一種治療子宮肌瘤的藥物組合物及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療子宮肌瘤的藥物組合物。該藥物組合物是由以下重量份的原料制成的：小茴香1～3，蒲黃1～3，桃仁1～3，鴉跖花1～3。該藥物組合物采用藥學(xué)中常規(guī)的制藥方法制備成片劑、丸劑、硬膠囊劑、顆粒劑、口服液。該藥物組合物可用于制備治療子宮肌瘤以及子宮內(nèi)膜異位癥的藥物。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種治療子宮肌瘤的藥物組合物及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及一種由小茴香、蒲黃、桃仁、鴉跖花組成的具有治療子 宮肌瘤作用的藥物組合物。
[0002]
【背景技術(shù)】
[0003] 子宮肌瘤是發(fā)生在女性生殖器官中的一種常見(jiàn)良性腫瘤，也叫做子宮平滑肌瘤， 癥狀不明顯，中醫(yī)里認(rèn)為是由于氣滯血瘀，臟腑功能失調(diào)而引起。
[0004] 子宮肌瘤有無(wú)癥狀及其輕重，主要決定于肌瘤的部位、大小、數(shù)目以及并發(fā)癥。有 的肌瘤小、生長(zhǎng)緩慢、無(wú)癥狀，可以終生未被發(fā)現(xiàn)。近年由于B型超聲檢查的廣泛應(yīng)用，不少 患者是因常規(guī)查體，經(jīng)B超檢查發(fā)現(xiàn)有子宮肌瘤，而其本人并無(wú)癥狀。多數(shù)患者是因有癥狀 而來(lái)就醫(yī)。子宮肌瘤常見(jiàn)的癥狀有子宮出血、腹部腫塊、陰道溢液、壓迫癥狀等。
[0005] 子宮肌瘤是雌激素敏感性腫瘤，多見(jiàn)于性激素功能活躍的育齡婦女，少見(jiàn)于絕經(jīng) 后婦女。臨床往往發(fā)現(xiàn)當(dāng)外源性給予雌激素或妊娠時(shí)，子宮肌瘤迅速增大；絕經(jīng)后出現(xiàn)的低 雌二醇（E2)低孕酮（P)狀態(tài)可以引起肌瘤的縮小、甚至消失。故長(zhǎng)期以來(lái)，雌激素一直被認(rèn) 為是子宮肌瘤發(fā)生和發(fā)展的促進(jìn)劑，即傳統(tǒng)的"雌激素假說(shuō)"。然而目前許多研究表明，子宮 肌瘤患者外周血循環(huán)中的E2、P水平與正常人并無(wú)顯著性差別，而局部肌瘤組織內(nèi)E2、P含 量卻高于同一子宮正常平滑肌組織內(nèi)的含量。因此不能確定血清E2、P水平與子宮肌瘤發(fā) 生發(fā)展的直接關(guān)系，而可能在于肌瘤組織局部對(duì)激素的敏感性。激素主要的生物學(xué)效應(yīng)靠 與受體結(jié)合后才能得以實(shí)現(xiàn)。靶組織保留激素的多少取決于其細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)受體的含量；在 同一激素水平下，激素在靶組織中產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)的強(qiáng)弱也取決于靶細(xì)胞受體的含量，說(shuō) 明肌瘤的生長(zhǎng)與ER、PR的水平密切相關(guān)，即所謂受體效應(yīng)。
[0006] 本發(fā)明提供了一種治療子宮肌瘤的藥物組合物，研究對(duì)雌、孕激素負(fù)荷法造模的 實(shí)驗(yàn)性子宮肌瘤大鼠的子宮肌組織進(jìn)行ER、PR表達(dá)水平的測(cè)定。結(jié)果顯示：本發(fā)明提供藥 物組合物組大鼠子宮肌層ER、PR表達(dá)水準(zhǔn)較模型組大鼠有所下降。
[0007] 細(xì)胞凋亡也稱(chēng)程式性細(xì)胞死亡，是細(xì)胞衰老、死亡過(guò)程的主要形式。細(xì)胞凋亡是體 內(nèi)細(xì)胞的一個(gè)生理性調(diào)節(jié)機(jī)制。Bcl-2和Bax在體內(nèi)通常以二聚體形式發(fā)揮作用。若其中 Bcl-2蛋白同聚體形成則抑制細(xì)胞凋亡，Bax蛋白同聚體形成則促進(jìn)細(xì)胞凋亡。本研究發(fā) 現(xiàn)：在空白組大鼠子宮中，Bcl-2呈低表達(dá)，Bax呈高表達(dá)。這提示在正常大鼠子宮肌層組 織中Bax占優(yōu)勢(shì)，Bcl-2表達(dá)弱，可能使之對(duì)凋亡更敏感，更易發(fā)生凋亡。模型組大鼠子宮 中Bcl-2表達(dá)增加，Bax的表達(dá)減少，提示Bcl-2高表達(dá)可能是肌瘤的特征，導(dǎo)致肌瘤不斷 增大。本發(fā)明藥物組合物能夠增加子宮肌瘤大鼠 Bax的表達(dá)，降低大鼠大鼠子宮平滑肌細(xì) 胞的胞漿中Bcl-2蛋白陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0008] 本發(fā)明的目的是提供一種治療子宮肌瘤的藥物組合物。
[0009] 本發(fā)明的另一目的是提供藥物組合物的制備方法。
[0010] 本發(fā)明的還提供該藥物組合物在制備治療子宮肌瘤以及子宮內(nèi)膜異位癥藥物中 的應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明的目的是通過(guò)以下方式實(shí)現(xiàn)的： 一種治療子宮肌瘤的藥物組合物，是由以下重量份的原料制成的：小茴香1?3,蒲黃 1?3,桃仁1?3,鴉跖花1?3。
[0012] 所述藥物組合物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的：小茴香1，蒲黃2,桃仁3,鴉 跖花1。
[0013] 所述藥物組合物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的：小茴香2,蒲黃3,桃仁2,鴉 跖花2。
[0014] 所述藥物組合物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的：小茴香3,蒲黃1，桃仁1，鴉 跖花3。
[0015] 所述藥物組合物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的：小茴香1，蒲黃1，桃仁1，鴉 跖花1。
[0016] 所述藥物組合物采用藥學(xué)中常規(guī)的制藥方法制備成口服制劑。
[0017] 所述藥物組合物制備成的口服制劑為片劑、丸劑、硬膠囊劑、顆粒劑、口服液。
[0018] 所述藥物組合物優(yōu)選采用如下方法制備：取小茴香、蒲黃、桃仁、鴉跖花，混合，力口 入5?10倍量的水煎煮2?4次，每次0. 5?2小時(shí)，提取液合并，濾過(guò)，濾液濃縮，干燥， 粉碎成細(xì)粉，加入輔料，混勻，裝入硬膠囊，即得。
[0019] 所述藥物組合物可用于制備治療子宮肌瘤的藥物。
[0020] 所述藥物組合物還可用于制備治療子宮內(nèi)膜異位癥的藥物。
[0021] 本發(fā)明藥物組合物中的小茴香為傘形科茴香屬植物茴香Foeniculumvulgare Mill.的干燥果實(shí)。蒲黃為香蒲科香蒲屬植物狹葉香蒲Typha angustifolia L.、東方香蒲 T.orientalis Presl、寬葉香蒲 T.latifolia L·、長(zhǎng)荀香蒲 T.angustata Bory et Chaub. 的干燥花粉。桃仁為薔薇科桃屬植物桃Amygdalus persica L. [Prunus persica (L.) Batsch.]或山桃 A. davidiana (Carr. ) C. de Vos ex Henry [Prunus davidiana (Carr.) Franch.]的干燥種子。鴉妬花為毛茛科植物鴉妬花屬植物鴉妬花Oxygraphis glacialis (Fisch. ) Bunge的干燥花及全草。
[0022] 通過(guò)如下實(shí)驗(yàn)研究驗(yàn)證本發(fā)明的技術(shù)效果： 實(shí)驗(yàn)例1 :本發(fā)明藥物組合物治療子宮內(nèi)膜異位癥的實(shí)驗(yàn)研究 本研究以雌、孕激素負(fù)荷法建立大鼠實(shí)驗(yàn)性子宮肌瘤模型。研究本發(fā)明藥物組合物對(duì) 其的干預(yù)，觀察子宮形態(tài)學(xué)改變，并用免疫組化法檢測(cè)雌激素受體（ER)、孕激素受體（PR)、 Bcl-2/Bax蛋白在子宮肌層組織中的表達(dá)情況，探討本發(fā)明藥物組合物治療子宮肌瘤的作 用效果與作用機(jī)制。
[0023] -、材料與方法 1.動(dòng)物雌性未孕SD大鼠，體質(zhì)量200?250g，由南京中醫(yī)藥大學(xué)二級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室 飼養(yǎng)（SPF級(jí))，飼養(yǎng)條件：室溫（200±20) °C，相對(duì)濕度（60±5)%。實(shí)驗(yàn)飼料：湯山龍泉牌 實(shí)驗(yàn)鼠顆粒飼料。
[0024] 2.受試藥物與試劑 2. 1本發(fā)明藥物組合物：取干燥的小茴香250g、蒲黃250g、桃仁250g、鴉跖花250g，力口 5000mL水煎煮，煎煮2次，每次1小時(shí)，提取液合并，濾過(guò)，濾液濃縮，干燥，加入蒸餾水中，制 成l.Og生藥/mL濃度的溶液。
[0025] 2. 2對(duì)比藥物組合物A :取干燥的小茴香333g、蒲黃333g、桃仁333g，加5000mL 水煎煮，煎煮2次，每次1小時(shí)，提取液合并，濾過(guò)，濾液濃縮，干燥，加入蒸餾水中，制成1. 0g 生藥/mL濃度的溶液。
[0026] 2. 3對(duì)比藥物組合物B ::取干燥的蒲黃333g、桃仁333g、鴉跖花333g，加5000mL 水煎煮，煎煮2次，每次1小時(shí)，提取液合并，濾過(guò)，濾液濃縮，干燥，加入蒸餾水中，制成1. 0g 生藥/mL濃度的溶液。
[0027] 2. 4對(duì)比藥物組合物C :取干燥的桃仁333g、鴉跖花333g、小茴香333g，加5000mL 水煎煮，煎煮2次，每次1小時(shí)，提取液合并，濾過(guò)，濾液濃縮，干燥，加入蒸餾水中，制成1. 0g 生藥/mL濃度的溶液。
[0028] 2. 5對(duì)比藥物組合物D :取干燥的鴉跖花333g、小茴香333g、蒲黃333g，加5000mL 水煎煮，煎煮2次，每次1小時(shí)，提取液合并，濾過(guò)，濾液濃縮，干燥，加入蒸餾水中，制成1. 0g 生藥/mL濃度的溶液。
[0029] 2.6對(duì)比藥物組合物E:取干燥的小茴香 200g、蒲黃 200g、桃仁 200g、鴉跖花 200g、川楝子200g，加5000mL水煎煮，煎煮2次，每次1小時(shí)，提取液合并，濾過(guò)，濾液濃縮， 干燥，加入蒸餾水中，制成1. 〇g生藥/mL濃度的溶液。
[0030] 2. 7對(duì)比藥物組合物F:取干燥的小茴香200g、蒲黃200g、桃仁200g、鴉跖花 200g、當(dāng)歸200g，加5000mL水煎煮，煎煮2次，每次1小時(shí)，提取液合并，濾過(guò)，濾液濃縮，干 燥，加入蒸餾水中，制成1. 〇g生藥/mL濃度的溶液。
[0031] 2.8對(duì)比藥物組合物6:取干燥的小茴香20(^、蒲黃20(^、桃仁20(^、鴉跖花 200g、木香200g，加5000mL水煎煮，煎煮2次，每次1小時(shí)，提取液合并，濾過(guò)，濾液濃縮，干 燥，加入蒸餾水中，制成1. 〇g生藥/mL濃度的溶液。
[0032] 2.9陽(yáng)性對(duì)照藥物桂枝茯苓膠囊：江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，規(guī)格： 〇. 31g。將桂枝茯苓膠囊內(nèi)藥物加入蒸餾水中制成0. 04g/mL濃度的溶液。
[0033] 2. 10兔抗大鼠 ER、PR、Bcl-2、Bax多克隆抗體：購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公 司。
[0034] 3.造模與分組 3. 1造模 以雌、孕激素負(fù)荷法建立大鼠實(shí)驗(yàn)性子宮肌瘤模型，選用SD大鼠，隨機(jī)分為子宮肌瘤 造模組及空白對(duì)照組兩組。造模方法參照文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)（易明娟.宮寧口服液治療子宮肌瘤 的實(shí)驗(yàn)研究.中藥藥理與臨床，1996,12 (4) :41-43)，造模組給予肌肉注射苯甲酸雌二醇 0. 06mL/只（含藥量0. 12mg)，3次/周（周一、三、五)，共16周，第10周起加黃體酮0. 05mL/ 只（含藥量lmg)，2次/周（周二、四），共7周?？瞻讓?duì)照組給與肌肉注射高溫滅菌花生油 0.05mL/只，3次/周，共16周。與空白對(duì)照組相比，模型組大鼠的子宮平滑肌增生明顯，兩 者有顯著差異（P < 〇. 001)，說(shuō)明該方案造模成功。
[0035] 3.2 分組 造模結(jié)束后，隨機(jī)分為模型組12只、桂枝茯苓膠囊組12只，本發(fā)明藥物組合物組12 只、對(duì)比藥物組合物A組12只、對(duì)比藥物組合物B組12只、對(duì)比藥物組合物C組12只、對(duì) 比藥物組合物D組12只，對(duì)比藥物組合物E組12只，對(duì)比藥物組合物F組12只，對(duì)比藥物 組合物G組12只，另設(shè)空白對(duì)照組(滅菌花生油造模）12只。
[0036] 4.給藥 造模結(jié)束后灌胃給藥。本發(fā)明藥物組合物給予本發(fā)明藥物組合物l〇g生藥/kg，對(duì)比藥 物組合物A組給予對(duì)比藥物組合物A 10g生藥/kg,對(duì)比藥物組合物B組給予對(duì)比藥物組合 物B 10g生藥/kg，對(duì)比藥物組合物C組給予對(duì)比藥物組合物C 10g生藥/kg，對(duì)比藥物組 合物D給予對(duì)比藥物組合物D 10g生藥/kg，對(duì)比藥物組合物E給予對(duì)比藥物組合物E 10g 生藥/kg，對(duì)比藥物組合物F給予對(duì)比藥物組合物F 10g生藥/kg，對(duì)比藥物組合物G給予 對(duì)比藥物組合物G 10g生藥/kg,桂枝獲茶膠囊組給桂枝獲茶膠囊溶液0. 6g/kg，模型組、對(duì) 照組給予飲用水。各組給藥體積均為2mL/100g，l次/日（上午10:00)，共4周。末次給藥 后晚20點(diǎn)各組大鼠禁食14h，次日晨各組大鼠10%水合氯醛靜脈麻醉后頸動(dòng)脈取血，取血 后采用頸椎脫白方法處死大鼠并取子宮，10%磷酸緩沖福爾馬林固定。
[0037] 5.觀察指標(biāo) 5.1子宮組織形態(tài)學(xué)觀察以10%福爾馬林固定子宮，石蠟包埋切片，HE染色，顯微鏡 下觀察子宮組織學(xué)形態(tài)變化。平滑肌細(xì)胞增生程度評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)： (-):子宮肌層未見(jiàn)增厚，未見(jiàn)有炎性浸潤(rùn)，結(jié)構(gòu)正常。
[0038] ( + ):子宮肌層增厚不明顯，輕度炎性浸潤(rùn)。
[0039] (++):子宮肌層輕度增厚，炎細(xì)胞浸潤(rùn)較明顯。
[0040] (+++):子宮肌層明顯增厚，炎細(xì)胞浸潤(rùn)較重。
[0041] 5.2免疫組織學(xué)觀察 用免疫組化法檢測(cè)子宮肌瘤細(xì)胞內(nèi)ER、PR、Bcl-2/Bax在子宮肌瘤組織中的表達(dá)情況。 ER :雌激素是子宮肌瘤生長(zhǎng)的主要刺激因素，并發(fā)現(xiàn)雌激素是通過(guò)其受體而發(fā)揮作用的。 PR :孕激素在子宮肌瘤的發(fā)病中有重要作用，與雌激素起協(xié)調(diào)作用。孕激素受體介入與肌瘤 的生長(zhǎng)有關(guān)。Bcl-2和Bax :Bcl-2是一種原癌基因，可阻止凋亡并延長(zhǎng)細(xì)胞壽命，Bax基因 能對(duì)抗Bcl-2的活性，有直接促進(jìn)凋亡的功能。
[0042] 分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：綜合陽(yáng)性細(xì)胞所占比例和染色強(qiáng)度進(jìn)行半定量判定。染色強(qiáng)度按下列 標(biāo)準(zhǔn)評(píng)定： 陰性為0分； 染色雖弱但明顯強(qiáng)于陰性對(duì)照者為1分； 染色強(qiáng)度中等者為2分； 染色強(qiáng)者為3分。
[0043] 染色的陽(yáng)性細(xì)胞所占比只評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)為： 陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)〈5%為陰性：0分； 6%?15%為弱陽(yáng)性：1分； 16%?30%者為陽(yáng)性：2分； >31%者為強(qiáng)陽(yáng)性：3分。
[0044] 綜合評(píng)分：兩種評(píng)分相加，將結(jié)果分為4個(gè)等級(jí)： 〇?1分為（-); 2分為（+ ); 3?4分為（++); 5?6分為（+++)。
[0045] 按綜合評(píng)分的等級(jí)來(lái)評(píng)價(jià)切片指標(biāo)變化情況。
[0046] 6.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 資料的統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟體進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料0
【權(quán)利要求】
1. 一種治療子宮肌瘤的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原 料制成的：小茴香1?3,蒲黃1?3,桃仁1?3,鴉跖花1?3。
2. 如權(quán)利要求1藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原料制成 的：小茴香1，蒲黃2,桃仁3,鴉妬花1。
3. 如權(quán)利要求1藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原料制成 的：小茴香2,蒲黃3,桃仁2,鴉跖花2。
4. 如權(quán)利要求1藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原料制成 的：小茴香3,蒲黃1，桃仁1，鴉妬花3。
5. 如權(quán)利要求1藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原料制成 的：小茴香1，蒲黃1，桃仁1，鴉妬花1。
6. 如權(quán)利要求1?5任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物采用藥學(xué) 中常規(guī)的制藥方法制備成口服制劑。
7. 如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物采用藥學(xué)中常規(guī)的制 藥方法制備成片劑、丸劑、硬膠囊劑、顆粒劑、口服液。
8. 如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物采用如下方法制備：取 小茴香、蒲黃、桃仁、鴉妬花，混合，加入5?10倍量的水煎煮2?4次，每次0. 5?2小時(shí)， 提取液合并，濾過(guò)，濾液濃縮，干燥，粉碎成細(xì)粉，加入輔料，混勻，裝入硬膠囊，即得。
9. 如權(quán)利要求1?5任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物在制備治 療子宮肌瘤藥物中的應(yīng)用。
10. 如權(quán)利要求1?5任意一項(xiàng)所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物在制備 治療子宮內(nèi)膜異位癥藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K36/88GK104096011SQ201410343913
【公開(kāi)日】2014年10月15日 申請(qǐng)日期:2014年7月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月19日
【發(fā)明者】吳修紅 申請(qǐng)人:吳修紅