本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料
技術(shù)領(lǐng)域：
，更具體地，涉及一種高效抗菌復(fù)合止血海綿的制備方法。
背景技術(shù)：
：有效止血是減輕患者痛苦，降低死亡率的關(guān)鍵，而快速有效的止血成為解決這一問題的重點(diǎn)。日常生活中難免會(huì)遇到各種突發(fā)事故、災(zāi)難所造成身體組織的破損。止血是傷口處理的第一步，也直接影響著后面的創(chuàng)傷愈合。目前，常見的止血材料有微孔類無機(jī)材料（沸石）、多微孔淀粉、纖維蛋白膠、明膠海綿、羧甲基纖維素可溶性止血紗布、α-氰基丙烯酸酯類組織膠等，這些材料雖然有很好的止血效果，但各自又存在一定的局限性。明膠和較遠(yuǎn)的組織粘附性較差，溶于從傷口上脫落；多孔沸石和多微孔淀粉在吸收血液中的水分后會(huì)放熱，使傷口周圍的溫度升高造成灼傷口，難以愈合，并且這些敷料的功能比較單一。因此，開發(fā)出一種具有抗菌功能性和快速止血效果的止血材料十分必要。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是為了解決目前止血材料的功能單一、止血效果不理想且存在血栓形成風(fēng)險(xiǎn)的問題，提供一種高效抗菌復(fù)合止血海綿的制備方法。本發(fā)明將殼聚糖和海藻酸結(jié)合在一起制備的復(fù)合止血海綿，既含有殼聚糖的氨基又有海藻酸鈉的羧基，在這兩種官能團(tuán)的共同作用下有效提高止血效果。另外，殼聚糖中混合了海藻酸鹽多孔微球，不僅克服了單一的殼聚糖止血海綿的缺陷，同時(shí)也克服了海藻酸鹽多孔微球易被血液沖走，降低造成血栓風(fēng)險(xiǎn)的可能。這兩者之間的協(xié)同作用復(fù)合組成了一種效果更佳的止血材料。殼聚糖、海藻酸作為兩種天然的海洋高分子材料，不僅具有良好的生物相容性、可降解性，同時(shí)還有很好的止血、抗菌、促進(jìn)傷口愈合的功能。尤其是殼聚糖的微酸條件下帶正電荷可以很好的與血液中紅細(xì)胞發(fā)生靜電作用，從而在傷口處聚集大量的紅細(xì)胞，加速止血，而海藻酸鈉形成凝膠能夠?yàn)閭谔峁┮粋€(gè)濕潤的環(huán)境，有利于傷口的愈合。殼聚糖、海藻酸鈉所制備止血材料不僅止血效果突出、而且避免了更換材料所產(chǎn)生的二次傷害，能克服傳統(tǒng)止血材料存在的缺陷。本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：本發(fā)明提供了一種高效抗菌復(fù)合止血海綿的制備方法，包括如下步驟：S1.將海藻酸鈉溶液加入氯化鈉和季鹽，制備得到A液；S2.在分散液中加入乳化劑，作為B液；配置4~6%的氯化鈣溶液作為C液；S3.采用乳化交聯(lián)法，按照水油比為1：（3~7）的體積比將A液加入到B液中，攪拌后形成乳濁液，然后將C液加入到乳濁液中反應(yīng)，固化，離心，洗滌，干燥后得到多孔海藻酸鹽載藥微球；S4.將殼聚糖鹽酸鹽溶水制成水溶液，加入S2中制得的多孔海藻酸鹽載藥微球和止血藥物，進(jìn)行多次冷凍干燥后，洗滌，滅菌，得到所述高效抗菌復(fù)合止血海綿；海藻酸鈉溶液的質(zhì)量濃度為1.5~3%，氯化鈉的質(zhì)量體積濃度為0.03~0.07g/L，季鹽的濃度為1.5~2.5g/L；S4中制得的多孔海藻酸鹽載藥微球與殼聚糖鹽酸鹽的質(zhì)量比為1：（15~25）。本發(fā)明首先以海藻酸鈉為載體材料，氯化鈉為致孔劑，氯化鈣為交聯(lián)劑，高效抗菌劑季鏻鹽為模型藥物，采用乳化交聯(lián)法制備多孔載藥微球，然后將微球和中藥小薊按照一定的重量比加入到殼聚糖鹽酸鹽溶液中，混合均勻后冷凍干燥，最后經(jīng)滅菌處理，獲得高效抗菌止血海綿。優(yōu)選地，S1中海藻酸鈉溶液的質(zhì)量濃度為2%，氯化鈉的質(zhì)量體積濃度為0.05g/L，季鹽的濃度為2.0g/L。優(yōu)選地，S2中所述分散液為液體石蠟或異辛烷，所述乳化劑為3%span80和1%Tween80。優(yōu)選地，配置5%的氯化鈣溶液作為C液。優(yōu)選地，S3中采用乳化交聯(lián)法，按照水油比為1：5的體積比將A液加入到B液中。優(yōu)選地，S4中殼聚糖鹽酸鹽的分子量為10萬，脫乙酰度為85%。優(yōu)選地，將殼聚糖鹽酸鹽溶水制成質(zhì)量體積比為2%的水溶液。優(yōu)選地，所述止血藥物為中藥小薊。優(yōu)選地，所述冷凍干燥操作為先在-20℃預(yù)凍6h，然后于-70℃冷凍干燥24h。優(yōu)選地，所述滅菌操作為采用紫外燈輻射3~5h。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：1、本發(fā)明采用的是天然的高分子多糖，具有良好的生物相容性、可生物降解、無毒等特性。2、本發(fā)明將海藻酸鹽多孔微球作為類分子篩與殼聚糖溶液混合制備止血海綿，不僅能提高海綿的力學(xué)性能，還能提高其吸水溶脹性，從而能快速濃縮血液中的有形成分，縮短止血時(shí)間，減少出血量。3、本發(fā)明還將季鏻鹽抗菌劑包埋在海藻酸鹽微球中，這樣微球?qū)ζ淦鸬揭欢ǖ木忈屪饔?，從而能長久抑制傷口感染，促進(jìn)傷口愈合。4、本發(fā)明將多孔海藻酸鹽載藥微球嵌于殼聚糖海綿中，既發(fā)揮了快速止血高效抗菌促傷口愈合作用，又規(guī)避了材料進(jìn)入血液形成血栓的風(fēng)險(xiǎn)。具體實(shí)施方式以下結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明，但實(shí)施例并不對本發(fā)明做任何形式的限定。除非特別說明，本發(fā)明采用的試劑、方法和設(shè)備為本
技術(shù)領(lǐng)域：
常規(guī)試劑、方法和設(shè)備。除非特別說明，本發(fā)明所用試劑和材料均為市購。實(shí)施例1：將2g海藻酸鈉粉末溶于100ml去離子水得到2%的海藻酸鈉溶液，加入0.005g的NaCl和0.2g的季鏻鹽，攪拌均勻，作為A液；在液體石蠟中加入3%span80和1%Tween80配制混合乳化劑溶液作為B液；配置5%氯化鈣溶液作為C液；采用乳化交聯(lián)法，按照水油比1：5將A液加入到B液中，在470rpm轉(zhuǎn)速，45℃恒溫水浴下攪拌15min，形成乳濁液，然后將C液逐滴加入到乳濁液中，控制滴速30滴/min，滴加完畢后再反應(yīng)20min，加入異丙醇固化10min，離心、洗滌、干燥，即得多孔海藻酸鹽載藥微球；將2g殼聚糖鹽酸鹽（分子量為10萬、脫乙酰度為85%）溶于去離子水制成2%（w/v）的水溶液，加入0.1g上述制備的多孔海藻酸鹽微球和0.05g中藥小薊均勻攪拌，在-20℃預(yù)凍6h，然后于-70℃冷凍干燥24h，用堿液和去離子水洗滌后，再次將材料與上述相同條件下進(jìn)行預(yù)凍和冷凍干燥處理。將上述再次冷凍干燥的海綿進(jìn)行紫外燈輻射4h滅菌處理，最后獲得高效抗菌止血海綿。實(shí)施例2將2g海藻酸鈉粉末溶于100ml去離子水得到2%的海藻酸鈉溶液，加入0.02g的NaCl和1g的季鏻鹽，攪拌均勻，作為A液；在異辛烷中加入3%span80和1%Tween80配制混合乳化劑溶液作為B液；配置5%氯化鈣溶液作為C液；采用乳化交聯(lián)法，按照水油比1：10將A液加入到B液中，在470rpm轉(zhuǎn)速，45℃恒溫水浴下攪拌15min，形成乳濁液，然后將C液逐滴加入到乳濁液中，控制滴速30滴/min，滴加完畢后再反應(yīng)30min，加入異丙醇固化10min，離心、洗滌、干燥，即得多孔海藻酸鹽載藥微球；將2g殼聚糖鹽酸鹽（分子量為10萬、脫乙酰度為90%）溶于去離子水制成2%（w/v）的水溶液，加入0.4g上述制備的多孔海藻酸鹽微球和0.2g中藥小薊均勻攪拌，在-20℃預(yù)凍12h，然后于-80℃冷凍干燥48h，用堿液和去離子水洗滌后，再次將材料與上述相同條件下進(jìn)行預(yù)凍和冷凍干燥處理。將上述再次冷凍干燥的海綿進(jìn)行紫外燈輻射6h滅菌處理，最后獲得高效抗菌止血海綿。實(shí)施例3將2g海藻酸鈉粉末溶于100ml去離子水得到2%的海藻酸鈉溶液，加入0.01g的NaCl和0.5g的季鏻鹽，攪拌均勻，作為A液；在液體石蠟中加入3%span80和1%Tween80配制混合乳化劑溶液作為B液；配置5%氯化鈣溶液作為C液；采用乳化交聯(lián)法，按照水油比1：8將A液加入到B液中，在470rpm轉(zhuǎn)速，45℃恒溫水浴下攪拌15min，形成乳濁液，然后將C液逐滴加入到乳濁液中，控制滴速30滴/min，滴加完畢后再反應(yīng)30min，加入異丙醇固化10min，離心、洗滌、干燥，即得多孔海藻酸鹽載藥微球；將2g殼聚糖鹽酸鹽（分子量為10萬、脫乙酰度為88%）溶于去離子水制成2%（w/v）的水溶液，加入0.3g上述制備的多孔海藻酸鹽微球和0.1g中藥小薊均勻攪拌，在-20℃預(yù)凍8h，然后于-75℃冷凍干燥36h，用堿液和去離子水洗滌后，再次將材料與上述相同條件下進(jìn)行預(yù)凍和冷凍干燥處理。將上述再次冷凍干燥的海綿進(jìn)行紫外燈輻射5h滅菌處理，最后獲得高效抗菌止血海綿。對比例1制備方法同實(shí)施例1，不同的是：海藻酸鈉溶液的濃度為5%。對比例2制備方法同實(shí)施例1，不同的是：作為C液的氯化鈣溶液的濃度為8%。對比例3制備方法同實(shí)施例1，不同的是：殼聚糖鹽酸鹽的質(zhì)量百分比為15%。實(shí)施例4通過對實(shí)施例1~3得到的海綿樣品進(jìn)行了促凝血試驗(yàn)。測試溶液使用D液，D液為加抗凝劑檸檬酸鈉的新鮮兔血，模擬人體傷口滲出的血液。D液由新鮮兔血添加10%檸檬酸鈉攪拌均勻配制而成。測試方法為取3支試管分別加入1mlA液，在37℃恒溫水浴中加熱1h，分別加入實(shí)施例1~3得到的海綿樣品碎片80mg，繼續(xù)恒溫加熱，每隔半分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次試管，直至試管中的血液不流動(dòng)為止，分別記錄各組試管中D液的凝固時(shí)間。表1促凝血試驗(yàn)結(jié)果組號促凝血時(shí)間(min)實(shí)施例11.64實(shí)施例21.70實(shí)施例31.80對比例12.12對比例22.20對比例31.96由上表可知，本發(fā)明的復(fù)合止血海綿材料具有快速止血的性能，且比對比例的止血效果更好。當(dāng)前第1頁1 2 3