含有稻殼多酚的抗肺癌保健品的制作方法

本發(fā)明屬于保健品領(lǐng)域，具體涉及一種含有稻殼多酚的抗肺癌保健品。

背景技術(shù)：

肺癌是發(fā)病率和死亡率近年來(lái)增長(zhǎng)最快的一種惡行腫瘤，每年死于肺癌的人數(shù)已經(jīng)超過(guò)了一百萬(wàn)，約占惡行腫瘤死亡人數(shù)的四分之一，近50年來(lái)許多國(guó)家都報(bào)道肺癌的發(fā)病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發(fā)病率和死亡率均占所有惡行腫瘤的第一位，女性發(fā)病率占第二位，死亡率占第二位。近年來(lái)中藥組分配伍抗腫瘤研究是治療惡性腫瘤的新方向，尋找有效的抗癌藥物和方法，是世界醫(yī)學(xué)面臨的重要課題，中藥作為祖國(guó)醫(yī)學(xué)用來(lái)防治疾病的有力武器，與化學(xué)合成藥物相比，除了具有取材方便、價(jià)格低廉和毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)外，更重要的是，中藥的優(yōu)勢(shì)在于改變腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為從而抑制其生長(zhǎng)發(fā)展，并保護(hù)機(jī)體的正常功能，使患者延長(zhǎng)壽命，減輕痛苦，保持良好生活質(zhì)量。同時(shí)，隨著社會(huì)的進(jìn)步，生產(chǎn)力的發(fā)展，現(xiàn)代人越來(lái)越把注意力從化合成藥轉(zhuǎn)向天然藥，希望從天然藥物中開(kāi)發(fā)出更為安全有效的新藥以替代前者，從而減少藥源疾病的發(fā)生，發(fā)展中草藥不僅傳承了中華民族千百年的精華，也具有廣大的市場(chǎng)前景及經(jīng)濟(jì)效益。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明目的是提供一種具有抗肺癌功能的含有稻殼多酚的天然保健品，該保健品是以我國(guó)廣泛種植的禾本科糧食作物水稻的加工副產(chǎn)物稻殼出發(fā)，制備稻殼多酚和其他中藥提取物混合。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

含有稻殼多酚的抗肺癌保健品，由以下原料按重量百分比組成：

稻殼多酚50-70％，地黃提取物5-10％，紫花地丁提取物5-10％，

水牛角提取物5-10％，女貞子提取物5-10％，中邊蓮提取物5-10％。

所述含有稻殼多酚的抗肺癌保健品，所述稻殼多酚的制備方法如下：

1)纖維素酶酶解提取：料液比按質(zhì)量比1:10-1:30，將稻殼粉末溶于水，纖維素酶加入量為120-180u/g，進(jìn)行熱水浸提，控制溫度為50-60℃，ph范圍值5.0-6.0，酶解時(shí)間為1-2h，離心，過(guò)濾，得纖維素酶酶解提取液備用，沉淀物a繼續(xù)進(jìn)行乙醇輔助提??；

2)乙醇輔助提?。毫弦罕劝促|(zhì)量比1:10-1:30，將沉淀物a溶于乙醇，乙醇體積分?jǐn)?shù)為50-70％，提取時(shí)間為2-3h，離心，過(guò)濾，得乙醇輔助提取液備用，沉淀物b繼續(xù)進(jìn)行超聲浸提；

3)超聲浸提：超聲波功率為160-200w，超聲時(shí)間為20-30min，抽濾，得超聲浸提提取液備用；

4)合并纖維素酶酶解提取液、乙醇輔助提取液和超聲浸提提取液，將總提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，濾紙初過(guò)濾后，用濾膜進(jìn)行超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得到粗稻殼多酚干粉。

所述含有稻殼多酚的抗肺癌保健品，所述地黃提取物的制備方法為：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的地黃固體粉末；分別按質(zhì)量比1:10比例稱取地黃固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過(guò)濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得地黃提取物。

所述含有稻殼多酚的抗肺癌保健品，所述紫花地丁提取物的制備方法為：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的紫花地丁固體粉末；分別按質(zhì)量比1:10比例稱取紫花地丁固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過(guò)濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得紫花地丁提取物。

所述含有稻殼多酚的抗肺癌保健品，水牛角提取物的制備方法為：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的水牛角固體粉末；分別按質(zhì)量比1:10比例稱取水牛角固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過(guò)濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得水牛角提取物。

所述含有稻殼多酚的抗肺癌保健品，女貞子提取物的制備方法為：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的女貞子固體粉末；分別按質(zhì)量比1:10比例稱取女貞子固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過(guò)濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得女貞子提取物。

所述含有稻殼多酚的抗肺癌保健品，中邊蓮提取物的制備方法為：在室溫條件下，稱量粉碎成200目的中邊蓮固體粉末；分別按質(zhì)量比1:10比例稱取中邊蓮固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過(guò)濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得中邊蓮提取物。

本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明開(kāi)創(chuàng)性的技術(shù)是將稻殼多酚作為抗肺癌的核心功能性原料，提出用于治療肺癌的中藥組合物，配伍合理，形成具有抗肺癌的多酚、中草藥混合保健品。本發(fā)明通過(guò)對(duì)人體外肺癌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究，發(fā)現(xiàn)稻殼多酚的組合物對(duì)體外腫瘤細(xì)胞具有較好的抑制作用，對(duì)于肺癌的防治有著非常顯著的效果，可以避免過(guò)多的化學(xué)合成藥物造成的毒副作用，而且價(jià)格低廉，來(lái)源廣泛，也使得稻殼多酚組合物受到廣泛關(guān)注。

本發(fā)明采用水稻加工副產(chǎn)物稻殼粉末提取的多酚作為活性物質(zhì)，制備抗肺癌保健品或藥品，提取方法簡(jiǎn)單，不存在合成藥劑的毒副作用，對(duì)設(shè)備的要求低，中間產(chǎn)物及終產(chǎn)物均無(wú)毒，安全性高，生產(chǎn)成本低，而且服用和攜帶十分的方便，吸收快速且效果好，因此擁有十分廣闊市場(chǎng)前景，適合工業(yè)生產(chǎn)。

附圖說(shuō)明

圖1是稻殼多酚組合物對(duì)人肺癌細(xì)胞株973細(xì)胞生長(zhǎng)影響。

圖2是稻殼多酚組合物抑制973細(xì)胞集落形成的集落試驗(yàn)結(jié)果。

圖3是稻殼多酚組合物抑制973細(xì)胞遷移試驗(yàn)結(jié)果。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1含有稻殼多酚的抗肺癌保健品

(一)稻殼多酚的制備

采用纖維素酶酶解—乙醇浸提—超聲波分步法的工藝組合提取稻殼多酚步驟如下：

1)纖維素酶酶解提取：將稻殼去除雜質(zhì)，干燥，經(jīng)粉碎機(jī)粉碎，過(guò)60目篩，制成稻殼粉末。料液比按質(zhì)量比1:30，將稻殼粉末溶于水，纖維素酶加入量為150u/g，進(jìn)行熱水浸提，控制溫度為50℃，ph5.0，酶解時(shí)間為2h，4000r/min進(jìn)行離心15min，過(guò)濾，得纖維素酶酶解提取液備用，沉淀物a繼續(xù)進(jìn)行乙醇浸提；

2)乙醇輔助提?。毫弦罕劝窗促|(zhì)量比1：20，將沉淀物a溶于乙醇，乙醇體積分?jǐn)?shù)為60％，提取時(shí)間為3h，離心，過(guò)濾，得乙醇輔助提取液備用，沉淀物b繼續(xù)進(jìn)行超聲提?。?/p>

3)超聲浸提：料液比按按質(zhì)量比1:20，將沉淀物b溶于乙醇，乙醇體積分?jǐn)?shù)為60％，超聲波功率為180w，超聲時(shí)間為30min，抽濾，得超聲浸提提取液備用；

4)合并纖維素酶酶解提取液、乙醇輔助提取液和超聲浸提提取液，將總提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，濾紙初過(guò)濾后，用濾膜進(jìn)行超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得到粗稻殼多酚干粉。

(二)地黃提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的地黃固體粉末；按質(zhì)量比1:10比例稱取地黃固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過(guò)濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得地黃提取物。

(三)紫花地丁提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的紫花地丁固體粉末；按質(zhì)量比1:10比例稱取紫花地丁固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過(guò)濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得紫花地丁提取物。

(四)水牛角提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的水牛角固體粉末；按質(zhì)量比1:10比例稱取水牛角固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過(guò)濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得水牛角提取物。

(五)女貞子提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的女貞子固體粉末；按質(zhì)量比1:10比例稱取女貞子固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過(guò)濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得女貞子提取物。

(六)中邊蓮提取物的制備

在室溫條件下，稱量粉碎成200目的中邊蓮固體粉末；分別按質(zhì)量比1:10比例稱取中邊蓮固體粉末和去離子水，超聲破碎30min，室溫浸提3h，濾紙初過(guò)濾、超濾膜超濾，超濾液無(wú)菌冷凍干燥，得中邊蓮提取物。

(七)含有稻殼多酚的抗肺癌保健品組合物(簡(jiǎn)稱稻殼多酚組合物)

由以下原料按重量百分比組成：

稻殼多酚60％,地黃提取物5％,紫花地丁提取物10％，

水牛角提取物5％，女貞子提取物10％，中邊蓮提取物10％

(八)mtt實(shí)驗(yàn)

本實(shí)施例使用人肺癌細(xì)胞株973細(xì)胞，采用mtt法檢測(cè)稻殼多酚組合物體外抗癌活性，實(shí)驗(yàn)步驟如下：

1)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的肺癌細(xì)胞系(973)細(xì)胞接種于96孔板，過(guò)夜培養(yǎng)使其貼壁；

2)稻殼多酚組合物的濃度(6.25、12.5和25mg/ml)；

3)在24h后加入mtt(5mg/ml)；

4)然后將96孔板放在37℃恒溫培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h；

5)處理結(jié)束后，將mtt吸出，加入150μl的dmso，使甲瓚晶體完全溶解；

6)通過(guò)測(cè)量每個(gè)孔在490nm處的吸光度值來(lái)評(píng)估973細(xì)胞的增值；結(jié)果如圖1所示。

如圖1所示，不同濃度的稻殼多酚組合物(6.25、12.5和25mg/ml)分別孵育973細(xì)胞24h，然后利用mtt比色法檢測(cè)。結(jié)果顯示，處理肺癌細(xì)胞一段時(shí)間后，濃度為12.5和25mg/ml的稻殼多酚組合物均表現(xiàn)出顯著的抑制作用，濃度為25mg/ml組抑制率在24h后達(dá)到了77.4％，結(jié)果表明，稻殼多酚組合物在體外可抑制人肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)。

(九)集落形成實(shí)驗(yàn)

不同的處理組的肺癌細(xì)胞以每孔1000個(gè)細(xì)胞的密度接種于孔板上，培養(yǎng)過(guò)夜使其貼壁。分別加入12.5和25mg/ml的稻殼多酚組合物培養(yǎng)10d，吸出培養(yǎng)基，每孔用pbs仔細(xì)洗兩次。使用甲醇將集落固定20min，然后用0.5％結(jié)晶紫染色15min，用清水沖洗并拍照，結(jié)果如圖2所示。

如圖2所示，稻殼多酚組合物抑制肺癌細(xì)胞集落形成的集落試驗(yàn)結(jié)果。稻殼多酚組合物孵育973細(xì)胞一段時(shí)間后，集落數(shù)量與對(duì)照組相比明顯降低。24小時(shí)后濃度為12.5mg/ml時(shí)能夠顯著減少肺癌細(xì)胞形成的集落，濃度為25mg/ml時(shí)集落的減少極顯著。

(十)transwell實(shí)驗(yàn)

腫瘤細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)采用直徑為6.5mm的transwell小室，其中內(nèi)孔大小為8.0μm。將973細(xì)胞血清饑餓24h，然后使用胰蛋白酶消化，計(jì)數(shù)，并用無(wú)血清1640培養(yǎng)基重懸。大約1×10⁵細(xì)胞被接種到上層小室，下層小室加入含有10％胎牛血清的1640培養(yǎng)基。細(xì)胞放在37℃培養(yǎng)24h。培養(yǎng)后，上層小室內(nèi)表面的細(xì)胞被遷移。將穿過(guò)小室的細(xì)胞固定和染色并在顯微鏡下統(tǒng)計(jì)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組做三個(gè)平行取其平均值，結(jié)果如圖3所示。

由圖3可見(jiàn)，腫瘤細(xì)胞的一個(gè)重要特點(diǎn)是他們具有入侵和遷移到遠(yuǎn)端器官的能力，這是幾乎所有癌癥死亡的主要原因，利用transwell實(shí)驗(yàn)分析米糠多酚組合物對(duì)973細(xì)胞的遷移影響。如圖3所示，與對(duì)照組相比，稻殼多酚組合物處理組973細(xì)胞跨膜遷移的數(shù)量大幅下降，結(jié)果顯示稻殼多酚組合物可以顯著抑制973細(xì)胞遷移。

實(shí)施例2含有稻殼多酚的抗肺癌保健品

(一)-(六)同實(shí)施例1。

(七)含有稻殼多酚的抗肺癌保健品，由以下原料按重量百分比組成：

稻殼多酚70％，地黃提取物10％，紫花地丁提取物5％，

水牛角提取物5％，女貞子提取物5％,中邊蓮提取物5％。

實(shí)施例3含有稻殼多酚的抗肺癌保健品

(一)-(六)同實(shí)施例1。

(七)含有稻殼多酚的抗肺癌保健品，由以下原料按重量百分比組成：

稻殼多酚50％,地黃提取物10％，紫花地丁提取物10％，

水牛角提取物10％，女貞子提取物10％,中邊蓮提取物10％。