一種包含多載藥緩釋系統(tǒng)骨修復(fù)材料的制備方法與流程

本發(fā)明涉及一種包含多載藥緩釋系統(tǒng)骨修復(fù)材料的制備方法，屬于生物材料領(lǐng)域，具體涉及一種以可降解脂肪族聚酯所形成的纖維作為主要基體材料并加載抗菌藥物和以表面接枝與內(nèi)部吸附方式載有促成骨藥物的納米載體的骨修復(fù)材料及其制備方法。

技術(shù)背景

骨缺損是臨床上非常常見的創(chuàng)傷，骨的修復(fù)過程是非常漫長的，它主要包括血腫和炎癥期、初始骨痂反應(yīng)期、軟骨形成期以及骨形成及改建期。在骨修復(fù)過程中細(xì)胞分泌多種生長因子以不同時序發(fā)揮作用，保證骨缺損的修復(fù)。

在臨床上，當(dāng)骨缺損發(fā)生時，最好的辦法是進(jìn)行骨移植，主要包括自體骨移植，同種異體骨移植以及非組織修補(bǔ)術(shù)等，其中對骨缺損修復(fù)效果最好的是自體骨移植。但是，自體骨取用過多會給患者帶來新的創(chuàng)傷及并發(fā)癥；同種異體骨移植可以克服部分自體骨移植帶來的問題，但是會受到供體來源、移植時組織狀況以及免疫原性等的限制；非組織修補(bǔ)術(shù)通常用于關(guān)節(jié)替代手術(shù)，主要問題就是不能跟周圍的組織整合進(jìn)而形成感染的病灶。對于骨缺損或者組織缺損，理想的解決辦法就是要克服以上三個方面的問題。生物材料領(lǐng)域?yàn)榻鉀Q這一問題提供了潛在的選擇。

作為一個理想的骨修復(fù)支架材料，需要滿足以下四個方面的要求：

(1)具有生物相容性、骨傳導(dǎo)性、骨誘導(dǎo)性，能夠?yàn)檎５募?xì)胞活動提供支持；

(2)可生物降解性，能夠?yàn)樾陆M織的長入提供空間并逐漸被新組織取代；

(3)一定的力學(xué)性能，能承受手術(shù)操作過程以及骨生長過程中的應(yīng)力；

(4)連貫多孔結(jié)構(gòu)，為新組織的生成運(yùn)輸營養(yǎng)物質(zhì)和廢物。

同軸靜電紡絲技術(shù)是一種制備納米纖維的簡單通用方法，由于其藥物加載方式簡單易行，在靜電紡絲過程中不同的藥物及生物大分子很容易加載到纖維核層和殼層，另外，藥物在載入纖維中后不會發(fā)生性能變化，仍能保持其性能，可以用來預(yù)防術(shù)后感染。因此，同軸靜電紡絲制備的納米纖維載藥膜具有良好的臨床應(yīng)用前景。同時骨缺損處多種生長因子缺乏或是活性不足是影響骨再生的重要原因，因此，研究一種既可以抗菌消炎又可以促進(jìn)骨修復(fù)的生物材料是十分重要的。

在通過同軸靜電紡絲制備具有核殼結(jié)構(gòu)的骨修復(fù)材料時，抗菌藥物通過共混的方式加入到纖維核層和殼層，纖維殼層藥物釋放速率比較快，存在突釋現(xiàn)象，材料植到人體的5-7天后，藥物釋放基本上已達(dá)80-90％；纖維核層藥物釋放速率相比殼層有所減緩。通過同軸靜電紡絲制備的骨修復(fù)材料植入人體10-14天后，藥物釋放達(dá)80％-90％，組織修復(fù)過程中感染情況的發(fā)生要持續(xù)至少2周，因此能夠在一定程度上滿足要求。

埃洛石納米管是一種管狀的鋁硅酸鹽，它的外徑約為50-80nm，內(nèi)徑約為10-15nm，長度大約是1000nm，負(fù)載率大約是15％-20％；并且埃洛石納米管表面具有硅羥基，可以作為表面接枝的化學(xué)反應(yīng)基團(tuán)。埃洛石納米管的長徑比為20-50，在聚合物纖維中取向會顯著增強(qiáng)纖維的力學(xué)性能。埃洛石納米管具有天然來源，不會對環(huán)境造成污染，并且具有良好的生物相容性。作為管狀容器，埃洛石納米管在化妝品、藥物釋放、醫(yī)用移植(如牙齒填料)等方面得到廣泛應(yīng)用。

在靜電紡絲制備的具有核殼結(jié)構(gòu)的納米纖維中加入抗菌藥物和以腔內(nèi)負(fù)載及管外接枝兩種方式載有促成骨藥物的埃洛石納米管，通過靜電紡絲技術(shù)，制備抗菌抗炎促成骨性生物材料，若對制得的引導(dǎo)組織再生膜的降解速率或者力學(xué)性能以及耐水性有更高的要求，還可以對聚合物基體中的天然高分子進(jìn)行交聯(lián)。本材料的載藥共分為兩部分，一部分是直接存在于纖維核層及殼層的抗菌藥物，另一部分藥物則存在于纖維核層的埃洛石納米管腔中及表面。直接存在于纖維核層及殼層的抗菌藥物擴(kuò)散至纖維表面然后再轉(zhuǎn)移至損傷部位；纖維內(nèi)部埃洛石納米管中的促成骨藥物首先要從埃洛石納米管擴(kuò)散進(jìn)入纖維內(nèi)部，然后再從纖維內(nèi)部擴(kuò)散至纖維表面，最后再從纖維表面擴(kuò)散至損傷部位；埃洛石納米管表面以化學(xué)鍵接枝的促成骨藥物主要通過酯鍵水解斷裂得以釋放進(jìn)入纖維核層，然后從纖維核層進(jìn)入纖維殼層最后從纖維殼層擴(kuò)散至纖維表面至骨缺損部位，從而減緩了藥物釋放的速率，延長藥物釋放時間，實(shí)現(xiàn)兩種藥物的順序釋放。本設(shè)計(jì)可以提高納米纖維膜的載藥量，減緩藥物釋放速率，緩解突釋現(xiàn)象，實(shí)現(xiàn)兩種藥物的順序釋放；同時，纖維核層和殼層負(fù)載藥物可以不同，和埃洛石納米管腔內(nèi)和表面接枝藥物可以不同，以起到同時殺滅厭氧菌及需氧菌、促成骨及成血管的作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種含有多載藥緩釋系統(tǒng)骨修復(fù)材料的制備方法，實(shí)現(xiàn)抗菌藥物和促成骨藥物的可控的長期的順序釋放，可以促進(jìn)骨缺損修復(fù)，不必二次手術(shù)，還可抑制缺損發(fā)生后易發(fā)生的細(xì)菌性感染及炎癥。

根據(jù)權(quán)利要求1所述的含多種載藥緩釋系統(tǒng)骨修復(fù)材料制備方法有如下步驟：

(1)取一定量的埃洛石納米管，加入甲苯溶劑中超聲分散均勻，120℃下甲苯回流條件下將埃洛石納米管表面用KH550進(jìn)行改性，KH550的用量為1-5mL/g埃洛石納米管，反應(yīng)進(jìn)行12-24h后得到改性后的埃洛石納米管A；

(2)取一定量的促成骨藥物1與丙烯酰氯反應(yīng)，促成骨藥物與丙烯酰氯的摩爾比為1-1.5，反應(yīng)在冰水浴條件下進(jìn)行12-24h后，將反應(yīng)產(chǎn)物提純，干燥得到C；

(3)將A和C在一定條件下反應(yīng)得到表面接枝有促成骨藥物的埃洛石納米管D，其中A與C的摩爾比為0.5-1.5，接枝到埃洛石納米管表面的粗成骨藥物約為埃洛石納米管質(zhì)量的1％-5％。

(4)取促成骨藥物1加入到其良溶劑中，充分?jǐn)嚢璩暿蛊淙芙庖缘玫狡滹柡腿芤海?/p>

(5)取埃洛石納米管D與促成骨藥物1的飽和溶液混合，超聲分散得到埃洛石納米管的懸浮液，其中埃洛石納米管的質(zhì)量與促成骨藥物1的質(zhì)量比為0.2-1；將懸浮溶液抽真空直至液體表面不再有氣泡出現(xiàn)，離心后取出上清液，用促成骨藥物1的良溶劑清洗沉淀；重復(fù)抽真空步驟至少三次，即可得到腔內(nèi)負(fù)載和表面接枝有促成骨藥物的埃洛石納米管E；

(6)將上述負(fù)載有促成骨藥物1的埃洛石納米管干燥，研磨；

(7)將可降解脂肪族聚酯溶于有機(jī)溶劑中，室溫磁力攪拌6-24h，得到可降解脂肪族聚酯質(zhì)量濃度為0.04-0.2g/mL的溶液F；

(8)向F溶液中加入抗菌藥物2，室溫磁力攪拌6-12h后加入載有促成骨藥物1的埃洛石納米管，磁力攪拌6-12h，得到可降解脂肪族聚酯質(zhì)量濃度為0.04-0.2g/mL的溶液G，溶液G中載有促成骨藥物1的埃洛石納米管與可降解脂肪族聚酯的質(zhì)量比1/100-40/100，抗菌藥物2與可降解脂肪族聚酯的的質(zhì)量比為5/100-20/100；

(9)將可降解天然高分子溶于有機(jī)溶劑中，室溫磁力攪拌6-24h，得到可降解天然高分子質(zhì)量濃度為0.04-0.2g/mL的溶液H；

(10)向溶液H中加入抗菌藥物2，室溫磁力攪拌6-12h，得到可降解天然高分子濃度為0.04-0.2g/mL的溶液I，溶液I中抗菌藥物2與可降解天然高分子的質(zhì)量比為5/100-10/100；

(11)以溶液I作為內(nèi)層，溶液G作為殼層，進(jìn)行同軸靜電紡絲，內(nèi)外層進(jìn)樣速率比為1/3-1，以不銹鋼滾筒為接收裝置，滾筒轉(zhuǎn)動速率為100-600rpm，紡絲液流動速率為0.5-10mL/h，電壓7-20kV，接收距離8-30cm，紡絲0.5-30h，得到厚度50-500μm的電紡絲纖維膜；

(12)靜電紡絲結(jié)束后，將紡絲膜在通風(fēng)櫥中室溫放置2-7天，包裝消毒。

本發(fā)明使用埃洛石納米管作為納米載體，進(jìn)行腔內(nèi)負(fù)載和表面接枝促成骨藥物，但是本發(fā)明不限于埃洛石納米管，表面帶有羥基的具有生物相容性的、尺寸在1-100nm之間的無機(jī)多孔納米粒子如介孔二氧化硅、介孔生物活性玻璃、羥基磷灰石納米管等均適用于本發(fā)明。

本發(fā)明采用同軸靜電紡絲的方法制備納米纖維，但是本發(fā)明不限于同軸靜電紡絲，單軸靜電紡絲、溶液澆注、3D打印等制備的材料以及水凝膠等都適用于本發(fā)明。

本發(fā)明將促成骨藥物載入到埃洛石納米管管腔中以及接枝到埃洛石納米管的表面，但是本發(fā)明不限于促成骨藥物，也可使用含羥基的抗菌消炎藥物如甲硝唑等以延長其緩釋時間。

附圖說明

圖1為摘要附圖(包含多載藥緩釋系統(tǒng)骨修復(fù)材料示意圖)；

圖2為埃洛石納米管表面接枝促成骨藥物的反應(yīng)機(jī)理圖；

圖3為案例一中實(shí)施例1的包含多載藥緩釋系統(tǒng)納米纖維膜的電鏡圖片；

圖4為實(shí)施例1的包含多載藥緩釋系統(tǒng)納米纖維膜的藥物釋放曲線；

圖5為實(shí)施例1的包含多載藥緩釋系統(tǒng)納米纖維膜的抑菌圈照片，模型菌為金黃色葡萄球菌。

具體實(shí)施方法：

下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不限于以下實(shí)施例。

實(shí)施例1

(1)取5g的埃洛石納米管，加入200mL甲苯溶劑中超聲分散均勻，120℃下甲苯回流條件下加入5mL KH550，反應(yīng)進(jìn)行12h后得到改性后的埃洛石納米管A；

(2)取一定量的促成骨藥物淫羊藿苷與丙烯酰氯反應(yīng)，促成骨藥物與丙烯酰氯的摩爾比為1：1，反應(yīng)在冰水浴條件下進(jìn)行12h后，將反應(yīng)產(chǎn)物提純，干燥得到C；

(3)將A和C在一定條件下反應(yīng)得到表面接枝有促成骨藥物的埃洛石納米管D，其中A與C的摩爾比為1:2；

(4)取一定量促成骨藥物淫羊藿苷加入到N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，充分?jǐn)嚢璩暿蛊淙芙庖缘玫狡滹柡腿芤海?/p>

(5)取5g埃洛石納米管D與含5g促成骨藥物淫羊藿苷的飽和溶液混合，超聲分散得到埃洛石納米管的懸浮液；將懸浮溶液抽真空直至液體表面不再有氣泡出現(xiàn)，離心后取出上清液，用促成骨藥物淫羊藿苷的良溶劑清洗沉淀；重復(fù)抽真空步驟至少三次，即可得到腔內(nèi)負(fù)載和表面接枝有促成骨藥物的埃洛石納米管E；

(6)將上述負(fù)載有促成骨藥物淫羊藿苷的埃洛石納米管干燥，研磨；

(7)將1.2聚己內(nèi)酯溶于18.8g三氟乙醇中，室溫磁力攪拌24h，得到聚己內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6％的溶液F；

(8)向F溶液中加入0.06g抗菌藥物甲硝唑，室溫磁力攪拌12h后加入0.012g載有促成骨藥物淫羊藿苷的埃洛石納米管，磁力攪拌12h，得到聚己內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6％的溶液G，溶液G中載有促成骨藥物淫羊藿苷的埃洛石納米管與可降解脂肪族聚酯的質(zhì)量比1/100，抗菌藥物甲硝唑與可降解脂肪族聚酯的的質(zhì)量比為5/100；

(9)將2.4明膠溶于37.6g三氟乙醇中，室溫磁力攪拌24h，得到明膠質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6％的溶液H；

(10)向溶液H中加入0.12g甲硝唑，室溫磁力攪拌24hh，得明膠質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6％的溶液I，溶液I中甲硝唑與明膠的質(zhì)量比為5/100；

(11)以溶液I作為內(nèi)層，溶液G作為殼層，進(jìn)行同軸靜電紡絲，以不銹鋼滾筒為接收裝置，滾筒轉(zhuǎn)動速率為100rpm，內(nèi)層紡絲液流動速率為0.5mL/h，外層紡絲液流動速率為1.5mL/h，電壓15KV，接收距離18cm，紡絲20h，得到厚度300μm的電紡絲纖維膜；

(12)靜電紡絲結(jié)束后，將紡絲膜在通風(fēng)櫥中室溫放置5天，包裝消毒。

(13)按上述方法制備得到的納米纖維膜可以實(shí)現(xiàn)促成骨藥物長達(dá)三個月的藥物釋放，加速骨缺損的修復(fù)；該納米纖維膜還可以抑制缺損處細(xì)菌滋生。

實(shí)施例2

(1)取5g的埃洛石納米管，加入200mL甲苯溶劑中超聲分散均勻，120℃下甲苯回流條件下加入25mL KH550，反應(yīng)進(jìn)行12h后得到改性后的埃洛石納米管A；

(2)取一定量的促成骨藥物淫羊藿苷與丙烯酰氯反應(yīng)，促成骨藥物與丙烯酰氯的摩爾比為1：1.5，反應(yīng)在冰水浴條件下進(jìn)行12h后，將反應(yīng)產(chǎn)物提純，干燥得到C；

(3)將A和C在一定條件下反應(yīng)得到表面接枝有促成骨藥物的埃洛石納米管D，其中A與C的摩爾比為2:3；

(4)取一定量促成骨藥物淫羊藿苷加入到N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，充分?jǐn)嚢璩暿蛊淙芙庖缘玫狡滹柡腿芤海?/p>

(5)取5g埃洛石納米管D與淫羊藿苷的飽和溶液混合，超聲分散得到埃洛石納米管的懸浮液；將懸浮溶液抽真空直至液體表面不再有氣泡出現(xiàn)，離心后取出上清液，用N,N-二甲基甲酰胺清洗沉淀；重復(fù)抽真空步驟至少三次，即可得到腔內(nèi)負(fù)載和表面接枝有促成骨藥物的埃洛石納米管E；

(6)將上述負(fù)載有淫羊藿苷的埃洛石納米管干燥，研磨；

(7)將2g聚己內(nèi)酯溶于18g三氟乙醇中，室溫磁力攪拌24h，得到聚己內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的溶液F；

(8)向F溶液中加入0.4g抗菌藥物甲硝唑，室溫磁力攪拌12h后加入0.8g載有促成骨藥物淫羊藿苷的埃洛石納米管，磁力攪拌12h，得到聚己內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6％的溶液G，溶液G中載有促成骨藥物1的埃洛石納米管與聚己內(nèi)酯的質(zhì)量比40/100，甲硝唑與聚己內(nèi)酯的質(zhì)量比為20/100；

(9)將4g明膠溶于36g三氟乙醇中，室溫磁力攪拌24h，得到明膠質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的溶液H；

(10)向溶液H中加入0.4g甲硝唑，室溫磁力攪拌24h，得明膠質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的溶液I，溶液I中甲硝唑與明膠的質(zhì)量比為10/100；

(11)以溶液I作為內(nèi)層，溶液G作為殼層，進(jìn)行同軸靜電紡絲，以不銹鋼滾筒為接收裝置，滾筒轉(zhuǎn)動速率為100rpm，內(nèi)層紡絲液流動速率為0.5mL/h，外層紡絲液流動速率為1.5mL/h，電壓15KV，接收距離18cm，紡絲30h，得到厚度500μm的電紡絲纖維膜；

(12)靜電紡絲結(jié)束后，將紡絲膜在通風(fēng)櫥中室溫放置5天，包裝消毒。

(13)按上述方法制備得到的納米纖維膜可以實(shí)現(xiàn)促成骨藥物長達(dá)三個月的藥物釋放，加速骨缺損的修復(fù)；該納米纖維膜還可以抑制缺損處細(xì)菌滋生。

實(shí)施例3

(1)取5g的埃洛石納米管，加入200mL甲苯溶劑中超聲分散均勻，120℃下甲苯回流條件下加入15mL KH550，反應(yīng)進(jìn)行12h后得到改性后的埃洛石納米管A；

(2)取一定量的促成骨藥物淫羊藿苷與丙烯酰氯反應(yīng)，淫羊藿苷與丙烯酰氯的摩爾比為1：1.2，反應(yīng)在冰水浴條件下進(jìn)行24h后，將反應(yīng)產(chǎn)物提純，干燥得到C；

(3)將A和C在60℃下以甲醇和水的混合溶劑(甲醇體積：水體積＝4:1)反應(yīng)得到表面接枝有淫羊藿苷的埃洛石納米管D，其中A與C的摩爾比為1:1.2；

(4)取一定量生長因子骨形態(tài)蛋白(BMP)加入到去離子水中，充分?jǐn)嚢璩蛊淙芙庖缘玫狡滹柡腿芤海?/p>

(5)取5g埃洛石納米管D與骨形態(tài)發(fā)生蛋白的飽和溶液混合，超聲分散得到埃洛石納米管的懸浮液；將懸浮溶液抽真空直至液體表面不再有氣泡出現(xiàn)，離心后取出上清液，用去離子水清洗沉淀；重復(fù)抽真空步驟至少三次，即可得到腔內(nèi)負(fù)載骨形態(tài)發(fā)生蛋白和表面接枝有淫羊藿苷的埃洛石納米管E；

(6)將上述負(fù)載有促成骨藥物1的埃洛石納米管E干燥，研磨；

(7)將1.6g聚己內(nèi)酯溶于18.4g三氟乙醇中，室溫磁力攪拌24h，得到聚己內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8％的溶液F；

(8)向F溶液中加入0.16g抗菌藥物環(huán)丙沙星，室溫磁力攪拌12h后加入0.32g載有淫羊藿苷的埃洛石納米管，磁力攪拌12h，得到聚己內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8％的溶液G，溶液G中載有淫羊藿苷的埃洛石納米管與聚己內(nèi)酯的質(zhì)量比20/100，環(huán)丙沙星與聚己內(nèi)酯的的質(zhì)量比為10/100；

(9)將4g明膠溶于37.6g三氟乙醇中，室溫磁力攪拌24h，得到明膠質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的溶液H；

(10)向溶液H中加入0.32g甲硝唑，室溫磁力攪拌24h，得明膠質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的溶液I，溶液I中甲硝唑與明膠的質(zhì)量比為8/100；

(11)以溶液I作為內(nèi)層，溶液G作為殼層，進(jìn)行同軸靜電紡絲，以不銹鋼滾筒為接收裝置，滾筒轉(zhuǎn)動速率為100rpm，內(nèi)層紡絲液流動速率為0.5mL/h，外層紡絲液流動速率為1mL/h，電壓20KV，接收距離20cm，紡絲25h，得到厚度400μm的電紡絲纖維膜；

(12)靜電紡絲結(jié)束后，將紡絲膜在通風(fēng)櫥中室溫放置7天，包裝消毒。

(13)按上述方法制備得到的納米纖維膜可以實(shí)現(xiàn)促成骨藥物長達(dá)三個月的藥物釋放，加速骨缺損的修復(fù)；該納米纖維膜還可以抑制缺損處細(xì)菌滋生。

實(shí)施例4

(1)取5g的埃洛石納米管，加入200mL甲苯溶劑中超聲分散均勻，120℃下甲苯回流條件下加入15mL KH550，反應(yīng)進(jìn)行12h后得到改性后的埃洛石納米管A；

(2)取一定量的促成骨藥物淫羊藿苷與丙烯酰氯反應(yīng)，淫羊藿苷與丙烯酰氯的摩爾比為1：1.2，反應(yīng)在冰水浴條件下進(jìn)行24h后，將反應(yīng)產(chǎn)物提純，干燥得到C；

(3)將A和C在60℃下以甲醇和水的混合溶劑(甲醇體積：水體積＝4:1)反應(yīng)得到表面接枝有淫羊藿苷的埃洛石納米管D，其中A與C的摩爾比為1:1.2；

(4)取一定量生長因子骨形態(tài)蛋白(BMP)加入到去離子水中，充分?jǐn)嚢璩蛊淙芙庖缘玫狡滹柡腿芤海?/p>

(5)取5g埃洛石納米管D與骨形態(tài)發(fā)生蛋白的飽和溶液混合，超聲分散得到埃洛石納米管的懸浮液；將懸浮溶液抽真空直至液體表面不再有氣泡出現(xiàn)，離心后取出上清液，用去離子水清洗沉淀；重復(fù)抽真空步驟至少三次，即可得到腔內(nèi)負(fù)載骨形態(tài)發(fā)生蛋白和表面接枝有淫羊藿苷的埃洛石納米管E；

(6)將上述負(fù)載有促成骨藥物淫羊藿苷的埃洛石納米管E干燥，研磨；

(7)將1.6g聚乳酸溶于18.4g三氟乙醇中，室溫磁力攪拌24h，得到聚乳酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8％的溶液F；

(8)向F溶液中加入0.16g抗菌藥物環(huán)丙沙星，室溫磁力攪拌12h后加入0.32g載有淫羊藿苷的埃洛石納米管，磁力攪拌12h，得到聚乳酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8％的溶液G，溶液G中載有淫羊藿苷的埃洛石納米管與聚乳酸的質(zhì)量比20/100，環(huán)丙沙星與聚乳酸的的質(zhì)量比為10/100；

(9)將溶液G進(jìn)行靜電紡絲，以不銹鋼滾筒為接收裝置，滾筒轉(zhuǎn)動速率為100rpm，紡絲液流動速率為1mL/h，電壓20KV，接收距離20cm，紡絲25h，得到厚度400μm的電紡絲纖維膜；

(10)靜電紡絲結(jié)束后，將紡絲膜在通風(fēng)櫥中室溫放置7天，包裝消毒。

(11)按上述方法制備得到的納米纖維膜可以實(shí)現(xiàn)促成骨藥物長達(dá)三個月的藥物釋放，加速骨缺損的修復(fù)；該納米纖維膜還可以抑制缺損處細(xì)菌滋生。

實(shí)施例5

(1)取5g的埃洛石納米管，加入200mL甲苯溶劑中超聲分散均勻，120℃下甲苯回流條件下加入15mL KH550，反應(yīng)進(jìn)行12h后得到改性后的埃洛石納米管A；

(2)取一定量的促成骨藥物槲皮素與丙烯酰氯反應(yīng)，槲皮素與丙烯酰氯的摩爾比為1：1反應(yīng)在冰水浴條件下進(jìn)行24h后，將反應(yīng)產(chǎn)物提純，干燥得到C；

(3)將A和C在60℃下以甲醇和水的混合溶劑(甲醇體積：水體積＝4:1)反應(yīng)得到表面接枝有槲皮素的埃洛石納米管D，其中A與C的摩爾比為1:1.2；

(4)取一定量血管上皮生長因子(VEGF)加入到去離子水中，攪拌使其溶解以得到其飽和溶液；

(5)取5g埃洛石納米管D與血管上皮生長因子(VEGF)的飽和溶液混合，超聲分散得到埃洛石納米管的懸浮液；將懸浮溶液抽真空直至液體表面不再有氣泡出現(xiàn)，離心后取出上清液，用去離子水清洗沉淀；重復(fù)抽真空步驟至少三次，即可得到腔內(nèi)負(fù)載血管上皮生長因子(VEGF)和表面接枝有槲皮素的埃洛石納米管E；

(6)將上述負(fù)載有促成骨藥物槲皮素的埃洛石納米管E干燥，研磨；

(7)將1.6g聚己內(nèi)酯溶于18.4g三氟乙醇中，室溫磁力攪拌24h，得到聚己內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8％的溶液F；

(8)向F溶液中加入0.16g抗菌藥物環(huán)丙沙星，室溫磁力攪拌12h后加入0.32g載有淫羊藿苷的埃洛石納米管，磁力攪拌12h，得到聚己內(nèi)酯質(zhì)量分?jǐn)?shù)為8％的溶液G，溶液G中載有淫羊藿苷的埃洛石納米管與聚己內(nèi)酯的質(zhì)量比20/100，環(huán)丙沙星與聚己內(nèi)酯的的質(zhì)量比為10/100；

(9)將4g殼聚糖溶于37.6g三氟乙醇中，室溫磁力攪拌24h，得到殼聚糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的溶液H；

(10)向溶液H中加入0.32g甲硝唑，室溫磁力攪拌24h，得殼聚糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10％的溶液I，溶液I中甲硝唑與殼聚糖的質(zhì)量比為8/100；

(11)以溶液I作為內(nèi)層，溶液G作為殼層，進(jìn)行同軸靜電紡絲，以不銹鋼滾筒為接收裝置，滾筒轉(zhuǎn)動速率為300rpm，內(nèi)層紡絲液流動速率為1.2mL/h，外層紡絲液流動速率為2.4mL/h，電壓20KV，接收距離15cm，紡絲20h，得到厚度300μm的電紡絲纖維膜；

(12)靜電紡絲結(jié)束后，將紡絲膜在通風(fēng)櫥中室溫放置7天，包裝消毒。

(13)按上述方法制備得到的納米纖維膜可以實(shí)現(xiàn)促成骨藥物長達(dá)三個月的藥物釋放，加速骨缺損的修復(fù)；該納米纖維膜還可以抑制缺損處細(xì)菌滋生。