本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥材料領(lǐng)域，尤其涉及一種鹿茸膠原蛋白復(fù)合生物玻璃修復(fù)材料的制備方法。
背景技術(shù)：
自發(fā)現(xiàn)生物玻璃至今，人們更多關(guān)注的是生物玻璃組份對(duì)生物活性的影響。納米技術(shù)的興起，使人們開(kāi)始認(rèn)識(shí)到結(jié)構(gòu)對(duì)生物活性也有重要影響，更加注重于尺寸效應(yīng)、微觀精細(xì)結(jié)構(gòu)對(duì)材料結(jié)構(gòu)和性能的影響。從納米尺寸出發(fā)研發(fā)設(shè)計(jì)的納米生物玻璃、介孔生物玻璃更是備受國(guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。生物玻璃能激活細(xì)胞基因，有利于增強(qiáng)細(xì)胞的增殖與分化，具有骨誘導(dǎo)和骨傳導(dǎo)的作用。但鑒于其無(wú)定形硅骨架的存在，生物玻璃仍呈現(xiàn)為無(wú)定形態(tài)，機(jī)械性能差，且藥物附著性差，其在生物醫(yī)藥材料上的應(yīng)用還有待進(jìn)一步開(kāi)發(fā)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種機(jī)械性能好，且具有優(yōu)良的藥物附著性的鹿茸膠原蛋白復(fù)合生物玻璃修復(fù)材料的制備方法。
本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
一種鹿茸膠原蛋白復(fù)合生物玻璃修復(fù)材料的制備方法，包括以下步驟：
步驟一：取鹿茸粉，按質(zhì)量比1:30的料液比加入到0.45mol/l、ph7.5的nacl溶液中，溶液提取24h，過(guò)濾后保留提取液，殘?jiān)貜?fù)上述步驟1次，將2次提取液合并，得鹿茸膠原蛋白粗提液；
步驟二：稱取鹿茸膠原蛋白粗提液，加入0.02mol/l、ph7-7.5的磷酸鹽緩沖液中，制成質(zhì)量濃度1％的溶液，同時(shí)加入質(zhì)量百分比1％的蛋白酶，室溫下酶解反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束于100℃酶滅活10min，將酶解液離心處理，取上清液凍干得到鹿茸膠原蛋白；
步驟三：稱取10g甲殼素置于三口燒瓶中，并加入3mol/l的鹽酸溶液，其中甲殼素與鹽酸溶液的投料比為1/30g·ml-1，將混合溶液煮沸回流，過(guò)程中不斷攪拌，反應(yīng)持續(xù)6小時(shí)后，將混合溶液離心并去除上層液體，取下層沉淀物重新置于三口燒瓶中并按1/30g·ml-1投料比加入到3mol/l的鹽酸溶液中，繼續(xù)加熱回流6小時(shí)后，將混合溶液離心并去除上層液體，取下層沉淀物用去離子水反復(fù)沖洗直至ph值達(dá)到3-4之間，在沉淀物中加入100ml去離子水進(jìn)行超聲分散，再將分散均勻的分散液轉(zhuǎn)移到截留分子量為8000-14000的透析袋中，將其浸入去離子水中進(jìn)行透析，每2h跟換一次去離子水，直至透析袋內(nèi)外溶液ph值均為7，透析好的分散液通過(guò)砂芯漏斗過(guò)濾，過(guò)濾后加入到50ml去離子水中進(jìn)行超聲分散，分散均勻后加入30ml丙酮進(jìn)行離心處理，取下層沉淀物超聲分散在三氟乙醇溶液中，制成質(zhì)量濃度12％的甲殼素溶液；
步驟四：將5g聚環(huán)氧乙烷-聚環(huán)氧丙烷-聚環(huán)氧乙烷三嵌段共聚物溶于62g體積濃度為70％的乙醇溶液中，充分?jǐn)嚢韬螅来渭尤?g硅酸乙酯、0.7g磷酸三乙酯、1.5gca(no3)2·4h2o、1g0.5m鹽酸溶液，得混合液；
步驟五：將混合液在室溫下攪拌24h后靜置，當(dāng)溶液呈粘稠狀溶液時(shí)，即制得生物玻璃溶液；
步驟六：將鹿茸膠原蛋白、甲殼素溶液、生物玻璃溶液按質(zhì)量比3:50:9混合均勻，使用超聲波震蕩對(duì)其進(jìn)行分散，50℃條件下磁力攪拌1h，再在室溫下繼續(xù)攪拌8h，得到粘稠溶液置于與高壓裝置連接的醫(yī)用針管中，通過(guò)靜電紡絲制得修復(fù)材料，高壓裝置電壓為20kv，將制得的材料在40℃下真空干燥。
優(yōu)選的，步驟六中所述的醫(yī)用針管的容量為20ml。
優(yōu)選的，步驟六中所述的醫(yī)用針管的針頭固定在距離靜電紡絲接收板20cm處。
本發(fā)明的有益效果在于：
1)甲殼素具有良好的生物相容性、抗菌性及優(yōu)良的機(jī)械性能。
2)生物玻璃具有良好的生物相容性，且具有組織修復(fù)的功能，能激活細(xì)胞基因，有利于增強(qiáng)細(xì)胞的增殖與分化，具有骨誘導(dǎo)和骨傳導(dǎo)的作用。
3)鹿茸膠原蛋白中含有促細(xì)胞生長(zhǎng)因子和表皮生長(zhǎng)因子，對(duì)修復(fù)機(jī)體和護(hù)養(yǎng)皮膚大有好處。
4)甲殼素可以改善材料的機(jī)械性能，生物玻璃可以改善材料的醫(yī)藥性能。
5)采用靜電紡絲技術(shù)制備的材料，具有良好的孔隙率，有利于藥物的附著。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的描述。
實(shí)施例1
一種鹿茸膠原蛋白復(fù)合生物玻璃修復(fù)材料的制備方法，包括以下步驟：
步驟一：取鹿茸粉，按質(zhì)量比1:30的料液比加入到0.45mol/l、ph7.5的nacl溶液中，溶液提取24h，過(guò)濾后保留提取液，殘?jiān)貜?fù)上述步驟1次，將2次提取液合并，得鹿茸膠原蛋白粗提液；
步驟二：稱取鹿茸膠原蛋白粗提液，加入0.02mol/l、ph7-7.5的磷酸鹽緩沖液中，制成質(zhì)量濃度1％的溶液，同時(shí)加入質(zhì)量百分比1％的蛋白酶，室溫下酶解反應(yīng)2h，反應(yīng)結(jié)束于100℃酶滅活10min，將酶解液離心處理，取上清液凍干得到鹿茸膠原蛋白；
步驟三：稱取10g甲殼素置于三口燒瓶中，并加入3mol/l的鹽酸溶液，其中甲殼素與鹽酸溶液的投料比為1/30g·ml-1，將混合溶液煮沸回流，過(guò)程中不斷攪拌，反應(yīng)持續(xù)6小時(shí)后，將混合溶液離心并去除上層液體，取下層沉淀物重新置于三口燒瓶中并按1/30g·ml-1投料比加入到3mol/l的鹽酸溶液中，繼續(xù)加熱回流6小時(shí)后，將混合溶液離心并去除上層液體，取下層沉淀物用去離子水反復(fù)沖洗直至ph值達(dá)到3-4之間，在沉淀物中加入100ml去離子水進(jìn)行超聲分散，再將分散均勻的分散液轉(zhuǎn)移到截留分子量為8000-14000的透析袋中，將其浸入去離子水中進(jìn)行透析，每2h跟換一次去離子水，直至透析袋內(nèi)外溶液ph值均為7，透析好的分散液通過(guò)砂芯漏斗過(guò)濾，過(guò)濾后加入到50ml去離子水中進(jìn)行超聲分散，分散均勻后加入30ml丙酮進(jìn)行離心處理，取下層沉淀物超聲分散在三氟乙醇溶液中，制成質(zhì)量濃度12％的甲殼素溶液；
步驟四：將5g聚環(huán)氧乙烷-聚環(huán)氧丙烷-聚環(huán)氧乙烷三嵌段共聚物溶于62g體積濃度為70％的乙醇溶液中，充分?jǐn)嚢韬螅来渭尤?g硅酸乙酯、0.7g磷酸三乙酯、1.5gca(no3)2·4h2o、1g0.5m鹽酸溶液，得混合液；
步驟五：將混合液在室溫下攪拌24h后靜置，當(dāng)溶液呈粘稠狀溶液時(shí)，即制得生物玻璃溶液；
步驟六：將鹿茸膠原蛋白、甲殼素溶液、生物玻璃溶液按質(zhì)量比3:50:9混合均勻，使用超聲波震蕩對(duì)其進(jìn)行分散，50℃條件下磁力攪拌1h，再在室溫下繼續(xù)攪拌8h，得到粘稠溶液置于與高壓裝置連接的醫(yī)用針管中，通過(guò)靜電紡絲制得修復(fù)材料，高壓裝置電壓為20kv，將制得的材料在40℃下真空干燥。
步驟六中所述的醫(yī)用針管的容量為20ml，步驟六中所述的醫(yī)用針管的針頭固定在距離靜電紡絲接收板20cm處。