包含糖皮質(zhì)激素和EDO?S101的組合的制作方法

本發(fā)明涉及用于治療癌癥、例如用于治療乳腺癌或血液學(xué)癌癥的組合和組合物，所述血液學(xué)癌癥是諸如多發(fā)性骨髓瘤、淋巴瘤或白血病。

發(fā)明背景

癌癥是最具有生命威脅的疾病之一。癌癥是其中身體一部分中的細(xì)胞經(jīng)歷失控生長的病癥。根據(jù)來自美國癌癥協(xié)會的最新數(shù)據(jù)，估計在2014年美國將有167萬新增癌癥病例。癌癥是美國第二大死因(僅次于心臟病)并且在2014年將奪去超過585,000條生命。實際上，預(yù)計生活在美國的50％的所有男人和33％的所有女人在他們的有生之年都將發(fā)展某種類型的癌癥。因此，癌癥構(gòu)成重大的公共健康負(fù)擔(dān)并且在美國導(dǎo)致了顯著成本。這些數(shù)字在其他地方在全球大多數(shù)國家中反映，盡管癌癥的類型和發(fā)展癌癥的群體的相對比例取決于許多不同因素(如包括遺傳和飲食)而變化。

幾十年來，外科手術(shù)、化療和放射是針對各種癌癥的確立的治療?；颊咄ǔ＝邮苓@些治療的組合，這取決于他們疾病的類型和程度。但是，當(dāng)外科手術(shù)治療是不可能時，對于癌癥患者而言化療是最重要的選項。盡管外科手術(shù)有時有效摘除位于某些部位(例如，位于乳房、結(jié)腸和皮膚)的腫瘤，但是其不能用于治療位于其他區(qū)域(如脊柱)的腫瘤，也不能用于治療彌散性的血液學(xué)癌癥，包括血液和形成血液的組織(如骨髓)的癌癥。它們包括多發(fā)性骨髓瘤、淋巴瘤和白血病。放射療法涉及將活組織暴露于電離輻射，導(dǎo)致被暴露的細(xì)胞的死亡或損傷。放射療法的副作用可以是急性的和暫時性的，而其他可能是不可逆的?；熒婕捌茐募?xì)胞復(fù)制或細(xì)胞代謝。其最經(jīng)常地用于治療乳腺癌、肺癌和睪丸癌。該癌癥治療失敗的主要原因之一是癌細(xì)胞的耐藥性形成，這是可能導(dǎo)致疾病復(fù)發(fā)或甚至死亡的一個嚴(yán)重問題。因此，需要更有效的癌癥治療。

多發(fā)性骨髓瘤是一個顯著和正在增長的問題。它是由漿細(xì)胞產(chǎn)生的癌癥。正常漿細(xì)胞產(chǎn)生免疫球蛋白來抗擊感染。在骨髓瘤中，漿細(xì)胞變得異常的、失控地增殖并且僅釋放一種類型的抗體–已知為副蛋白–其不具有有益功能。它傾向于在骨髓中累積并且在血液中循環(huán)，并且也可以在尿中檢測到。它影響其中骨髓在成人中具有正?；钚缘捏w內(nèi)多個部位(因此‘多發(fā)性’骨髓瘤)。多發(fā)性骨髓瘤(或其也稱作骨髓瘤)的主要形式有活躍骨髓瘤(active myeloma)、漿細(xì)胞瘤、輕鏈型骨髓瘤和非分泌性骨髓瘤。在2011年美國的新增骨髓瘤病例的數(shù)目為每年每100,000個男人和女人中6.1個，五年生存百分率為45％。預(yù)計在2014年美國新增病例的數(shù)目將超過24,000(所有癌癥病例的1.4％)，而在2014年的死亡數(shù)目將剛好超過11,000(所有癌癥病例的1.9％)。

在WO-A-2010/085377中，顯示式I的化合物具有優(yōu)異的針對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系的體外活性，活性在比苯達(dá)莫司汀(bendamustin)所示活性高□35-100的范圍內(nèi)。

白血病是一類血液或骨髓癌癥，特征在于未成熟白細(xì)胞(稱為“胚細(xì)胞”)的異常增加。身體產(chǎn)生大量的這些無功能的胚細(xì)胞，而不是產(chǎn)生正常的、有功能的白細(xì)胞以抗擊感染。白血病是涵蓋廣譜疾病的寬泛術(shù)語。它又是甚至更寬泛的一組影響血液、骨髓和淋巴樣系統(tǒng)的疾病(它們?nèi)糠Q為血液腫瘤)的一部分。最常見形式有急性成淋巴細(xì)胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia，ALL)、慢性淋巴細(xì)胞白血病(chronic lymphocytic leukemia，CLL)、急性髓性白血病(acute myeloid leukemia，AML)和慢性髓性白血病(chronic myeloid leukemia，CML)，較不常見的形式包括多毛細(xì)胞白血病(hairy cell leukemia，HCL)、T細(xì)胞前淋巴細(xì)胞白血病(T-cell prolymphocytic leukemia，T-PLL)、巨粒淋巴細(xì)胞白血病(large granular lymphocytic leukemia)和T細(xì)胞急性成淋巴細(xì)胞性白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia)。預(yù)計在2014年美國新增病例將超過52,000(美國所有新增癌癥的3.1％)，超過24,000死亡(美國所有癌癥死亡的4.1％)。五年生存百分率目前為57.2％，該數(shù)字顯著低于許多其他癌癥，急性髓性白血病的五年存活率特別低，僅為20％。

淋巴瘤是一種淋巴系統(tǒng)的癌癥。存在兩種主要類型的淋巴瘤，即霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma)和非霍奇金淋巴瘤(non Hodgkin lymphoma)。

非霍奇金淋巴瘤是最常見的淋巴瘤形式。淋巴系統(tǒng)貫穿身體運行，因此可能在幾乎身體所有部分發(fā)現(xiàn)非霍奇金淋巴瘤。在非霍奇金淋巴瘤患者中，它們的白細(xì)胞中的一些(淋巴細(xì)胞)異常分裂。它們不具有像正常細(xì)胞那樣的任何靜止時間，它們開始持續(xù)分裂，因此生產(chǎn)過多。它們不像它們通常那樣自然死亡。這些細(xì)胞在它們完全成熟之前開始分裂，因此不能與正常白細(xì)胞一樣抵抗感染。所有的異常淋巴細(xì)胞開始在淋巴結(jié)或其他地方如骨髓或脾臟中聚集。然后，它們可以生長為腫瘤并且開始在它們生長所在的淋巴系統(tǒng)或器官內(nèi)導(dǎo)致問題。例如，如果淋巴瘤在甲狀腺中起始，則它可以影響甲狀腺激素的正常生產(chǎn)。存在許多不同類型的非霍奇金淋巴瘤。它們可以以幾種不同方式分類。一種方式是通過受影響的細(xì)胞的類型。在非霍奇金淋巴瘤中，兩種類型的淋巴細(xì)胞可以被影響–B細(xì)胞和T細(xì)胞。這分類為B細(xì)胞淋巴瘤或T細(xì)胞淋巴瘤。大多數(shù)具有非霍奇金淋巴瘤的人具有B細(xì)胞淋巴瘤。T細(xì)胞淋巴瘤在青少年和年輕人中更常見。

霍奇金淋巴瘤細(xì)胞在顯微鏡下具有特殊的外觀。這些細(xì)胞稱為里-施(Reed Sternberg)細(xì)胞。非霍奇金淋巴瘤不具有里-施細(xì)胞。對于醫(yī)生而言，重要的是能夠分辨出霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤細(xì)胞之間的差異，因為它們是兩種不同的疾病。在霍奇金淋巴瘤中，淋巴結(jié)中的細(xì)胞是癌變的。

在2009年非霍奇金淋巴瘤患者的5年存活率％是63％，而霍奇金淋巴瘤的那些在相同期間的存活率為83％。

乳腺癌是乳房組織中形成的癌癥。最常見的乳腺癌類型是導(dǎo)管癌，其在輸乳管(將乳汁從乳房小葉輸送至乳頭的細(xì)管)內(nèi)膜中開始。另一種類型的乳腺癌是小葉癌，其在乳房的小葉(乳腺)中開始。乳腺癌可以分成亞類，如低密蛋白(claudin-low)腫瘤、基底細(xì)胞樣(basal-like)腫瘤、人表皮生長因子受體2(HER2)陽性腫瘤、luminal A型腫瘤和luminal B型腫瘤。浸潤性乳腺癌是已經(jīng)從其在乳腺導(dǎo)管或小葉中起始之處擴(kuò)散至周圍正常組織的乳腺癌。乳腺癌在男人和女人中都發(fā)生，但是男性乳腺癌很少。在2014年，估計有將近233,00個新增女性病例和2,400個男性病例，40,00個女性死亡和僅超過400個男性死亡。

每100個乳腺癌女性中約15個具有三陰性乳腺癌，即是雌激素陰性的，孕酮陰性的和HER2陰性的。復(fù)發(fā)性三陰性乳腺癌是一種醫(yī)療需要高度未滿足的病癥，這是由于其具有侵襲性的生物學(xué)、耐藥性的快速發(fā)展和缺乏分子靶標(biāo)導(dǎo)致。直至現(xiàn)在，化療仍然是晚期三陰性乳腺癌的護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)，中位整體存活率很差。

在WO-A-2010/085377中，公開了以下式I的化合物。它是首創(chuàng)一類(first-in-class)雙功能烷基化-HDACi融合分子，其有效地抑制HDAC途徑。

生物學(xué)測定顯示，式I的化合物有效地抑制HDAC酶(HDAC1 IC₅₀為9nM)，并且已經(jīng)顯示具有針對多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系的優(yōu)異的體外活性。

需要更有效的癌癥治療，包括治療乳腺癌和血液學(xué)癌癥，如多發(fā)性骨髓瘤、淋巴瘤或白血病。目前，這些病癥影響許多人，并且對于這些病癥中的許多中長期預(yù)后并不好。

發(fā)明概述

在本發(fā)明的第一方面，提供了包含糖皮質(zhì)激素和式I的化合物或其藥用鹽的組合：

本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，式I的化合物或其藥用鹽和糖皮質(zhì)激素如地塞米松(dexamethasone)或潑尼松(prednisone)的組合在治療癌癥中特別有效，所述癌癥包括血液學(xué)癌癥如多發(fā)性骨髓瘤、淋巴瘤和白血病，和乳腺癌。它們非常有希望來努力解決發(fā)現(xiàn)更有效的癌癥治療的問題。該組合可以任選地進(jìn)一步包含蛋白酶體抑制劑如卡非佐米(carfilzomib)或硼替佐米(bortezomib)。這些進(jìn)一步的組合在治療癌癥中也特別有效。

在本發(fā)明的第二方面，提供了藥物組合物，其包含藥用稀釋劑或載體和根據(jù)本發(fā)明第一方面的組合。

在本發(fā)明的第三方面，提供了試劑盒，其包含根據(jù)本發(fā)明第一方面的組合和任選地，治療患者的使用說明。

在本發(fā)明的第四方面，提供了根據(jù)本發(fā)明第一、第二或第三方面的組合、組合物或試劑盒，其用于治療癌癥。

在本發(fā)明的第五方面，提供了在有此需要的患者中治療癌癥的方法，其包括向所述患者施用根據(jù)本發(fā)明第一、第二或第三方面的組合、組合物或試劑盒。

附圖描述

圖1是對于不同測試的化合物在48小時溫育后，對于單個化合物和作為組合(二元組合和三元組合)，作為對照的％的MM1S多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞體外存活％相對于濃度的圖表；

圖2是對于不同測試的化合物在72小時溫育后，對于單個化合物和作為組合(二元組合和三元組合)，作為對照的％的MM1S多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞體外存活％相對于濃度的圖表；和

圖3是對于不同測試的化合物，對于單個化合物和作為組合，對于皮下接種3x10⁶個MM1S細(xì)胞到右翼的CB17-SCID小鼠，腫瘤生長(mm³)相對于研究天數(shù)的圖表。

發(fā)明詳述

在本發(fā)明中，使用許多通用術(shù)語和措詞，其應(yīng)該如下解釋。

“動物”包括人，非人哺乳動物(例如，狗，貓，兔，牛，馬，綿羊，山羊，豬，鹿等)和非哺乳動物(例如，鳥等)。

“藥用鹽”是指本發(fā)明化合物的鹽，其是藥學(xué)上可接受的，如上定義，并且具有所需的藥理學(xué)活性。這些鹽包括與無機(jī)酸或與有機(jī)酸形成的酸加成鹽。藥用鹽還包括堿加成鹽，其當(dāng)存在的酸性質(zhì)子能夠與無機(jī)或有機(jī)堿反應(yīng)時可以形成。通常，這樣的鹽可以例如通過將游離酸或堿形式的這些化合物與化學(xué)計算量的適當(dāng)?shù)膲A或酸在水中或在有機(jī)溶劑中或在這兩者的混合物中反應(yīng)來制備。通常，優(yōu)選非水性介質(zhì)如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。酸加成鹽的實例包括無機(jī)酸加成鹽，如例如鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，硫酸鹽，硫酸氫鹽，氨基磺酸鹽，硝酸鹽，磷酸鹽，和有機(jī)酸加成鹽，如例如乙酸鹽，三氟乙酸鹽，馬來酸鹽，富馬酸鹽，檸檬酸鹽，草酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽，水楊酸鹽，甲苯磺酸鹽，乳酸鹽，萘磺酸鹽，蘋果酸鹽，扁桃酸鹽，甲磺酸鹽和對甲苯磺酸鹽。堿加成鹽的實例包括無機(jī)鹽，如例如，鈉、鉀、鈣和銨鹽，和有機(jī)堿鹽，如例如乙二胺、乙醇胺、N,N-二亞烷基乙醇胺、三乙醇胺和堿性氨基酸鹽。

已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)，式I的化合物或其藥用鹽和糖皮質(zhì)激素如地塞米松的組合特別有效地治療癌癥，包括血液學(xué)癌癥如多發(fā)性骨髓瘤、白血病和淋巴瘤，和乳腺癌，因此它們高度有希望用于解決發(fā)現(xiàn)更有效的癌癥治療的問題。這些組合可以任選地還包含蛋白酶體抑制劑如卡非佐米或硼替佐米。這些進(jìn)一步的組合也特別有效用于治療癌癥。

在本發(fā)明的組合中，式I的化合物的藥用鹽可優(yōu)選為鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，硫酸鹽，硫酸氫鹽，氨基磺酸鹽，硝酸鹽，磷酸鹽，檸檬酸鹽，甲磺酸鹽，三氟乙酸鹽，谷氨酸鹽，葡糖醛酸鹽，戊二酸鹽，蘋果酸鹽，馬來酸鹽，琥珀酸鹽，富馬酸鹽，酒石酸鹽，甲苯磺酸鹽，水楊酸鹽，乳酸鹽，萘磺酸鹽或乙酸鹽，并且更優(yōu)選乙酸鹽。

在本發(fā)明的組合中，糖皮質(zhì)激素可以例如選自由以下組成的組：地塞米松、醋酸氟西奈德(fluocinolone acetonide)和潑尼松，其中優(yōu)選地塞米松。

本發(fā)明的組合可以還包含蛋白酶體抑制劑。用于本發(fā)明的組合中的蛋白酶體抑制劑的適當(dāng)實例包括硼替佐米、卡非佐米、marizomib、delanzomib(CEP-18770)、oprozomib(ONX 0912)、ixazomib(MLN-9708)和LU-102。這些之中，優(yōu)選硼替佐米、卡非佐米和LU-102。

這些蛋白酶體抑制劑的結(jié)構(gòu)如下：

在另一個優(yōu)選的包含式I的化合物或其藥用鹽、糖皮質(zhì)激素和任選地蛋白酶體抑制劑的本發(fā)明的組合中，所述組合可以進(jìn)一步包含一種或多種另外的藥物活性劑。特別適合的藥用活性劑是與所述式I的化合物或其藥用鹽、糖皮質(zhì)激素和蛋白酶體抑制劑具有不同作用模式的抗腫瘤劑，例如烷基化劑，如亞硝基脲(nitrosureas)、乙烯亞胺(ethylenimines)、烷基磺酸鹽、肼和三嗪，和基于鉑的藥劑；植物生物堿、紫杉烷類、長春花生物堿；抗腫瘤抗生素，如色霉素、蒽環(huán)霉素，和其他抗生素，如絲裂霉素和博來霉素；抗代謝藥，如葉酸拮抗劑，嘧啶拮抗劑，嘌呤拮抗劑和腺苷脫氨酶抑制劑；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，如拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑，拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑，其他抗腫瘤劑如核糖核苷酸還原酶抑制劑，腎上腺皮質(zhì)類固醇抑制劑，抗微管劑和維甲類；蛋白激酶；熱休克蛋白，多-ADP(腺苷二磷酸)-核糖聚合酶(PARP)、缺氧誘導(dǎo)因子(HIF)、蛋白酶體、Wnt/Hedgehog/Notch信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白、TNF-α、基質(zhì)金屬蛋白酶、法呢基轉(zhuǎn)移酶、凋亡途徑、組蛋白脫乙酰酶(HDAC)、組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(HAT)和甲基轉(zhuǎn)移酶；激素療法、血管破壞劑、基因療法、RNAi癌癥療法、化學(xué)保護(hù)劑、抗體綴合物、癌癥免疫療法如白介素-2、癌癥疫苗或單克隆抗體；和優(yōu)選地DNA損傷劑、抗代謝藥、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、抗微管劑、EGFR抑制劑、HER2抑制劑、VEGFR2抑制劑、BRAF抑制劑、Bcr-Abl抑制劑、PDGFR抑制劑、ALK抑制劑、PLK抑制劑、MET抑制劑、表觀遺傳學(xué)藥物、HSP90抑制劑、PARP抑制劑、CHK抑制劑、芳香酶抑制劑、雌激素受體拮抗劑和靶向VEGF、HER2、EGFR、CD50、CD20、CD30、CD33等的抗體。

在本發(fā)明組合的一個實施方案中，式I的化合物或其藥用鹽、糖皮質(zhì)激素和，如果存在的，蛋白酶體抑制劑，適合于同時、順序或分開施用。優(yōu)選地，式I的化合物或其藥用鹽、糖皮質(zhì)激素和，如果存在的，蛋白酶體抑制劑，適合于同時施用。

在本發(fā)明組合的一個實施方案中，糖皮質(zhì)激素是地塞米松，并且式I的化合物或其藥用鹽是

或其乙酸鹽。該組合可以任選地還包含選自硼替佐米、卡非佐米和LU-102的蛋白酶體抑制劑。

在本發(fā)明組合的一個實施方案中，在所述組合中糖皮質(zhì)激素與式I的化合物或其藥用鹽的摩爾比為1:500至500:1。優(yōu)選地，在所述組合中糖皮質(zhì)激素與式I的化合物或其藥用鹽的摩爾比為1:500至1:100，更優(yōu)選1:300至1:100，最優(yōu)選1:250至1:150，例如1:150、1:200、1:250或1:300。

本發(fā)明組合的一個特別優(yōu)選的實施方案包含式I的化合物或其乙酸鹽和地塞米松，其中在所述組合中地塞米松與式I的化合物或其乙酸鹽的摩爾比為1:250至1:150，例如1:150、1:200或1:250。

已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)，許多包含糖皮質(zhì)激素和式I的化合物或其藥用鹽的組合是協(xié)同組合。換句話說，該組合的功效已經(jīng)利用基于Chou Talay方法(Chou等，Adv.Enzyme Regul.，22，27-55(1984))的Calcusyn軟件(biosoft，F(xiàn)erguson，MO，USA)測量，所述方法計算具有以下解釋的組合指數(shù)(CI)：

CI 1>1：拮抗作用，CI＝1：加和作用，和CI<1協(xié)同作用。

對于本發(fā)明的許多包含糖皮質(zhì)激素和式I的化合物或其藥用鹽的二元組合，發(fā)現(xiàn)CI小于1，表明協(xié)同作用。

本發(fā)明組合的另一個實施方案還包含蛋白酶體抑制劑，其中在所述組合中蛋白酶體抑制劑與式I的化合物或其藥用鹽與糖皮質(zhì)激素的摩爾比為1:1000:20至1000:1:20。優(yōu)選地，在所述組合中，蛋白酶體抑制劑與式I的化合物或其藥用鹽與糖皮質(zhì)激素的摩爾比為1:1000:10至1:100:2。更優(yōu)選地，用于所述組合中的蛋白酶體抑制劑與式I的化合物或其藥用鹽與糖皮質(zhì)激素的摩爾比為1:1000:5至1:200:2，最優(yōu)選1:700:4至1:400:3，例如1:1000:5、1:900:5、1:800:4、1:700:4、1:600:4、1:500:3或1:400:3。

本發(fā)明的一個特別優(yōu)選的組合包含選自硼替佐米和卡非佐米的蛋白酶體抑制劑、式I的化合物或其乙酸鹽和地塞米松，其中在所述組合中，選自硼替佐米和卡非佐米的蛋白酶體抑制劑與式I的化合物或其乙酸鹽與地塞米松的摩爾比為1:700:4至1:400:3，例如1:700:4、1:700:3、1:600:4、1:600:3、1:500:3或1:400:3。本發(fā)明第一方面的另一個特別優(yōu)選的組合包含選自LU-102的蛋白酶體抑制劑、式I的化合物或其乙酸鹽和地塞米松，其中在所述組合中，LU-102與式I的化合物或其乙酸鹽與地塞米松的摩爾比為1:3:4至1:0.5:3，例如1:3:4、1:3:3、1:2:4、1:2:3、1:1:4、1:1:3或1:0.5:3。

還已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)，許多本發(fā)明的包含蛋白酶體抑制劑、式I的化合物或其藥用鹽和糖皮質(zhì)激素的三元組合也是協(xié)同組合，即發(fā)現(xiàn)組合指數(shù)CI小于1。

根據(jù)本發(fā)明第二方面的藥物組合物包含藥用稀釋劑或載體和根據(jù)本發(fā)明第一方面的組合。第二發(fā)明的優(yōu)選組合物包括包含以上描述和例舉的本發(fā)明的優(yōu)選組合的那些。根據(jù)本發(fā)明第二方面的藥物組合物的藥用稀釋劑或載體可以是任何適當(dāng)?shù)姆稚?，賦形劑，輔劑，或用作本發(fā)明組合的活性劑的載體并且不干擾所述組合中存在的活性劑的其他材料。典型的藥用載體和稀釋劑的實例可以參見E.W.Martin的"Remington's Pharmaceutical Sciences"，這些包括水，鹽水，葡萄糖溶液，血清溶液，林格氏溶液、聚乙二醇(例如PEG400)，表面活性劑(例如Cremophor)，環(huán)多糖(例如，羥丙基-β-環(huán)糊精或磺丁基醚β-環(huán)糊精)、聚合物、脂質(zhì)體、膠束、納米球等。

在本發(fā)明的第三方面，提供試劑盒，其包含根據(jù)本發(fā)明第一方面的組合和任選地治療患者的使用說明。典型地，試劑盒可以包含式I的化合物或其藥用鹽，糖皮質(zhì)激素和蛋白酶體抑制劑以及治療患者的使用說明。每種活性劑可以在適當(dāng)?shù)娜萜髦刑峁?。試劑盒可以還包含遞送系統(tǒng)，其例如用于式I的化合物或其藥用鹽、糖皮質(zhì)激素或蛋白酶體抑制劑或它們的任何組合。

使用說明可以建議根據(jù)諸如以下變量同時、順序或分開施用所述組合的糖皮質(zhì)激素、式I的化合物或其藥用鹽和如果存在的，蛋白酶體抑制劑：被治療的具體病癥，病癥狀態(tài)，使用的具體化合物的活性；使用的具體組合；患者的年齡，體重，整體健康，性別和飲食；給藥時間，給藥途徑和使用的具體化合物的排泄率；治療持續(xù)時間；與使用的具體化合物組合或同時使用的藥物；和醫(yī)藥領(lǐng)域公知的類似因素。

根據(jù)本發(fā)明第三方面的優(yōu)選試劑盒包括包含如上所述和例舉的本發(fā)明優(yōu)選組合的那些。

在本發(fā)明的第四方面中，提供了根據(jù)本發(fā)明第一、第二或第三方面的組合、組合物或試劑盒，其用于治療癌癥。

在本發(fā)明的第五方面中，提供了在有此需要的患者中治療癌癥的方法，包括向所述患者施用根據(jù)本發(fā)明第一、第二或第三方面的組合、組合物或試劑盒。

已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的組合、組合物和試劑盒在體內(nèi)和體外都針對各種各樣的腫瘤細(xì)胞類型高度有效。本發(fā)明的這些二元和三元組合和本發(fā)明的組合物和試劑盒中的組合顯示的抗腫瘤活性在許多情況下不僅僅是加和的，其顯示顯著小于1的組合指數(shù)CI，表明這些組合的協(xié)同作用。這種出人意料的發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步支持本發(fā)明的組合、組合物和試劑盒在治療癌癥中特別有效。

本發(fā)明的組合、組合物和試劑盒能夠治療的癌癥的實例包括血液學(xué)癌癥如多發(fā)性骨髓瘤，淋巴瘤和白血病，乳腺癌，肺癌，結(jié)直腸癌，前列腺癌，睪丸癌，胰腺癌，肝癌，胃癌，膽管癌，食道癌，胃腸道基質(zhì)瘤，宮頸癌，卵巢癌，子宮癌，腎癌，黑素瘤，基底細(xì)胞癌，鱗狀細(xì)胞癌，膀胱癌，肉瘤，間皮瘤，胸腺瘤，骨髓增生異常綜合征，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤和骨髓增生性疾病。具體地，本發(fā)明的組合、組合物和試劑盒針對血液學(xué)癌癥和乳腺癌有效，所述血液學(xué)癌癥如多發(fā)性骨髓瘤、淋巴瘤和白血病。在根據(jù)本發(fā)明第四方面用于治療癌癥的組合、組合物或試劑盒或根據(jù)本發(fā)明第五方面的治療方法的一個實施方案中，癌癥選自血液學(xué)癌癥和乳腺癌。

當(dāng)本發(fā)明的組合、組合物或試劑盒用于治療血液學(xué)癌癥時，這可以優(yōu)選選自多發(fā)性骨髓瘤(例如，活躍骨髓瘤(active myeloma)、漿細(xì)胞瘤(plasmacytoma)、輕鏈型骨髓瘤(light chain myeloma)或非分泌性骨髓瘤(non-secretory myeloma))，淋巴瘤(例如，霍奇金淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤)和白血病[急性成淋巴細(xì)胞性白血病(ALL)、慢性淋巴細(xì)胞白血病(CLL)、急性髓性白血病(AML，包括成髓細(xì)胞白血病，急性前髓細(xì)胞白血病，急性髓單核細(xì)胞白血病，急性單核細(xì)胞白血病，急性紅白血病和急性巨核細(xì)胞白血病，以及在包括復(fù)發(fā)和難治階段的所有階段中可治療的所有形式)、慢性髓性白血病(CML)、多毛細(xì)胞白血病(hairy cell leukemia，HCL)、T細(xì)胞前淋巴細(xì)胞白血病(T-PLL)、巨粒淋巴細(xì)胞白血病或T細(xì)胞急性成淋巴細(xì)胞性白血病]。

當(dāng)本發(fā)明的組合、組合物或試劑盒是用于治療乳腺癌時，乳腺癌可以典型地選自低密蛋白(claudin-low)腫瘤、基底細(xì)胞樣(basal-like)腫瘤、人表皮生長因子受體2(HER2)陽性腫瘤、luminal A型腫瘤和luminal B型腫瘤，并且其優(yōu)選為三陰性乳腺癌。

在根據(jù)本發(fā)明用于治療癌癥的組合、組合物或試劑盒和根據(jù)本發(fā)明治療癌癥的方法的一個優(yōu)選實施方案中，糖皮質(zhì)激素、式I的化合物或其藥用鹽和，如果存在的，蛋白酶體抑制劑，被同時、順序或分開施用。更優(yōu)選地，糖皮質(zhì)激素、式I的化合物或其藥用鹽和，如果存在的，蛋白酶體抑制劑，被同時施用。

在用于治療癌癥的組合、組合物或試劑盒中和根據(jù)本發(fā)明治療癌癥的方法中，典型地以10至100mg/kg患者體重的劑量范圍，和優(yōu)選以40至80mg/kg患者提供的劑量范圍，將式I的化合物或其藥用鹽施用于有此需要的患者。典型地，將糖皮質(zhì)激素以0.1至1mg/kg患者體重的劑量范圍，和優(yōu)選以0.3至0.5mg/kg患者體重的劑量范圍施用。當(dāng)將蛋白酶體抑制劑與式I的化合物或其鹽和糖皮質(zhì)激素也一起施用時，將其典型地以0.01至0.3mg/kg患者體重的劑量范圍施用。優(yōu)選地，將蛋白酶體抑制劑以0.05至0.15mg/kg患者體重的劑量范圍施用于患者。

根據(jù)本發(fā)明的組合、組合物或試劑盒的治療有效量是所述組合、組合物或試劑盒的以下量，所述量以適用于任何藥物治療的合理的效益/風(fēng)險比賦予所治療的受試者以根據(jù)本發(fā)明第四和第五方面的治療效果。治療效果可以是客觀的(即，通過某種測試或標(biāo)記可測量的)或主觀的(即，受試者給出效果指示或感覺)。認(rèn)為根據(jù)本發(fā)明的組合、組合物或試劑盒的有效量是這樣的量，其中式I的化合物或其鹽以10至100mg/kg患者體重(例如40至80mg/kg體重如40、50、60、70或80mg/kg體重)的劑量范圍被包括在組合中，糖皮質(zhì)激素以0.03至1mg/kg患者體重(例如0.3至0.5mg/kg患者體重、如0.3、0.4或0.5mg/kg患者體重)的劑量范圍被包括在組合中，并且蛋白酶體抑制劑(如果存在的話)以0.01至0.3mg/kg患者體重(例如0.05至0.15mg/kg如0.05、0.1或0.15mg/kg體重)的劑量范圍被包括在組合中。

有效量將根據(jù)給藥途徑以及與其他活性劑的共同使用的可能性而變化。然而，應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的組合、組合物和試劑盒的總?cè)談┝繉⒂芍髦吾t(yī)師在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)決定。對于任何具體患者的特定治療有效劑量水平將取決于各種因素而變化，所述因素包括被治療的病癥和病癥嚴(yán)重性；使用的具體化合物的活性；使用的具體組合；患者的年齡，體重，整體健康，性別和飲食；給藥時間，給藥途徑和使用的具體化合物的排泄率；治療持續(xù)時間；與使用的具體化合物組合或同時使用的藥物；和醫(yī)藥領(lǐng)域公知的類似因素。本發(fā)明還涉及根據(jù)本發(fā)明的第一、第二或第三方面的組合、組合物或試劑盒在制備藥物中的用途，所述藥物用于治療癌癥，例如用于治療血液學(xué)癌癥或乳腺癌。

本發(fā)明組合、組合物或試劑盒的適當(dāng)給藥形式的實例非限制性地包括口服、局部、腸胃外、舌下、直腸、陰道、經(jīng)眼和鼻內(nèi)。腸胃外給藥包括皮下注射，靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、胸骨內(nèi)注射或輸注技術(shù)。優(yōu)選地，將所述組合、組合物和試劑盒腸胃外施用?？梢耘渲票景l(fā)明的組合、組合物和試劑盒，以便允許本發(fā)明的組合或組合物在將組合、組合物或試劑盒施用于動物(優(yōu)選人)之后是可生物利用的。組合物可以采用一個或多個劑量單位的形式，其中例如，片劑可以是單劑量單位，氣溶膠形式的本發(fā)明的組合或組合物的容器可以容納多個劑量單位。

優(yōu)選地，本發(fā)明的組合以試劑盒的形式提供。典型地，試劑盒包括糖皮質(zhì)激素、式I的化合物或其藥用鹽和任選地蛋白酶體抑制劑。在某些實施方案中，試劑盒可以包括一種或多種遞送系統(tǒng)，例如糖皮質(zhì)激素、式I的化合物或其藥用鹽和任選地蛋白酶體抑制劑或它們的任何組合，和使用試劑盒的指導(dǎo)(例如，治療受試者的使用說明)。這些指示/使用說明可以建議根據(jù)以下變量同時、順序或分開施用所述組合的糖皮質(zhì)激素、式I的化合物或其藥用鹽和，如果存在的，蛋白酶體抑制劑，所述變量諸如被治療的具體病癥，病癥狀態(tài)，使用的具體化合物的活性；使用的具體組合；患者的年齡，體重，整體健康，性別和飲食；給藥時間，給藥途徑和使用的具體化合物的排泄率；治療持續(xù)時間；與使用的具體化合物組合或同時使用的藥物；和醫(yī)藥領(lǐng)域公知的類似因素。

藥用稀釋劑或載體可以是顆粒的，以便組合物是例如片劑或粉劑形式。載體可以是液體，所述組合、組合物或試劑盒是例如口服糖漿或注射液。另外，載體可以是氣態(tài)的，以提供氣溶膠組合物，用于例如吸入器給藥。這樣的藥用載體可以是液體，如水和油，包括石油、動物、植物或合成來源的那些，如花生油，大豆油，礦物油，芝麻油等。載體可以是鹽水，阿拉伯樹膠，明膠，淀粉糊，滑石，角蛋白，膠態(tài)氧化硅，脲等。另外，可以使用輔助劑，穩(wěn)定劑，增稠劑，潤滑劑和著色劑。在一個實施方案中，當(dāng)施用于動物時，本發(fā)明的組合、組合物或試劑盒和藥用載體是無菌的。當(dāng)靜脈內(nèi)施用本發(fā)明的組合或組合物時，水是優(yōu)選的載體。鹽水溶液和葡萄糖溶液和甘油溶液也可以用作液體載體，特別是用于注射液。適當(dāng)?shù)乃幱幂d體還包括賦形劑，如淀粉，葡萄糖，乳糖，蔗糖，明膠，麥芽，大米，面粉，白堊，硅膠，硬脂酸鈉，單硬脂酸甘油酯，滑石，氯化鈉，脫脂奶粉，甘油，丙二醇，水，乙醇等。本發(fā)明的組合物，如果需要，還可以含有少量的潤濕劑或乳化劑，或pH緩沖劑。

當(dāng)意欲用于口服給藥時，組合或組合物可以是固體或液體形式，其中半固體、半液體、混懸液和凝膠形式被包括在本文中考慮為固體或液體的形式內(nèi)。

作為用于口服給藥的固體組合物，所述組合、組合物或試劑盒可以配制成粉末、顆粒、壓縮片劑、藥丸、膠囊、口香糖、糯米紙囊劑等形式。該固體組合物典型地含有一種或多種惰性稀釋劑，作為包含所有活性劑的單一片劑或作為各自包含本發(fā)明組合單一活性劑的多個分開的固體組合物(在試劑盒的情形中)。另外，可以存在以下中的一種或多種：粘合劑如羧甲基纖維素，乙基纖維素，微晶纖維素，或明膠；賦形劑，如淀粉，乳糖或糊精，崩解劑，如海藻酸，海藻酸鈉，玉米淀粉等；潤滑劑，如硬脂酸鎂；助流劑，如膠體二氧化硅；甜味劑，如蔗糖或糖精；調(diào)味劑如薄荷油，水楊酸甲酯或橙味調(diào)味劑；和著色劑。

當(dāng)所述組合或組合物是膠囊形式(例如，明膠膠囊)時，除了上述類型的材料以外，它還可以含有液體載體，如聚乙二醇，環(huán)糊精或脂肪油。

所述組合，組合物或試劑盒可以是液體形式，例如酏劑、糖漿、溶液劑、乳劑或混懸劑。該液體可以用于口服給藥或者用于注射遞送。當(dāng)意欲用于口服給藥時，組合、組合物或試劑盒可以包含甜味劑、防腐劑、染料/著色劑和增香劑中的一種或多種。在用于注射給藥的組合或組合物中，還可以包括表面活性劑、防腐劑、潤濕劑、分散劑、懸浮劑、緩沖劑、穩(wěn)定劑和等張劑中的一種或多種。在本發(fā)明的試劑盒中，組合物的包含一種或多種活性劑的液體組分可以在給藥之前合并并且同時施用，或者每種活性劑可以順序或分開施用。

優(yōu)選的給藥途徑是腸胃外給藥，其包括但不限于，皮內(nèi)，肌內(nèi)，腹膜內(nèi)，靜脈內(nèi)，皮下，鼻內(nèi)，硬膜外，鼻內(nèi)，腦內(nèi)，心室內(nèi)，鞘內(nèi)，陰道內(nèi)或透皮。優(yōu)選的給藥方式留待執(zhí)業(yè)醫(yī)生判斷，并且部分取決于醫(yī)學(xué)病癥的部位(如癌癥部位)。在更優(yōu)選的實施方案中，靜脈內(nèi)施用本發(fā)明的當(dāng)前組合、組合物和試劑盒。

本發(fā)明的液體組合、組合物和試劑盒，無論它們是溶液、混懸液或其他類似形式，也可以包括以下中的一種或多種：無菌稀釋劑，如注射用水，鹽水溶液，優(yōu)選生理鹽水，林格氏溶液，等張氯化鈉，固定油，如合成甘油單酯或二酯，聚乙二醇，甘油，或其他溶劑；抗細(xì)菌劑，如苯甲醇，或?qū)αu基苯甲酸甲酯；和用于調(diào)節(jié)張力的試劑，如氯化鈉或右旋糖。腸胃外組合或組合物可以被包封在由玻璃、塑料或其他材料制成的安瓿管、一次性注射器或多劑量小瓶中。生理鹽水是優(yōu)選的輔劑。

對于給藥(例如靜脈內(nèi))，組合或組合物可以典型地包含劑量范圍為10至100mg/kg患者體重的式I的化合物或其鹽、劑量范圍為0.1至1mg/kg患者體重的糖皮質(zhì)激素和劑量范圍為0.01至0.3mg/kg患者體重的蛋白酶體抑制劑。更優(yōu)選地，組合或組合物可以典型地包含劑量范圍為40至80mg/kg患者體重的式I的化合物或其鹽、劑量范圍為0.3至0.5mg/kg患者體重的糖皮質(zhì)激素和劑量范圍為0.05至0.15mg/kg患者體重的蛋白酶體抑制劑。

可以配制本發(fā)明的組合，以使糖皮質(zhì)激素、式I的化合物或其藥用鹽和，如果存在的，蛋白酶體抑制劑，適合于同時、順序或分開給藥。優(yōu)選地，將它們同時給藥。

可以通過任何便利的途徑，例如通過輸注或推注，通過上皮或皮膚黏膜襯里吸收，施用本發(fā)明的組合、組合物或試劑盒。

在具體實施方案中，理想的是將一種或多種本發(fā)明的組合、組合物或試劑盒或者組合、組合物或試劑盒局部施用于需要治療的區(qū)域。在一個實施方案中，通過直接注射于癌癥、腫瘤或腫瘤性(neoplastic)或前腫瘤性(pre-neoplastic)組織的部位(或之前的部位)來進(jìn)行給藥。

例如通過使用吸入器或霧化器，用霧化劑配制，或通過在碳氟化合物或合成的肺表面活性劑中灌注，也可以采用肺給藥。在某些實施方案中，本發(fā)明的組合、組合物或試劑盒或組合物可以用傳統(tǒng)的粘合劑和載體如甘油三酯配制為栓劑。

本發(fā)明的組合、組合物或試劑盒可以采取以下形式：溶液劑，混懸劑，乳劑，片劑，丸劑，小丸，膠囊，含有液體的膠囊，粉末劑，緩釋制劑，栓劑，乳劑，氣溶膠，噴霧劑，混懸劑，或適合使用的任何其他形式。適當(dāng)藥物載體的其他實例描述在E.W.Martin的"Remington's Pharmaceutical Sciences"中。

藥物組合、組合物和試劑盒可以使用藥學(xué)領(lǐng)域公知的方法制備。例如，意欲通過注射施用的組合物可以通過將本發(fā)明的試劑盒組分與水組合以形成溶液來制備?？梢约尤氡砻婊钚詣﹣泶龠M(jìn)均勻溶液或混懸劑的形成。

本發(fā)明的組合、組合物和試劑盒特別有效用于治療癌癥。已經(jīng)顯示本發(fā)明的組合、組合物和試劑盒具有針對各種各樣的腫瘤細(xì)胞類型的在體外和體內(nèi)的優(yōu)異活性，使得它們特別有希望用于開發(fā)治療癌癥，例如血液學(xué)癌癥和乳腺癌。

實施例

在以下實施例中，將具有下式I的化合物稱為EDO-S101(或附圖中的EDO)：

其可以如WO-A-2010/085377的實施例5中所述制備。

實施例1 EDO-S101體外組合–多發(fā)性骨髓瘤MM1S細(xì)胞系

在多發(fā)性骨髓瘤MM1S細(xì)胞系(獲自LGC Standards S.a.r.l.，6，rue Alfred Kastler，BP 83076，F(xiàn)-67123Molsheim Cedex，法國)中將EDO-S101與地塞米松和硼替佐米體外組合。通過MTT測定測量活性，該測定是基于自由線粒體酶琥珀酸脫氫酶產(chǎn)生的3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑(MTT)進(jìn)行代謝溴化物還原，變?yōu)楸环Q為甲的藍(lán)色化合物。然后測量被處理的細(xì)胞的線粒體功能。該方法已經(jīng)廣泛用于測量細(xì)胞增殖和存活能力。剩余的活細(xì)胞與生成的甲的量成比例。

簡而言之，該方法如下：

·將30,000個MM1S細(xì)胞/孔鋪平板于96-孔微量滴定板中。

·在DMSO中制備EDO-S101和PI稀釋液，在乙醇中制備地塞米松，并加入所述孔中至實驗中標(biāo)明的終濃度。

·將平板在恒溫箱中在37℃下在濕潤氣氛中在5％CO₂/95％空氣存在下溫育24-48-72小時。

·在溫育后在每個孔中加入10μL的MTT溶液，并且溫育2小時以允許甲晶體形成。

·加入100μl SDS+HCl(每12mL的SDS，10μL HCl)的混合溶液以溶解甲晶體。

·在570nm OD讀取吸光度并且使用650nm的參比波長。

·如下獲得細(xì)胞存活力(百分比)：％存活力＝OD處理的細(xì)胞x 100/OD對照細(xì)胞。

·一式四份測試每個劑量并且每個實驗進(jìn)行至少兩次。

對于所有實驗而言，不同藥物的濃度是比率恒定的。EDO-S101為500nM、1μM、2.5μM；地塞米松為2.5nM；5nM；10nM；并且硼替佐米為0.75nM、1.5nM、3nM。

結(jié)果如以下表1和附圖1所示。

表1

組合的功效利用基于Chou Talay方法(Chou等，Adv.Enzyme Regul.，22，27-55(1984))的Calcusyn軟件(bIosoft，F(xiàn)erguson，MO，USA)量化，所述方法計算具有以下解釋的組合指數(shù)(CI)：

CI 1>1:拮抗作用，CI＝1:加和作用，和CI<1協(xié)同作用。

從圖1和從以上可以看出，EDO-S101顯示了與地塞米松的協(xié)同作用，而且在與地塞米松和硼替佐米的三元組合中也顯示了協(xié)同作用。

在另一個實驗中，將相同恒定劑量的這些藥物溫育72小時而不是48小時。結(jié)果顯示在以下表2和附圖2中。

表2

再次，從圖2和表2中的以上結(jié)果可以看出，EDO-S101顯示了與地塞米松的協(xié)同作用，并且還在與地塞米松和硼替佐米的三元組合中顯示協(xié)同作用。

實施例2 EDO-S101組合體內(nèi)針對皮下漿細(xì)胞瘤的異種移植物

用在100μL RPMI 1640培養(yǎng)基和100μL Matrigel(BD Biosciences)中的3×10⁶個多發(fā)性骨髓瘤MM1S細(xì)胞(獲自LGC Standards S.a.r.l.，6，rue Alfred Kastler，BP 83076，F(xiàn)-67123 Molsheim Cedex，法國)在右側(cè)皮下接種CB17-SCID小鼠(獲自The Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)。當(dāng)腫瘤變得可觸知時，將小鼠隨機(jī)化為8個處理組，每個組5只小鼠。

這些組是：

·對照(僅用載體處理的組)

·硼替佐米1mg/kg，腹膜內(nèi)一周兩次，共三周

·地塞米松0,5mg，靜脈內(nèi)一周兩次，共三周

·EDO-S101，靜脈內(nèi)，劑量30mg/kg，一周一次，共3個劑量，

·硼替佐米+地塞米松

·硼替佐米+EDO-S101

·EDO-S101+地塞米松

·EDO-S101+硼替佐米和地塞米松的三元組合

每天進(jìn)行腫瘤直徑的卡鉗測量，使用以下公式將腫瘤體積估計為橢圓體積：V＝4/3π×(a/2)×(b/2)2，其中“a”和“b”分別對應(yīng)于最長和最短的直徑。

腫瘤生長結(jié)果顯示在圖3中，其為腫瘤生長(mm³)針對研究天數(shù)的圖表。可以看出，EDO-S101和地塞米松的組合導(dǎo)致的腫瘤體積小于在單獨的任一種藥劑的情況下觀察到的腫瘤體積，而EDO-S101、硼替佐米和地塞米松的三元組合在研究結(jié)束時顯示了比單獨的任何活性劑非常顯著更小的腫瘤體積。

綜上，可以看出，與糖皮質(zhì)激素抑制劑如地塞米松組合的式I的化合物(EDO-S101)在體外和體內(nèi)針對多發(fā)性骨髓瘤作用方面，都顯示了優(yōu)異的活性。另外，可以看出，這些組合的活性是出人意料地協(xié)同的。還有，發(fā)現(xiàn)包含式I的化合物、糖皮質(zhì)激素和蛋白酶體抑制劑如硼替佐米的三元組合顯示特別強(qiáng)的協(xié)同作用。預(yù)期這些組合具有針對各種各樣的血液學(xué)癌癥(不僅僅骨髓瘤，而且有其他血液學(xué)病癥，如淋巴瘤和白血病)的活性。我們還相信這些組合可能具有針對其他癌癥如乳腺癌的活性。

結(jié)果，預(yù)期本發(fā)明的式I的化合物與糖皮質(zhì)激素的組合(任選地包含蛋白酶體抑制劑)將用于治療癌癥，特別是血液學(xué)癌癥和乳腺癌。