一種中草藥多糖組合物及其用途的制作方法

本發(fā)明涉及保健食品領(lǐng)域，特別涉及一種中草藥多糖組合物及其用途。

背景技術(shù)：

現(xiàn)有腫瘤治療存在局限性。腫瘤目前居于死因譜的首位，成為重大的健康威脅，腫瘤的三大常規(guī)治療：手術(shù)、放化療均會(huì)造成具有一定的局限性，對(duì)患者造成一定的痛苦感受，放化療對(duì)正常的免疫系統(tǒng)也有不同程度的抑制作用。

免疫治療至關(guān)重要。隨著腫瘤免疫學(xué)的研究進(jìn)展，人們?cè)絹?lái)越認(rèn)識(shí)到免疫系統(tǒng)對(duì)于腫瘤的監(jiān)視及清除是至關(guān)重要的，免疫治療被譽(yù)為有望攻克癌癥的第四類治療方法。

免疫負(fù)調(diào)控細(xì)胞成為新靶點(diǎn)。以往人們關(guān)注的是正向免疫，即免疫細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的直接殺傷，而現(xiàn)在學(xué)術(shù)界認(rèn)為，腫瘤細(xì)胞實(shí)現(xiàn)免疫逃逸是腫瘤得以發(fā)生發(fā)展的重要前提，而該重要生物事件發(fā)生的原因是腫瘤微環(huán)境中存在著一個(gè)免疫負(fù)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，該網(wǎng)絡(luò)中的免疫負(fù)調(diào)控細(xì)胞和因子抑制了免疫效應(yīng)細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的監(jiān)視和清除。髓源抑制性細(xì)胞(MDSC)、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)是主要的免疫負(fù)調(diào)控細(xì)胞。

中草藥多糖可改善腫瘤微環(huán)境。多糖是中草藥提取物的主要成分，某些中草藥多糖可以調(diào)控免疫細(xì)胞的激活、增殖和分化，近年的研究表明，中草藥多糖對(duì)免疫負(fù)調(diào)控細(xì)胞的分化具有調(diào)控作用，進(jìn)而影響其功能，發(fā)揮改善腫瘤微環(huán)境的作用。但未見相應(yīng)的中藥組合物的相關(guān)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明提供一種中草藥多糖組合物及其用途。本發(fā)明所得的中藥組合物、藥物或保健食品經(jīng)科學(xué)配伍而成，相得益彰，無(wú)毒副作用。既有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，又有恢復(fù)機(jī)體正常的免疫監(jiān)視功能，能夠?qū)δ[瘤起預(yù)防和/或輔助治療作用。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種中藥組合物，由黃精、枸杞和靈芝組成。

在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述中藥組合物中所述黃精的有效成分為黃精多糖，所述枸杞的有效成分為枸杞多糖，所述靈芝的有效成分為靈芝多糖。

在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述中藥組合物中所述黃精多糖、所述枸杞多糖與所述靈芝多糖的質(zhì)量比為(1～5):(1～5):(1～5)。

在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述中藥組合物中所述黃精多糖、所述枸杞多糖與所述靈芝多糖的質(zhì)量比為(2～4):(2～4):(2～4)。

在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述中藥組合物中所述黃精多糖、所述枸杞多糖與所述靈芝多糖的質(zhì)量比為2:3:3。

在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述中藥組合物中所述黃精多糖、枸杞多糖或靈芝多糖由如下方法制得：將黃精、枸杞或靈芝粉碎后，以g/mL計(jì)，按照黃精、枸杞或靈芝與水的質(zhì)量體積比為(0.5g～2.0g)∶5mL的比例加水，在70℃～75℃下加熱攪拌提取2-4h，過濾獲得的濾渣按照上述料液比、溫度和時(shí)間繼續(xù)提取兩次，合并三次提取液，經(jīng)過減壓濃縮和離心獲得澄清濃縮液，按照澄清濃縮液∶95％乙醇＝1∶(7～10)的體積比將相應(yīng)的7～10倍體積95％乙醇加入到澄清濃縮液中，混勻后于4℃過夜靜置沉淀，離心收集沉淀，經(jīng)過真空冷凍干燥即獲得黃精多糖、枸杞多糖或靈芝多糖。

本發(fā)明還提供了所述的中藥組合物在制備解除MDSC對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制劑和/或下調(diào)荷瘤機(jī)體Treg細(xì)胞比例的制劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了所述中藥組合物在制備提高免疫機(jī)能的保健食品和/或藥物中的用途。

本發(fā)明還提供了所述中藥組合物在制備預(yù)防和/或輔助治療腫瘤的保健食品和/或藥物中的用途。

此外，本發(fā)明還提供了一種用于提高機(jī)體免疫機(jī)能和/或預(yù)防和/或輔助治療腫瘤的藥物和/或保健食品，包括所述的中藥組合物以及藥學(xué)上可接受的輔料。

在本方面一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述藥物或保健食品的劑型為膠囊、片劑、顆粒劑、口服液、散劑、袋泡茶。

通過實(shí)驗(yàn)令人驚奇的發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明所得的保健食品經(jīng)科學(xué)配伍而成，相得益彰，無(wú)毒副作用。既有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，又有恢復(fù)機(jī)體正常的免疫監(jiān)視功能，能夠?qū)δ[瘤起預(yù)防和/或輔助治療作用。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，本發(fā)明的保健食品解除MDSC對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)；施用后還觀察到復(fù)合多糖可以下調(diào)荷瘤小鼠脾臟中Treg細(xì)胞的比例。其意義在于恢復(fù)機(jī)體正常的免疫監(jiān)視功能，預(yù)防腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸，可用于治療或預(yù)防由免疫負(fù)調(diào)控細(xì)胞MDSC和Treg導(dǎo)致的腫瘤及癌前病變；增強(qiáng)化療藥抗腫瘤效果。

本發(fā)明目的提供一種具有恢復(fù)機(jī)體正常的免疫監(jiān)視功能的保健食品及其制備方法，同時(shí)確認(rèn)和評(píng)價(jià)黃精多糖、枸杞多糖、靈芝多糖組合對(duì)恢復(fù)機(jī)體正常免疫監(jiān)視是否具有預(yù)防和改善作用。本發(fā)明制備的保健食品通過恢復(fù)機(jī)體正常的免疫監(jiān)視功能實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)和驗(yàn)證，應(yīng)該指出的是，所列舉的實(shí)施例不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。

附圖說(shuō)明

為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹。

圖1示復(fù)合多糖抑制MSC2增殖；注：***P<0.05；復(fù)合多糖組與對(duì)照組比較；

圖2示復(fù)合多糖部分恢復(fù)T細(xì)胞增殖能力；其中，圖2(A)示對(duì)照組(脾細(xì)胞)，圖2(B)示對(duì)照組+刀豆蛋白(ConA)，圖2(C)示對(duì)照組+ConA+MSC2，圖2(D)示對(duì)照組+ConA+MSC2+GQ，圖2(E)示對(duì)照組+ConA+MSC2+LZ，圖2(F)示對(duì)照組+ConA+MSC2+HJ，圖2(G)示對(duì)照組+ConA+MSC2+HJ+GQ+LZ；

圖3示復(fù)合多糖下調(diào)荷瘤小鼠脾臟中Treg比例；其中，圖3(A)示對(duì)照組的樣品1，圖3(B)示對(duì)照組的樣品2，圖3(C)示對(duì)照組的樣品3，圖3(D)示對(duì)照組的樣品4，圖3(E)示對(duì)照組的樣品5，圖3(F)示對(duì)照組的樣品6，圖3(G)示復(fù)合多糖組(黃精多糖+枸杞多糖+靈芝多糖)的樣品1，圖3(H)示復(fù)合多糖組(黃精多糖+枸杞多糖+靈芝多糖)的樣品2，圖3(I)示復(fù)合多糖組(黃精多糖+枸杞多糖+靈芝多糖)的樣品3，圖3(J)示復(fù)合多糖組(黃精多糖+枸杞多糖+靈芝多糖)的樣品4；

圖4示復(fù)合多糖增強(qiáng)化療藥抗腫瘤效果；

在本發(fā)明的圖1～圖4中，GQ示枸杞，LZ示靈芝，HJ示黃精。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明公開了一種中草藥多糖組合物及其用途，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。

本發(fā)明提供了一種中藥組合物，由黃精、枸杞和靈芝組成。

在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，中藥組合物中所述黃精的有效成分為黃精多糖，所述枸杞的有效成分為枸杞多糖，所述靈芝的有效成分為靈芝多糖。

在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，中藥組合物中所述黃精多糖、所述枸杞多糖與所述靈芝多糖的質(zhì)量比為(1～5):(1～5):(1～5)。

在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，中藥組合物中所述黃精多糖、所述枸杞多糖與所述靈芝多糖的質(zhì)量比為(2～4):(2～4):(2～4)。

根據(jù)本發(fā)明第一方面，提供了一種保健食品組合物，所述組合物包含黃精多糖、枸杞多糖、靈芝多糖，優(yōu)選以重量計(jì)2:3:3比例混合，任選進(jìn)一步包括醫(yī)學(xué)或食品可接受的載體、賦形劑、賦形劑和/或填充劑。

在本方面一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述黃精多糖、枸杞多糖或靈芝多糖為天然的或人工合成的。

根據(jù)本發(fā)明第二方面，提供一種保健食品組合物的制備方法，所述方法包括，混合以重量計(jì)2:3:3比例的黃精多糖、枸杞多糖和靈芝多糖。

在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述黃精多糖、枸杞多糖或靈芝多糖由如下方法制得：取所述黃精、所述枸杞或所述靈芝粉碎，按照黃精、枸杞或靈芝∶水＝0.5g～2.0g∶5mL的比例加水，以g/mL計(jì)，在70℃～75℃下加熱攪拌提取3h，過濾獲得的濾渣按照上述料液比、溫度和時(shí)間繼續(xù)提取兩次，合并三次提取液，經(jīng)過減壓濃縮和離心獲得澄清濃縮液，按照澄清濃縮液∶95％乙醇＝1∶7～10的體積比將相應(yīng)的7～10倍體積95％乙醇加入到澄清濃縮液中，混勻后于4℃下過夜靜置沉淀，離心收集沉淀，經(jīng)過真空冷凍干燥即獲得黃精多糖、枸杞多糖或靈芝多糖。

根據(jù)本發(fā)明第三方面，提供了一種根據(jù)第二方面的方法制備的保健食品組合物。

根據(jù)本發(fā)明第四方面，提供了一種組合物和/或所述的制備方法制得的中藥組合物在制備解除MDSC對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制劑和/或下調(diào)荷瘤機(jī)體Treg細(xì)胞比例的制劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了所述的中藥組合物和/或所述的制備方法制得的中藥組合物在制備提高免疫機(jī)能的保健食品和/或藥物中的用途。

本發(fā)明還提供了所述的中藥組合物和/或所述的制備方法制得的中藥組合物在制備預(yù)防和/或輔助治療腫瘤的保健食品和/或藥物中的用途。

本發(fā)明還提供了所述的中藥組合物和/或所述制備方法制得的中藥組合物在制備恢復(fù)機(jī)體正常的免疫監(jiān)視功能的藥物中的用途。

所述恢復(fù)機(jī)體正常的免疫監(jiān)視功能，包括解除MDSC對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)，恢復(fù)T細(xì)胞增殖的能力；下調(diào)荷瘤機(jī)體脾臟中Treg細(xì)胞比例，改善免疫狀態(tài)；治療或預(yù)防由免疫負(fù)調(diào)控細(xì)胞MDSC和Treg導(dǎo)致的疾病,所述疾病包括由免疫抑制狀態(tài)引起的腫瘤及癌前病變；增強(qiáng)化療藥抗腫瘤效果。

本發(fā)明還提供了一種用于提高免疫機(jī)能和/或預(yù)防和/或輔助治療腫瘤的藥物和/或保健食品，包括所述的中藥組合物和/或所述制備方法制得的所述的中藥組合物以及藥學(xué)上可接受的輔料。

在本方面一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，所述藥物或保健食品的劑型為膠囊、片劑、顆粒劑、口服液、散劑、袋泡茶。

通過實(shí)驗(yàn)令人驚奇的發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明所得的保健食品經(jīng)科學(xué)配伍而成，相得益彰，無(wú)毒副作用。既有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，又有恢復(fù)機(jī)體正常的免疫監(jiān)視功能，能夠?qū)δ[瘤起預(yù)防和/或輔助治療作用。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，本發(fā)明的保健食品解除MDSC對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)；施用后還觀察到復(fù)合多糖可以下調(diào)荷瘤小鼠脾臟中Treg細(xì)胞的比例。其意義在于恢復(fù)機(jī)體正常的免疫監(jiān)視功能，預(yù)防腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸，可用于治療或預(yù)防由免疫負(fù)調(diào)控細(xì)胞MDSC和Treg導(dǎo)致的腫瘤及癌前病變；增強(qiáng)化療藥抗腫瘤效果。

本發(fā)明目的提供一種具有恢復(fù)機(jī)體正常的免疫監(jiān)視功能的保健食品及其制備方法，同時(shí)確認(rèn)和評(píng)價(jià)黃精多糖、枸杞多糖、靈芝多糖組合對(duì)恢復(fù)機(jī)體正常免疫監(jiān)視是否具有預(yù)防和改善作用。本發(fā)明制備的保健食品通過恢復(fù)機(jī)體正常的免疫監(jiān)視功能實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)價(jià)和驗(yàn)證，應(yīng)該指出的是，所列舉的實(shí)施例不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。

本發(fā)明提供的中藥組合物及其制備方法、用途以及含有該中藥組合物的藥物、保健食品中所用原料及試劑均可由市場(chǎng)購(gòu)得。

下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：

實(shí)施例1 黃精多糖的制備

本發(fā)明所述黃精多糖通過以下制備方法制備獲得：將黃精粉碎后，按照黃精∶水＝0.5g∶5mL的比例加水，在70℃下加熱攪拌提取2h，過濾獲得的濾渣按照上述料液比、溫度和時(shí)間繼續(xù)提取兩次，合并三次提取液，經(jīng)過減壓濃縮和離心獲得澄清濃縮液，按照澄清濃縮液∶95％乙醇＝1∶7的體積比將7倍體積95％乙醇加入到澄清濃縮液中，混勻后于4℃下過夜靜置沉淀，離心收集沉淀，經(jīng)過真空冷凍干燥即獲得黃精多糖。

實(shí)施例2 枸杞多糖的制備

本發(fā)明所述枸杞多糖通過以下制備方法制備獲得：將枸杞粉碎后，按照枸杞∶水＝1g∶5mL的比例加水，在75℃下加熱攪拌提取3h，過濾獲得的濾渣按照上述料液比、溫度和時(shí)間繼續(xù)提取兩次，合并三次提取液，經(jīng)過減壓濃縮和離心獲得澄清濃縮液，按照澄清濃縮液∶95％乙醇＝1∶9的體積比將9倍體積95％乙醇加入到澄清濃縮液中，混勻后于4℃下過夜靜置沉淀，離心收集沉淀，經(jīng)過真空冷凍干燥即獲得枸杞多糖。

實(shí)施例3 靈芝多糖的制備

本發(fā)明所述枸杞多糖、靈芝多糖通過以下制備方法制備獲得：將靈芝粉碎后，按照靈芝∶水＝2g∶5mL的比例加水，在75℃下加熱攪拌提取4h，過濾獲得的濾渣按照上述料液比、溫度和時(shí)間繼續(xù)提取兩次，合并三次提取液，經(jīng)過減壓濃縮和離心獲得澄清濃縮液，按照澄清濃縮液∶95％乙醇＝1∶10的體積比將10倍體積95％乙醇加入到澄清濃縮液中，混勻后于4℃下過夜靜置沉淀，離心收集沉淀，經(jīng)過真空冷凍干燥即獲得靈芝多糖。

實(shí)施例4 黃精多糖、枸杞多糖和靈芝多糖組合物的制備

將實(shí)施例1制得的黃精多糖、實(shí)施例2制得枸杞多糖和實(shí)施例3制得的靈芝多糖以重量計(jì)比例2:3:3混合，進(jìn)一步加入醫(yī)學(xué)或食品可接受的載體、賦形劑、賦形劑和/或填充劑。

制成包含黃精多糖、枸杞多糖和靈芝多糖的保健食品組合物。

實(shí)施例5 黃精多糖、枸杞多糖和靈芝多糖組合物的制備

將實(shí)施例1制得的黃精多糖、實(shí)施例2制得枸杞多糖和實(shí)施例3制得的靈芝多糖以重量計(jì)比例1:5:5混合，進(jìn)一步加入醫(yī)學(xué)或食品可接受的載體、賦形劑、賦形劑和/或填充劑。

制成包含黃精多糖、枸杞多糖和靈芝多糖的保健食品組合物。

實(shí)施例6 黃精多糖、枸杞多糖和靈芝多糖組合物的制備

將實(shí)施例1制得的黃精多糖、實(shí)施例2制得枸杞多糖和實(shí)施例3制得的靈芝多糖以重量計(jì)比例5:1:1混合，進(jìn)一步加入醫(yī)學(xué)或食品可接受的載體、賦形劑、賦形劑和/或填充劑。

制成包含黃精多糖、枸杞多糖和靈芝多糖的保健食品組合物。

實(shí)施例7 黃精多糖、枸杞多糖和靈芝多糖組合物的制備

將實(shí)施例1制得的黃精多糖、實(shí)施例2制得枸杞多糖和實(shí)施例3制得的靈芝多糖以重量計(jì)比例2:4:3混合，進(jìn)一步加入醫(yī)學(xué)或食品可接受的載體、賦形劑、賦形劑和/或填充劑。

制成包含黃精多糖、枸杞多糖和靈芝多糖的保健食品組合物。

實(shí)施例8 黃精多糖、枸杞多糖和靈芝多糖組合物的制備

將實(shí)施例1制得的黃精多糖、實(shí)施例2制得枸杞多糖和實(shí)施例3制得的靈芝多糖以重量計(jì)比例4:2:4混合，進(jìn)一步加入醫(yī)學(xué)或食品可接受的載體、賦形劑、賦形劑和/或填充劑。

制成包含黃精多糖、枸杞多糖和靈芝多糖的保健食品組合物。

實(shí)施例9 黃精多糖、枸杞多糖和靈芝多糖組合物的制備

將實(shí)施例1制得的黃精多糖、實(shí)施例2制得枸杞多糖和實(shí)施例3制得的靈芝多糖以重量計(jì)比例3:3:2混合，進(jìn)一步加入醫(yī)學(xué)或食品可接受的載體、賦形劑、賦形劑和/或填充劑。

制成包含黃精多糖、枸杞多糖和靈芝多糖的保健食品組合物。

實(shí)施例10 多糖組合物對(duì)預(yù)防或輔助治療腫瘤功能的驗(yàn)證

本發(fā)明申請(qǐng)人使用上述實(shí)施例1～4所制得的黃精多糖、枸杞多糖、靈芝多糖、復(fù)合多糖進(jìn)行了細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

流式細(xì)胞儀：BD公司，Calibo；

分析天平：北京賽多利斯有限公司產(chǎn)品，Sartorius BS124S型；

電子天平：北京賽多利斯有限公司產(chǎn)品，Sartorius BL1500型。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

CFSESigma購(gòu)自公司。CD4+、CD8+、CD25+流式抗體購(gòu)自BD公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)藥物

表1 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)原料清單

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 復(fù)合多糖對(duì)MDSC增殖的效應(yīng)

MSC2接種于96孔板，細(xì)胞密度為1×10⁴/孔。黃精多糖、枸杞多糖和靈芝多糖加入培養(yǎng)體系中。單一多糖組的多糖濃度分別為1mg/ml，復(fù)合多糖組總濃度為1mg/ml，其中每種多糖濃度比為2：3：3。作用3天后，進(jìn)行MTT檢測(cè)。

2.2 小鼠結(jié)腸癌皮下移植瘤模型構(gòu)建及復(fù)合多糖體外干預(yù)

結(jié)腸癌細(xì)胞系CT26，皮下接種于Balb/c小鼠，接種劑量為1×10⁶/只，21天后，處死小鼠，取脾臟制備單細(xì)胞懸液，按4×10⁶/孔接種于96孔板，實(shí)驗(yàn)組為培養(yǎng)體系中加入復(fù)合多糖(黃精多糖+枸杞多糖+靈芝多糖)，對(duì)照組包括未加入多糖組(正常組)及3種多糖的單用組(單一多糖組)。作用1天后進(jìn)行流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)，檢測(cè)CD11b+Gr1+細(xì)胞在單核細(xì)胞中的比例。

2.3 復(fù)合多糖與化療藥聯(lián)用

結(jié)腸癌細(xì)胞系CT26，皮下接種于Balb/c小鼠，接種劑量為1×10⁶/只。12天后，采用復(fù)合多糖(黃精多糖+枸杞多糖+靈芝多糖)灌胃，每天一次。同時(shí)，皮下注射5-氟尿嘧啶(5Fu)，劑量為5毫克/公斤/天。復(fù)合多糖劑量為500毫克/公斤/天。對(duì)照組采用蒸餾水灌胃，每天也皮下注射5Fu，劑量同復(fù)合多糖組。每組樣本例數(shù)為8只。第20天時(shí)，記錄腫瘤大小(長(zhǎng)和寬)，計(jì)算腫瘤體積，公式為1/2×長(zhǎng)×寬²。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 復(fù)合多糖對(duì)MSC2增殖的效應(yīng)，見圖1、表2。

結(jié)果顯示，復(fù)合多糖組MDSC增殖明顯少于對(duì)照組，也少于單一多糖組。本結(jié)果說(shuō)明復(fù)合多糖(黃精多糖+枸杞多糖+靈芝多糖)可以產(chǎn)生協(xié)同增效，抑制MDSC，改善機(jī)體的免疫狀態(tài)，可用于制備保健品和食品，可用于腫瘤的預(yù)防和輔助治療。

表2 復(fù)合多糖對(duì)MDSC增殖的抑制效應(yīng)

注：*：復(fù)合多糖與對(duì)照組比較，P＜0.01；#：復(fù)合多糖與各單一多糖組比較，P＜0.01。

3.2 復(fù)合多糖部分恢復(fù)T細(xì)胞增殖功能，見圖2、表3。

結(jié)果顯示，復(fù)合多糖組T細(xì)胞增殖得到部分恢復(fù)，出現(xiàn)增殖峰，而單一多糖組未出現(xiàn)增殖峰。本結(jié)果說(shuō)明復(fù)合多糖(黃精多糖+枸杞多糖+靈芝多糖)可以部分解除MDSC對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制作用，起到免疫調(diào)節(jié)作用，可用于制備保健品和食品，可用于腫瘤的預(yù)防和輔助治療。

表3 復(fù)合多糖逆轉(zhuǎn)MDSC對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制的效應(yīng)

注：*：復(fù)合多糖與對(duì)照組比較，P＜0.01；#：復(fù)合多糖與單一多糖組比較，P＜0.01。

3.3 復(fù)合多糖下調(diào)結(jié)腸癌CT26荷瘤小鼠Treg細(xì)胞比例，見圖3、表4。

結(jié)果顯示，復(fù)合多糖組Treg細(xì)胞比例少于對(duì)照組。本結(jié)果說(shuō)明復(fù)合多糖(黃精多糖+枸杞多糖+靈芝多糖)可以下調(diào)荷瘤機(jī)體Treg細(xì)胞比例，改善機(jī)體的免疫狀態(tài)，可用于制備保健品和食品，可用于腫瘤的預(yù)防和輔助治療。

表4 復(fù)合多糖下調(diào)CT26荷瘤小鼠脾臟中Treg的比例

注：*：復(fù)合多糖與對(duì)照組比較，P＜0.01；#：復(fù)合多糖與單一多糖組比較，P＜0.05。

3.4 復(fù)合多糖協(xié)同化療藥抗腫瘤，見圖4、表5。

結(jié)果顯示，第20天時(shí)，復(fù)合多糖與化療藥聯(lián)用組，結(jié)腸癌腫瘤體積小于單純化療組。本結(jié)果說(shuō)明復(fù)合多糖(黃精多糖+枸杞多糖+靈芝多糖)可以增強(qiáng)化療藥的抗腫瘤效果，可用于腫瘤化療的輔助治療。

表5 復(fù)合多糖體內(nèi)抗結(jié)腸癌的效應(yīng)

注：*：復(fù)合多糖與對(duì)照組比較，P＜0.01。

綜合以上結(jié)果，實(shí)施例4制備的黃精多糖、枸杞多糖、靈芝多糖組合物可以解除MDSC對(duì)T細(xì)胞增殖的抑制效應(yīng)；還觀察到復(fù)合多糖可以下調(diào)荷瘤小鼠脾臟中Treg細(xì)胞的比例。其意義在于恢復(fù)機(jī)體正常的免疫監(jiān)視功能，預(yù)防腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸，預(yù)防腫瘤的發(fā)生。由此，表明本發(fā)明實(shí)施例4制備的黃精多糖、枸杞多糖、靈芝多糖組合物具有恢復(fù)機(jī)體正常的免疫監(jiān)視功能，而且比單獨(dú)使用黃精多糖、枸杞多糖、靈芝多糖更具優(yōu)勢(shì)(p<0.05)。

取實(shí)施例5～實(shí)施例9制備的黃精多糖、枸杞多糖、靈芝多糖組合物進(jìn)行上述實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與實(shí)施例4制備的組合物的結(jié)果相同或相近，比單獨(dú)使用黃精多糖、枸杞多糖更具優(yōu)勢(shì)，且具有顯著差異(P≤0.05)。

根據(jù)該黃精多糖、枸杞多糖、靈芝多糖組合物具有恢復(fù)機(jī)體正常的免疫監(jiān)視功能，將天然的、人工的、以及上述實(shí)施例1、2和3的制備方法制成的黃精多糖、枸杞多糖、靈芝多糖，按比例配制(即實(shí)施例4制備的組合物，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)2:3：3比例配置效果最出人意料)，再加入食用或藥用輔料，可制備成膠囊、片劑、顆粒劑、口服液、散劑、袋泡茶等各種保健食品的劑型。

實(shí)施例11 不同比例的黃精多糖、枸杞多糖和靈芝多糖組合物及其功效

將實(shí)施例1制得的黃精多糖、實(shí)施例2制得枸杞多糖和實(shí)施例3制得的靈芝多糖以表6中不同重量計(jì)比例混合，進(jìn)一步加入醫(yī)學(xué)或食品可接受的載體、賦形劑、賦形劑和/或填充劑。制成包含黃精多糖、枸杞多糖和靈芝多糖的保健食品組合物。并按照上述實(shí)施例中能夠?qū)δ[瘤起預(yù)防和/或輔助治療作用的驗(yàn)證方法，得到恢復(fù)機(jī)體正常免疫監(jiān)視功能效力的結(jié)果分值。(100分制，以實(shí)施例4中2:3:3的混合質(zhì)量比制得組合物相應(yīng)的恢復(fù)機(jī)體正常免疫監(jiān)視功能效力記為100分，其他混合比例相應(yīng)的功能試驗(yàn)結(jié)果相比占實(shí)施例4的功能試驗(yàn)結(jié)果的百分點(diǎn)，記為相應(yīng)的功能分值)。

表6 不同比例的黃精多糖、枸杞多糖和靈芝多糖組合物及其功效

功能試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃精多糖、枸杞多糖和靈芝多糖在(1～5):(1～5):(1～5)的混合比例時(shí)相比單獨(dú)的施用三種多糖具有更顯著的恢復(fù)機(jī)體正常免疫監(jiān)視功能，對(duì)腫瘤起預(yù)防和/或輔助治療作用。當(dāng)施用多糖混合比例為(2～4):(2～4):(2～4)時(shí)，效果更顯著。

本發(fā)明所述的保健食品經(jīng)科學(xué)配伍而成，相得益彰，無(wú)毒副作用；既有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，又有恢復(fù)機(jī)體正常免疫監(jiān)視的功能。申請(qǐng)人聲明，以上內(nèi)容是結(jié)合具體的實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實(shí)施只局限于這些說(shuō)明。對(duì)于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡(jiǎn)單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。