本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種用于預(yù)防或治療纖維化疾病的藥物組合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
尼達(dá)尼布，即3-z-[1-(4-(n-((4-甲基-哌嗪-1-基)-甲基羰基)-n-甲基-氨基)-苯胺基)-1-苯基-亞甲基]-6-甲氧基羰基-2-二氫吲哚酮，分子式c31h33n5o4，化合物結(jié)構(gòu)如下：
尼達(dá)尼布是一種新型的血管生成抑制劑，可同時(shí)作用于血管生成過程中涉及的3種關(guān)鍵受體家族：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(vegfr)、血小板源性生長(zhǎng)因子受體(pdgfr)以及成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(fgfr)。尼達(dá)尼布已被fda和ema批準(zhǔn)上市，用于治療特發(fā)性肺纖維化(ipf)，也被ema批準(zhǔn)聯(lián)合多西他賽在一線化療之后應(yīng)用于組織學(xué)診斷為腺癌的、局部晚期或轉(zhuǎn)移性或局部復(fù)發(fā)性非小細(xì)胞肺癌(nsclc)成年患者。
纖維化的特征通常在于成纖維細(xì)胞和成肌纖維細(xì)胞增殖的異常增加，以及膠原和其他細(xì)胞外基質(zhì)(ecm)成分的過量沉積。纖維化(fibrosis)可發(fā)生于多種器官，主要病理改變?yōu)槠鞴俳M織內(nèi)纖維結(jié)締組織增多，實(shí)質(zhì)細(xì)胞減少，持續(xù)進(jìn)展可致器官結(jié)構(gòu)破壞和功能減退，乃至衰竭，嚴(yán)重威脅人類健康和生命。
任何原因只要能引起組織細(xì)胞損傷，均可導(dǎo)致組織細(xì)胞發(fā)生變性、壞死和炎癥反應(yīng)，如果損傷很小，損傷細(xì)胞周邊正常實(shí)質(zhì)細(xì)胞將發(fā)生增生修復(fù)，這種修復(fù)可完全恢復(fù)正常的結(jié)構(gòu)和功能。然而如果損傷較大或反復(fù)損傷超出了損傷周圍實(shí)質(zhì)細(xì)胞的再生能力時(shí)，間質(zhì)纖維結(jié)締組織將大量增生對(duì)缺損組織進(jìn)行修復(fù)，即發(fā)生纖維化的病理改變。因此本質(zhì)上纖維化是組織遭受損傷后的修復(fù)反應(yīng)，以保護(hù)組織器官的相對(duì)完整性。增生的纖維結(jié)締組織雖然修復(fù)了缺損，但卻不具備原來器官實(shí)質(zhì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能。如果這種修復(fù)反應(yīng)過度、過強(qiáng)和失控時(shí)，就會(huì)引起器官的纖維化和導(dǎo)致器官的功能下降。
由此可見，纖維化是指由于炎癥導(dǎo)致器官實(shí)質(zhì)細(xì)胞發(fā)生壞死，組織內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)異常增多和過度沉積的病理過程。輕者成為纖維化，重者引起組織結(jié)構(gòu)破壞而發(fā)生器官硬化。
在全世界范圍內(nèi)，組織纖維化是許多疾病致殘、致死的主要原因，組織纖維化在人體各主要器官疾病的發(fā)生和發(fā)展過程中均起著重要作用。據(jù)美國(guó)有關(guān)統(tǒng)計(jì)資料證明，該國(guó)因各種疾病而致死的病人中，接近45％可以歸于組織纖維增生疾病。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是針對(duì)上述缺陷，提供一種用于預(yù)防或治療纖維化疾病的藥物組合物及其應(yīng)用，該藥物組合物包括活性成分和輔料，所述活性成分包括選自尼達(dá)尼布及其鹽和溶劑合物中的一種或多種。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：
根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供一種尼達(dá)尼布或其鹽、其溶劑合物在制備用于預(yù)防或治療纖維化疾病的藥物中的用途，纖維化疾病為毒素和藥物引起的肝纖維化，血吸蟲性肝纖維化，代謝性肝纖維化，營(yíng)養(yǎng)不良性肝纖維化，心源性肝纖維化，脂肪性肝纖維化，酒精性肝纖維化，肝淤血性纖維化，膽汁淤積性肝纖維化，膽管囊腫導(dǎo)致的肝纖維化，慢性腎盂腎炎、阻塞性腎病、遺傳性腎病、糖尿病腎病、乙肝或艾滋病病毒及腎移植引起的腎纖維化，藥物中毒引起的腎纖維化，糖尿病引起的腎纖維化，心內(nèi)膜心肌纖維化，胰腺囊腫纖維化，神原型系統(tǒng)纖維化，縱膈纖維化，骨髓纖維化，骨髓增生異常綜合癥，子宮肥大，前列腺增生，乳腺纖維瘤，脾纖維化，吸煙、重癥肺結(jié)核、肺移植和胸廓運(yùn)動(dòng)障礙造成的肺纖維化疾病，晶狀體前囊膜纖維化，增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變中的一種或幾種。
根據(jù)本發(fā)明的第二方面，提供一種用于預(yù)防或治療纖維化疾病的藥物組合物，該藥物組合物包括活性成分和輔料，該活性成分為選自尼達(dá)尼布、其鹽、其溶劑合物中的一種或多種。
需要說明的是，溶劑合物為其中溶劑分子形成固態(tài)的化學(xué)計(jì)量復(fù)合物且包括但不限于乙醇和甲醇的化合物或其鹽。溶劑合物包括水合物，水合物為特定形式的溶劑合物，其中溶劑分子為水。本發(fā)明的化合物或其鹽的水合物為該化合物或其鹽與水的化學(xué)計(jì)量組合物，諸如半水合物、單水合物或二水合物。
該鹽優(yōu)選為根據(jù)本發(fā)明的化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。合適的藥學(xué)上可接受的鹽包括無機(jī)酸和有機(jī)酸的鹽，包括鹽酸、硫酸、磷酸、氫溴酸、甲烷磺酸、三氟甲烷磺酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸、1-萘磺酸、2-萘磺酸、乙酸、三氟乙酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、乳酸、乙二酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、苯甲酸、水楊酸、苯基乙酸和扁桃酸。另外，藥學(xué)上可接受的鹽包括無機(jī)堿的鹽，諸如含有堿陽離子(例如li+、na+或k+)、堿土陽離子(例如mg2+、ca2+或ba2+)、銨陽離子的鹽；以及有機(jī)堿的酸式鹽，包括脂肪族和芳香族被取代銨和季銨陽離子，諸如來自三乙胺、n,n-二乙胺、n,n-二環(huán)己胺、賴氨酸、吡啶、n,n-二甲基氨基吡啶(dmap)、1,4-二氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷(dabco)、1,5-二氮雜雙環(huán)[4,3,0]壬-5-烯(dbn)和1,8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(dbu)的質(zhì)子化或全烷基化的鹽。
優(yōu)選地，該藥物組合物為口服制劑、靜脈注射劑、皮下注射劑、肌內(nèi)注射劑、肌肉注射劑、膏劑、栓劑或氣霧化劑。
具體地，該藥物組合物可以采用包括口服、靜脈注射、皮下注射、肌內(nèi)注射、肌肉注射、局部給藥、直腸栓劑給藥、氣霧化給藥、關(guān)節(jié)內(nèi)給藥的方式給藥。
優(yōu)選采用口服方式給藥，口服制劑可以是：片劑、散記、顆粒劑、膠囊劑、糖漿劑、口服液、含片劑、吸入劑等。
優(yōu)選地，口服制劑的輔料為選自分散劑、增稠劑、潤(rùn)濕劑、賦形劑、粘合劑、助流劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑、著色劑、矯味矯嗅劑、乳化劑、表面活性劑、助溶劑、混懸劑、等滲劑、緩沖劑、防腐劑、抗氧化劑、穩(wěn)定劑、吸收促進(jìn)劑中的任一種或幾種。
優(yōu)選的分散劑是：中鏈甘油三酯、聚乙二醇或植物油等。
優(yōu)選的增稠劑是：混合脂肪酸甘油酯等。
優(yōu)選的潤(rùn)濕劑是：大豆卵磷脂、吐溫80、吐溫60、司盤80或司盤60等。
優(yōu)選的賦形劑是：乳糖、蔗糖、葡萄糖、玉米淀粉、甘露醇、山梨糖醇、淀粉、α淀粉、糊精、微晶纖維素、輕質(zhì)硅酸酐、硅酸鋁、硅酸鈣、硅酸鋁酸鎂、磷酸氫鈣等。
優(yōu)選的粘合劑是：聚乙烯醇、甲基纖維素、乙基纖維素、阿拉伯膠、黃耆膠、明膠、蟲膠、羥丙基纖維素、羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙二醇等。
優(yōu)選的助流劑是：膠態(tài)二氧化硅。
優(yōu)選的潤(rùn)滑劑是：硬脂酸鎂、聚乙二醇、硬脂酸鈣、富馬酸十八酯鈉、滑石粉、聚乙二醇。
優(yōu)選的崩解劑是：微晶纖維素、瓊脂、明膠、碳酸鈣、碳酸氫鈉、檸檬酸鈣、糊精、果膠、低取代羥丙基纖維素、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈣、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉、羧甲基淀粉鈉等。
優(yōu)選的著色劑是：三氧化二鐵、黃色三氧化二鐵、胭脂紅、焦糖、β-胡蘿卜素、氧化鈦、滑石粉、磷酸核黃素鈉等。
優(yōu)選的矯味劑是：可可粉、薄荷醇、薄荷油、冰片、桂皮粉等。
優(yōu)選的乳化劑或表面活性劑是：十八烷基三乙醇胺、十二烷基硫酸鈉、十二烷基硫酸鈉、十二烷基硫酸鈉氨基丙酸、卵磷脂、甘油單硬脂酸、蔗糖脂肪酸酯、甘油脂肪、酸酯等。
優(yōu)選的助溶劑是：聚乙二醇、丙二醇、安息香酸芐酯、乙醇、膽固醇、三乙醇胺、碳酸鈉、檸檬酸鈉、吐溫80、煙酰胺等。
優(yōu)選的混懸劑是：聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纖維素、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素等親水性高分子。
優(yōu)選的等滲劑是：葡萄糖、氯化鈉、甘露醇、山梨糖醇等。
優(yōu)選的緩沖劑是：磷酸鹽、醋酸鹽、碳酸鹽、檸檬酸鹽等緩沖液。
優(yōu)選的防腐劑是：對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、氯丁醇、芐醇、苯乙醇、脫氫乙酸、山梨酸等。
優(yōu)選的抗氧化劑是：亞硫酸鹽、抗壞血酸、α-生育酚等。
優(yōu)選地，該活性成分為乙磺酸尼達(dá)尼布，該藥物組合物為尼達(dá)尼布乙磺酸鹽的組合物。
優(yōu)選地，按重量份計(jì)，該口服藥物的配方組成包括：
進(jìn)一步優(yōu)選地，該口服藥物為膠囊劑。
進(jìn)一步優(yōu)選地，該口服藥物的制備方法為：將分散劑、增稠劑和潤(rùn)濕劑加熱至40-50℃使融化，加入已過0.8mm篩的活性成分，混合均勻，高壓均質(zhì)機(jī)(轉(zhuǎn)速20000r/min)中均制3-5次，每次2分鐘，直至內(nèi)容物為完全均一狀態(tài)，得囊液，采用壓制或滴制法填充入囊殼，制備成軟膠囊，即得。
進(jìn)一步優(yōu)選地，該口服藥物包括一個(gè)或多個(gè)單位的單位制劑，該單位制劑以尼達(dá)尼布計(jì)，每個(gè)單位制劑含有的活性成分的重量為活性成分的有效治療劑量的n倍，其中，n為0.1～10之間的數(shù)。
優(yōu)選地，n為0.1～1之間的數(shù)。
優(yōu)選地，活性成分的有效治療劑量是10～150毫克/人/次。
進(jìn)一步優(yōu)選地，活性成分的有效治療劑量是10～100毫克/人/次。
更優(yōu)選地，活性成分的有效治療劑量是50～100毫克/人/次。
進(jìn)一步優(yōu)選地，該膠囊劑，按重量份計(jì)，其配方組成為：
優(yōu)選地，所述的纖維化疾病為毒素和藥物引起的肝纖維化，血吸蟲性肝纖維化，代謝性肝纖維化，營(yíng)養(yǎng)不良性肝纖維化，心源性肝纖維化，脂肪性肝纖維化，酒精性肝纖維化，肝淤血性纖維化，膽汁淤積性肝纖維化，膽管囊腫導(dǎo)致的肝纖維化；慢性腎盂腎炎，阻塞性腎病，遺傳性腎病如alport綜合征，糖尿病腎病，乙肝或艾滋病病毒及腎移植等引起的腎纖維化，藥物中毒引起的腎纖維化，糖尿病引起的腎纖維化；心內(nèi)膜心肌纖維化，胰腺囊腫纖維化，神原型系統(tǒng)纖維化，縱膈纖維化，骨髓纖維化，骨髓增生異常綜合癥，子宮肥大，前列腺增生，乳腺纖維瘤，脾纖維化，吸煙、重癥肺結(jié)核、肺移植和胸廓運(yùn)動(dòng)障礙造成的肺纖維化疾病，晶狀體前囊膜纖維化，增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變等中的一種或幾種。
本發(fā)明的藥物組合物使用量依據(jù)癥狀、年齡、給藥方式進(jìn)行選擇，通常成人每日給藥不超過3次，優(yōu)選2次，每次10～150mg(以尼達(dá)尼布計(jì))，優(yōu)選每次10mg～100mg，更優(yōu)選為每次20mg～90mg，進(jìn)一步優(yōu)選為每次30mg～80mg，更進(jìn)一步優(yōu)選為每次40～70mg。
本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明所述尼達(dá)尼布制劑能夠針對(duì)vegf、pdgf、fgf三種血管生成受體進(jìn)行纖維化疾病的預(yù)防或治療，而且每天口服次數(shù)不超過3次，優(yōu)選2次，并且能夠提供有效的藥物濃度，進(jìn)而達(dá)到較好的防治效果。
由于以上技術(shù)方案的實(shí)施，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)：
附圖說明
圖1為he染色的假手術(shù)組動(dòng)物腎臟組織病理圖；
圖2為siruisred染色的假手術(shù)組動(dòng)物腎臟組織病理圖；
圖3為he染色的模型對(duì)照組動(dòng)物腎臟組織病理圖；
圖4為siruisred染色的模型對(duì)照組動(dòng)物腎臟組織病理圖；
圖5為he染色的供試品低劑量組動(dòng)物腎臟組織病理圖；
圖6為siruisred染色的供試品低劑量組動(dòng)物腎臟組織病理圖。
具體實(shí)施方式
以下將通過具體實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明，但并不用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。本領(lǐng)域技術(shù)人員可在權(quán)利要求范圍內(nèi)對(duì)制備方法和使用儀器做出改進(jìn)，這些改進(jìn)也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。
實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。
實(shí)施例1：尼達(dá)尼布膠囊劑的制備
按如下方法和表1中物料配比制備尼達(dá)尼布膠囊劑：
表1：尼達(dá)尼布膠囊劑物料配比
將處方量的中鏈甘油三酯、混合脂肪酸甘油酯、大豆卵磷脂加熱至40-50℃使融化，加入已過0.8mm篩的處方量的乙磺酸尼達(dá)尼布，混合均勻，高壓均質(zhì)機(jī)(轉(zhuǎn)速20000r/min)中均制3-5次，每次2分鐘，直至內(nèi)容物為完全均一狀態(tài)，得囊液，采用壓制或滴制法填充入囊殼，制備成軟膠囊，即得。
實(shí)施例2：尼達(dá)尼布膠囊劑的理化性質(zhì)
按照實(shí)施例1的兩種處方組成分別制備軟膠囊200粒，觀察軟膠囊外觀、檢查裝量差異(裝量差異不得超過7.5％)、測(cè)定溶出度(槳法(中國(guó)藥典2015年版二部附錄xc第二法))、測(cè)定含量(分別測(cè)定0天及加速1月40℃、rh75％含量)。
液相檢測(cè)方法：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.1％三氟乙酸為流動(dòng)相a，乙腈為流動(dòng)相b，按表2進(jìn)行梯度洗脫，流速為每分鐘1.0ml；檢測(cè)波長(zhǎng)為387nm，柱溫35℃。
表2：液相洗脫液梯度配比組成
含量測(cè)定方法：取本品20粒，傾出內(nèi)容物，精密稱定，精密稱取適量(約相當(dāng)于尼達(dá)尼布12.5mg)，置50ml量瓶中，加初始流動(dòng)相適量，超聲使溶解，放冷，稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液1ml，置25ml量瓶中，加初始流動(dòng)相稀釋至刻度，作為供試品溶液，精密量取10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取乙磺酸尼達(dá)尼布對(duì)照品適量，精密稱定，加初始流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1ml中約含10μg尼達(dá)尼布的溶液，同法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。
計(jì)算公式為：
式(1)中，f為校正因子；c對(duì)照為對(duì)照品溶液的濃度(mg/ml)；a對(duì)照為對(duì)照品溶液主峰峰面積。
式(2)中：f平均為校正因子的平均值；c供試品為供試品溶液的濃度(mg/ml)；a供試品為供試品溶液主峰峰面積；w平均——平均裝量(mg)；規(guī)格為150mg或100mg。
溶出度測(cè)定方法：取本品6粒，以槳法(中國(guó)藥典2015年版二部附錄xc第二法)測(cè)定，以0.01mol/l鹽酸溶液(1000ml水中加入1.17ml鹽酸)900ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為每分鐘75轉(zhuǎn)，依法操作，經(jīng)30分鐘時(shí)，取溶液10ml，濾過(棄去初濾液5ml)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取乙磺酸尼達(dá)尼布對(duì)照品適量，精密稱定，加初始流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1ml分別中約含150μg和100μg尼達(dá)尼布的溶液，精密量取對(duì)照品溶液各10μl注入液相色譜儀(每份進(jìn)3針)，精密量取供試品溶液10μl注入液相色譜儀(每份進(jìn)1針)，記錄色譜圖；按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，計(jì)算每粒的溶出量，應(yīng)符合規(guī)定。
計(jì)算公式：
式(3)中，f為校正因子；c對(duì)照為對(duì)照品溶液的濃度(mg/ml)；a對(duì)照為對(duì)照品溶液主峰峰面積。
式(4)中，f平均為校正因子的平均值；c供試品為供試品溶液的濃度(mg/ml)；a供試品為供試品溶液主峰峰面積。
各理化性質(zhì)測(cè)試結(jié)果見表3，含量以尼達(dá)尼布(c31h33n5o4)計(jì)(n＝20)，溶出度以尼達(dá)尼布(c31h33n5o4)計(jì)(n＝6)。
表3：尼達(dá)尼布膠囊劑理化性質(zhì)
實(shí)施例3：乙磺酸尼達(dá)尼布對(duì)大鼠腎纖維化的抑制作用
50只雄性sd大鼠以體重相近原則隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為假手術(shù)組、模型對(duì)照組、供試品低劑量組、供試品中劑量組和供試品高劑量組。試驗(yàn)動(dòng)物零天(d0)麻醉后正中開腹，分離左側(cè)腎臟。于左腎下極處分離輸尿管，行單側(cè)輸尿管結(jié)扎術(shù)(uuo)。假手術(shù)組僅進(jìn)行開腹和分離左腎步驟。
術(shù)后次日(d1)開始給藥，假手術(shù)組(組1)動(dòng)物不作處理，模型對(duì)照組(組2)動(dòng)物給予溶媒，供試品低劑量組給予供試品劑量為10mg/kg/次、供試品中劑量組給予供試品劑量為50mg/kg/次、供試品高劑量組給予供試品劑量為200mg/kg/次，試驗(yàn)動(dòng)物灌胃給藥，每日上午和下午各給藥1次，連續(xù)給藥14天。
所有試驗(yàn)動(dòng)物藥前、藥后每周稱重1次。第15天收集24h尿液，測(cè)定尿量、肌酐(crea)、尿素氮(bun)、總蛋白(tp)、微量白蛋白(malb)。第15天取血分離血清測(cè)定肌酐(crea)、尿素氮(bun)、總蛋白(tp)、白蛋白(alb)。第15天動(dòng)物安樂死并進(jìn)行大體解剖觀察，取結(jié)扎側(cè)腎臟進(jìn)行he染色和siriusred染色。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1)一般臨床觀察：供試品高劑量組一動(dòng)物于第6天被發(fā)現(xiàn)死亡。同組的另兩只動(dòng)物于第15天解剖前被發(fā)現(xiàn)死亡。同組多只動(dòng)物于實(shí)驗(yàn)后期發(fā)現(xiàn)有弓背、四肢和雙耳蒼白、肛周污穢等癥狀。
2)體重：供試品能劑量依賴性地抑制sd大鼠的體重增長(zhǎng)。其中中劑量組和高劑量組的抑制作用均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.001)。第11天時(shí)供試品低、中、高劑量組的體重分別為311±22g、283±27g和249±21g，而模型對(duì)照組為325±19g，各組體重變化參見表4(g，mean±sd)。注：***：p<0.001vs陰性對(duì)照組。
表4：大鼠體重
3)血生化指標(biāo)：相比假手術(shù)組，模型對(duì)照組血清肌酐水平顯著上升，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(68±12vs44±8，p<0.01)。供試品各組中，低劑量組改善趨勢(shì)最為明顯(58±18)，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
模型對(duì)照組血清bun水平相比假手術(shù)組顯著上升(10.2±1.0vs5.3±0.4，p<0.05)，供試品各組未見改善趨勢(shì)。供試品高劑量組血清bun相比模型對(duì)照組顯著上升(18.9±6.2vs10.2±1.0，p<0.001)。
模型對(duì)照組相比假手術(shù)組血清tp和alb未見明顯變化。給予供試品能劑量依賴性地降低血清tp和alb，且均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05～0.001)。
各組的血生化指標(biāo)參見表5，肌酐(μm，mean±sd)；尿素氮(mm，mean±sd)；總蛋白(g/l，mean±sd)；微量白蛋白(g/l，mean±sd)，注：++：p<0.01vs假手術(shù)組；*、**、***：p<0.05、0.01、0.001vs陰性對(duì)照組。
表5：大鼠血生化指標(biāo)
4)尿生化指標(biāo)：術(shù)后第15天模型對(duì)照組的24h尿量相比假手術(shù)組有少量降低，但不具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(26.0±12.2vs29.1±11.0，p>0.05)。供試品能劑量依賴性地減少動(dòng)物的24h尿量，其中供試品高劑量組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(5.4±4.3vs26.0±12.2，p<0.001)。
術(shù)后第15天模型對(duì)照組的24h尿crea排泄量相比假手術(shù)組未見差異。供試品能劑量依賴性地減少動(dòng)物的24h尿crea排泄量，其中供試品高劑量組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(27.5±11.9vs84.7±11.7，p<0.001)。
術(shù)后第15天模型對(duì)照組的24h尿bun排泄量相比假手術(shù)組有少量降低，但不具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(1.14±1.90vs1.51±1.15，p>0.05)。供試品能劑量依賴性地減少動(dòng)物的24h尿bun排泄量，其中供試品高劑量的24h尿bun排泄量?jī)H為0.02±0.04，但因標(biāo)準(zhǔn)差較大，未見統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
術(shù)后第15天模型對(duì)照組的24h尿tp排泄量相比假手術(shù)組未見差異。供試品能降低動(dòng)物的24h尿tp排泄量，其中供試品高劑量組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(5.6±4.7vs14.6±6.8，p<0.05)。
術(shù)后第15天模型對(duì)照組的24h尿malb排泄量相比假手術(shù)組有少量升高，但不具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(0.27±0.63vs0.01±0.01，p>0.05)。供試品低、高劑量具有減少動(dòng)物的24h尿malb排泄量的趨勢(shì)，但未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。供試品中劑量具有升高動(dòng)物的24h尿malb排泄量的趨勢(shì)，同樣未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
各組的尿生化指標(biāo)參見表6，尿量(ml/24h，mean±sd)；肌酐(μmol/24h，mean±sd)；尿素(mmol/24h，mean±sd)；總蛋白(mg/24h，mean±sd)；微量白蛋白(mg/24h，mean±sd)，注：*、***：p<0.05、0.001vs陰性對(duì)照組。
表6：大鼠尿生化指標(biāo)
5)病理：顯微鏡下腎臟可見間質(zhì)纖維化，與模型對(duì)照組比較，在給予供試品后各組的腎臟纖維化發(fā)病率略有降低，但未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
其中，供試品連續(xù)給予輸尿管結(jié)扎的sd大鼠14天，第15天安樂死，假手術(shù)組物腎臟組織未見明顯異常改變，采用he染色，進(jìn)行100倍放大，見圖1。
供試品連續(xù)給予輸尿管結(jié)扎的sd大鼠14天，第15天安樂死，假手術(shù)組動(dòng)物腎臟組織未見明顯異常改變，采用siruisred染色，進(jìn)行100倍放大，見圖2。
供試品連續(xù)給予輸尿管結(jié)扎的sd大鼠14天，第15天安樂死，模型對(duì)照組動(dòng)物腎臟腎小管擴(kuò)張，間質(zhì)纖維化，采用he染色，進(jìn)行100倍放大，見圖3。
供試品連續(xù)給予輸尿管結(jié)扎的sd大鼠14天，第15天安樂死，模型對(duì)照組動(dòng)物腎臟腎小管間的間質(zhì)纖維化，病變程度輕微，采用siruisred染色，進(jìn)行100倍放大，見圖4。
供試品連續(xù)給予輸尿管結(jié)扎的sd大鼠14天，第15天安樂死，供試品低劑量組動(dòng)物腎臟腎小管擴(kuò)張，間質(zhì)纖維化，采用he染色，進(jìn)行100倍放大，見圖5。
供試品連續(xù)給予輸尿管結(jié)扎的sd大鼠14天，第15天安樂死，供試品低劑量組動(dòng)物腎臟腎小管間的間質(zhì)纖維化，病變程度輕微，采用siruisred染色，進(jìn)行100倍放大，見圖6。
本實(shí)驗(yàn)條件下，單側(cè)輸尿管結(jié)扎能導(dǎo)致sd大鼠輕度的腎間質(zhì)纖維化和輕度的腎功能障礙。給予供試品每日兩次，每次10mg/kg體重具有改善腎間質(zhì)纖維化的傾向。供試品的無毒性劑量為小于每日兩次，每次10mg/kg體重。致死劑量為小于每日兩次，每次200mg/kg體重。供試品的毒性靶器官需要進(jìn)一步的研究。
上述實(shí)施例只為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點(diǎn)，其目的在于讓熟悉此項(xiàng)技術(shù)的人士能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實(shí)施，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡根據(jù)本發(fā)明精神實(shí)質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。