一種地榆苷元注射劑及其制備方法和用途與流程

本發(fā)明涉及一種地榆苷元注射劑及其制備方法和用途，屬藥物領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

骨髓抑制是臨床上常見(jiàn)的造血系統(tǒng)疾病，它可發(fā)生于各系統(tǒng)腫瘤性疾病的放射治療及(或)化學(xué)治療、電離輻射引起的放射損傷、病毒性肝炎、微小病毒感染或藥物(氯霉素、苯、磺胺、抗癲癰藥、鎮(zhèn)靜劑、抗甲狀腺藥、抗糖尿病藥、抗瘧疾、安眠藥)等因素。骨髓抑制可引起骨髓微環(huán)境、造血干細(xì)胞、造血細(xì)胞生長(zhǎng)因子等的損傷，粒、紅、巨核細(xì)胞系統(tǒng)一系、二系或三系細(xì)胞受抑制。粒細(xì)胞缺乏會(huì)引起嚴(yán)重感染；紅細(xì)胞明顯減少會(huì)引起嚴(yán)重貧血；血小板明顯下降引起嚴(yán)重出血，甚至導(dǎo)致死亡。

目前，臨床上對(duì)于骨髓抑制，尤其是放化療引起的骨髓抑制，尚缺乏有效的治療手段。因此，尋找到有效的藥物來(lái)緩解骨髓抑制，成為了一個(gè)亟待解決的問(wèn)題。

地榆苷元是從薔薇科地榆屬植物地榆(Sanguisorba officinalis L.)或長(zhǎng)葉地榆[S.officinalis L.var.longifolia(Bertol.)Yu et Li]的根中提取得到的一種活性成分，是地榆皂苷I和地榆皂苷II的苷元，化學(xué)名：3β，19α-羥基烏索-12烯-28-羧酸，其結(jié)構(gòu)式如下所示：

然而，迄今尚未見(jiàn)以地榆苷元為活性成分制備注射劑，用于治療和/或預(yù)防骨髓抑制的公開(kāi)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種地榆苷元注射劑，其特征在于：它是包含下述原料制備而成的制劑：

地榆苷元、增溶劑。

進(jìn)一步地，它是包含下述重量配比的原料制備而成的制劑：

地榆苷元0.5-10份、增溶劑0.001-60份。

進(jìn)一步地，所述地榆苷元與增溶劑的重量配比為1:0.005～300。

進(jìn)一步地，所述的增溶劑為吐溫80、聚氧乙烯蓖麻油EL或泊洛沙姆188；所述的pH調(diào)節(jié)劑為氫氧化鈉。

進(jìn)一步地，所述注射劑中地榆苷元的濃度為0.2mg/mL。

進(jìn)一步地，所述的注射劑是注射液、粉針劑、水針劑或大輸液。

進(jìn)一步地，包括下述步驟：

按配比稱取地榆苷元分散于注射用水中，加入相應(yīng)配比的增溶劑、pH調(diào)節(jié)劑，調(diào)節(jié)pH至10，攪拌溶解，再加入注射用水，過(guò)濾、滅菌，即得本發(fā)明注射劑。

本發(fā)明還提供了所述注射劑用于制備治療和/或預(yù)防骨髓抑制的藥物的用途。

進(jìn)一步地，所述的藥物是治療和/或預(yù)防化學(xué)物質(zhì)導(dǎo)致的骨髓抑制的藥物。

進(jìn)一步地，所述的藥物是升高血細(xì)胞和/或骨髓造血干細(xì)胞的藥物。

進(jìn)一步地，所述的藥物是升高外周血白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板和/或血紅蛋白的藥物。

發(fā)明人前期研究發(fā)現(xiàn)，地榆苷元存在溶解度低、口服胃腸吸收率小等問(wèn)題，造成該成分口服生物利用度低，限制了該成分升高血細(xì)胞效果的發(fā)揮。

發(fā)明人經(jīng)過(guò)對(duì)劑型及其配方的研究，通過(guò)本發(fā)明制備的地榆苷元注射劑解決了地榆苷元溶解度低的問(wèn)題，提高了地榆苷元生物利用度，進(jìn)而提高其升高血細(xì)胞的療效，對(duì)地榆苷元的新劑型開(kāi)發(fā)及更好的臨床應(yīng)用具有十分重要的意義。

顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識(shí)和慣用手段，在不脫離本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。

以下通過(guò)實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

附圖說(shuō)明

圖1為各實(shí)驗(yàn)組小鼠骨髓造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)比較。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1本發(fā)明注射劑的制備

按下述配比稱取原料：

地榆苷元1.5g、吐溫80 10g、pH調(diào)節(jié)劑適量。

制備方法如下：

取地榆苷元分散于10mL注射用水中，加入吐溫80、氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH至10，攪拌溶解，再加入注射用水至7500mL使溶液中地榆苷元的濃度為0.2mg/mL，用0.22um微孔濾膜過(guò)濾、滅菌，即得本發(fā)明注射劑。

實(shí)施例2本發(fā)明注射劑的制備

按下述配比稱取原料：

地榆苷元2.5g、聚氧乙烯蓖麻油EL 60g、pH調(diào)節(jié)劑適量。

制備方法如下：

取地榆苷元分散于10mL注射用水中，加入聚氧乙烯蓖麻油EL、氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH至10，攪拌溶解，再加入注射用水至12500mL使溶液中地榆苷元的濃度為0.2mg/mL，用0.22um微孔濾膜過(guò)濾、滅菌，即得本發(fā)明注射劑。

實(shí)施例3本發(fā)明注射劑的制備

按下述配比稱取原料：

地榆苷元10g、泊洛沙姆188 60g、pH調(diào)節(jié)劑適量。

制備方法如下：

取地榆苷元分散于10mL注射用水中，加入泊洛沙姆188、氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH至10，攪拌溶解，再加入注射用水至50000mL使溶液中地榆苷元的濃度為0.2mg/mL，用0.22um微孔濾膜過(guò)濾、滅菌，即得本發(fā)明注射劑。

以下通過(guò)具體實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明的有益效果。

實(shí)驗(yàn)例1采用不同輔料制備的地榆苷元注射劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)

本研究根據(jù)地榆苷元的性質(zhì)，選用吐溫80、聚氧乙烯蓖麻油EL、泊洛沙姆188、丙二醇、維生素C為輔料，制成地榆苷元注射劑。

制備方法如下：取地榆苷元0.2g分散于100mL注射用水中，分別加入不同的輔料(吐溫80、聚氧乙烯蓖麻油EL、泊洛沙姆188、丙二醇、維生素C)、氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH至10，攪拌溶解，再加入注射用水至1000mL使溶液中地榆苷元的濃度為0.2mg/mL，用0.22um微孔濾膜過(guò)濾、滅菌，即得本發(fā)明注射劑，結(jié)果見(jiàn)表1。

熱原按《中國(guó)藥典》(2010年版)熱原檢查法測(cè)定。

澄明度按《中國(guó)藥典》(2010年版)可見(jiàn)異物檢查法項(xiàng)下的燈檢法檢查。

地榆苷元含量，采用HPLC法測(cè)定，色譜條件：Agilent extend-C18色譜柱(250×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.5％磷酸(70:30)。流速：0.8mL·min-1，柱溫：40℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：205nm，進(jìn)樣量：10μL。

表1 采用不同輔料制備的地榆苷元注射劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)

注：與吐溫80組比較，*P<0.05。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：采用本發(fā)明輔料吐溫80、聚氧乙烯蓖麻油EL、泊洛沙姆188制備的地榆苷元注射劑，熱源檢查合格，澄明度檢查合格，地榆苷元含量測(cè)定顯示含量較高，表明采用本發(fā)明輔料吐溫80、聚氧乙烯蓖麻油EL、泊洛沙姆188制備的地榆苷元注射劑符合制劑要求，且最大程度保留地榆苷元成分。其它二種輔料丙二醇、維生素C制備的地榆苷元注射劑，熱源檢查合格，澄明度檢查不合格，地榆苷元含量測(cè)定顯示含量較低。

實(shí)驗(yàn)例2采用不同量輔料制備的地榆苷元注射劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)

制備方法如下：取地榆苷元0.2g分散于100mL注射用水中，分別加入不同量的增溶劑(吐溫80)、氫氧化鈉，調(diào)節(jié)pH至10，攪拌溶解，再加入注射用水至1000mL使溶液中地榆苷元的濃度為0.2mg/mL，用0.22um微孔濾膜過(guò)濾、滅菌，即得本發(fā)明注射劑，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 采用不同量增溶劑制備的地榆苷元注射劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)

注：與1.0mg組比較，*P<0.05。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：僅在本發(fā)明地榆苷元0.2g和增溶劑用量為1.0mg-60g比例下制備的地榆苷元注射劑熱源合格，澄明度符合要求，含量高，制劑最佳，可制備符合要求的地榆苷元注射劑。

實(shí)驗(yàn)例3本發(fā)明地榆苷元注射劑藥效學(xué)研究

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1受試藥物本發(fā)明地榆苷元注射劑A組(按照實(shí)施例1制備)、B組(按照實(shí)施例2制備)、C組(按照實(shí)施例3制備)、地榆苷元10％DMSO-生理鹽水組、環(huán)磷酰胺。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物KM-小鼠：18.5～22.5g。

1.3實(shí)驗(yàn)儀器：全自動(dòng)血球分析儀；BS-600L電子天平：規(guī)格：600g/0.1g，

上海友聲衡器有限公司。

1.4統(tǒng)計(jì)方法

用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間采用單因素方差分析，方差齊者組間進(jìn)行LSD檢驗(yàn)，方差不齊者進(jìn)行Tamhane’s T2檢驗(yàn)。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及模型制備

所有動(dòng)物適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后按體重隨機(jī)分為：空白組；模型組；地榆苷元注射劑A、B、C組，制成2.5mg·kg^-1混懸液，臨用前配制；地榆苷元組：地榆苷元粉末，用10％DMSO-生理鹽水溶解，配制成2.5mg·kg^-1混懸液，臨用前配制。實(shí)驗(yàn)第1天，除空白組外，其余各組小鼠按50mg·kg^-1劑量腹腔注射環(huán)磷酰胺生理鹽水溶液，連續(xù)3天，空白組小鼠尾靜脈注射等體積生理鹽水。

2.2給藥

各實(shí)驗(yàn)組自實(shí)驗(yàn)第1天開(kāi)始按劑量、給藥方式給予相應(yīng)藥物，空白組和模型組小鼠尾靜脈注射等體積生理鹽水，連續(xù)7天。

2.3標(biāo)本采集

實(shí)驗(yàn)第8天，各實(shí)驗(yàn)組小鼠眼眶取血，用裝有EDTA抗凝劑的0.5mlEP管收集待測(cè)。

2.4檢測(cè)指標(biāo)及方法

外周血象檢測(cè)：采用全自動(dòng)血球計(jì)數(shù)儀對(duì)各實(shí)驗(yàn)組小鼠外周血白細(xì)胞(WBC)、中性粒細(xì)胞(NEUT)紅細(xì)胞(RBC)、血小板(PLT)、血紅蛋白(HGB)進(jìn)行計(jì)數(shù)。

骨髓造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)(以骨髓細(xì)胞CD34+抗原表達(dá)量計(jì))用含牛血清白蛋白濃度為0.2％的PBS緩沖液沖出小鼠右側(cè)股骨骨髓細(xì)胞，取出106個(gè)細(xì)胞離心，棄上清，加入30μL正常小鼠血清以封閉非特異結(jié)合位點(diǎn)，再加入10μL FITC標(biāo)記的大鼠抗小鼠CD34+抗體，對(duì)照管加入10μL相應(yīng)對(duì)照抗體，4℃避光反應(yīng)30min。加入2mL紅細(xì)胞裂解液，作用5min，洗細(xì)胞2次，加入終濃度為3μg/mL的PI染液，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)骨髓細(xì)胞CD34+抗原表達(dá)。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1外周血主要血細(xì)胞計(jì)數(shù)比較，見(jiàn)表3、表4。

表3 各實(shí)驗(yàn)組小鼠外周血血細(xì)胞數(shù)量

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；注：與地榆苷元組比較，^△P<0.05，^△△P<0.01。

結(jié)果顯示，與模型組比較，地榆苷元注射劑A組、地榆苷元注射劑B組、地榆苷元注射劑C組小鼠造血干細(xì)胞數(shù)量均有顯著升高(P<0.05)，地榆苷元組無(wú)顯著性差異；與地榆苷元組比較，地榆苷元注射劑A組、地榆苷元注射劑B組、地榆苷元注射劑C組小鼠外周血WBC、RBC、PLT數(shù)量均有顯著升高(P<0.05)。

表4 各實(shí)驗(yàn)組小鼠外周血血細(xì)胞數(shù)量

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；注：與地榆苷元組比較，^△P<0.05，^△△P<0.01。

結(jié)果顯示，與模型組比較，地榆苷元注射劑A組、地榆苷元注射劑B組、地榆苷元注射劑C組小鼠外周血NEUT和HGB數(shù)量均有顯著升高(P<0.05)，地榆苷元組無(wú)顯著性差異；與地榆苷元組比較，地榆苷元注射劑A組、地榆苷元注射劑B組、地榆苷元注射劑C組組小鼠外周血NEUT和HGB數(shù)量均有顯著升高(P<0.05)

3.2、骨髓造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)比較

從圖1可知，與模型組比較，本發(fā)明地榆苷元注射劑組小鼠造血干細(xì)胞數(shù)量均有顯著升高(P<0.05)，地榆苷元組無(wú)顯著性差異；與地榆苷元組比較，本發(fā)明地榆苷元注射劑組小鼠造血干細(xì)胞數(shù)量均有顯著升高(P<0.05)。

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明地榆苷元注射劑可以有效升高血細(xì)胞，藥效明顯優(yōu)于直接用地榆苷元原藥給藥。

綜上所述，本發(fā)明制備的地榆苷元注射劑解決了地榆苷元溶解度低的問(wèn)題，提高了地榆苷元生物利用度，進(jìn)而提高其升高血細(xì)胞的療效，對(duì)地榆苷元更好的臨床應(yīng)用具有十分重要的意義。