背景技術(shù)：
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
0、概述
1、本披露提供了一種通過(guò)向患者施用11β-羥基類固醇脫氫酶1型(hsd-1)的偽不可逆抑制劑來(lái)治療糖皮質(zhì)激素(gc)過(guò)量患者的方法。本披露還提供了一種通過(guò)施用偽不可逆hsd-1抑制劑來(lái)改善或預(yù)防gc過(guò)量患者的特定癥狀的方法。本披露還提供了一種在糖皮質(zhì)激素過(guò)量患者中降低尿液四氫皮質(zhì)醇水平的方法，該方法包括向患者施用偽不可逆hsd-1抑制劑，其中所述尿液四氫皮質(zhì)醇的水平與無(wú)癥狀患者相比升高。本披露還提供了一種通過(guò)將偽不可逆hsd-1抑制劑與gc藥物共施用來(lái)治療或改善gc過(guò)量患者的特定癥狀的方法。
2、在一些實(shí)施例中，糖皮質(zhì)激素過(guò)量是指?jìng)€(gè)體中的一種病況或生理狀態(tài)，其中尿液四氫皮質(zhì)醇或糖皮質(zhì)激素分解的其他產(chǎn)物的水平相對(duì)于參考患者或樣品升高，或相對(duì)于未經(jīng)歷糖皮質(zhì)激素過(guò)量的患者升高。在一些實(shí)施例中，糖皮質(zhì)激素過(guò)量的癥狀包括心血管、代謝、免疫、骨骼、肌肉、皮膚、眼部、精神、認(rèn)知、晝夜節(jié)律和穩(wěn)態(tài)癥狀。
3、在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑對(duì)人脂肪hsd-1抑制不顯示快速耐受。在一些實(shí)施例中，hsd-1抑制劑選自spi-62和bi-187004，或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，hsd-1抑制劑是spi-62或其藥學(xué)上可接受的鹽。
4、在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑的特征是與靶標(biāo)介導(dǎo)的藥物處置一致的人藥代動(dòng)力學(xué)。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑選自spi-62、abt-384、mk-0736、mk-0916、bms-823778、ue-2343、amg-221和bi-187004，或其藥學(xué)上可接受的鹽。
5、在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑的血漿暴露在單次低劑量后小于與劑量成比例，而在多次低劑量后與劑量成比例。在一些實(shí)施例中，劑量為10mg或更低、或6mg或更低、或4mg或更低。
6、在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑的特征是與靶標(biāo)介導(dǎo)的藥物處置一致的人藥效動(dòng)力學(xué)。在一些實(shí)施例中，hsd-1抑制劑對(duì)肝hsd-1抑制的藥效動(dòng)力學(xué)半衰期與其藥代動(dòng)力學(xué)半衰期相比延長(zhǎng)。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑的特征是人肝hsd-1抑制的藥效動(dòng)力學(xué)半衰期為至少1周。在一些實(shí)施例中，人肝hsd-1抑制的藥效動(dòng)力學(xué)半衰期為至少2周。在一些實(shí)施例中，人肝hsd-1抑制的藥效動(dòng)力學(xué)半衰期為至少4周。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑選自spi-62和abt-384，或其藥學(xué)上可接受的鹽。
7、在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑的特征是與人hsd-1的快結(jié)合(fast-on)、慢解離(slow-off)的體外結(jié)合動(dòng)力學(xué)。在一些實(shí)施例中，hsd-1抑制劑的滯留時(shí)間為至少約500秒。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑選自spi-62、abt-384、kr-67607、ue-2343和bi-187004，或其藥學(xué)上可接受的鹽。
8、在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑的特征是與人hsd-1的明顯快結(jié)合、慢解離的體內(nèi)結(jié)合動(dòng)力學(xué)。在一些實(shí)施例中，模型估計(jì)的koff小于0.3h-1。在一些實(shí)施例中，模型估計(jì)的koff小于1.0h-1。在一些實(shí)施例中，模型估計(jì)的koff小于3.0h-1。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑選自spi-62和abt-384，或其藥學(xué)上可接受的鹽。
9、在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑的特征是其體內(nèi)效力大于體外效力。在一些實(shí)施例中，模型估計(jì)的hsd-1抑制劑的kd低于hsd-1抑制劑ki。在一些實(shí)施例中，模型估計(jì)的kd比ki低至少50倍。在一些實(shí)施例中，模型估計(jì)的kd比ki低至少100倍。在一些實(shí)施例中，模型估計(jì)的kd比ki低至少200倍。在一些實(shí)施例中，模型估計(jì)的hsd-1抑制劑的脂肪ic50低于hsd-1抑制劑體外測(cè)量值。在一些實(shí)施例中，模型估計(jì)的脂肪ic50比體外測(cè)量值低至少100倍。在一些實(shí)施例中，模型估計(jì)的脂肪ic50比體外測(cè)量值低至少300倍。在一些實(shí)施例中，模型估計(jì)的脂肪ic50比體外測(cè)量值低至少700倍。在一些實(shí)施例中，偽不可逆抑制劑是spi-62或其藥學(xué)上可接受的鹽。
10、在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑在人hsd-1活性位點(diǎn)與nadph的焦磷酸鹽形成氫鍵。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑選自spi-62、abt-384、kr-67607、sar-184481、化合物a和化合物b，或其藥學(xué)上可接受的鹽。
11、在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑在人hsd-1活性位點(diǎn)與nadph形成芳香族堆疊相互作用。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑選自bms-823778、mk-0916、化合物c和化合物d，或其藥學(xué)上可接受的鹽。
12、本披露還提供了一種在有需要的患者中改善或預(yù)防糖皮質(zhì)激素過(guò)量癥狀的方法，該方法包括向患者施用腦滲透劑偽不可逆hsd-1抑制劑。在一個(gè)實(shí)施例中，癥狀包括精神(例如，情緒)、認(rèn)知或晝夜節(jié)律(例如，睡眠)癥狀。在一些實(shí)施例中，精神癥狀選自抑郁、焦慮、輕躁狂、躁狂和精神?。换蛘哒J(rèn)知癥狀選自記憶、視覺(jué)空間處理、推理、語(yǔ)言學(xué)習(xí)和語(yǔ)言表現(xiàn)的損害；或者晝夜節(jié)律癥狀選自失眠、白天疲勞、睡眠呼吸暫停、睡眠碎片化、夜間運(yùn)動(dòng)活動(dòng)增加和rem睡眠異常。
13、在一些實(shí)施例中，本文所述的方法進(jìn)一步包括向患者施用糖皮質(zhì)激素藥物。在一些實(shí)施例中，將hsd-1抑制劑與糖皮質(zhì)激素藥物以固定劑量組合施用。在一些實(shí)施例中，將hsd-1抑制劑和糖皮質(zhì)激素藥物共同包裝以單獨(dú)施用。在一些實(shí)施例中，將hsd-1抑制劑與糖皮質(zhì)激素藥物分開(kāi)施用和包裝。在一些實(shí)施例中，糖皮質(zhì)激素藥物選自潑尼松龍、甲潑尼龍、地塞米松、氫化可的松、布地奈德、地夫可特、倍氯米松、環(huán)索奈德、氟替卡松、莫米松、曲安奈德、氟尼松、氯倍他索、倍他米松、氟輕松、氟輕縮松、氯可托龍、鹵貝他索、去羥米松、地奈德、哈西奈德、潑尼卡酯、二氟拉松、安西奈德、阿氯米松、二氟潑尼酯、氯替潑諾、氟米龍、利美索龍和甲羥松，或其藥學(xué)上可接受的鹽或酯衍生物。
14、在一些實(shí)施例中，患者患有分泌acth或crh的腫瘤。在一些實(shí)施例中，患者患有分泌皮質(zhì)醇的腫瘤。
15、在另一個(gè)實(shí)施例中，將偽不可逆hsd-1抑制劑口服施用。在另一個(gè)實(shí)施例中，將偽不可逆hsd-1抑制劑靜脈內(nèi)施用。在另一個(gè)實(shí)施例中，將偽不可逆hsd-1抑制劑肌內(nèi)或皮下施用。在另一個(gè)實(shí)施例中，將偽不可逆hsd-1抑制劑通過(guò)吸入或鼻內(nèi)施用。在另一個(gè)實(shí)施例中，將偽不可逆hsd-1抑制劑眼部施用。在另一個(gè)實(shí)施例中，將偽不可逆hsd-1抑制劑局部施用。
16、本披露描述了一種重要類型的hsd-1抑制劑——偽不可逆hsd-1抑制劑，其已經(jīng)證明了該亞類的兩個(gè)成員bi-187004和spi-62具有以前未知的優(yōu)勢(shì)。與某些其他hsd-1抑制劑(例如，azd4017、azd8329、bi-135585)不同，bi-187004在多次給藥后顯示出對(duì)人脂肪hsd-1抑制的有限快速耐受，而spi-62則沒(méi)有。由于脂肪hsd-1調(diào)節(jié)gc過(guò)量的顯著心臟代謝發(fā)病率，因此不損失脂肪hsd-1的抑制劑在治療gc過(guò)量方面有望在臨床上優(yōu)于其他hsd-1抑制劑。人們認(rèn)為，持久的人脂肪hsd-1抑制是偽不可逆抑制劑的共同特征，偽不可逆抑制劑被定義為顯示以下四種特性中的一種或多種的hsd-1抑制劑。
17、(1)臨床藥代動(dòng)力學(xué)與靶標(biāo)介導(dǎo)的藥物處置(tmdd)一致。在單次低劑量后，大部分施用劑量被靶標(biāo)迅速螯合，因此只有一小部分藥物分子處于中心循環(huán)中。因此，在藥物血漿濃度方面遠(yuǎn)低于具有線性動(dòng)力學(xué)的藥物。隨著單次劑量增加，低容量靶標(biāo)迅速飽和。靶標(biāo)所螯合的劑量部分與劑量成反比地減小。因此，藥物在高單次劑量下似乎具有線性藥代動(dòng)力學(xué)，因?yàn)榕c總劑量相比，靶標(biāo)捕獲的部分最小。在一個(gè)或多個(gè)第一次低劑量后觀察到的顯著非線性藥代動(dòng)力學(xué)在重復(fù)低劑量后轉(zhuǎn)變?yōu)榫€性藥代動(dòng)力學(xué)。
18、(2)臨床藥效動(dòng)力學(xué)與tmdd一致。在低劑量后的早期，甚至在檢測(cè)到血漿水平之前就可能檢測(cè)到靶標(biāo)參與(target?engagement)。在廣泛的劑量范圍內(nèi)，靶標(biāo)參與可能似乎與濃度無(wú)關(guān)；高靶標(biāo)參與可能與低血漿水平有關(guān)。藥理學(xué)半衰期可以大大延長(zhǎng)，因?yàn)榧词寡獫{水平下降到檢測(cè)限以下，藥物仍與微環(huán)境中的靶標(biāo)結(jié)合。
19、(3)快結(jié)合、慢解離地與hsd-1結(jié)合，酶滯留時(shí)間(kd-1)長(zhǎng)于其他hsd-1抑制劑。這導(dǎo)致解離常數(shù)(koff)顯著低于締合常數(shù)(kon)，這可以通過(guò)臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的群體pk建模來(lái)揭示。kd(即koff與kon的比率)顯著低于測(cè)量的ki。由于快結(jié)合、慢解離的結(jié)合，體內(nèi)導(dǎo)致50％最大hsd-1抑制(ic50)的濃度遠(yuǎn)低于體外測(cè)量的ic50，這可以通過(guò)臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的群體pk-pd建模來(lái)揭示。
20、(4)當(dāng)與人hsd-1結(jié)合時(shí)，與酶以及輔因子nadph形成非共價(jià)三元復(fù)合物。這是慢解離結(jié)合和tmdd行為的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。必須克服抑制劑和nadph的結(jié)合能，才能使抑制劑與酶解離。三元復(fù)合物還抵抗來(lái)自hsd-1底物的競(jìng)爭(zhēng)，當(dāng)?shù)孜锏难h(huán)水平增加時(shí)，這在gc過(guò)量中尤為重要。在一些實(shí)施例中，氫鍵合和芳香族堆疊相互作用是hsd-1抑制劑在活性位點(diǎn)與nadph連接或復(fù)合的不同模式。
21、皮質(zhì)醇和可的松
22、皮質(zhì)醇是一種糖皮質(zhì)激素，由腎上腺產(chǎn)生和釋放。不到6％的循環(huán)皮質(zhì)醇可供組織生物利用，因?yàn)樗c皮質(zhì)類固醇結(jié)合球蛋白和白蛋白廣泛結(jié)合。循環(huán)可的松供組織的生物利用度要高得多，因?yàn)樗鼘?duì)皮質(zhì)類固醇結(jié)合球蛋白的親和力只有皮質(zhì)醇的12％。糖皮質(zhì)激素水平升高可通過(guò)減少胰島素依賴性葡萄糖攝取、增強(qiáng)肝臟糖異生和抑制胰腺細(xì)胞分泌胰島素導(dǎo)致胰島素抵抗。持續(xù)糖皮質(zhì)激素過(guò)量的患者可出現(xiàn)血脂異常、內(nèi)臟肥胖和其他代謝綜合征。其他生理癥狀可包括體重快速增加(主要在面部、胸部和腹部、與纖細(xì)的手臂和腿形成鮮明對(duì)比)、面色潮紅以及臉型圓潤(rùn)、高血壓、骨質(zhì)疏松癥、皮膚病學(xué)變化(例如瘀傷和紫色妊娠紋)、肌無(wú)力和情緒波動(dòng)(表現(xiàn)為焦慮、抑郁或易怒等)。
23、觀察到可的松水平隨著偽不可逆hsd-1抑制劑施用而增加。例如，單次劑量和多次劑量spi-62使肝臟可的松水平顯著增加，如通過(guò)排泄的可的松代謝物——尿液四氫可的松的增加所證明的。在施用單次劑量10、20或50mg?spi-62(n＝40)的健康成人中，四氫可的松的最小二乘均值(標(biāo)準(zhǔn)誤差)為32.71(1.149)μmol，而單次劑量匹配安慰劑后為9.19(2.300)μmol(n＝10)。在同一受試者中，14個(gè)日劑量后，spi-62的四氫可的松為42.73(1.968)μmol，而安慰劑為8.51(0.410)μmol。在老年人中也觀察到類似的結(jié)果。先前的研究還表明，向健康成人和老年受試者施用abt-384持續(xù)7-21天使肝臟可的松水平顯著增加，如尿液四氫可的松的增加所證明的。在連續(xù)6周服用10mg的spi-62的痛性糖尿病周圍神經(jīng)病變患者中，循環(huán)可的松水平顯著增加，而血清皮質(zhì)醇沒(méi)有變化。例如，在研究藥物施用的最后一天，spi-62的血清可的松為56.0(2.37)nm(n＝36)，而安慰劑為38.8(2.16)nm(n＝36)。此外，兩周后，spi-62的血清可的松為49.5(1.75)nm，而安慰劑為38.7(1.70)nm。在健康成人中未獲得類似的可的松結(jié)果。
24、尿液四氫皮質(zhì)醇
25、在一些實(shí)施例中，可以向患者施用偽不可逆hsd-1抑制劑以降低患者尿液四氫皮質(zhì)醇的水平。皮質(zhì)醇的主要排泄途徑是作為尿液代謝物。這些代謝物的總量最能代表當(dāng)天皮質(zhì)醇的腺體總輸出量。皮質(zhì)醇主要以5-α-四氫皮質(zhì)醇(5α-thf)和5-β-四氫皮質(zhì)醇(5β-thf)和四氫可的松(the)排泄。含量較低的尿液代謝物包括皮甾五醇和皮酮四醇。小部分(1％-3％)以皮質(zhì)醇和可的松排泄，可的松本身是皮質(zhì)醇的代謝物。24小時(shí)內(nèi)尿液皮質(zhì)醇和尿液四氫皮質(zhì)醇的測(cè)量可用于指示患者每日皮質(zhì)醇的產(chǎn)生水平。本披露還提供了一種降低患者尿液四氫皮質(zhì)醇水平的方法，該方法包括向患者施用偽不可逆hsd-1抑制劑，其中所述尿液四氫皮質(zhì)醇的水平與無(wú)癥狀患者相比升高。
26、偽不可逆hsd-1抑制劑化合物結(jié)構(gòu)
27、本領(lǐng)域已知和可用多種偽不可逆hsd-1抑制劑，包括但不限于spi-62、abt-384、mk-0736、mk-0916、bms-823778、ue-2343、amg-221、kr-67607、bi-187004、sar-184481、化合物a、化合物b、化合物c、化合物d、bms-823778或其藥學(xué)上可接受的鹽。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的，本文所述的或本領(lǐng)域已知或可用的任何偽不可逆hsd-1抑制劑可以如本文所述使用，并包含在本披露的范圍內(nèi)。
28、本文所述的一些偽不可逆hsd-1抑制劑的結(jié)構(gòu)如下所述。所有結(jié)構(gòu)和iupac名稱使用chemdraw?20.0生成。
29、如本文所用，“spi-62”是指4-(5-(2-(4-氯-2,6-二氟苯氧基)丙-2-基)-4-甲基-4h-1,2,4-三唑-3-基)-3-氟苯甲酰胺。
30、
31、如本文所用，“bms-823778”是指2-(3-(1-(4-氯苯基)環(huán)丙基)-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-8-基)丙-2-醇。
32、
33、如本文所用，“abt-384”是指(1s,3r,4r,5s,7s)-4-(2-甲基-2-(4-(5-(三氟甲基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)丙酰胺基)金剛烷-1-甲酰胺。
34、
35、如本文所用，“ue-2343”是指(5-(1h-吡唑-4-基)噻吩-3-基)((1r,3r,5s)-3-羥基-3-(嘧啶-2-基)-8-氮雜二環(huán)[3.2.1]辛-8-基)甲酮。
36、
37、如本文所用，“mk-0736”是指3-(4-(3-(乙基磺?；?丙基)二環(huán)[2.2.2]辛-1-基)-4-甲基-5-(2-(三氟甲基)苯基)-4h-1,2,4-三唑。
38、
39、如本文所用，“amg-221”是指(s,e)-2-(((1s,2s,4r)-二環(huán)[2.2.1]庚-2-基)亞氨基)-5-異丙基-5-甲基噻唑烷-4-酮。
40、
41、如本文所用，“mk-0916”是指3-((1s,3s)-1-(4-氯苯基)-3-氟環(huán)丁基)-4,5-二環(huán)丙基-4h-1,2,4-三唑。
42、
43、如本文所用，“kr-67607”是指(1s,3r,4s,5s,7s)-4-(2-(6-(2,6-二氯-4-(三氟甲基)苯基)-4-甲基-1,1-二氧化-1,2,6-噻二嗪-2-基)乙酰氨基)金剛烷-1-甲酰胺。
44、
45、如本文所用，“bi-187004”是指(4ar,9as)-1-(1h-苯并[d]咪唑-6-羰基)-2,3,4,4a,9,9a-六氫-1h-茚并[2,1-b]吡啶-6-甲腈。
46、
47、如本文所用，“azd4017”是指(s)-2-(1-(5-(環(huán)己基氨基甲酰基)-6-(丙硫基)吡啶-2-基)哌啶-3-基)乙酸。
48、
49、如本文所用，“azd8329”是指4-(4-(((1r,3r,5r,7r)-金剛烷-2-基)氨基甲?；?-5-(叔丁基)-1h-吡唑-1-基)苯甲酸。
50、
51、如本文所用，“bi-135585”是指(s)-6-(2-羥基-2-甲基丙基)-3-((s)-1-(4-(1-甲基-2-氧代-1,2-二氫吡啶-4-基)苯基)乙基)-6-苯基-1,3-噁嗪烷-2-酮。
52、
53、如本文所用，“sar-184841”是指4-(5-(4-(叔丁基)哌嗪-1-基)吡啶-2-基)-n-((1r,3s,5s,7s)-5-氨基甲?；饎偼?2-基)-3,4-二氫喹喔啉-1(2h)-甲酰胺。
54、
55、如本文所用，“化合物a”是指(1s,3r,5s,7s)-4-(2-(4-甲氧基苯氧基)-2-甲基丙酰胺基)金剛烷-1-甲酰胺。
56、
57、如本文所用，“化合物b”是指3,4-二氫喹啉-1(2h)-基[4-(1h-咪唑-5-基)哌啶-1-基]甲酮。
58、
59、如本文所用，“化合物c”是指(5r)-2-[(2-氟苯基)氨基]-5-(1-甲基乙基)-1,3-噻唑-4(5h)-酮。
60、
61、如本文所用，“化合物d”是指3-(2-氟乙基)-4-((4-[(2s)-1,1,1-三氟-2-羥基丙-2-基]苯基)磺?；?芐腈。
62、
63、糖皮質(zhì)激素過(guò)量的癥狀
64、本披露還提供了一種通過(guò)施用偽不可逆hsd-1抑制劑來(lái)治療或改善gc過(guò)量患者的特定癥狀的方法。gc過(guò)量的癥狀可能因個(gè)體而異，但常見(jiàn)的癥狀域可包括但不限于心血管、代謝、免疫、骨骼、肌肉、皮膚、眼部、精神、認(rèn)知、晝夜節(jié)律和穩(wěn)態(tài)。在一些實(shí)施例中，腦滲透劑偽不可逆hsd-1抑制劑可用于治療與情緒、認(rèn)知和睡眠有關(guān)的癥狀。
65、在一些實(shí)施例中，與gc過(guò)量有關(guān)的特定癥狀可以包括但不限于體重增加和脂肪組織沉積(特別是在腹部和上背部周圍、面部和肩膀之間)、腹部、大腿、乳房和手臂皮膚上的粉紅色或紫色妊娠紋(條紋)、皮膚變薄脆弱、容易瘀傷、疲勞、經(jīng)常生病、瘀傷和傷口愈合緩慢、骨骼脆弱、肌無(wú)力、高血糖、焦慮和抑郁、睡眠問(wèn)題和注意力不集中。在一些實(shí)施例中，長(zhǎng)期高皮質(zhì)醇可導(dǎo)致心臟病、骨質(zhì)疏松癥、糖尿病和心理健康不良。
66、在一些實(shí)施例中，與gc過(guò)量相關(guān)的心血管癥狀可以包括但不限于高血壓(包括缺乏夜間血壓下降)、動(dòng)脈粥樣硬化、內(nèi)皮功能障礙、促血栓狀態(tài)、冠狀動(dòng)脈疾病、心力衰竭和中風(fēng)。
67、在一些實(shí)施例中，與gc過(guò)量相關(guān)的代謝癥狀可以包括但不限于肥胖、葡萄糖不耐受、胰島素抵抗、糖尿病和血脂異常(包括高膽固醇血癥和高甘油三酯血癥)。
68、在一些實(shí)施例中，與gc過(guò)量相關(guān)的免疫癥狀可以包括但不限于感染(包括機(jī)會(huì)性感染)和敗血癥。
69、在一些實(shí)施例中，與gc過(guò)量相關(guān)的骨癥狀可以包括但不限于骨質(zhì)疏松癥、骨壞死、骨質(zhì)減少、低鈣血癥(通過(guò)吸收減少或腎臟消除增加或?qū)S生素d和pth的影響)、線性骨生長(zhǎng)受損(身材)和骨折(包括低沖擊或壓縮骨折)。
70、在一些實(shí)施例中，與gc過(guò)量相關(guān)的肌肉癥狀可以包括但不限于肌肉萎縮和肌無(wú)力。
71、在一些實(shí)施例中，與gc過(guò)量相關(guān)的皮膚病癥狀可以包括但不限于傷口愈合受損、皮膚薄或脆弱、皮下脂肪異常積累、多血癥、紫紋、黑棘皮癥、色素沉著和易瘀傷。
72、在一些實(shí)施例中，與gc過(guò)量相關(guān)的眼部癥狀可以包括但不限于眼壓升高、青光眼、眼球突出和白內(nèi)障。
73、在一些實(shí)施例中，與gc過(guò)量相關(guān)的精神癥狀可以包括但不限于抑郁、焦慮、輕躁狂、躁狂和精神病。
74、在一些實(shí)施例中，與gc過(guò)量相關(guān)的認(rèn)知癥狀可以包括但不限于記憶、視覺(jué)空間處理、推理、語(yǔ)言學(xué)習(xí)和語(yǔ)言表現(xiàn)的損害。
75、在一些實(shí)施例中，與gc過(guò)量相關(guān)的晝夜節(jié)律癥狀可以包括但不限于失眠、白天疲勞、睡眠呼吸暫停、睡眠碎片化、夜間運(yùn)動(dòng)活動(dòng)增加和rem睡眠異常。
76、在一些實(shí)施例中，與gc過(guò)量相關(guān)的穩(wěn)態(tài)癥狀可以包括但不限于低鉀血癥、高鈉血癥、低磷血癥、高鈣尿癥、生長(zhǎng)激素抑制和甲狀腺疾病(包括甲狀腺功能減退和甲狀腺功能亢進(jìn))。
77、缺乏脂肪快速耐受
78、本披露還提供了一種通過(guò)施用偽不可逆hsd-1抑制劑來(lái)治療或改善患者糖皮質(zhì)激素過(guò)量或其癥狀的方法，該抑制劑對(duì)人脂肪hsd-1抑制不顯示快速耐受。hsd-1底物(非活性gc)水平升高的競(jìng)爭(zhēng)可導(dǎo)致脂肪快速耐受。gc(無(wú)論是活性形式還是非活性形式)具有高度親脂性，因此預(yù)期gc在給予hsd-1抑制劑的患者組織中積累，特別是gc過(guò)量患者，還特別是脂肪組織中，如本文所述。
79、在一些實(shí)施例中，可用于本披露的偽不可逆hsd-1抑制劑可以是本領(lǐng)域已知或可用的任何偽不可逆hsd-1抑制劑。一些示例性偽不可逆hsd-1抑制劑包括但不限于spi-62、abt-384、mk-0736、mk-0916、bms-823778、ue-2343、amg-221、kr-67607、bi-187004、sar-184481、化合物a、化合物b、化合物c、化合物d或其藥學(xué)上可接受的鹽。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，在不偏離本披露范圍的情況下，可以使用其他偽不可逆hsd-1抑制劑。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑選自spi-62、abt-384、kr-67607、sar-184481、化合物a和化合物b，或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑選自bms-823778、mk-0916、化合物c和化合物d，或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑選自spi-62、abt-384、mk-0736、mk-0916、bms-823778、ue-2343和amg-221，或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑選自spi-62、abt-384、kr-67607、ue-2343和bi-187004，或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑選自spi-62和abt-384，或其藥學(xué)上可接受的鹽。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑是spi-62或其藥學(xué)上可接受的鹽。
80、在一些實(shí)施例中，將本文所述的偽不可逆hsd-1抑制劑施用給具有升高水平的糖皮質(zhì)激素或尿液四氫皮質(zhì)醇的患者或受試者，以降低患者或受試者糖皮質(zhì)激素或尿液四氫皮質(zhì)醇的水平。在一些實(shí)施例中，一旦患者的癥狀減輕或消除，就可以暫?；蛲Ｖ箓尾豢赡鎕sd-1抑制劑的施用，并且如果臨床醫(yī)生或醫(yī)師認(rèn)為合適，可以在必要時(shí)重新開(kāi)始施用。在一些實(shí)施例中，本披露提供了通過(guò)施用偽不可逆hsd-1抑制劑而不暫停或停止對(duì)患者進(jìn)行慢性gc過(guò)量病況的慢性治療。在一些實(shí)施例中，偽不可逆抑制劑提供了優(yōu)點(diǎn)，即它們?cè)诙虝旱耐Ｋ幤陂g保持療效(例如，患者在幾天甚至幾周內(nèi)忽視服藥)。
81、在一些實(shí)施例中，本文所述的偽不可逆hsd-1抑制劑的劑量可以是醫(yī)療工作者或臨床醫(yī)生認(rèn)為合適的任何劑量。在一些實(shí)施例中，將偽不可逆抑制劑以足以占據(jù)體內(nèi)所有hsd-1的摩爾劑量施用。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑在低劑量下實(shí)現(xiàn)并保持完全靶標(biāo)參與。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑在亞毫克劑量下實(shí)現(xiàn)并保持完全靶標(biāo)參與。
82、在一些實(shí)施例中，將偽不可逆hsd-1抑制劑以約1至約40mg(包括1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、20mg、21mg、22mg、23mg、24mg、25mg、26mg、27mg、28mg、29mg、30mg、31mg、32mg、33mg、34mg、35mg、36mg、37mg、38mg、39mg、40mg等)的單次劑量施用。在一些實(shí)施例中，亞毫克劑量可以是約等于或小于1mg的任何劑量，例如0.05mg、0.1mg、0.15mg、0.2mg、0.25mg、0.3mg、0.35mg、0.4mg、0.45mg、0.5mg、0.55mg、0.6mg、0.65mg、0.7mg、0.75mg、0.8mg、0.85mg、0.9mg、0.95mg或1mg。在一些實(shí)施例中，如本文所述，單次劑量的偽不可逆hsd-1抑制劑可能適合于慢性gc過(guò)量患者。在一些實(shí)施例中，將單次劑量的偽不可逆抑制劑靜脈內(nèi)施用。
83、在一些實(shí)施例中，可以將偽不可逆hsd-1抑制劑在指定的時(shí)間段內(nèi)以多次劑量施用。多次劑量可以指一天內(nèi)多次劑量，或替代地，可以指在臨床醫(yī)生或醫(yī)療工作者認(rèn)為合適的一段時(shí)間內(nèi)每天單次劑量。
84、在一些實(shí)施例中，spi-62的劑量范圍為約0.2mg至約6mg，每天一次。在一些實(shí)施例中，spi-62、abt-384、mk-0736或mk-0916的劑量為約10mg或更少。在一些實(shí)施例中，ue-2343的劑量為約10mg至約35mg。在一些實(shí)施例中，bi-187004的劑量為約20mg至約240mg。
85、在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑的施用時(shí)間段可以是任何時(shí)間段，例如包括但不限于1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天等。根據(jù)本披露的時(shí)間段可以是任何時(shí)間段，例如1-14天、或7-14天、或7-10天或10-14天的時(shí)間段。在其他實(shí)施例中，hsd-1抑制劑的施用時(shí)間段可以是7-30天、或7-21天等。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑的施用時(shí)間段可以是1天、6天或12天。在一些實(shí)施例中，可以連續(xù)向患者施用偽不可逆hsd-1抑制劑以控制慢性gc過(guò)量。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑的劑量的施用可以持續(xù)1個(gè)月、或2個(gè)月、或3個(gè)月、或4個(gè)月、或5個(gè)月、或6個(gè)月、或7個(gè)月、或8個(gè)月、或9個(gè)月、或10個(gè)月、或11個(gè)月、或12個(gè)月、或15個(gè)月、或18個(gè)月、或24個(gè)月、或36個(gè)月、或48個(gè)月或更長(zhǎng)時(shí)間。在一些實(shí)施例中，可以將偽不可逆hsd-1抑制劑以單次高劑量靜脈內(nèi)施用，例如以控制敗血癥或防止類固醇使用副作用(例如，在糖尿病患者中)的發(fā)展。
86、如本文所述，偽不可逆hsd-1抑制劑(1)不應(yīng)顯示脂肪快速耐受，(2)應(yīng)顯示tmddpk和pd，(3)應(yīng)顯示快結(jié)合、慢解離動(dòng)力學(xué)，以及(4)應(yīng)在活性位點(diǎn)與nadph連接。然而，這些特征中只有一個(gè)為表明分子是偽不可逆hsd-1抑制劑所必需的。
87、在一些實(shí)施例中，本文所述的偽不可逆hsd-1抑制劑(例如spi-62、abt-384等)的特征是本文所述的與靶標(biāo)介導(dǎo)的藥物處置一致的人藥代動(dòng)力學(xué)。
88、在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑對(duì)人肝hsd-1抑制具有長(zhǎng)藥效動(dòng)力學(xué)半衰期。在一些實(shí)施例中，hsd-1抑制劑對(duì)肝hsd-1抑制的藥效動(dòng)力學(xué)半衰期與其藥代動(dòng)力學(xué)半衰期相比延長(zhǎng)。在一些實(shí)施例中，人肝hsd-1抑制的半衰期為至少1周、或2周、或3周、或4周、或5周、或6周等。
89、在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑顯示與人hsd-1的快結(jié)合、慢解離結(jié)合動(dòng)力學(xué)。在一些實(shí)施例中，滯留時(shí)間是hsd-1抑制劑的快結(jié)合、慢解離結(jié)合動(dòng)力學(xué)的指標(biāo)。偽不可逆hsd-1抑制劑可以通過(guò)體外酶動(dòng)力學(xué)評(píng)估來(lái)鑒定，其中與其他hsd-1抑制劑相比，預(yù)計(jì)它們顯示更長(zhǎng)的酶滯留時(shí)間。在一些實(shí)施例中，本文所述的hsd-1抑制劑顯示至少約500秒的滯留時(shí)間。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的，滯留時(shí)間閾值可以隨不同的緩沖液、nadph濃度或酶濃度變化。
90、在一些實(shí)施例中，初始劑量的偽不可逆hsd-1抑制劑最初結(jié)合并保持結(jié)合組織中的其靶標(biāo)。在一些實(shí)施例中，多達(dá)約3mg偽不可逆hsd-1抑制劑被螯合而離開(kāi)中心循環(huán)。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑在亞毫克至低毫克范圍內(nèi)的單次劑量后表現(xiàn)出非線性藥代動(dòng)力學(xué)，在多次劑量后具有與劑量成比例的暴露。在一些實(shí)施例中，hsd-1抑制劑的血漿暴露在單次低劑量后小于與劑量成比例，而在多次低劑量后與劑量成比例。在一些實(shí)施例中，劑量為10mg或更低，例如10mg、或9mg、或8mg、或7mg、或6mg、或5mg、或4mg、或3mg、或2mg、或1mg、或小于1mg。在一些實(shí)施例中，劑量為6mg或更低、或4mg或更低。
91、在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑(例如spi-62)的藥代動(dòng)力學(xué)特征是具有3個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)吸收室和約2.5mg至3.6mg的估計(jì)目標(biāo)容量的兩室tmdd群體藥代動(dòng)力學(xué)模型。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑的kd低于ki。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑的kd比ki低至少10倍。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑的kd比ki低至少60倍。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑對(duì)肝hsd-1的體內(nèi)ic50比體外測(cè)量值低至少50倍。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑對(duì)肝hsd-1的體內(nèi)ic50比體外測(cè)量值低約200倍。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑對(duì)hsd-1的估計(jì)體內(nèi)脂肪ic50低于hsd-1抑制劑體外測(cè)量值。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑的體內(nèi)脂肪ic50比體外測(cè)量值低至少100倍。在一些實(shí)施例中，偽不可逆hsd-1抑制劑的體內(nèi)脂肪ic50比體外測(cè)量值低約700倍。
92、在一些實(shí)施例中，可以將偽不可逆hsd-1抑制劑與糖皮質(zhì)激素藥物共同施用。在一些實(shí)施例中，將偽不可逆hsd-1抑制劑和糖皮質(zhì)激素藥物以固定劑量組合共同施用，共同包裝或單獨(dú)開(kāi)處方。如本文所述，糖皮質(zhì)激素藥物可以是本領(lǐng)域已知或可用的糖皮質(zhì)激素，例如包括但不限于潑尼松龍、甲潑尼龍、地塞米松、氫化可的松、布地奈德、地夫可特、倍氯米松、環(huán)索奈德、氟替卡松、莫米松、曲安奈德、氟尼松、氯倍他索、倍他米松、氟輕松、氟輕縮松、氯可托龍、鹵貝他索、去羥米松、地奈德、哈西奈德、潑尼卡酯、二氟拉松、安西奈德、阿氯米松、二氟潑尼酯、氯替潑諾、氟米龍、利美索龍和甲羥松。用于延長(zhǎng)藥理作用持續(xù)時(shí)間而施用的糖皮質(zhì)激素的酯前藥(例如，醋酸潑尼松龍和半琥珀酸潑尼松龍)或其藥學(xué)上可接受的鹽也適合并包含在本披露的范圍內(nèi)。在一些實(shí)施例中，特定的糖皮質(zhì)激素藥物可以在醫(yī)療工作者或臨床醫(yī)生認(rèn)為適當(dāng)時(shí)進(jìn)行改變。在一些實(shí)施例中，糖皮質(zhì)激素藥物可能不是潑尼松或可的松，它們是需要hsd-1才能活化的無(wú)活性前藥。
93、在一些實(shí)施例中，可以將本文所述的偽不可逆hsd-1抑制劑通過(guò)由醫(yī)療工作者或臨床醫(yī)生認(rèn)為合適的任何途徑施用。合適的施用途徑包括但不限于口服、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、吸入、鼻內(nèi)、眼部、局部。
94、定義
95、所提供的定義和方法定義了本披露，并且在本披露的實(shí)踐中指導(dǎo)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員。除非另有說(shuō)明，否則術(shù)語(yǔ)應(yīng)根據(jù)相關(guān)領(lǐng)域普通技術(shù)人員的常規(guī)用法來(lái)理解。
96、如本文所用，“腦滲透劑”是指穿過(guò)血腦屏障的藥物或化合物。在一些實(shí)施例中，腦滲透劑偽不可逆hsd-1抑制劑用于治療與情緒、認(rèn)知能力和睡眠有關(guān)的糖皮質(zhì)激素過(guò)量癥狀。
97、如本文所用，“糖皮質(zhì)激素過(guò)量”是指?jìng)€(gè)體中的一種病況或生理狀態(tài)，其中活性糖皮質(zhì)激素(例如皮質(zhì)醇或合成糖皮質(zhì)激素)的水平相對(duì)于參考患者或樣品升高，或相對(duì)于未經(jīng)歷糖皮質(zhì)激素過(guò)量的患者升高。
98、如本文所用，“偽不可逆hsd-1抑制劑”是指與hsd-1結(jié)合、相互作用、引發(fā)構(gòu)象變化或以其他方式抑制或消除活性的化合物，例如小分子化合物。
99、如本文所用，“偽不可逆抑制”是指與hsd-1的輔因子nadph和抑制劑分子的氫鍵合或芳香族堆疊相互作用。通過(guò)這些，形成三元復(fù)合物，與僅與酶形成二元復(fù)合物的其他hsd-1抑制劑相比，其更耐受解離(即，結(jié)合更強(qiáng)，而不是更弱)。
100、如本文所用，“快速耐受”是指對(duì)連續(xù)劑量的藥物的反應(yīng)減弱，使藥物的效果降低。快速耐受是指藥物不敏感的發(fā)作。
101、如本文所用，化合物的“有效量”是指足以產(chǎn)生期望反應(yīng)(例如減少或消除病況或疾病的體征或癥狀)的量。例如，如本文所述，有效量可以是治療患者糖皮質(zhì)激素過(guò)量所需的偽不可逆hsd-1抑制劑的量。偽不可逆hsd-1抑制劑的有效量可能是改善或預(yù)防患者糖皮質(zhì)激素過(guò)量癥狀或降低患者中尿液四氫皮質(zhì)醇水平所必需的量。一般來(lái)說(shuō)，這個(gè)量足以可測(cè)量地減輕糖皮質(zhì)激素過(guò)量的癥狀或降低患者中尿液四氫皮質(zhì)醇的水平。當(dāng)向受試者施用時(shí)，通常會(huì)使用達(dá)到目標(biāo)組織濃度(例如，在肝臟、脂肪組織、大腦、骨骼、肌肉、皮膚、眼睛中)的劑量，該劑量已被證明達(dá)到可接受水平的糖皮質(zhì)激素或尿液四氫皮質(zhì)醇，即不會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)糖皮質(zhì)激素過(guò)量癥狀的水平。在一些實(shí)例中，“有效量”是治療一種或多種癥狀的量。在一個(gè)實(shí)例中，有效量是治療有效量。在一個(gè)實(shí)例中，有效量是預(yù)防或逆轉(zhuǎn)糖皮質(zhì)激素過(guò)量的一個(gè)或多個(gè)體征或癥狀的量。
102、如本文所用，“減少(reducing或reduced)”是指相對(duì)于參考樣品或患者，患者體內(nèi)例如一種或多種糖皮質(zhì)激素或尿液四氫皮質(zhì)醇的量或水平的降低或減少。如本文所用，減少量是指將糖皮質(zhì)激素或尿液四氫皮質(zhì)醇的水平降低到患者體內(nèi)未發(fā)現(xiàn)或未發(fā)生生理癥狀的水平。
103、如本文所用，“參考樣品”或“參考患者”是未如本文所述向其施用偽不可逆hsd-1抑制劑的樣品或患者，或健康患者。
104、如本文所用，“受試者”或“患者”是指人。根據(jù)本披露的患者或受試者患有糖皮質(zhì)激素過(guò)量。除非另有說(shuō)明，否則術(shù)語(yǔ)“患者”或“受試者”在本文中可互換使用。在一些實(shí)施例中，本文所述的患者或受試者患有分泌acth或crh的腫瘤。在一些實(shí)施例中，患者或受試者患有分泌皮質(zhì)醇的腫瘤。
105、如本文所用，“四氫皮質(zhì)醇”是指尿液四氫皮質(zhì)醇或皮甾五醇，其水平因施用hsd-1抑制劑而改變。
106、術(shù)語(yǔ)“治療”或“緩解”包括向患者施用化合物或藥劑，以緩解或逆轉(zhuǎn)疾病、病況或病癥的癥狀，或阻止或抑制其進(jìn)一步發(fā)展。需要治療的受試者包括那些已經(jīng)患有疾病或病癥或出現(xiàn)疾病、病況或病癥的癥狀的受試者，例如，糖皮質(zhì)激素或尿液四氫皮質(zhì)醇水平升高的患者。
107、用于描述和要求保護(hù)本披露的某些實(shí)施例的表示成分的量、性質(zhì)如分子量、反應(yīng)條件等的數(shù)字應(yīng)理解為在一些情況下通過(guò)術(shù)語(yǔ)“約”修飾。在一些實(shí)施例中，術(shù)語(yǔ)“約”用于指示值包括用于確定該值的裝置或方法的可變性的量度。書面描述和所附權(quán)利要求書中闡述的數(shù)值參數(shù)是近似值，其可以根據(jù)特定實(shí)施例尋求獲得的所需性質(zhì)而變化。數(shù)值參數(shù)應(yīng)該根據(jù)報(bào)告的有效數(shù)字的數(shù)目并通過(guò)應(yīng)用普通的舍入技術(shù)來(lái)解釋。盡管闡述本披露的一些實(shí)施例的寬范圍的數(shù)值范圍和參數(shù)是近似值，但是具體實(shí)施例中闡述的數(shù)值盡可能精確地報(bào)告。在本披露的一些實(shí)施例中呈現(xiàn)的數(shù)值可能含有必然由在它們相應(yīng)的測(cè)試測(cè)量中發(fā)現(xiàn)的可變性導(dǎo)致的某些誤差。本文對(duì)值范圍的描述僅旨在用作單獨(dú)提及落入該范圍內(nèi)的每個(gè)單獨(dú)值的簡(jiǎn)寫方法。除非本文另有指示，否則每個(gè)單獨(dú)值被并入說(shuō)明書中，如同其在本文中單獨(dú)描述一樣。
108、在描述特定實(shí)施例的背景下(特別是在某些以下權(quán)利要求的背景下)使用的術(shù)語(yǔ)“一個(gè)”和“一種”以及“該”和類似提及可以被解釋為涵蓋單數(shù)和復(fù)數(shù)，除非另有特別說(shuō)明。如本文(包括權(quán)利要求書)所用的術(shù)語(yǔ)“或”是包含性使用的，除非明確指出僅指替代物或替代物是相互排斥的。
109、術(shù)語(yǔ)“包含”、“具有”和“包括”是開(kāi)放式連接動(dòng)詞。一個(gè)或多個(gè)這些動(dòng)詞的任何形式或時(shí)態(tài)(如“包含(comprises)”、“包含(comprising)”、“具有(has)”、“具有(having)”、“包括(includes)”和“包括(including)”)也是開(kāi)放式的。例如，“包括(comprises)”、“具有”或“包括(includes)”一個(gè)或多個(gè)步驟的任何方法不限于僅具有那些一個(gè)或多個(gè)步驟，并且還可以覆蓋其他未列出的步驟。類似地，“包含”、“具有”或“包括”一個(gè)或多個(gè)特征的任何組合物或裝置不限于僅具有那些一個(gè)或多個(gè)特征，并且可以覆蓋其他未列出的特征。
110、在本文描述的所有方法能夠以任何合適順序進(jìn)行，除非本文另外說(shuō)明或另外與上下文明顯矛盾。相對(duì)于本文的某些實(shí)施例提供的任何和所有實(shí)例或示例性語(yǔ)言(例如，“如”)的使用僅旨在更好地闡明本披露并且不對(duì)本披露的范圍構(gòu)成限制，除非另有聲明。本說(shuō)明書中的任何語(yǔ)言都不應(yīng)該被解釋為指示任何未要求保護(hù)的要素為實(shí)踐本披露所必需。
111、本文披露的本披露的替代要素或?qū)嵤├姆纸M不應(yīng)該被解釋為限制。每個(gè)組成員可以單獨(dú)地提及和要求保護(hù)，或者與該組的其他成員或本文中找到的其他元素以任何組合提及和要求保護(hù)。出于方便或可專利性的原因，組的一個(gè)或多個(gè)成員可以包括在組中或從其中刪除。
112、已經(jīng)詳細(xì)描述了本披露，清楚的是在不背離所附權(quán)利要求書限定的本披露的范圍的情況下，修改、變化和等效實(shí)施例是可能的。此外，應(yīng)該了解，本披露中的所有實(shí)例都作為非限制性實(shí)例提供。
113、實(shí)例
114、在以下實(shí)例中提供了本披露內(nèi)容的實(shí)施例的實(shí)例。以下實(shí)例僅以說(shuō)明的方式呈現(xiàn)，并且?guī)椭绢I(lǐng)域普通技術(shù)人員使用本披露。這些實(shí)例并不旨在以任何方式另外限制本披露內(nèi)容的范圍。
115、實(shí)例1.spi-62對(duì)脂肪hsd-1的抑制。
116、對(duì)3種hsd-1抑制劑報(bào)告的矛盾觀察結(jié)果是人脂肪hsd-1抑制的快速耐受，并且可能被認(rèn)為是類別效應(yīng)。與多次劑量后相比，以下hsd-1抑制劑在單次劑量后顯示出更多的脂肪hsd-1抑制，即使血漿藥物水平在重復(fù)給藥后增加到穩(wěn)定狀態(tài)，并且在單次劑量和多次劑量后都觀察到肝臟hsd-1抑制。
117、在腹部肥胖的受試者中，azd4017在單次劑量后表現(xiàn)出脂肪hsd-1抑制，但在重復(fù)給藥后沒(méi)有持續(xù)的抑制作用。azd4017也顯示多次劑量后沒(méi)有皮膚hsd-1抑制，盡管在同一受試者中它與最大肝臟hsd-1抑制相關(guān)。由于單次劑量后沒(méi)有數(shù)據(jù)，因此尚不清楚azd4017是否顯示皮膚hsd-1抑制的快速耐受，或者是否可能有其他解釋。與接受安慰劑的受試者相比，接受azd4017的受試者觀察到皮膚的臨床益處(改善傷口愈合)。用于測(cè)量皮膚hsd-1活性的離體測(cè)定可能不具有特異性。
118、在人脂肪組織中，與急性施用相比，重復(fù)給藥azd8329后hsd-1活性的抑制喪失。
119、在單次劑量bi-135585后，人脂肪組織中hsd-1酶抑制中值達(dá)到90％，但在連續(xù)治療14天后較低(31％或更低)。
120、據(jù)預(yù)測(cè)，偽不可逆hsd-1抑制劑不會(huì)顯示人脂肪hsd-1抑制的快速耐受。這是基于一種假設(shè)，即脂肪快速耐受是hsd-1底物(非活性gc)水平增加競(jìng)爭(zhēng)的結(jié)果。非活性gc具有高度親脂性，因此預(yù)計(jì)會(huì)在接受hsd-1抑制劑治療的患者組織(特別是gc過(guò)量患者，還特別是脂肪組織)中積累。
121、bi-187004——由我們基于快結(jié)合、慢解離體外酶動(dòng)力學(xué)而將其鑒定為偽不可逆hsd-1抑制劑——顯示對(duì)人脂肪hsd-1抑制的有限快速耐受。例如，與20mg劑量相關(guān)的人脂肪組織中hsd-1酶抑制中值在第2天為92.4％，在第15天為78.1％。對(duì)于240mg劑量，第2天的中值為99.5％，第15天為93.1％。第2天和第15天之間的差異可能是因?yàn)槌鲇诤笄谠颍緲悠肥窃诘?天上劑量后10至45分鐘以及在第15天上第14天劑量后24小時(shí)獲得的。
122、可的松是一種內(nèi)源性hsd-1底物，其km為1.9mm，而logp為1.25。潑尼松是一種常見(jiàn)的gc藥物，一種需要hsd-1才能活化為潑尼松龍的前藥。它也是潑尼松龍的主要代謝物，潑尼松龍是另一種常見(jiàn)gc藥物。它對(duì)人hsd-1的km為20.6mm，而logp為1.5。
123、對(duì)于競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑(例如azd4017、azd8329或bi-135585)，可的松、潑尼松或其他親脂性hsd-1底物的組織水平增加是有問(wèn)題的。當(dāng)?shù)孜?如可的松或潑尼松)在組織中積累時(shí)，因?yàn)閔sd-1不會(huì)將其轉(zhuǎn)化為活性形式，它可以與抑制劑競(jìng)爭(zhēng)。這與觀察結(jié)果一致，即這3種化合物在單次劑量后顯著抑制脂肪hsd-1，但在多次劑量后抑制較小。與肝臟相比，這種現(xiàn)象在脂肪(可能還有皮膚)中可能更普遍，因?yàn)榻M織血流量較低，脂質(zhì)含量較高，可能還有其他因素。相比之下，偽不可逆抑制劑對(duì)底物積累的競(jìng)爭(zhēng)不太敏感，并且更能維持hsd-1抑制及其隨之而來(lái)的臨床益處。這預(yù)測(cè)在臨床試驗(yàn)中得到了驗(yàn)證。
124、向年齡在18至65歲之間且體重指數(shù)在30.0至45.0之間的2型糖尿病男性和非月經(jīng)期女性受試者每天施用spi-62，持續(xù)14天。在第1、2和14個(gè)劑量間隔之前和期間至少4小時(shí)內(nèi)，經(jīng)由微透析導(dǎo)管(63微透析導(dǎo)管，m?dialysis，瑞典斯德哥爾摩)以1μl/min的速率將灌注液t1(mdialysis，瑞典斯德哥爾摩)+0.5％酒精usp中1μg/ml?d8可的松([2,2,4,6,6,9,12,12-2h8]可的松，密理博西格瑪公司(millipore?sigma)，俄亥俄州邁阿密堡)連續(xù)輸注到皮下腹部脂肪組織中。兩小時(shí)間隔(spi-62劑量后0-2、2-4、4-6、6-8、8-10、20-22和22-24小時(shí))收集脂肪透析液，并分析d8可的松和d8皮質(zhì)醇。d8皮質(zhì)醇摩爾百分比分?jǐn)?shù)(mpf)計(jì)算為：([2,2,4,6,6,9,12,12-2h8]皮質(zhì)醇*368.51)/([2,2,4,6,6,9,12,12-2h8]可的松*370.52)，其中368.51和370.52是d8可的松和d8皮質(zhì)醇的摩爾質(zhì)量。脂肪hsd-1抑制百分比計(jì)算為：100*(1-(mpft/mpf基線)。
125、樣品的時(shí)間(t)被認(rèn)為是收集間隔的中點(diǎn)。測(cè)定靈敏度將脂肪hsd-1抑制的定量限制在約90％-95％，取決于d8可的松的值，因?yàn)榈陀诙肯孪薜膁8皮質(zhì)醇值被估算為定量下限。顯示數(shù)據(jù)為spi-62日劑量為6mg的兩名受試者中觀察到的抑制中值。
126、如圖1所示，單次劑量后2-4小時(shí)檢測(cè)到脂肪hsd-1抑制，在第2次劑量間隔期間達(dá)到最大可測(cè)量水平，在第2次和第14次劑量間隔期間幾乎相同。在spi-62劑量為1mg、2mg、3mg或10mg的其他受試者中，在多次劑量后觀察到最大可測(cè)量的脂肪hsd-1抑制，即使沒(méi)有或有限的脂肪hsd-1抑制與較低的單次spi-62劑量相關(guān)。
127、實(shí)例2.通過(guò)人藥代動(dòng)力學(xué)鑒定的偽不可逆hsd-1抑制劑
128、偽不可逆hsd-1抑制劑可以通過(guò)人藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行鑒定。由于初始劑量的偽不可逆hsd-1抑制劑最初結(jié)合并保持結(jié)合組織中的其靶標(biāo)，因此可以從中心循環(huán)中螯合多達(dá)約3mg。因此，在亞毫克至低毫克范圍內(nèi)的單次劑量后，藥代動(dòng)力學(xué)存在顯著且一致非線性特征，多次劑量后具有與劑量成比例的暴露?；谌怂幋鷦?dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)，以下被鑒定為偽不可逆hsd-1抑制劑。
129、在單次spi-62(以前為asp3662)劑量施用后，觀察到實(shí)質(zhì)性非線性的血漿暴露；0.7mg至3mg的單次劑量與劑量標(biāo)準(zhǔn)化血漿水平相關(guān)，遠(yuǎn)低于較高的單次劑量。對(duì)于0.2mg至50mg的spi-62劑量，給藥14天后的血漿水平大致與劑量成比例(在每天0.2mg給藥前施用3mg負(fù)荷劑量)。spi-62的單次劑量和多次劑量藥代動(dòng)力學(xué)通過(guò)具有3個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)吸收室和約2.5mg的spi-62的估計(jì)目標(biāo)容量(這與藥代動(dòng)力學(xué)非線性突出的劑量范圍吻合)的兩室tmdd群體藥代動(dòng)力學(xué)模型得到充分表征。
130、在單次abt-384劑量施用后，觀察到實(shí)質(zhì)性非線性的血漿暴露；1mg至4mg的單次劑量與劑量標(biāo)準(zhǔn)化血漿水平相關(guān)，遠(yuǎn)低于較高的單次劑量。對(duì)于1至100mg的abt-384劑量，給藥14天后的血漿水平大致與劑量成比例。abt-384的單次劑量和多次劑量藥代動(dòng)力學(xué)通過(guò)具有3個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)吸收室和約1mg?spi-62的估計(jì)目標(biāo)容量(這與藥代動(dòng)力學(xué)非線性突出的劑量范圍吻合，并且可能是低估計(jì)值，因?yàn)闆](méi)有來(lái)自亞毫克劑量的數(shù)據(jù)可用)的兩室tmdd群體藥代動(dòng)力學(xué)模型得到充分表征。據(jù)報(bào)道，abt-384在食蟹猴肝臟中保留至少77天。
131、spi-62和abt-384具有kd比ki低約60倍的顯著和意想不到的特性。
132、mk-0736表現(xiàn)出非線性、可飽和分布pk，導(dǎo)致半衰期隨著劑量和劑量依賴性積累的增加而縮短。mk-0736的群體藥代動(dòng)力學(xué)由具有一階吸收、線性消除和可飽和分布的兩室模型描述。施用劑量范圍為1.2mg至200mg，因此在類似于spi-62和abt-384的劑量下可能觀察到可飽和分布，這與hsd-1抑制劑tmdd的那些先例一致。研究的作者(默克公司(merck)的臨床藥理學(xué)專家)顯然不知道tmdd，因此使用了不太合適的模型結(jié)構(gòu)來(lái)建模mk-0736藥代動(dòng)力學(xué)。
133、在單次mk-0916劑量施用后，觀察到實(shí)質(zhì)性非線性的血漿暴露；0.2mg至3.16mg的單次劑量與劑量標(biāo)準(zhǔn)化血漿水平相關(guān)，遠(yuǎn)低于較高的單次劑量。對(duì)于0.2mg至50mg的mk-0916劑量，給藥14天或28天后的血漿水平大致與劑量成比例。將藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)擬合到兩室飽和分布模型。觀察到藥代動(dòng)力學(xué)線性的劑量范圍與spi-62相似，表明mk-0916也經(jīng)受hsd-1介導(dǎo)的tmdd。研究的作者(默克公司的臨床藥理學(xué)專家)顯然不知道tmdd，因此使用了不太合適的模型結(jié)構(gòu)來(lái)建模mk-0916藥代動(dòng)力學(xué)。約3mg?mk-0916的估計(jì)飽和分布能力與藥代動(dòng)力學(xué)非線性突出的劑量范圍以及使用tmdd模型估計(jì)的spi-62目標(biāo)容量吻合。
134、單次0.1mg或0.5mg劑量后未檢測(cè)到bms-823778血漿水平，而單次2mg劑量后小于與劑量成比例的血漿水平。穩(wěn)態(tài)暴露從每天0.5mg與劑量成比例。這些觀察結(jié)果與hsd-1抑制劑tmdd臨床藥代動(dòng)力學(xué)行為一致，spi-62和abt-384最能表征此行為?；谏韺W(xué)的藥代動(dòng)力學(xué)模型高估了在低水平第一劑量后的暴露。研究的作者(bms的臨床藥理學(xué)專家)將他們模型的缺點(diǎn)歸因于未知的機(jī)制，因此顯然不知道hsd-1介導(dǎo)的tmdd。
135、單次劑量2mg和5mg后，ue2343血漿水平低于定量水平。單次劑量10mg至35mg后，暴露以大于與劑量成比例的方式增加。圖顯示，單次10mg劑量(40.4ng/ml)后測(cè)量的平均最大血漿濃度遠(yuǎn)高于測(cè)定定量值(通過(guò)視覺(jué)推斷，不超過(guò)約5ng/ml)。未報(bào)告劑量<10mg的多次劑量數(shù)據(jù)。尚未報(bào)道群體藥代動(dòng)力學(xué)模型。ue2343的偽不可逆hsd-1抑制導(dǎo)致的tmdd最可能解釋數(shù)據(jù)。
136、amg-221顯示出藥代動(dòng)力學(xué)的非線性，與單次30mg或100mg劑量相比，單次3mg劑量后的劑量標(biāo)準(zhǔn)化暴露更低。血漿水平數(shù)據(jù)的特征是2室開(kāi)放模型，其中從中心室線性消除，該模型略微高估了與較高劑量相關(guān)的暴露。amg-221似乎顯示出與tmdd一致的人藥代動(dòng)力學(xué)，盡管在重復(fù)給藥后沒(méi)有數(shù)據(jù)，但僅基于藥代動(dòng)力學(xué)證據(jù)，推斷不如其他hsd-1抑制劑清楚。
137、單次2.5mg劑量后bi-187004劑量標(biāo)準(zhǔn)化血漿水平顯著低于以及單次5mg劑量后的水平低于單次劑量10mg及更高相關(guān)的水平。未報(bào)告低于10mg的多次劑量數(shù)據(jù)。尚未報(bào)道群體藥代動(dòng)力學(xué)模型。bi-187004的偽不可逆hsd-1抑制導(dǎo)致的tmdd最可能解釋數(shù)據(jù)。
138、實(shí)例3.通過(guò)人藥效動(dòng)力學(xué)鑒定的偽不可逆hsd-1抑制劑
139、偽不可逆hsd-1抑制劑可以通過(guò)人藥效動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行鑒定。由于抑制劑從酶緩慢解離，因此以下是偽不可逆hsd-1抑制劑的特征。
140、在停止給藥后將長(zhǎng)時(shí)間觀察hsd-1抑制，特別是在hsd-1蛋白濃度最高的肝臟中，這可以進(jìn)一步促進(jìn)長(zhǎng)期相互作用。由于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中高h(yuǎn)sd-1濃度，因此理論上，從一個(gè)酶分子解離的抑制劑分子在從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中分布出來(lái)之前與另一個(gè)結(jié)合的可能性更高。
141、靶標(biāo)抑制可以與非常低的血漿水平相關(guān)。雖然循環(huán)的偽不可逆hsd-1抑制劑分子不與酶結(jié)合，因此可以通過(guò)與其他hsd-1抑制劑相似的途徑和相似的速率被消除，但與胞內(nèi)酶的長(zhǎng)期結(jié)合提供了區(qū)室，偽不可逆hsd-1抑制劑只能非常緩慢地從中重新進(jìn)入循環(huán)。即使使用高靈敏度測(cè)定，hsd-1抑制也可能與接近或低于定量限的血漿藥物水平以及遠(yuǎn)低于分子對(duì)人hsd-1的ki或ic50的未結(jié)合(即組織可及)水平相關(guān)。
142、在單次劑量后，將觀察到hsd-1抑制的滯后和濃度獨(dú)立性。當(dāng)從胃腸道吸收偽不可逆hsd-1抑制劑時(shí)，它首先分布到肝臟，肝臟含有藥物可以結(jié)合并保持結(jié)合而不會(huì)進(jìn)入中心循環(huán)的最高濃度的hsd-1。對(duì)于低劑量，在藥物達(dá)到高于定量限的血漿水平之前，可能會(huì)觀察到大量的hsd-1抑制。單次劑量偽不可逆hsd-1抑制劑后，隨著藥物血漿水平增加然后降低，肝臟hsd-1抑制可能不會(huì)變化太大，特別是如果劑量足以使肝臟hsd-1飽和(健康成人的藥物容量高達(dá)約3mg)。
143、在肝細(xì)胞中，5-類固醇還原酶和3-類固醇還原酶依次將皮質(zhì)醇(hsd-1產(chǎn)物)代謝為四氫皮質(zhì)醇和別四氫皮質(zhì)醇，并將可的松(hsd-1底物)代謝為四氫可的松。四氫代謝物迅速而廣泛地以尿液排泄出去。因此，尿液(四氫皮質(zhì)醇+別四氫皮質(zhì)醇)/四氫可的松比率是肝臟酶活性的生物標(biāo)記物。持續(xù)的腎上腺合成提供循環(huán)的皮質(zhì)醇池，其中游離部分(約5％)進(jìn)入細(xì)胞。這防止尿液hsd-1比率降至約0.1以下。因此，該范圍內(nèi)的值被認(rèn)為指示肝臟hsd-1的最大抑制。
144、停止spi-62給藥后，通過(guò)尿液hsd-1比率評(píng)估的肝hsd-1抑制是持久的。在健康成人中，在最后一次劑量后2周以上，尿液hsd-1比率未完全恢復(fù)到基線。例如，在停止每日劑量spi-62?0.7mg后16±2天，平均尿液hsd-1比率比基線降低55％，而在最后一個(gè)給藥日，比基線降低84％。在較低(圖2)和較高日劑量的spi-62后觀察到類似的數(shù)據(jù)。在連續(xù)6周施用日劑量10mg?spi-62的患有痛性糖尿病周圍性腎病的患者中，給藥前平均尿液hsd-1比率為1.06，最后一次給藥日為0.13，最后一次劑量后2周為0.33。
145、通過(guò)與hsd-1特異性pet配體[11c]as2471907競(jìng)爭(zhēng)評(píng)估，單次劑量spi-62?3mg后，大腦hsd-1占有率在3.3至25小時(shí)為84％-90％，在42至46小時(shí)為56％-83％，在139小時(shí)為36％-45％，在189小時(shí)為26％。正如所預(yù)期的，spi-62在大腦中的藥理學(xué)半衰期比在肝臟中更短。參見(jiàn)圖3。
146、迄今為止臨床上施用的最低spi-62劑量為每天0.2mg，持續(xù)14天，與最后一次給藥日尿液hsd-1比率相對(duì)于基線平均降低87％相關(guān)，此時(shí)平均最大血漿藥物濃度(cmax)為<1ng/ml。這對(duì)應(yīng)于未結(jié)合濃度<0.25nm，遠(yuǎn)低于spi-62對(duì)人hsd-1的ki?5.3nm和ic50?17nm。在0.2mg至50mg的spi-62劑量范圍內(nèi)，每個(gè)劑量組的平均尿液hsd-1比率在0.09與0.17之間。最終尿液hsd-1比率與濃度無(wú)關(guān)；相應(yīng)的cmax平均值范圍為<1至835ng/ml。單次劑量spi-621mg與安慰劑相比，尿液hsd-1比率的平均差異為51％，并且平均cmax<0.05ng/ml(未結(jié)合濃度<0.012nm)。單次劑量6mg至60mg?spi-62后，平均尿液hsd-1比率在0.11與0.18之間；相應(yīng)的cmax平均值范圍為28ng/ml至595ng/ml。
147、在施用spi-62單次劑量后觀察到預(yù)期的滯后模式。在給藥后0至6(○)、6至12(◇)、12至24(+)、24至48(●)和48至72(◆)小時(shí)收集的尿液中測(cè)定尿液hsd-1比率(參見(jiàn)圖4)。血漿spi-62水平來(lái)自每次收集的中點(diǎn)；給藥后9小時(shí)和60小時(shí)的數(shù)據(jù)從周圍數(shù)據(jù)中插值。顯示了每組6名受試者的平均值。
148、在劑量后的前6小時(shí)內(nèi)，觀察到部分肝hsd-1沒(méi)有無(wú)變化的濃度-反應(yīng)關(guān)系。這可能是由于在初始分布階段期間組間的可變性，在此期間沒(méi)有或幾乎沒(méi)有hsd-1抑制。對(duì)于初始分布階段后的間隔，0.1與0.2之間的相似平均尿hsd-1比率與<2至>300ng/ml的血漿藥物水平以及劑量后6至72小時(shí)的時(shí)間間隔相關(guān)。單次劑量spi-62?1mg劑量未顯示滯后圖，因?yàn)樗幬锼骄陀趌loq(0.1ng/ml)。在給藥后0至6、6至12、12至24、24至48和48至72小時(shí)收集的尿液中，1mg劑量后的平均尿液hsd-1比率為0.694、0.471、0.472、0.522和0.618，各自指示了部分肝hsd-1抑制。
149、還報(bào)道，abt-384在體內(nèi)顯示出延長(zhǎng)的hsd-1抑制。在7次日劑量abt-384?1至100mg后，在健康成年人中測(cè)得類似的肝臟hsd-1抑制，其中相應(yīng)的平均cmax為9.4ng/ml至647ng/ml。在一項(xiàng)1期臨床試驗(yàn)中，在停止向健康成人每天施用abt-384后長(zhǎng)達(dá)40小時(shí)內(nèi)，觀察到完全腦hsd-1抑制。
150、在單次口服amg-221?3mg后，觀察到預(yù)期的滯后模式。那些數(shù)據(jù)增加了amg-221是一種偽不可逆hsd-1抑制劑的信心。
151、實(shí)例4.通過(guò)體外酶動(dòng)力學(xué)鑒定的偽不可逆hsd-1抑制劑
152、偽不可逆hsd-1抑制劑可以通過(guò)體外酶動(dòng)力學(xué)評(píng)估來(lái)鑒定，其中與其他hsd-1抑制劑相比，預(yù)計(jì)它們顯示更長(zhǎng)的酶滯留時(shí)間。表面等離子體共振(spr)是受入射光刺激的負(fù)介電常數(shù)材料與正介電常數(shù)材料之間界面處的傳導(dǎo)電子的共振振蕩。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)與表面結(jié)合時(shí)，spr可用于檢測(cè)配體與蛋白質(zhì)的結(jié)合。
153、先前，據(jù)報(bào)道abt-384在體外與hsd-1酶迅速形成緊密的酶-抑制劑復(fù)合物，但解離速率非常緩慢。
154、使用spr表征19種hsd-1抑制劑的結(jié)合親和力和動(dòng)力學(xué)。采用平行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，在50mm?tris，150mm?nacl，2％?dmso，ph?7.4中，在30μl/min流速下，通過(guò)a-b-a方法測(cè)試每種化合物。將酶暴露于含300μm?nadph的50mm?tris，150mm?nacl，2％?dmso，ph?7.4溶液90秒(a步驟)，然后暴露于含300μm?nadph和測(cè)試化合物的緩沖液150秒(b步驟)，然后暴露于含300μm?nadph的緩沖液300至370秒(a步驟)。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，在300μm?nadph存在下監(jiān)測(cè)測(cè)試化合物的締合和解離。通過(guò)在含有300μm?nadph的50mm?tris，150mm?nacl，2％?dmso，ph7.4中進(jìn)行兩倍連續(xù)稀釋來(lái)制備四種濃度的測(cè)試化合物。每種化合物的滯留時(shí)間(解離速率常數(shù)的倒數(shù))如下表1所示。
155、表1.hsd-1抑制劑的滯留時(shí)間
156、
157、
158、基于這些結(jié)果，abt-384、bi-187004、ue-2343、spi-62和kr-67607被鑒定為可能的偽不可逆hsd-1抑制劑。
159、僅對(duì)這些進(jìn)行分類的理由如下。
160、雖然kr-67607的臨床藥代動(dòng)力學(xué)或藥效動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)尚未公布，但其酶滯留時(shí)間與spi-62非常相似，spi-62也通過(guò)臨床藥代動(dòng)力學(xué)和藥效動(dòng)力學(xué)結(jié)果被確定為偽不可逆hsd-1抑制劑。kr-67607還與abt-384共享重要的化學(xué)團(tuán)，abt-384是另一種確定的偽不可逆hsd-1抑制劑，并且似乎與spi-62和abt-384共享與人hsd-1的結(jié)合模式(參見(jiàn)下文)。
161、abt-384酸代謝物在體外hsd-1抑制劑效力僅為abt-384的19％。此外，有結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)認(rèn)為abt-384酸代謝物不是偽不可逆hsd-1抑制劑。
162、spi-09在食蟹猴中在廣泛范圍的單次劑量?jī)?nèi)顯示出與劑量成比例的藥代動(dòng)力學(xué)，這是偽不可逆hsd-1抑制劑所不期望的。abt-384在食蟹猴中的藥代動(dòng)力學(xué)行為與在人中相似。食蟹猴共享對(duì)人hsd-1的變構(gòu)調(diào)節(jié)重要的pro-cys基序(見(jiàn)下文)，進(jìn)一步支持食蟹猴作為表征偽不可逆hsd-1抑制劑的合適物種。
163、因此，abt-384酸代謝物、spi-09和其他具有較短酶滯留時(shí)間的hsd-1抑制劑通過(guò)體外酶動(dòng)力學(xué)不被分類為偽不可逆抑制劑。
164、對(duì)脂肪hsd-1抑制顯示快速耐受的抑制劑(bi-135585、azd4017、azd8329)通過(guò)體外酶動(dòng)力學(xué)不被分類為偽不可逆抑制劑。
165、然而，顯示與偽不可逆抑制一致的臨床藥代動(dòng)力學(xué)的一些化合物(mk-0916、bms-823778)通過(guò)體外酶動(dòng)力學(xué)不被如此分類。spr的一個(gè)可能限制是，人hsd-1在體內(nèi)的變構(gòu)構(gòu)象(見(jiàn)下文)在實(shí)驗(yàn)條件下無(wú)法維持。在偽不可逆hsd-1抑制劑的一種或多種結(jié)合模式取決于酶的天然變構(gòu)構(gòu)象的程度上，spr可能顯示出僅一些偽不可逆hsd-1抑制劑的長(zhǎng)滯留時(shí)間。與spi-62、abt-384和kr-67607相比，bms-823778與人hsd-1的結(jié)合模式不同(見(jiàn)下文)。mk-0916與bms-823778具有化學(xué)結(jié)構(gòu)相似性；這兩個(gè)分子與人hsd-1的結(jié)合可能相似。
166、實(shí)例5.通過(guò)酶-抑制劑結(jié)構(gòu)鑒定的偽不可逆hsd-1抑制劑
167、人hsd-1似乎以四聚體發(fā)揮作用。靈長(zhǎng)類動(dòng)物特有的c-末端脯氨酸(p)271半胱氨酸(c)272基序位于四聚體的中心，并形成改變酶活性的可逆的酶二硫化物。四聚化界面的構(gòu)象靈活性與酶活性位點(diǎn)的結(jié)構(gòu)變化偶聯(lián)，表明中心p271-c272基序可能調(diào)節(jié)酶活性。兩個(gè)二聚體通過(guò)沿反平行方向定向的酶羧基末端對(duì)之間的互補(bǔ)相互作用締合。hsd-1四聚體中的每個(gè)羧基末端大致垂直于二聚體2重軸。末端的這種排列產(chǎn)生長(zhǎng)4螺旋束狀結(jié)構(gòu)，其將相鄰的酶活性位點(diǎn)定位到結(jié)構(gòu)的頂部和底部(圖5)。底物(例如可的松)結(jié)合誘導(dǎo)四聚體的構(gòu)象變化，以提供酶特異性并保護(hù)活性位點(diǎn)免于大量轉(zhuǎn)移，從而促進(jìn)氫化物轉(zhuǎn)移。
168、已經(jīng)提出了兩種基于結(jié)構(gòu)的模型，用于hsd-1膜相互作用和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中的亞基組裝(圖6)。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的高度內(nèi)陷膜結(jié)構(gòu)與模型一致，在該模型中，跨越兩個(gè)脂質(zhì)雙層的四聚體形成腔室，在該腔室中，偽不可逆抑制劑在從hsd-1緩慢解離后，可以在同一四聚體內(nèi)迅速與hsd-1重新締合，以實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期抑制。
169、hsd-1屬于短鏈脫氫酶/還原酶(sdr)酶家族，它們具有共同的反應(yīng)機(jī)制，其中活性位點(diǎn)酪氨酸(y)作為催化酸，使結(jié)合底物的反應(yīng)性酮氧質(zhì)子化?；钚晕稽c(diǎn)絲氨酸(s)穩(wěn)定結(jié)合底物的方向。保守的賴氨酸(k)與nadph的煙酰胺核糖形成氫鍵，并降低y羥基的pka以促進(jìn)質(zhì)子轉(zhuǎn)移。在hsd-1中，催化三聯(lián)體是s170-y183-k187。許多hsd-1抑制劑與催化三聯(lián)體相互作用，特別是s170和y183。一些hsd-1抑制劑反而與催化三聯(lián)體附近的α螺旋骨架相互作用。
170、據(jù)假設(shè)，與hsd-1蛋白和nadph輔因子形成三元復(fù)合物是偽不可逆抑制劑的共同特征。在與hsd-1結(jié)合的結(jié)構(gòu)已存入蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)的39種hsd-1抑制劑中，少數(shù)似乎直接與nadph形成這種三元復(fù)合物。這些可以根據(jù)3種類型的相互作用進(jìn)一步分類：(1)酰胺氮和nadph焦磷酸鹽之間的氫鍵(酰胺)；(2)芳香族氮和nadph焦磷酸鹽之間的氫鍵(芳香族)；和(3)與nadph煙酰胺環(huán)的芳香族堆疊相互作用(堆疊)。與催化三聯(lián)體和附近骨架的相互作用也總結(jié)在下表2中。
171、表2.與催化三聯(lián)體和骨架的相互作用
172、 抑制劑 pdb記錄 nadp(h) s170 y183 k187 骨架 化合物a 2irw 酰胺 是 是 否 否 sar184841 4hx5 酰胺 是 是 否 否 化合物b 3qqp 芳香族 是 是 否 否 化合物c 2rbe 堆疊 是 是 否 否 化合物d 3oq1 堆疊 否 否 否 是 bms-823778 5qii 堆疊 是 是 否 否
173、這些藥物之一與hsd-1的締合將是雙分子反應(yīng)，而解離將是其中藥物和催化輔因子nadph與hsd-1的相互作用有助于解離的活化能屏障的過(guò)程。從某種意義上說(shuō)，nadph與hsd-1的結(jié)合能也將抑制劑與hsd-1保持在一起。這導(dǎo)致了偽不可逆抑制劑的快結(jié)合、慢解離動(dòng)力學(xué)特征。
174、其他33種與hsd-1結(jié)合的結(jié)構(gòu)可用的抑制劑，包括azd4017(pdb記錄4hfr)和azd8329(pdb記錄4p38)，這兩種對(duì)脂肪hsd-1抑制顯示出快速耐受，它們不會(huì)形成包括nadph的三元復(fù)合物或僅通過(guò)水分子形成。水分子在活性位點(diǎn)可能具有足夠的流動(dòng)性，因此目前無(wú)法預(yù)測(cè)hsd-1抑制劑和nadph在人hsd-1活性位點(diǎn)通過(guò)水分子的復(fù)合物會(huì)帶來(lái)與酰胺、芳香族和堆疊相互作用相同的優(yōu)勢(shì)。
175、圖7所示的化合物a[(1s,3r,5s,7s)-4-(2-(4-甲氧基苯氧基)-2-甲基丙酰胺基)金剛烷-1-甲酰胺)]是有用的，因?yàn)榕cnadph和催化三聯(lián)體相互作用的分子部分與abt-384和kr-67607中的部分相同。使用分子對(duì)接技術(shù)，對(duì)spi-62、abt-384和kr-67607與hsd-1的結(jié)合進(jìn)行建模。模型表明，這些抑制劑在活性位點(diǎn)與nadph形成酰胺類三元復(fù)合物。它們與sar-184841和化合物a一起被分類為偽不可逆hsd-1抑制劑。
176、與其他類別成員相比，spi-62顯示出不同但相似的相互作用。例如，(a)苯甲酰胺，而不是金剛烷甲酰胺，與nadph焦磷酸鹽相互作用；以及(b)三嗪環(huán)，而不是酰胺酮，與s170和y183相互作用(圖10)。bms-823778和其他hsd-1抑制劑也顯示出與s170和y183的這種三嗪相互作用。
177、spi-62和abt-384的酸代謝物的分子對(duì)接模型表明，代謝物與背離nadph焦磷酸鹽的苯甲酸或金剛烷羧酸以相反的方向結(jié)合。這是與母體藥物相比，酸代謝物是效力低得多的hsd-1抑制劑的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。
178、mk-0916和bms-823778的三嗪環(huán)與nadph、s170和y183的煙酰胺環(huán)相互作用，這是它們作為偽不可逆hsd-1抑制劑的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。圖9顯示了bms-823778的已建立的結(jié)合。使用分子對(duì)接技術(shù)，對(duì)mk-0916的結(jié)合進(jìn)行建模，以確定結(jié)合模式是否與bms-823778相似。模型表明，該抑制劑似乎在活性位點(diǎn)與nadph形成堆疊類三元復(fù)合物?；衔颿和化合物d(pdb記錄2rbe和3oq1，表2)也可能是偽不可逆hsd-1抑制劑。在hsd-1活性位點(diǎn)與napdh形成芳香族類三元復(fù)合物的化合物(例如化合物b；pdb記錄3qqp)可能是偽不可逆抑制劑。
179、實(shí)例6.hsd-1抑制劑作為糖皮質(zhì)激素過(guò)量潛在治療的證據(jù)
180、hsd-1抑制劑用于糖皮質(zhì)激素過(guò)量患者(無(wú)論是內(nèi)源性(庫(kù)欣綜合征和acs)還是外源性(gc藥物))的治療假設(shè)是hsd-1形成大量過(guò)量的胞內(nèi)gc，這些gc可以與胞內(nèi)gc和鹽皮質(zhì)激素受體以及非基因組受體結(jié)合，從而引起癥狀。hsd-1抑制可以減少胞內(nèi)gc，因此有可能減輕庫(kù)欣綜合征或acs患者的癥狀。它還可以預(yù)防或逆轉(zhuǎn)與gc藥物使用相關(guān)的許多不良反應(yīng)，特別是依賴長(zhǎng)期使用gc藥物來(lái)控制自身免疫性疾病和其他病況的患者。
181、若干獨(dú)立的臨床和非臨床證據(jù)線索支持hsd-1抑制劑治療庫(kù)欣綜合征或acs的潛力，或在需要此類藥物的患者中作為gc的輔助療法。
182、hsd-1活性在庫(kù)欣綜合征患者中升高。尿液hsd-1比率(肝臟hsd-1活性的生物標(biāo)記物)在庫(kù)欣病患者中為1.74±0.24，在異位acth分泌患者中為3.95±0.69，在腎上腺庫(kù)欣綜合征患者中為1.7(中值)，而在健康成人中為1.21±0.06。hsd-1比率升高被認(rèn)為是皮質(zhì)醇誘導(dǎo)hsd-1的結(jié)果。
183、盡管24小時(shí)尿液游離皮質(zhì)醇非常高，但患有庫(kù)欣綜合征和體質(zhì)上低hsd-1活性的患者沒(méi)有顯示出與皮質(zhì)醇增多癥相關(guān)的癥狀。例如，一名20歲女性出現(xiàn)閉經(jīng)，這是庫(kù)欣病的雄激素癥狀，并且沒(méi)有表現(xiàn)出皮質(zhì)醇增多癥的后遺癥。她的尿液游離皮質(zhì)醇在不同情況下為831nmol/24小時(shí)和1049nmol/24小時(shí)，并且她的尿液hsd-1比率為0.66。經(jīng)蝶腺瘤切除術(shù)后，她開(kāi)始來(lái)月經(jīng)，并且其循環(huán)和尿液皮質(zhì)醇水平恢復(fù)正常。在另一個(gè)實(shí)例中，一名55歲女性意外發(fā)現(xiàn)了腎上腺腫瘤。她沒(méi)有表現(xiàn)出庫(kù)欣綜合征、胰島素抵抗、高血壓或血脂異常的體征。她的尿液游離皮質(zhì)醇為1149nmol/24小時(shí)，并且她的尿液hsd-1比率在不同情況下為0.61至0.66。腎上腺切除術(shù)后，最初需要高劑量糖皮質(zhì)激素療法以預(yù)防腎上腺功能不全。
184、hsd-1抑制劑(s-707106)在皮質(zhì)醇增多癥患者(11例acs，4例庫(kù)欣綜合征)中的試點(diǎn)開(kāi)放標(biāo)簽臨床試驗(yàn)顯示血糖控制和身體習(xí)慣的積極趨勢(shì)。在24周時(shí)，受試者平均體重減輕1.6kg，體脂百分比降低2.5％，體肌百分比增加2.4％?？诜咸烟悄土吭囼?yàn)后葡萄糖曲線下面積主要在肥胖受試者中降低。
185、在健康成年男性隊(duì)列中，與僅施用潑尼松龍的那些相比，連續(xù)7天施用潑尼松龍20mg和hsd-1抑制劑(azd4017)的那些表現(xiàn)出在正常血糖鉗夾期間對(duì)胰島素敏感性的抵抗降低、甘油三酯增加、夜間血壓升高、骨形成生物標(biāo)記物降低和骨吸收生物標(biāo)記物增加。
186、使用各種hsd-1抑制劑的臨床試驗(yàn)結(jié)果支持治療對(duì)應(yīng)于gc過(guò)量的發(fā)病率的某些常見(jiàn)慢性疾病和病癥的功效，包括incb-13739用于糖尿病，ro5093151用于非酒精性脂肪性肝病，以及azd4017用于傷口愈合受損。與安慰劑相比，一些臨床試驗(yàn)中的hsd-1抑制劑也與12周時(shí)體重減輕1kg-2kg有關(guān)。hsd-1抑制劑的其他臨床試驗(yàn)表明，即使施用足夠的劑量和活性對(duì)照的陽(yáng)性結(jié)果(如abt-384治療癡呆)也缺乏功效。然而，hsd-1抑制劑的其他臨床試驗(yàn)表明缺乏功效，可能是由于治療期不足或排除gc過(guò)量患者等原因，例如bi-187004治療糖尿病。糖尿病、非酒精性脂肪肝、傷口愈合受損、肥胖和癡呆是復(fù)雜病況，對(duì)于這些病況，皮質(zhì)醇過(guò)量只是多種病因因素之一，并非適用于所有患者。hsd-1抑制劑可能預(yù)計(jì)對(duì)gc過(guò)量患者特別有益，對(duì)于這些患者，這種治療專門針對(duì)他們患病的主要原因。即使對(duì)于既往hsd-1抑制劑臨床試驗(yàn)呈陰性的疾病(例如認(rèn)知障礙)，也可能是這種情況。
187、hsd-1敲除小鼠抵抗外源施用的皮質(zhì)酮(cort；皮質(zhì)醇的鼠等效物)的多種不良反應(yīng)。cort抑制hpa軸活性，如腎上腺萎縮所證明的，在敲除小鼠和對(duì)照小鼠中類似。與對(duì)照小鼠相比，敲除小鼠顯示皮質(zhì)酮對(duì)血壓和肝脂肪變性基本上沒(méi)有影響，并且cort對(duì)胰島素抵抗、肥胖、肌肉萎縮和皮膚萎縮的影響大大降低。敲除小鼠幾乎完全抵抗了cort對(duì)小梁骨結(jié)構(gòu)的不利影響。
188、hsd-1抑制劑在動(dòng)物模型中顯示出阻斷或逆轉(zhuǎn)外源施用gc的能力。abbott?hsd-1抑制劑在大鼠中阻斷gc施用對(duì)骨骼的不良反應(yīng)。霉菌毒素棒曲霉素和潑尼松龍誘導(dǎo)的股骨頭壞死通過(guò)施用hsd-1抑制劑得到改善，表明骨微結(jié)構(gòu)和密度得到改善。甘珀酸和pf-915275均在小鼠中預(yù)防gc誘導(dǎo)的傷口愈合損傷。在兔中，甘草甜素部分預(yù)防了與玻璃體內(nèi)曲安奈德相關(guān)的眼壓升高。
189、實(shí)例7.spi-62特有的支持性證據(jù)
190、臨床和非臨床證據(jù)支持spi-62治療庫(kù)欣綜合征或acs的特定潛力，或在需要此類藥物的患者中作為gc的輔助療法。
191、對(duì)每天施用spi-62或安慰劑后患有痛性糖尿病周圍神經(jīng)病變的患者進(jìn)行協(xié)方差分析，以分析總膽固醇(tc)、葡萄糖、糖化血紅蛋白(hba1c)和甘油三酯(tg)，以基線值作為協(xié)變量和基線*治療交互項(xiàng)。數(shù)據(jù)來(lái)自研究3662-cl-0049，這是一項(xiàng)2期隨機(jī)、雙盲、安慰劑和活性對(duì)照臨床試驗(yàn)，旨在評(píng)估spi-62在患有痛性糖尿病周圍神經(jīng)病變的受試者中的安全性和功效。
192、與安慰劑相比，在第6周/試驗(yàn)結(jié)束(eot)時(shí)，spi-62與tc、葡萄糖、hba1c和tg的基線校正值較低有關(guān)。在停止研究藥物施用后2周內(nèi)(第8周/研究結(jié)束(eos))，tc、葡萄糖和tg的差異幅度減小，但hba1c增大。在第6周/eot時(shí)觀察到tc和hba1c的治療*基線相互作用，使得基線值較高的患者在spi-62和安慰劑之間平均顯示出較大的差異，但葡萄糖或tg沒(méi)有差異(圖11)。因此，總體而言，spi-62與pdpn患者的tc、葡萄糖、hba1c和tg的有利變化有關(guān)。這些分析增加了spi-62具有控制高血糖和血脂異常潛力的信心。tc或hba1c值較高的患者可能特別受益于spi-62療法。
193、spi-62(一種偽不可逆hsd-1抑制劑)對(duì)hba1c、tc和tg的影響幅度(表3)在數(shù)值上大于其他臨床試驗(yàn)中對(duì)其他hsd-1抑制劑所報(bào)道的。
194、表3.hsd-1抑制劑對(duì)hba1c、tc和tg的影響。
195、
196、為了證明spi-62減輕小鼠中皮質(zhì)酮(cort)不良反應(yīng)，向c57bl/6雄性小鼠(7周齡；n＝14/組)施用cort(100mg/ml，在飲用水中)和spi-62(通過(guò)灌胃，在0.5％?hpmc中；0mg/kg/天、1mg/kg/天或10mg/kg/天或10mg/kg，每天兩次)，持續(xù)35天。對(duì)照組沒(méi)有接受cort或spi-62。每天評(píng)估體重，并且每周兩次評(píng)估食物消耗。使用echomri-130h身體成分分析儀在第0天、14天和28天測(cè)量全身肌肉和脂肪量。在第1天(劑量前)、第15天、第29天和第35天采集空腹葡萄糖和胰島素的血液樣品。在第22天進(jìn)行曠場(chǎng)測(cè)試。在第28天進(jìn)行握力測(cè)試。在第36天處死后，解剖并稱重性腺、皮下、腹膜后和腸系膜脂肪、股四頭肌和脛骨前肌，皮膚用福爾馬林固定并石蠟包埋。
197、cort導(dǎo)致食物消耗增加，spi-62似乎使其正?；?。cort治療的小鼠在2周內(nèi)體重增加減少，然后體重增加加速。spi-62預(yù)防體重增加加速。cort對(duì)真皮厚度和結(jié)構(gòu)的影響在同樣接受spi-62的小鼠中不太明顯。在曠場(chǎng)測(cè)試中沒(méi)有觀察到cort或spi-62的影響。spi-62預(yù)防胰島素抵抗、肥胖增加、骨骼肌萎縮和握力降低的cort不良反應(yīng)。spi-62在小鼠中預(yù)防幾種cort不良反應(yīng)，表明hsd-1抑制劑在靶組織中阻斷局部胞內(nèi)糖皮質(zhì)激素活化可以減輕糖皮質(zhì)激素毒性。參見(jiàn)表4至表9以及圖12和圖13。
198、表4.施用cort和spi-62的小鼠中胰島素抵抗小鼠(n＝14/組)通過(guò)灌胃接受飲用水中的皮質(zhì)酮和spi-62或媒介物，持續(xù)35天。通過(guò)ancova分析數(shù)據(jù)，其中基線作為協(xié)變量。
199、
200、ap<0.05相對(duì)于媒介物+水；bp<0.05相對(duì)于媒介物+cort
201、表5.施用cort和spi-62的小鼠中全身肌肉和脂肪含量小鼠(n＝14/組)通過(guò)灌胃接受飲用水中的皮質(zhì)酮和spi-62或媒介物，持續(xù)35天。通過(guò)ancova分析數(shù)據(jù)，其中基線作為協(xié)變量。
202、
203、ap<0.05相對(duì)于媒介物+水；bp<0.05相對(duì)于媒介物+cort
204、表6.施用cort和spi-62的小鼠中死后(第36天)脂肪蓄積重量小鼠(n＝14/組)通過(guò)灌胃接受飲用水中的皮質(zhì)酮和spi-62或媒介物，持續(xù)35天。通過(guò)anova分析數(shù)據(jù)。
205、
206、ap<0.05相對(duì)于媒介物+水；bp<0.05相對(duì)于媒介物+cort
207、表7.施用cort和spi-62的小鼠中死后(第36天)肌肉重量小鼠(n＝14/組)通過(guò)灌胃接受飲用水中的皮質(zhì)酮和spi-62或媒介物，持續(xù)35天。
208、通過(guò)anova分析數(shù)據(jù)。
209、
210、ap<0.05相對(duì)于媒介物+水；bp<0.05相對(duì)于媒介物+cort
211、表8.施用cort和spi-62的小鼠中觀察到的食物消耗的組平均值[標(biāo)準(zhǔn)偏差]。小鼠(n＝7對(duì)共同飼養(yǎng)對(duì)/組)通過(guò)灌胃接受飲用水中的皮質(zhì)酮和spi-62或媒介物，持續(xù)35天。既沒(méi)有預(yù)先指定也沒(méi)有進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)(參見(jiàn)方法)。
212、
213、
214、表9.在施用cort和spi-62的小鼠中，在基線和第15、29和35天觀察到的體重的組平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差。小鼠(n＝14/組)通過(guò)灌胃接受飲用水中的皮質(zhì)酮和spi-62或媒介物，持續(xù)35天。既沒(méi)有預(yù)先指定也沒(méi)有進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)。
215、
216、實(shí)例8.pk-脂肪pd模型開(kāi)發(fā)
217、向年齡在18至65歲之間且體重指數(shù)在30.0至45.0之間的2型糖尿病男性和非月經(jīng)期女性受試者每天施用spi-62，持續(xù)14天。除了實(shí)例1中描述的6名接受spi-62?1mg、3mg或6mg持續(xù)14天的受試者外，還有6名受試者接受spi-62?1mg、2mg、3mg或10mg持續(xù)5天至8天。在選定劑量間隔之前和期間至少4小時(shí)內(nèi)，經(jīng)由微透析導(dǎo)管(63微透析導(dǎo)管，m?dialysis，瑞典斯德哥爾摩)以1μl/min的速率將灌注液t1(m?dialysis，瑞典斯德哥爾摩)+0.5％酒精usp中1μg/ml?d8可的松([2,2,4,6,6,9,12,12-2h8]可的松，密理博西格瑪公司(milliporesigma)，俄亥俄州邁阿密堡)連續(xù)輸注到皮下腹部脂肪組織中。兩小時(shí)間隔(spi-62劑量后0-2、2-4、4-6、6-8、8-10、20-22和22-24小時(shí))收集脂肪透析液，并分析d8可的松和d8皮質(zhì)醇。d8皮質(zhì)醇摩爾百分比分?jǐn)?shù)(mpf)計(jì)算為：([2,2,4,6,6,9,12,12-2h8]皮質(zhì)醇*368.51)/([2,2,4,6,6,9,12,12-2h8]可的松*370.52)，其中368.51和370.52是d8可的松和d8皮質(zhì)醇的摩爾質(zhì)量。脂肪hsd-1抑制百分比計(jì)算為：100*(1-(mpft/mpf基線)。樣品的時(shí)間(t)被認(rèn)為是收集間隔的中點(diǎn)。對(duì)d8皮質(zhì)醇的較高靈敏度測(cè)定用于能夠定量脂肪hsd-1抑制>95％。
218、如圖14所示，將數(shù)據(jù)擬合到靶標(biāo)介導(dǎo)的藥物處置(tmdd)模型，其中spi-62以一階吸收速率常數(shù)(ka)到達(dá)中心室(cp，v中心)后，它可以通過(guò)分布間隙(q)分布到外周室(ct，v外周)，從系統(tǒng)中消除(cl)或以二階締合速率常數(shù)(kon)與靶位點(diǎn)結(jié)合(r)，形成spi-62-r復(fù)合物。這種復(fù)合物將以一階解離速率常數(shù)(koff)解離回到游離藥物和游離靶標(biāo)。此外，使用三個(gè)順序且相等的一階轉(zhuǎn)變速率常數(shù)(ktr)來(lái)表征spi-62從吸收位點(diǎn)(即蓄積區(qū)室)到中心區(qū)室的運(yùn)動(dòng)。該模型還包括脂肪間質(zhì)液室和脂肪組織細(xì)胞室，其中spi-62分子在兩個(gè)區(qū)室之間的運(yùn)輸由其滲透性(ps)決定。此外，tmdd過(guò)程發(fā)生在脂肪組織：脂肪組織細(xì)胞室中的spi-62分子可以以二階結(jié)合速率常數(shù)(kon)與靶位點(diǎn)(即脂肪細(xì)胞中表達(dá)的hsd-1，rta)結(jié)合，形成spi-62-r復(fù)合物。由于脂肪透析液中的spi-62濃度是使用微透析取樣的未結(jié)合濃度，因此將未結(jié)合部分(fu)摻入模型中以解釋這一點(diǎn)。最后，完整的pk/pd模型結(jié)構(gòu)包含抑制性imax模型，以將spi-62脂肪濃度與脂肪hsd-1活性聯(lián)系起來(lái)。
219、模型中的關(guān)鍵參數(shù)估計(jì)包括：締合速率常數(shù)(kon)1.44nm-1h-1，解離速率常數(shù)(koff)0.264h-1，中心室中的總目標(biāo)量(rtot)7840nm，脂肪室中的總目標(biāo)量(rta)671nm，達(dá)到50％hsd-1抑制的無(wú)脂肪濃度(ic50)23.4pm，以及希爾系數(shù)(hill?coefficient)(γ)1.42。
220、估計(jì)的kd(koff/kon)為183pm，這比spi-62對(duì)cho細(xì)胞中表達(dá)的人hsd-1的測(cè)量的ki12.6nm低69倍，比spi-62對(duì)純化的人hsd-1的ki?5.3nm低29倍。估計(jì)的ic50比spi-62對(duì)純化的人hsd-1的測(cè)量的ic50?17nm低>700倍。這兩個(gè)差異表明spi-62在人脂肪組織中對(duì)hsd-1的出乎意料高的效力，這與spi-62與hsd-1相對(duì)于積累的可的松(即hsd-1底物)的高度有效競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合導(dǎo)致的脂肪快速耐受缺乏一致。
221、估計(jì)的總目標(biāo)量(rtot+rta)對(duì)應(yīng)于3.6mg的spi-62，這與單次spi-62劑量后觀察到非線性pk的劑量范圍非常吻合。希爾系數(shù)表明spi-62與人hsd-1結(jié)合具有適度的正協(xié)同性。
222、實(shí)例9.偽不可逆hsd-1抑制劑的潛在優(yōu)點(diǎn)
223、本文描述了一項(xiàng)關(guān)鍵發(fā)現(xiàn)，即spi-62對(duì)脂肪hsd-1抑制沒(méi)有顯示快速耐受。先前已經(jīng)報(bào)道了三種其他hsd-1抑制劑(azd4017、azd8329、bi-135585)的這種快速耐受，并且可能被認(rèn)為是類別效應(yīng)。bi-187004——基于快結(jié)合、慢解離體外酶動(dòng)力學(xué)鑒定為偽不可逆hsd-1抑制劑——對(duì)脂肪hsd-1抑制僅顯示有限快速耐受。spi-62是第一種已證明缺乏脂肪快速耐受的hsd-1抑制劑。其中spi-62和某些其他hsd-1抑制劑在人hsd-1活性位點(diǎn)與nadph形成三元復(fù)合物的結(jié)構(gòu)模型預(yù)測(cè)，該屬偽不可逆hsd-1抑制劑的成員對(duì)脂肪hsd-1抑制不顯示出快速耐受?；谥緃sd-1在調(diào)節(jié)與gc過(guò)量發(fā)病率相對(duì)應(yīng)的心臟代謝過(guò)程中的相對(duì)重要性，可以預(yù)期偽不可逆抑制劑在諸如血糖和血脂控制領(lǐng)域可能比其他hsd-1抑制劑顯示出臨床優(yōu)勢(shì)，特別是在gc過(guò)量患者中。例如，bi-187004的動(dòng)物模型數(shù)據(jù)表明，降糖功效對(duì)脂肪hsd-1的持續(xù)>90％抑制具有依賴性。支持該論點(diǎn)的證據(jù)也來(lái)自spi-62，其受到限制，包括在單獨(dú)的臨床試驗(yàn)中施用持續(xù)時(shí)間不同，與hsd-1抑制劑對(duì)hba1c、膽固醇和甘油三酯的最大報(bào)道影響相關(guān)。
224、偽不可逆hsd-1抑制劑可能比其他hsd-1抑制劑具有其他優(yōu)勢(shì)。例如，由于持久的藥理學(xué)作用，偽不可逆hsd-1抑制劑更適合低于日劑量，包括蓄積配制品，并且不太可能因患者依從性不佳而顯示出功效下降。此外，人體中的hsd-1似乎完全被約3mg的有效小分子抑制劑占據(jù)。因?yàn)閭尾豢赡嬉种苿┮坏┙Y(jié)合，只能緩慢地從hsd-1分布出來(lái)，所以低慢性劑量是可能的。幾種偽不可逆hsd-1抑制劑(例如spi-62、abt-384、mk-0736和mk-0916)具有低于每天10mg的有效劑量范圍。相比之下，其他hsd-1抑制劑(例如s-707106、azd4017、incb-13739和ro5093151)需要日劑量100mg或更多才能顯示功效。在較高劑量下，某些類型的副作用(例如，azd4017注意到的肝毒性)的可能性就越大。
225、總之，本披露描述了此發(fā)現(xiàn)，即具有某些共同特性的hsd-1抑制劑屬可能具有臨床優(yōu)勢(shì)，特別是對(duì)于gc過(guò)量患者。
226、可以將上述各種實(shí)施例組合以提供另外的實(shí)施例。本說(shuō)明書中提及的和/或申請(qǐng)數(shù)據(jù)表中列出的所有美國(guó)專利、美國(guó)專利申請(qǐng)出版物、美國(guó)專利申請(qǐng)、國(guó)外專利、國(guó)外專利申請(qǐng)和非專利出版物均通過(guò)引用以其全文并入本文。如果需要采用各種專利、申請(qǐng)和出版物的概念來(lái)提供又另外的實(shí)施例，則可以修改這些實(shí)施例的各方面。
227、可以根據(jù)以上具體實(shí)施方式對(duì)實(shí)施例進(jìn)行這些和其他改變。通常，在以下權(quán)利要求中，所使用的術(shù)語(yǔ)不應(yīng)被解釋為將權(quán)利要求限制為說(shuō)明書和權(quán)利要求書中披露的具體實(shí)施例而應(yīng)被解釋為包括所有可能的實(shí)施例連同這些權(quán)利要求有權(quán)要求的等效物的全部范圍。因此，這些權(quán)利要求不受本披露內(nèi)容的限制。