動(dòng)物血液降溫的方法及其應(yīng)用以及心肺復(fù)蘇低溫動(dòng)物模型的制備方法及動(dòng)物模型與流程

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種動(dòng)物血液降溫的方法及其應(yīng)用以及心肺復(fù)蘇低溫動(dòng)物模型的制備方法及動(dòng)物模型。

背景技術(shù)：

目前，常見(jiàn)的將動(dòng)物的體溫降低到預(yù)期水平的方法有物理方法和化學(xué)方法等，例如使用降溫毯、冰帽等包裹動(dòng)物使其降溫，或者注射氯丙嗪、異丙嗪等藥物來(lái)達(dá)到降低動(dòng)物溫度的效果。而這些降溫方法一般降溫速度較慢，不能很好地達(dá)到期望的效果。

另外，雖然目前存在一些快速降溫的方法，但總體而言，大多存在成本高、操作復(fù)雜、有創(chuàng)傷等缺點(diǎn)。

考慮到治療性亞低溫被證實(shí)在心臟驟停、缺血缺氧性腦病、腦卒中、急性心肌梗死等多種疾病中具有器官保護(hù)作用，而早期、快速低溫是進(jìn)一步提升亞低溫器官保護(hù)效應(yīng)的重要手段，因此，需要提供一種降溫速度快、成本低、效果好的動(dòng)物降溫方法。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供動(dòng)物血液降溫的方法，本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供心肺復(fù)蘇低溫動(dòng)物模型的制備方法，本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供心肺復(fù)蘇低溫動(dòng)物模型，本發(fā)明的第四個(gè)目的在于提供動(dòng)物血液降溫的方法的應(yīng)用，以緩解現(xiàn)有技術(shù)中存在的動(dòng)物降溫速度慢、效果差、成本高的技術(shù)問(wèn)題。

本發(fā)明提供了一種動(dòng)物血液降溫的方法，其特征在于，該方法是通過(guò)4℃液體與血液進(jìn)行熱交換而實(shí)現(xiàn)。

進(jìn)一步的，所述方法包括：向動(dòng)物食道中插入食道降溫導(dǎo)管，并向所述食道降溫導(dǎo)管內(nèi)循環(huán)灌注4℃液體，通過(guò)4℃液體與動(dòng)物內(nèi)毗鄰食道的心臟、大血管內(nèi)的血液進(jìn)行熱交換，從而實(shí)現(xiàn)動(dòng)物全部血液的降溫。

進(jìn)一步的，所述食道降溫導(dǎo)管包括中心部分，以及貼附所述中心部分螺旋設(shè)置的螺旋部分；所述食道降溫導(dǎo)管由醫(yī)用硅膠軟管制成。

進(jìn)一步的，所述方法包括：利用血液凈化儀將靜脈血液引至動(dòng)物外，在體外進(jìn)行降溫后再回輸至體內(nèi)，從而實(shí)現(xiàn)動(dòng)物全部血液的降溫；所述在體外進(jìn)行降溫是通過(guò)4℃液體與血液凈化儀管路中的血液進(jìn)行熱交換實(shí)現(xiàn)的。

進(jìn)一步的，所述血液凈化儀的參數(shù)設(shè)置為：cvvh模式，血液流速起始180ml/min、維持120ml/min，置換液速度30ml/kg/h，脫水0ml/kg/h，肝素首劑靜推1000u、微泵維持150u/h。

另外，本發(fā)明還提供了一種心肺復(fù)蘇低溫動(dòng)物模型的制備方法，所述制備方法依次包括動(dòng)物準(zhǔn)備過(guò)程、心肺復(fù)蘇模型建立過(guò)程以及降溫過(guò)程；

所述動(dòng)物準(zhǔn)備過(guò)程包括：

(a)實(shí)驗(yàn)前12h，動(dòng)物禁食，不禁水；

(b)實(shí)驗(yàn)時(shí)，動(dòng)物稱重，肌肉注射氯胺酮誘導(dǎo)麻醉，所述氯胺酮的注射量為20mg/kg；將動(dòng)物固定，連接spo2、心電及肛表，并于誘導(dǎo)室顫前使用控溫毯維持動(dòng)物正常體溫在(38.0±0.5)℃；

(c)建立耳緣靜脈通道，戊巴比妥鈉靜脈注射誘導(dǎo)全麻，所述戊巴比妥鈉的注射量為30mg/kg；此后按照8mg/(kg·h)的量注射戊巴比妥鈉維持麻醉狀態(tài)，以及芬太尼2μg/(kg·h)持續(xù)鎮(zhèn)痛治療；

(d)經(jīng)口氣管插管，連接etco2/spo2監(jiān)測(cè)儀和呼吸機(jī)，進(jìn)行機(jī)械通氣；所述呼吸機(jī)的參數(shù)設(shè)置為潮氣量12ml/kg、峰流速40l/min和fio221％；通過(guò)調(diào)節(jié)所述呼吸機(jī)的呼吸頻率維持etco2在35～40mmhg；

(e)暴露右股靜脈，置入swan-ganz導(dǎo)管至右心房，用于監(jiān)測(cè)核心溫度；

(f)暴露右頸外靜脈，置入誘顫電極至右心室，用于誘導(dǎo)心室顫動(dòng)；

(g)經(jīng)口留置食道降溫導(dǎo)管，外接冰毯儀，用于向食道降溫導(dǎo)管內(nèi)循環(huán)灌注4℃液體；

所述心肺復(fù)蘇模型建立過(guò)程包括：

(h)經(jīng)誘顫電極釋放1ma交流電至右心室，誘導(dǎo)心室顫動(dòng)；

(i)心室顫動(dòng)成功后，斷開(kāi)呼吸機(jī)，停止機(jī)械通氣，無(wú)干預(yù)觀察8min后進(jìn)行cpr，所述cpr包括人工胸外按壓和球囊輔助通氣，比例30：2；所述胸外按壓的按壓深度5-6cm、頻率100-120次/分；

(j)cpr持續(xù)2.5min時(shí)，按照20μg/kg的量靜脈注射腎上腺素，此后根據(jù)復(fù)蘇情況每3min重復(fù)注射腎上腺素一次；

(k)cpr持續(xù)5min時(shí)，給予能量150j的雙向波電除顫1次，并判斷是否自主循環(huán)恢復(fù)；所述自主循環(huán)恢復(fù)的標(biāo)準(zhǔn)為室上性自主心律伴平均動(dòng)脈壓>50mmhg，持續(xù)5min以上；若動(dòng)物自主循環(huán)恢復(fù)，則視為復(fù)蘇成功；

所述降溫過(guò)程包括：復(fù)蘇成功后5min時(shí)，應(yīng)用權(quán)利要求3所述的方法對(duì)復(fù)蘇成功的動(dòng)物進(jìn)行降溫，目標(biāo)溫度33℃，持續(xù)至復(fù)蘇成功后24h。

另外，本發(fā)明還提供了一種心肺復(fù)蘇低溫動(dòng)物模型的制備方法，所述制備方法依次包括動(dòng)物準(zhǔn)備過(guò)程、心肺復(fù)蘇模型建立過(guò)程以及降溫過(guò)程；

所述動(dòng)物準(zhǔn)備過(guò)程包括：

(a)實(shí)驗(yàn)前12h，動(dòng)物禁食，不禁水；

(b)實(shí)驗(yàn)時(shí)，動(dòng)物稱重，肌肉注射氯胺酮誘導(dǎo)麻醉，所述氯胺酮的注射量為20mg/kg；將動(dòng)物固定，連接spo2、心電及肛表，并于誘導(dǎo)室顫前使用控溫毯維持動(dòng)物正常體溫在(38.0±0.5)℃；

(c)建立耳緣靜脈通道，戊巴比妥鈉靜脈注射誘導(dǎo)全麻，所述戊巴比妥鈉的注射量為30mg/kg；此后按照8mg/(kg·h)的量注射戊巴比妥鈉維持麻醉狀態(tài)，以及芬太尼2μg/(kg·h)持續(xù)鎮(zhèn)痛治療；

(d)經(jīng)口氣管插管，連接etco2/spo2監(jiān)測(cè)儀和呼吸機(jī)，進(jìn)行機(jī)械通氣；所述呼吸機(jī)的參數(shù)設(shè)置為潮氣量12ml/kg、峰流速40l/min和fio221％；通過(guò)調(diào)節(jié)所述呼吸機(jī)的呼吸頻率維持etco2在35～40mmhg；

(e)暴露右股靜脈，置入swan-ganz導(dǎo)管至右心房，用于監(jiān)測(cè)核心溫度；

(f)暴露右頸外靜脈，置入誘顫電極至右心室，用于誘導(dǎo)心室顫動(dòng)；

(g)暴露左股靜脈，置入中心靜脈導(dǎo)管，用于連接血液凈化儀；

所述心肺復(fù)蘇模型建立過(guò)程包括：

(h)經(jīng)誘顫電極釋放1ma交流電至右心室，誘導(dǎo)心室顫動(dòng)；

(i)心室顫動(dòng)成功后，斷開(kāi)呼吸機(jī)，停止機(jī)械通氣，8min后進(jìn)行cpr，所述cpr包括人工胸外按壓和球囊輔助通氣，比例30：2；所述胸外按壓的按壓深度5-6cm、頻率100-120次/分；

(j)cpr持續(xù)2.5min時(shí)，按照20μg/kg的量靜脈注射腎上腺素，此后根據(jù)復(fù)蘇情況每3min重復(fù)注射腎上腺素一次；

(k)cpr持續(xù)5min時(shí)，給予能量150j的雙向波電除顫1次，并判斷是否自主循環(huán)恢復(fù)；所述自主循環(huán)恢復(fù)的標(biāo)準(zhǔn)為室上性自主心律伴平均動(dòng)脈壓>50mmhg，持續(xù)5min以上；若動(dòng)物自主循環(huán)恢復(fù)，則視為復(fù)蘇成功；

所述降溫過(guò)程包括：復(fù)蘇成功后5min時(shí)，應(yīng)用權(quán)利要求5所述的方法對(duì)復(fù)蘇成功的動(dòng)物進(jìn)行降溫，目標(biāo)溫度33℃，持續(xù)至復(fù)蘇成功后24h。

另外，本發(fā)明還提供了按照所述的制備方法制備而成的心肺復(fù)蘇低溫動(dòng)物模型。

另外，本發(fā)明還提供了所述的動(dòng)物血液降溫的方法在制備心肺復(fù)蘇低溫動(dòng)物模型中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供的動(dòng)物血液降溫的方法，通過(guò)4℃液體與動(dòng)物的血液進(jìn)行熱交換，能夠?qū)崿F(xiàn)快速降溫，操作簡(jiǎn)單、成本低、降溫速度快；此外，按照本發(fā)明提供的心肺復(fù)蘇低溫動(dòng)物模型的制備方法制備而成的動(dòng)物模型，能夠科學(xué)地模擬心肺復(fù)蘇以及低溫治療方案，對(duì)于心肺復(fù)蘇中低溫治療的相關(guān)研究，提供了研究的基礎(chǔ)；另外，本發(fā)明提供的動(dòng)物血液降溫的方法，操作簡(jiǎn)單、成本低、降溫速度快，能夠應(yīng)用于制備心肺復(fù)蘇低溫動(dòng)物模型之中。

附圖說(shuō)明

為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明具體實(shí)施方式或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)具體實(shí)施方式或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖是本發(fā)明的一些實(shí)施方式，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1提供的食道降溫導(dǎo)管的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為本發(fā)明中食道降溫導(dǎo)管優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中使用不同型號(hào)食道降溫導(dǎo)管所對(duì)應(yīng)的溫度變化圖；

圖3為本發(fā)明中食道降溫導(dǎo)管優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中使用不同型號(hào)食道降溫導(dǎo)管所對(duì)應(yīng)的降溫速率圖；

圖4為本發(fā)明中食道降溫導(dǎo)管優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中使用不同型號(hào)食道降溫導(dǎo)管所對(duì)應(yīng)的心率變化圖；

圖5為本發(fā)明中食道降溫導(dǎo)管優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中使用不同型號(hào)食道降溫導(dǎo)管所對(duì)應(yīng)的平均動(dòng)脈壓變化圖；

圖6為本發(fā)明實(shí)施例2和對(duì)比例1-3各組中動(dòng)物溫度變化圖；

圖7為本發(fā)明實(shí)施例2和對(duì)比例3中動(dòng)物的降溫速率；

圖8為本發(fā)明實(shí)施例2和對(duì)比例3中動(dòng)物的降溫達(dá)標(biāo)時(shí)長(zhǎng)；

圖9為本發(fā)明實(shí)施例4和對(duì)比例5-7各組中動(dòng)物溫度變化圖；

圖10為本發(fā)明實(shí)施例4和對(duì)比例6中動(dòng)物的降溫速率；

圖11為本發(fā)明實(shí)施例4和對(duì)比例6中動(dòng)物的降溫達(dá)標(biāo)時(shí)長(zhǎng)。

圖標(biāo)：1-中心部分；2-螺旋部分。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

在本發(fā)明的描述中，需要說(shuō)明的是，如出現(xiàn)術(shù)語(yǔ)“中心”、“上”、“下”、“左”、“右”、“豎直”、“水平”、“內(nèi)”、“外”等指示的方位或位置關(guān)系為基于附圖所示的方位或位置關(guān)系，僅是為了便于描述本發(fā)明和簡(jiǎn)化描述，而不是指示或暗示所指的裝置或元件必須具有特定的方位、以特定的方位構(gòu)造和操作，因此不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。

在本發(fā)明的描述中，需要說(shuō)明的是，除非另有明確的規(guī)定和限定，如出現(xiàn)術(shù)語(yǔ)“安裝”、“相連”、“連接”應(yīng)做廣義理解，例如，可以是固定連接，也可以是可拆卸連接，或一體地連接；可以是機(jī)械連接，也可以是電連接；可以是直接相連，也可以通過(guò)中間媒介間接相連，可以是兩個(gè)元件內(nèi)部的連通。對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，可以具體情況理解上述術(shù)語(yǔ)在本發(fā)明中的具體含義。

如未特別說(shuō)明，本發(fā)明涉及的crrt指代連續(xù)腎臟替代療法所用的血液凈化儀；本發(fā)明涉及的cpr(cardiopulmonaryresuscitation)為心肺復(fù)蘇術(shù)；本發(fā)明涉及的cvvh(連續(xù)靜脈-靜脈血液濾過(guò))為連續(xù)腎臟替代療法應(yīng)用技術(shù)中的一種。

如未特別說(shuō)明，本發(fā)明涉及的儀器為常規(guī)儀器，涉及的試劑為常規(guī)市售試劑。

如未特別說(shuō)明，以下實(shí)施例涉及的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為國(guó)產(chǎn)健康雄性白豬，體重(30-35)kg，購(gòu)自上海甲干生物科技有限公司，動(dòng)物合格證號(hào)scxk(滬)2015-0005；所有動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由飲水。

實(shí)施例1

本實(shí)施例提供了經(jīng)食道誘導(dǎo)的動(dòng)物血液降溫的方法，包括：固定動(dòng)物后，食道降溫導(dǎo)管外接冰毯儀，將食道降溫導(dǎo)管插入動(dòng)物的食道中，經(jīng)食道降溫導(dǎo)管灌注4℃的循環(huán)低溫液體，通過(guò)4℃液體與毗鄰食道的心臟、大血管中的血液進(jìn)行熱交換，實(shí)現(xiàn)快速降溫的目的。

其中，4℃液體例如可以為，但不限于：4℃滅菌注射用水。

本實(shí)施例1所應(yīng)用的食道降溫導(dǎo)管如圖1所示，食道降溫導(dǎo)管包括中心部分1，以及貼附中心部分1螺旋設(shè)置的螺旋部分2，這樣的設(shè)置保證了食道降溫導(dǎo)管與食道的接觸面積最大化，而且設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便，適用范圍極廣；外接冰毯儀分別和中心部分1及螺旋部分2連接，形成一個(gè)4℃液體循環(huán)體系，例如4℃液體可以從冰毯儀進(jìn)入螺旋部分2，然后經(jīng)中心部分1流出至冰毯儀，經(jīng)冰毯儀降溫后的4℃液體再進(jìn)入螺旋部分2；其中，食道降溫導(dǎo)管由醫(yī)用硅膠軟管制成。

4℃液體從螺旋部分2進(jìn)入，從中心部分1流出，由于螺旋部分2直接與食道接觸，因此4℃液體從冰毯儀流出后直接與動(dòng)物的血液進(jìn)行交換，減少了不必要的損失。

在本實(shí)施例中，食道降溫導(dǎo)管的橫徑為20mm。此處涉及的橫徑，指整個(gè)食道降溫導(dǎo)管的最大外徑。

另外，還可以根據(jù)實(shí)際需求的不同，與中心部分1并行設(shè)置一根胃管，同樣的，胃管被螺旋部分2包圍。

本實(shí)施例提供的方法，具有如下優(yōu)點(diǎn)：1)食道降溫導(dǎo)管的原材料簡(jiǎn)單便宜，制作過(guò)程方便，整體成本低廉；2)通過(guò)外接傳統(tǒng)冰毯儀灌注低溫液體，能夠充分利用現(xiàn)有醫(yī)療資源；3)類(lèi)似于臨床使用的胃管，使用技術(shù)成熟，留置方便，且安全無(wú)創(chuàng)；4)創(chuàng)造性地利用了食道表面積大、離心臟與大血管近等特點(diǎn)，能夠達(dá)到快速進(jìn)行熱交換而降溫的目的。

食道降溫導(dǎo)管的優(yōu)化

為了獲得最適宜的食道降溫導(dǎo)管，發(fā)明人通過(guò)以下內(nèi)容對(duì)食道降溫導(dǎo)管的選擇進(jìn)行了篩選：

(1)選擇國(guó)產(chǎn)健康雄性白豬5頭，體重30-35kg，在胃鏡引導(dǎo)下，測(cè)量食道的全長(zhǎng)范圍，選其平均值作為食道降溫導(dǎo)管的食道內(nèi)留置長(zhǎng)度。

(2)結(jié)合食道可擴(kuò)張的生理特性，參考測(cè)試的食道長(zhǎng)度，將不同直徑的圓柱形軟體置入上述5頭實(shí)驗(yàn)豬的整個(gè)食道內(nèi)，測(cè)試食道所能容納的最大圓柱體橫斷面積，同時(shí)密切觀察動(dòng)物血壓、心率等生理參數(shù)的變化，進(jìn)而明確動(dòng)物所能承受的食道內(nèi)留置軟體的大小。

(3)根據(jù)液體流量、接觸面積及熱傳導(dǎo)材質(zhì)等熱交換影響要素，首先選擇壁薄、質(zhì)軟、塑形性佳、熱傳導(dǎo)良好的透明硅膠軟管；其次以胃管為軸心，圍繞其外壁貼附螺旋式的硅膠軟管，貼附長(zhǎng)度參考測(cè)試的食道全長(zhǎng)，以最大化食道內(nèi)熱交換接觸面積；再者，在動(dòng)物食道所能承受的留置軟體大小范圍內(nèi)，選擇管徑不同的硅膠軟管，制作出5種不同大小型號(hào)的經(jīng)食道降溫導(dǎo)管。

其中，5中不同型號(hào)的食道降溫導(dǎo)管的橫徑分別為11mm、14mm、17mm、20mm、23mm。

另外，在本次優(yōu)化實(shí)驗(yàn)中，制備橫徑為11mm的食道降溫導(dǎo)管所使用的硅膠軟管的內(nèi)外徑分別為1.5mm和3mm；制備橫徑為14mm的食道降溫導(dǎo)管所使用的硅膠軟管的內(nèi)外徑分別為2.5mm和4mm；制備橫徑為17mm的食道降溫導(dǎo)管所使用的硅膠軟管的內(nèi)外徑分別為3.5mm和5mm；制備橫徑為20mm的食道降溫導(dǎo)管所使用的硅膠軟管的內(nèi)外徑分別為4.5mm和6mm；制備橫徑為23mm的食道降溫導(dǎo)管所使用的硅膠軟管的內(nèi)外徑分別為5.5mm和7mm。

(4)利用上述5頭實(shí)驗(yàn)豬，進(jìn)行上述5種不同大小型號(hào)的經(jīng)食道降溫導(dǎo)管樣品的降溫測(cè)試試驗(yàn)(每頭實(shí)驗(yàn)豬，均用5種型號(hào)的食道降溫導(dǎo)管進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。針對(duì)每頭實(shí)驗(yàn)豬而言，一種降溫導(dǎo)管測(cè)試結(jié)束后，待實(shí)驗(yàn)豬的狀態(tài)恢復(fù)正常后，再進(jìn)行下一型號(hào)食道降溫導(dǎo)管的測(cè)試)，食道降溫導(dǎo)管外接冰毯儀進(jìn)行降溫，時(shí)長(zhǎng)4h，密切觀察降溫速率及血壓、心率等生理參數(shù)的變化，篩選出一種低溫液體流量大、降溫速率佳、且動(dòng)物能耐受的經(jīng)食道降溫導(dǎo)管，用于豬心肺復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)。篩選結(jié)果如下：

(i)溫度變化

5種不同型號(hào)的食道降溫導(dǎo)管運(yùn)行中實(shí)驗(yàn)豬的溫度變化如圖2所示，其中，導(dǎo)管23、導(dǎo)管20、導(dǎo)管17、導(dǎo)管14與導(dǎo)管11，分別代表橫徑為23mm、20mm、17mm、14mm、11mm的食道降溫導(dǎo)管。

對(duì)圖2中的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理后，得到5種不同型號(hào)的食道降溫導(dǎo)管的降溫速率圖，如圖3所示。導(dǎo)管23、導(dǎo)管20、導(dǎo)管17、導(dǎo)管14與導(dǎo)管11的降溫速率分別為(2.8±0.4)℃/h、(2.7±0.4)℃/h、(2.3±0.3)℃/h、(2.0±0.3)℃/h、(1.6±0.2)℃/h，由以上數(shù)據(jù)可以看出，隨著導(dǎo)管橫徑的增加，降溫速率加快；但對(duì)于導(dǎo)管23與導(dǎo)管20，兩者的降溫速率基本相當(dāng)。

(ii)心率和血壓變化

又進(jìn)一步分析了5種不同型號(hào)的食道降溫導(dǎo)管運(yùn)行中實(shí)驗(yàn)豬的心率和血壓的變化，結(jié)果分別如圖4和圖5所示。從圖中可以看出，隨著體溫的下降，心率呈現(xiàn)先升后降的趨勢(shì)，血壓保持穩(wěn)定或下降；但對(duì)于降溫速率較快的導(dǎo)管23組，與基線值相比，持續(xù)觀察到心率快、血壓高，提示動(dòng)物不耐受。

以上實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)食道降溫導(dǎo)管的橫徑為20mm時(shí)，既能夠快速、有效的降溫，又不會(huì)引起動(dòng)物的不耐受。因此選擇20mm作為食道降溫導(dǎo)管的最佳橫徑。

另外需要強(qiáng)調(diào)的是，發(fā)明人選取不同的實(shí)驗(yàn)豬(國(guó)產(chǎn)健康雄性白豬，體重30-35kg)，進(jìn)行了多次上述食道降溫導(dǎo)管優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，其最終結(jié)果均表現(xiàn)為當(dāng)食道降溫導(dǎo)管的橫徑為20mm時(shí)，既能夠快速、有效地降溫，又不會(huì)引起動(dòng)物的不耐受。因此表明，上述食道降溫導(dǎo)管優(yōu)化實(shí)驗(yàn)的結(jié)果具有適用性。

實(shí)施例2

本實(shí)施例提供了心肺復(fù)蘇低溫動(dòng)物模型的制備方法，包括：

一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備

1)實(shí)驗(yàn)前，動(dòng)物禁食12h，不禁水。

2)實(shí)驗(yàn)時(shí)，氯胺酮20mg/kg肌注誘導(dǎo)麻醉，稱重，置于手術(shù)臺(tái)三角板上，固定四肢，連接spo2、心電及肛表，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)生命體征，并于誘導(dǎo)室顫前使用控溫毯維持動(dòng)物正常體溫在(38.0±0.5)℃。

3)建立耳緣靜脈通道，戊巴比妥鈉30mg/kg靜脈全麻，此后戊巴比妥鈉8mg/(kg·h)維持麻醉狀態(tài)，以及芬太尼2μg/(kg·h)持續(xù)鎮(zhèn)痛治療。

4)經(jīng)口氣管插管，連接etco2/spo2監(jiān)測(cè)儀和呼吸機(jī)，進(jìn)行機(jī)械通氣。呼吸機(jī)參數(shù)設(shè)置為潮氣量12ml/kg、峰流速40l/min和fio221％。通過(guò)調(diào)節(jié)呼吸機(jī)呼吸頻率維持etco2在35～40mmhg。

5)暴露右股動(dòng)脈，置入swan-ganz導(dǎo)管至胸主動(dòng)脈，用于監(jiān)測(cè)胸主動(dòng)脈血壓和采集動(dòng)脈血標(biāo)本。

6)暴露右股靜脈，置入swan-ganz導(dǎo)管至右心房，用于監(jiān)測(cè)核心溫度。

7)暴露右頸外靜脈，置入誘顫電極至右心室，用于誘導(dǎo)室顫。

8)經(jīng)口留置食道降溫導(dǎo)管，外接冰毯儀，用于向食道降溫導(dǎo)管內(nèi)循環(huán)灌注4℃液體。

二、心肺復(fù)蘇模型制作

1)室顫前10min，采集動(dòng)物基礎(chǔ)數(shù)據(jù)如血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)、動(dòng)脈血?dú)饧办o脈血標(biāo)本等。

2)經(jīng)誘顫電極釋放1ma交流電至右心室，誘導(dǎo)心室顫動(dòng)。誘顫成功標(biāo)準(zhǔn)為心電圖呈室顫波形，動(dòng)脈血壓顯著下降、搏動(dòng)波形消失。

3)室顫成功后，斷開(kāi)呼吸機(jī)，停止機(jī)械通氣，無(wú)干預(yù)觀察8min，然后開(kāi)始cpr，其包括人工胸外按壓和球囊輔助通氣，比例30：2(胸外按壓30次、輔助通氣2次，如此循環(huán))。

4)除顫監(jiān)護(hù)儀實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)胸外按壓質(zhì)量，保證按壓深度5-6cm、頻率100-120次/分。

5)cpr2.5min時(shí)，靜脈注射腎上腺素20μg/kg，此后根據(jù)復(fù)蘇情況每3min重復(fù)使用一次。

6)cpr5min時(shí)，給予能量150j的雙向波電除顫1次，并判斷是否自主循環(huán)恢復(fù)。自主循環(huán)恢復(fù)的標(biāo)準(zhǔn)為室上性自主心律伴平均動(dòng)脈壓>50mmhg，持續(xù)5min以上。

7)若自主循環(huán)未恢復(fù)，立即進(jìn)行2mincpr，然后電除顫1次。如此重復(fù)此流程5次后，動(dòng)物仍未達(dá)到自主循環(huán)恢復(fù)，視為復(fù)蘇失敗。

8)復(fù)蘇成功的動(dòng)物，重新機(jī)械通氣觀察30h，靜脈注射戊巴比妥鈉150mg/kg予以安樂(lè)死，進(jìn)行動(dòng)物尸體解剖，記錄重要臟器的解剖結(jié)果。

三、降溫過(guò)程

在復(fù)蘇成功后5min時(shí)，按照實(shí)施例1中的方法，應(yīng)用食道降溫導(dǎo)管外接冰毯儀，經(jīng)食道進(jìn)行降溫，目標(biāo)溫度33℃，持續(xù)至復(fù)蘇后24h。再以1℃/h復(fù)溫5h。

對(duì)比例1

假手術(shù)組：只進(jìn)行手術(shù)操作，不經(jīng)歷心臟驟停復(fù)蘇過(guò)程，全程應(yīng)用冰毯儀維持正常溫度38.0±0.5℃。

對(duì)比例2

正常溫度組：經(jīng)歷心臟驟停復(fù)蘇過(guò)程，全程應(yīng)用冰毯儀維持正常溫度38.0±0.5℃。

對(duì)比例3

體表低溫組：經(jīng)歷心臟驟停復(fù)蘇過(guò)程，并在復(fù)蘇成功后5min時(shí)，應(yīng)用體表冰毯外接冰毯儀，經(jīng)體表進(jìn)行降溫，目標(biāo)溫度33℃，持續(xù)至復(fù)蘇后24h。再以1℃/h復(fù)溫5h。

結(jié)合對(duì)比例1至3，發(fā)明人對(duì)實(shí)施例2提供的方法的效果進(jìn)行了評(píng)價(jià)，評(píng)價(jià)結(jié)果如下。

如圖6所示，復(fù)蘇后，假手術(shù)組與正常溫度組動(dòng)物的體溫保持在相對(duì)穩(wěn)定的正常范圍內(nèi)，而體表低溫組與食道低溫組動(dòng)物的體溫呈現(xiàn)出降溫、維持、復(fù)溫等三個(gè)階段的變化趨勢(shì)。降溫階段，體表低溫組與食道低溫組動(dòng)物的體溫迅速下降，且食道低溫組較體表低溫組的動(dòng)物體溫下降更為迅速，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p<0.05)；低溫維持與復(fù)溫階段，食道低溫組與體表低溫組動(dòng)物的體溫保持一致的變化趨勢(shì)，組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均p>0.05)。其中，圖6中，bl表示基線值；vf表示室顫；pc表示胸外按壓；df表示除顫；與假手術(shù)組相比，^ap<0.05；與正常溫度組相比，^bp<0.05；與體表低溫組相比，^cp<0.05。

如圖7和圖8所示，在降溫階段，進(jìn)一步數(shù)據(jù)分析顯示，食道低溫組平均降溫速率為2.8℃/h、平均達(dá)標(biāo)時(shí)長(zhǎng)為102min，而體表低溫組平均降溫速率為1.5℃/h、平均達(dá)標(biāo)時(shí)長(zhǎng)為185min，提示食道低溫組動(dòng)物的降溫效率明顯高于體表低溫組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均p<0.05)。其中，圖7和圖8中，與體表低溫組相比，^*p<0.05。

實(shí)施例3

本實(shí)施例提供了經(jīng)crrt誘導(dǎo)的動(dòng)物血液降溫的方法，包括：利用crrt將靜脈血液引至體外，然后將crrt靜脈回心端管路置于4℃液體中，實(shí)現(xiàn)血液與4℃液體通過(guò)crrt管路進(jìn)行快速熱交換，然后低溫血液回輸至體內(nèi)，達(dá)到快速降溫的目的。

其中，crrt參數(shù)設(shè)置：

cvvh模式，血液流速起始180ml/min、維持120ml/min，置換液速度30ml/kg/h，脫水0ml/kg/h，肝素首劑靜推1000u、微泵維持150u/h。

crrt液體配置：

預(yù)沖液：肝素1支，0.9％nacl液1500ml。

置換液：1)a液：0.9％nacl液2000ml，5％glu液100ml，10％kcl液10ml，10％葡萄糖酸鈣液13ml，25％mgso4液3ml，滅菌注射用水500ml；2)b液：nahco3液125ml。a液與b液不混合，b液?jiǎn)为?dú)輸入。

本實(shí)施例提供的降溫方法，在低溫誘導(dǎo)階段，血液回輸端管路置于4℃液體中，利于快速誘導(dǎo)低溫；在后期維持階段，管路加熱裝置設(shè)置適宜溫度，包裹血液回輸端管路，維持目標(biāo)溫度。

實(shí)施例4

本實(shí)施例提供了心肺復(fù)蘇低溫動(dòng)物模型的制備方法，包括：

一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備

1)實(shí)驗(yàn)前，動(dòng)物禁食12h，不禁水。

2)實(shí)驗(yàn)時(shí)，氯胺酮20mg/kg肌注誘導(dǎo)麻醉，稱重，置于手術(shù)臺(tái)三角板上，固定四肢，連接spo2、心電及肛表，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)生命體征，并于誘導(dǎo)室顫前使用控溫毯維持動(dòng)物正常體溫在(38.0±0.5)℃。

3)建立耳緣靜脈通道，戊巴比妥鈉30mg/kg靜脈全麻，此后戊巴比妥鈉8mg/(kg·h)維持麻醉狀態(tài)，以及芬太尼2μg/(kg·h)持續(xù)鎮(zhèn)痛治療。

4)經(jīng)口氣管插管，連接etco2/spo2監(jiān)測(cè)儀和呼吸機(jī)，進(jìn)行機(jī)械通氣。呼吸機(jī)參數(shù)設(shè)置為潮氣量12ml/kg、峰流速40l/min和fio221％。通過(guò)調(diào)節(jié)呼吸機(jī)呼吸頻率維持etco2在35～40mmhg。

5)暴露右股靜脈，置入swan-ganz導(dǎo)管至右心房，用于監(jiān)測(cè)右心房壓、核心溫度和采集靜脈血標(biāo)本。

6)暴露右頸外靜脈，置入誘顫電極至右心室，用于誘導(dǎo)室顫。

7)暴露左股靜脈，置入透析用中心靜脈導(dǎo)管，用于crrt低溫治療。

二、心肺復(fù)蘇模型制作

1)室顫前10min，采集動(dòng)物基礎(chǔ)數(shù)據(jù)如血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)、動(dòng)脈血?dú)饧办o脈血標(biāo)本等。

2)經(jīng)誘顫電極釋放1ma交流電至右心室，誘導(dǎo)心室顫動(dòng)。

3)室顫成功后，斷開(kāi)呼吸機(jī)，停止機(jī)械通氣，無(wú)干預(yù)觀察8min，然后開(kāi)始cpr，其包括人工胸外按壓和球囊輔助通氣，比例30：2(胸外按壓30次、輔助通氣2次，如此循環(huán))。

4)除顫監(jiān)護(hù)儀實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)胸外按壓質(zhì)量，保證按壓深度5-6cm、頻率100-120次/分。

5)cpr2.5min時(shí)，靜脈注射腎上腺素20μg/kg，此后根據(jù)復(fù)蘇情況每3min重復(fù)使用一次。

6)cpr5min時(shí)，給予能量150j的雙向波電除顫1次，并判斷是否自主循環(huán)恢復(fù)。自主循環(huán)恢復(fù)的標(biāo)準(zhǔn)為室上性自主心律伴平均動(dòng)脈壓>50mmhg，持續(xù)5min以上。

7)若自主循環(huán)未恢復(fù)，立即進(jìn)行2mincpr，然后電除顫1次。如此重復(fù)此流程5次后，動(dòng)物仍未達(dá)到自主循環(huán)恢復(fù)，視為復(fù)蘇失敗。

8)復(fù)蘇成功的動(dòng)物，重新機(jī)械通氣觀察30h，靜脈注射戊巴比妥鈉150mg/kg予以安樂(lè)死，進(jìn)行動(dòng)物尸體解剖，記錄重要臟器的解剖結(jié)果。

三、降溫過(guò)程

復(fù)蘇成功后5min，按照實(shí)施例3中的方法，經(jīng)crrt管路進(jìn)行體外降溫，目標(biāo)溫度33℃，維持至復(fù)蘇后8h，再以體表冰毯維持至復(fù)蘇后24h。再以1℃/h復(fù)溫5h。

對(duì)比例4

假手術(shù)組：只進(jìn)行手術(shù)操作，不經(jīng)歷心臟驟停復(fù)蘇過(guò)程，全程應(yīng)用冰毯儀維持正常溫度38.0±0.5℃。

對(duì)比例5

正常溫度組：經(jīng)歷心臟驟停復(fù)蘇過(guò)程，全程應(yīng)用冰毯儀維持正常溫度38.0±0.5℃。

對(duì)比例6

體表低溫組：經(jīng)歷心臟驟停復(fù)蘇過(guò)程，并在復(fù)蘇成功后5min，應(yīng)用體表冰毯外接冰毯儀，經(jīng)體表進(jìn)行降溫，目標(biāo)溫度33℃，持續(xù)至復(fù)蘇后24h。再以1℃/h復(fù)溫5h。

結(jié)合對(duì)比例4至6，發(fā)明人對(duì)實(shí)施例4提供的方法的效果進(jìn)行了評(píng)價(jià)，評(píng)價(jià)結(jié)果如下。

如圖9、圖10和圖11所示，復(fù)蘇后，在實(shí)施低溫干預(yù)的體表低溫組與crrt低溫組，可見(jiàn)兩組動(dòng)物的體溫迅速下降，且crrt低溫組明顯快于體表低溫組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。進(jìn)一步分析顯示，crrt低溫組平均降溫速率為9.8℃/h、平均達(dá)標(biāo)時(shí)長(zhǎng)為28min，而體表低溫組平均降溫速率為1.5℃/h、平均達(dá)標(biāo)時(shí)長(zhǎng)為185min，結(jié)果提示crrt低溫組動(dòng)物的降溫效率明顯高于體表低溫組，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。其中，圖9中，bl表示基線值；vf表示室顫；pc表示胸外按壓；df表示除顫；與假手術(shù)組相比，^ap<0.05；與正常溫度組相比，^bp<0.05；與體表低溫組相比，^cp<0.05。圖10和圖11中，與體表低溫組相比，^*p<0.05。

如圖9所示，在低溫維持階段，crrt低溫組與體表低溫組動(dòng)物體溫均保持在目標(biāo)溫度33℃左右；復(fù)溫階段，兩組動(dòng)物均以1℃/h左右的速度復(fù)溫，最終恢復(fù)到基線水平。

最后應(yīng)說(shuō)明的是：以上各實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)其限制；盡管參照前述各實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分或者全部技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實(shí)施例技術(shù)方案的范圍。