大駁骨在制備預防和/或治療神經(jīng)退行性疾病的藥物中的應用及藥物的制作方法

本發(fā)明涉及藥物領域，具體而言，涉及一種大駁骨在制備預防和/或治療神經(jīng)退行性疾病的藥物中的應用及藥物。

背景技術：

大駁骨為雙子葉植物爵床科爵床屬植物黑葉小駁骨(justiciaventricosawall.exsims.)的干燥全草，全年均可采收。黑葉小駁骨又名大駁骨，黑葉爵床、黑葉接骨草、大接骨、大駁骨丹、鴨仔花、逼迫樹、大駁節(jié)等。其味辛；苦；性平。具有活血止痛；化瘀接骨；祛風除濕；消腫解毒。主治跌打傷腫；骨折；勞傷腰痛；風濕痹痛；胃氣痛；肺癰；乳癰；無名腫毒；外傷紅腫。有關大駁骨的藥用記載，始見于《本草求原》，《陸川本草》等古籍亦有記載，《嶺南采藥錄》，《南寧市藥物志》，廣州空軍《常用中草藥手冊》等地方本草專著及全國性大型中藥專著《中華本草》、《中藥大辭典》、《中華藥?！返染惺蛰d，廣西省中藥材標準(1990年版)，廣東省中藥材標準(2011年)和中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第八冊，第十一冊，第十九冊，第二十冊和國家中成藥標準匯編骨傷科分冊收載。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種大駁骨在制備預防和/或治療神經(jīng)退行性疾病的藥物中的應用及藥物，其旨在提供一種用于制備治療中樞神經(jīng)變性疾病藥劑的藥物；提供一種大駁骨的新的用途。

本發(fā)明提供一種技術方案：

大駁骨在制備預防和/或治療神經(jīng)退行性疾病的藥物中的應用。

進一步地，上述大駁骨的提取物在制備預防和/或治療神經(jīng)退行性疾病的藥物中的應用；

大駁骨的提取物主要通過以下步驟制得：將大駁骨采用溶劑進行提取，提取后分離得到提取液；其中，大駁骨與溶劑的重量比為1:5～20。

進一步地，上述神經(jīng)退行性疾病包括帕金森病、阿爾茲海默病、亨廷頓病和tau蛋白病中的至少一種。

本發(fā)明還提供一種技術方案：

一種預防和/或治療神經(jīng)退行性疾病的藥物，用于制備預防和/或治療神經(jīng)退行性疾病的藥物，藥物主要由包括大駁骨的原料制成。

進一步地，上述藥物主要通過以下步驟制得：將大駁骨采用溶劑進行提取，提取后分離得到提取液；其中，大駁骨與溶劑的重量比為1:5～20。

進一步地，上述溶劑選自水、甲醇、乙醇、異丙醇、1-丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、丙酮、乙酸乙酯中的一種或者多種。

進一步地，上述溶劑為質(zhì)量分數(shù)為30-95％乙醇水溶液。

進一步地，上述將大駁骨在30-90℃下超聲提取15-60min。

進一步地，上述分離得到提取液后還包括對提取液濃縮、干燥。

進一步地，上述對提取液進行蒸發(fā)濃縮、減壓濃縮或者膜濃縮；對濃縮后的提取液進行常壓干燥、減壓干燥、真空冷凍干燥或者噴霧干燥。

本發(fā)明提供的大駁骨在制備預防和/或治療神經(jīng)退行性疾病的藥物中的應用及藥物的有益效果是：

發(fā)明人發(fā)現(xiàn)大駁骨及其提取物新的用途，可以預防中樞神經(jīng)元發(fā)生變性、凋亡；含有大駁骨的藥物能夠使ht-22神經(jīng)細胞保持健康形態(tài)和增殖，保護ht-22神經(jīng)細胞，抑制ht-22神經(jīng)細胞的凋亡。本發(fā)明提供的藥物在制備治療、輔助治療或預防神經(jīng)退行性疾病的藥物中具有較好的療效。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例的技術方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應當理解，以下附圖僅示出了本發(fā)明的某些實施例，因此不應被看作是對范圍的限定，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他相關的附圖。

圖1顯示了mtt法檢測的實施例1提供的藥物對l-glutamate誘導ht-22細胞的保護作用。

圖2顯示了顯微鏡下觀察的實施例1提供的藥物對l-glutamate誘導ht-22細胞的保護作用。

具體實施方式

為使本發(fā)明實施例的目的、技術方案和優(yōu)點更加清楚，下面將對本發(fā)明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。

下面對本發(fā)明實施例的大駁骨在制備預防和/或治療神經(jīng)退行性疾病的藥物中的應用及藥物進行具體說明。

進一步地，上述神經(jīng)退行性疾病為中樞神經(jīng)變性疾病。

進一步地，上述大駁骨的提取物在制備預防和/或治療神經(jīng)退行性疾病的藥物中的應用；

大駁骨的提取物主要通過以下步驟制得：將大駁骨采用溶劑進行提取，提取后分離得到提取液；其中，大駁骨與溶劑的重量比為1:5～20。進一步地，大駁骨與溶劑的重量比為1:10-15。

上述溶劑選自水、甲醇、乙醇、異丙醇、1-丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、丙酮、乙酸乙酯中的一種或者多種。

進一步地，上述神經(jīng)退行性疾病包括帕金森病、阿爾茲海默病、亨廷頓病和tau蛋白病中的至少一種。具體地，tau蛋白病包括額顳癡呆、皮層基底節(jié)變性、皮克氏病、進行性核上性麻痹等。

在本發(fā)明的其他實施例中，上述神經(jīng)退行性疾病也包括威爾遜氏病、朊病毒病及其他癡呆包括血管性癡呆、肌萎縮側索硬化(als)、急性中風(腦中風引起的神經(jīng)損傷)及其他外傷性損傷；腦血管意外(如，年齡相關性黃斑變性)；腦和脊髓外傷、周圍神經(jīng)病、視網(wǎng)膜病和青光眼。

中樞神經(jīng)變性疾病是一組以中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元逐漸發(fā)生變性、凋亡所導致的神經(jīng)退行性疾病或神經(jīng)病癥。其病因大多不明，發(fā)病機制和病理表現(xiàn)復雜，臨床表現(xiàn)各異。該組疾病多見于中老年，呈慢性或亞急性起病，進行性加重，病程較長，且多數(shù)疾病和病癥之間相互重疊，如10％左右的帕金森病合并癡呆，太平洋關島的阿爾茨海默、帕金森綜合征等。由于缺乏特異的生化、影像學和病理生理學特征，往往主要依靠臨床醫(yī)生的經(jīng)驗作出診斷。除少數(shù)疾病(如帕金森病)依靠藥物或手術可能暫時改善臨床癥狀外，對大多數(shù)疾病目前尚無特效的治療方法。例如缺血性中風的治療策略主要包括溶栓治療和神經(jīng)保護治療。溶栓藥物阿替普酶(rt-pa)是首個也是迄今為止唯一被fda批準用于治療中風的溶栓藥物。盡管rt-pa已經(jīng)被證實能有效治療急性缺血性中風，但其治療時間窗窄，作用機理不明確，有出血風險，因此只有少數(shù)病人能夠及時接受rt-pa的有效治療。復方左旋多巴是治療pd的首選藥物，但患者長期服用會出現(xiàn)開關現(xiàn)象、劑末惡化等嚴重并發(fā)癥。因此開展神經(jīng)保護性治療，可能推遲發(fā)病時間或延緩病情的發(fā)展，已成為當前研究的熱點。

神經(jīng)保護治療是通過阻礙缺血級聯(lián)反應涉及的一種或多種機制，在初始階段保護缺血引起的半暗帶神經(jīng)元損傷，從而阻止或延遲神經(jīng)細胞死亡。可以通過藥物實現(xiàn)血液迅速回流入缺血組織，從而抑制缺血所引起的生化水平、代謝水平和細胞水平上的損害。腦缺血觸發(fā)了復雜的病理生化級聯(lián)反應，神經(jīng)保護治療的途徑多樣，環(huán)節(jié)不同，神經(jīng)保護的前景是很可觀的。

經(jīng)過發(fā)明人的研究以及探討發(fā)現(xiàn)，大駁骨在制備治療、輔助治療或預防神經(jīng)退行性疾病的藥物中具有較好的療效。大駁骨對中樞神經(jīng)元逐漸發(fā)生變性、凋亡具有療效。大駁骨有助于保護神經(jīng)細胞免受細胞損傷和/或抵抗神經(jīng)變性過程以及神經(jīng)元功能損害的治療劑或活性物質(zhì)。

本發(fā)明還提供一種技術方案：

一種預防和/或治療神經(jīng)退行性疾病的藥物，藥物主要由包括大駁骨的原料制成。

進一步地，上述藥物主要通過以下步驟制得：將大駁骨采用溶劑進行提取，提取后分離得到提取液；其中，大駁骨與溶劑的重量比為1:5～20。

進一步地，上述溶劑選自水、甲醇、乙醇、異丙醇、1-丁醇、乙二醇、1，2-丙二醇、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇、丙酮、乙酸乙酯中的一種或者多種。

進一步地，上述溶劑為質(zhì)量分數(shù)為30-95％乙醇水溶液。在本實施例中，為質(zhì)量分數(shù)95％的乙醇水溶液。

進一步地，上述將大駁骨在30-90℃下超聲提取15-60min。

進一步地，上述分離得到提取液后還包括對提取液濃縮、干燥。

進一步地，上述對提取液進行蒸發(fā)濃縮、減壓濃縮或者膜濃縮；具體地，采用減壓濃縮。在本發(fā)明較佳的實施例中，采用旋轉蒸發(fā)儀蒸發(fā)濃縮。

對濃縮后的提取液進行常壓干燥、減壓干燥、真空冷凍干燥或者噴霧干燥。對濃縮后的提取液進行常壓干燥、減壓干燥、真空冷凍干燥或者噴霧干燥。具體地，在本發(fā)明中采用減壓干燥。

大駁骨對中樞神經(jīng)元逐漸發(fā)生變性、凋亡具有療效。大駁骨的提取物或者藥物具有保護神經(jīng)元損傷，從而阻止或延遲神經(jīng)細胞死亡的效果；能推遲發(fā)病時間或延緩病情的發(fā)展。大駁骨制備的藥物能夠細胞保持健康形態(tài)和增殖，抑制細胞凋亡；該藥物對于神經(jīng)細胞具有顯著的保護作用。

此外，在其他實施例中，該藥物還包括藥學上可接受的載體或輔料。

例如：稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、硫酸鈣、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，例如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯、山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油等；吸收促進劑，例如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤滑劑，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。還可以將片劑進一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。

此外，為了將給藥單元制成丸劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。如：葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、gelucire、高嶺土、滑石粉等；粘合劑如阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。為了將給藥單元制成栓劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高級醇、高級醇的酯、明膠、半合成甘油酯等。

此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其它材料。

進一步地，本發(fā)明實施例的藥物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮膚、腹膜或直腸等。給藥劑型例如片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、脂質(zhì)體、透皮劑、口含片、栓劑、凍干粉針劑等?？梢允瞧胀ㄖ苿⒕忈屩苿?、控釋制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。

此外，本發(fā)明實施例的藥物的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預防或治療疾病的性質(zhì)和嚴重程度，患者或動物的性別、年齡、體重及個體反應，所用的具體化合物，給藥途徑及給藥次數(shù)等。上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個，例如二、三或四個劑量形式給藥。

承上所述，在給藥過程中，可改變藥物組合物中各活性成分的實際劑量水平，以便所得的活性化合物量能有效針對具體患者、組合物和給藥方式得到所需的治療反應。劑量水平須根據(jù)具體化合物的活性、給藥途徑、所治療病況的嚴重程度以及待治療患者的病況和既往病史來選定。但是，本領域的做法是，化合物的劑量從低于為得到所需治療效果而要求的水平開始，逐漸增加劑量，直到得到所需的效果。

發(fā)明人發(fā)現(xiàn)大駁骨及其提取物新的用途，可以預防中樞神經(jīng)元發(fā)生變性、凋亡；含有大駁骨的藥物能夠使ht-22神經(jīng)細胞保持健康形態(tài)和增殖，保護ht-22神經(jīng)細胞，抑制ht-22神經(jīng)細胞的凋亡。本發(fā)明提供的藥物在制備治療、輔助治療或預防神經(jīng)退行性疾病的藥物中具有較好的療效。

以下結合實施例對本發(fā)明的特征和性能作進一步的詳細描述。

實施例1

本實施例提供一種藥物，該藥物主要由以下步驟制備：

稱取大駁骨30g，置于三角瓶中，向三角瓶中加入300ml95％乙醇水溶液，于60℃超聲提取30min，過濾，用旋轉蒸發(fā)儀濃縮成浸膏狀后置于蒸發(fā)皿中蒸干，于恒溫烘箱內(nèi)(50℃)烘至恒重。

實施例2

本實施例提供一種藥物，該藥物主要由以下步驟制備：

稱取大駁骨10g，置于三角瓶中，向三角瓶中加入50ml30％乙醇水溶液，于30℃超聲提取15min，過濾，減壓濃縮成浸膏狀后置于蒸發(fā)皿中蒸干，于恒溫烘箱內(nèi)(50℃)烘至恒重。

實施例3

本實施例提供一種藥物，該藥物主要由以下步驟制備：

稱取大駁骨10g，置于三角瓶中，向三角瓶中加入200ml60％1，2-丙二醇水溶液，于90℃超聲提取60min，過濾，減壓濃縮成浸膏狀后真空冷凍干燥至恒重。

實施例4

本實施例提供一種藥物，該藥物主要由以下步驟制備：

稱取大駁骨10g，置于三角瓶中，向三角瓶中加入100ml乙酸乙酯，于60℃超聲提取45min，過濾，膜濃縮后減壓干燥至恒重。

實施例5

本實施例提供一種藥物，該藥物主要由以下步驟制備：

稱取大駁骨10g，置于三角瓶中，向三角瓶中加入150ml水，于45℃超聲提取60min，過濾，用旋轉蒸發(fā)儀濃縮成浸膏狀后置于蒸發(fā)皿中蒸干，于恒溫烘箱內(nèi)(50℃)烘至恒重。

試驗例

本試驗例對實施例1得到的藥物進行神經(jīng)保護測試。

1.ht-22神經(jīng)細胞的培養(yǎng)

將(三批)ht-22細胞用胰酶(0.25％，1ml)從中皿消化下來(1min內(nèi))，吹散成單細胞懸液，加入少量胎牛血清fbs(100μl)。1000rpm離心5min，去上清，將細胞沉淀分散在3ml完全培養(yǎng)基中，取1ml細胞懸液加入到24ml完全培養(yǎng)基中，來回顛倒10次混勻，取0.1ml用于計數(shù)。稀釋至適當?shù)募毎麧舛?8×10⁴cell/ml)后，48孔板先加50μl培養(yǎng)基，使培養(yǎng)基徹底分布于孔板邊緣。種植在48孔板中(三批細胞三塊板，100μl，8×10⁴cell/ml)。邊種邊旋轉離心管，種一半孔用力吹打細胞，使之均勻，同時讓細胞懸液鋪滿孔板底部，全部種完后在顯微鏡下觀察細胞分散是否均勻，十字搖勻使細胞在孔板底部分散均勻。放置24小時(細胞融合度約為30～40％)用于實驗。

2.mtt法測試

將實施例1中獲得藥物200μg分散于2ml完全培養(yǎng)基中，用于3×48孔板換液，做mtt實驗。取種好細胞的48孔板，分為control(對照組)，glutamate(谷氨酸)組，nac(n-acetylcysteine)(n-乙酰半胱氨酸)組，trolox(水溶性維生素e)組和樣品組(實施例1提供的藥物組)。每組三個復孔，培養(yǎng)基換液，每孔200μl，每次換液前，吹打培養(yǎng)基，使藥物分散均勻。換液完37℃孵育1h后加入谷氨酸使終濃度達到3mm(6μl)。搖勻后放置在37℃培養(yǎng)24h。觀察細胞形態(tài)，并檢測細胞存活率(mtt法)，然后用20μl的mtt(5mg/ml)避光37℃孵育2h，輕輕吸去液體，每孔加200μl的dmso，搖床5min搖勻。然后用多功能酶標儀計算490nm下各吸光值(下面圖中數(shù)據(jù)均為490nm下測得，損傷組細胞存活率約為control組的20％)。取三孔od值，求平均值，減去空白dmso的od值，然后除以對照組的平均值標準化。三批細胞的mtt的od值的平均值用sigmaplot12.5軟件做統(tǒng)計差異。

統(tǒng)計結果如表1所示，表1示出了control組、glutamate組、nac組，trolox組和樣品組中細胞存活率。

表1各實驗組細胞存活率對比(n＝3)

將表1中的實驗數(shù)據(jù)繪制柱狀圖，結果如圖1所示，具體地，圖1顯示了mtt法檢測的大駁骨提取物對l-glutamate誘導ht-22細胞的保護作用。圖中：“+”代表相應的試驗組有相應的組分，“-”代表相應的試驗組沒有相應的組分。其中，**p<0.01，***p<0.001與谷氨酸組比較(單因素方差分析，dunnett法)。trolox(10μm)作為陽性對照使用。

由圖1的結果顯示，實施例1提供的藥物對于ht-22神經(jīng)細胞具有顯著的保護作用。

3.顯微鏡下觀察的大駁骨提取物的保護作用

實施例1提供的藥物20μg分散于2ml完全培養(yǎng)基中，用于3×48孔板換液。取種好細胞的48孔板，分別是control組，glutamate組，glu(glutamate)+nac(n-acetylcysteine)組，glu+trolox和glu+樣品組(實施例1提供的藥物組)，每組三個復孔，培養(yǎng)基換液，每孔200μl，每次換液前，吹打培養(yǎng)基，使藥物分散均勻。換液完37℃孵育1h后加入谷氨酸使終濃度達到3mm(6μl)。搖勻后放置在37℃培養(yǎng)24h。最后在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，并拍照，結果如圖2所示。圖2顯示了顯微鏡下觀察的大駁骨提取物對l-glutamate誘導ht-22細胞的保護作用。由圖2可知，實施例1提供的藥物可以使細胞保持健康形態(tài)和增殖，抑制了l-glutamate(l-谷氨酸)引起的細胞凋亡。

從本實驗例可知，實施例1提供的藥物能夠細胞保持健康形態(tài)和增殖，抑制細胞凋亡；該藥物對于ht-22神經(jīng)細胞具有顯著的保護作用。

以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對于本領域的技術人員來說，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。