa凝膠在體內(nèi)和體外的治療效果。

101、a：在體外實(shí)驗(yàn)中，利用高糖和低氧條件培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞，模擬糖尿病足潰瘍微環(huán)境，經(jīng)wc@dpa凝膠治療后，促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞增殖和遷移，并促進(jìn)血管生成，在劃痕實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)wc@dpa凝膠治療后，創(chuàng)面面積明顯變小，表明wc@dpa凝膠具有促進(jìn)血管生成和傷口愈合的功能。

102、b：在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，利用stz誘導(dǎo)糖尿病小鼠，并在小鼠背部制造直徑10mm的圓形傷口，監(jiān)測(cè)wc@dpa凝膠對(duì)傷口的治療效果，結(jié)果顯示wc@dpa凝膠治療后的小鼠ros水平降低，促炎因子水平降低，抗炎因子水平升高，小鼠血管密度增強(qiáng)，傷口區(qū)域表現(xiàn)出更完整的表皮和豐富的肉芽組織，說(shuō)明wc@dpa凝膠可減輕糖尿病小鼠的局部組織炎癥和氧化應(yīng)激，促進(jìn)傷口愈合，并且安全性好。

103、(3)利用下肢缺血性損傷的糖尿病小鼠作為糖尿病足潰瘍的研究模型，經(jīng)wc@dpa凝膠治療后，小鼠表現(xiàn)出健康肌肉形態(tài)的恢復(fù)，毛細(xì)血管密度增加。治療后的小鼠肢體顯示出促炎因子水平顯著降低，抗炎因子水平顯著增加，即wc@dpa凝膠將持續(xù)性炎性轉(zhuǎn)化為更有利于愈合的急性炎性反應(yīng)，在治療后第5天加速血管重建的能力。

104、(4)wc@dpa凝膠具有獨(dú)特的特性，例如消除有害的羥基自由基、重新平衡氧化態(tài)以及重塑dfu的慢性炎性景觀。此外，wc固有地維持no的持續(xù)產(chǎn)生，促進(jìn)局部遞送至缺血區(qū)域，這對(duì)于增強(qiáng)下肢的血液循環(huán)尤其有益。實(shí)驗(yàn)證據(jù)強(qiáng)烈表明，dfo脂質(zhì)體和釋放no的工程wc的雙重作用顯著改善了細(xì)胞存活、遷移和氧化應(yīng)激管理，并加速了血管生成和肌肉再生的重建。