堿性磷酸酶在治療腎功能減退中的用途

堿性磷酸酶在治療腎功能減退中的用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域且特別是堿性磷酸酶在治療如腎功能減退等腎病中的用途。本發(fā)明還涉及藥學(xué)領(lǐng)域且特別是堿性磷酸酶的藥物用途。本發(fā)明提供通過使用堿性磷酸酶來改善腎功能減退情況的備選治療。
【專利說明】堿性磷酸酶在治療腎功能減退中的用途
[0001] 本申請是申請日為2008年1月30日，申請?zhí)枮?00880003595. 9,發(fā)明名稱為"堿 性磷酸酶在治療腎功能減退中的用途"的發(fā)明專利申請的分案申請。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，且特別是堿性磷酸酶在治療如腎功能減退等腎病中的用 途。本發(fā)明還涉及藥學(xué)領(lǐng)域，且特別是堿性磷酸酶的藥物用途。

【背景技術(shù)】
[0003] 有多種腎病可以導(dǎo)致腎功能減退。急性腎衰竭（ARF)是一種可以導(dǎo)致腎功能減退 的腎病。下面對ARF進行詳述，這些描述并不限制本發(fā)明的范圍。
[0004] 急性腎衰竭（ARF)是指導(dǎo)致血清肌酸酐水平升高的急性腎功能損失。
[0005] 社區(qū)獲得性ARF的年發(fā)病率為每一百萬人口約100例，而其僅在1 %的住院者中被 診斷出。另一方面，醫(yī)院獲得性ARF發(fā)生在4%的住院者和20%的重護理住院者中。醫(yī)院 獲得性ARF發(fā)病率的增加有多方面的因素：其與患ARF風(fēng)險增加的老年人群、可能在醫(yī)院的 設(shè)置中暴露于對腎臟有害的環(huán)境的高度普遍性以及疾病嚴重性的增加有關(guān)。
[0006] 在過去的40年中，急性腎衰竭的存活率并沒有得到改善，主要原因是受其影響 的患者年齡增大且患有更多的并發(fā)癥。依據(jù)腎衰竭的嚴重性，其死亡率可以在7%至高達 80 %的范圍。
[0007] 在急性腎衰竭中，腎小球濾過率在數(shù)天至數(shù)周內(nèi)下降。結(jié)果造成含氮廢物的排泄 降低，并且不能維持體液和電解質(zhì)平衡?；加屑毙阅I衰竭的患者通常沒有癥狀，而所述病癥 是通過所觀察到的血尿素氮（BUN)和血清肌酸酐水平的上升來診斷的。當血清肌酸酐水平 每天增加至少0. 5mg/dL(等于每天44ymol/L)且每天的尿排出小于400mL(少尿癥）時， 則出現(xiàn)完全的腎機能停止。
[0008] 病理生理學(xué)：腎小球濾過的驅(qū)動力是從腎小球到腎小囊腔的壓力梯度。腎小球壓 力主要依賴于腎血流（RBF)并受控于腎入球和出球微動脈的聯(lián)合阻力。不管ARF的成因是 什么，RBF的降低代表腎小球濾過率（GFR)減小的共同病理途徑。ARF的病因包括三種主要 機制。
[0009] ?腎前性腎衰竭定義為具有正常腎小管和腎小球功能的病癥。在腎前性急性腎衰 竭中，問題是腎血流減少，這種腎血流減少由實際血管內(nèi)損耗、腎有效循環(huán)血容量的下降、 或引起腎血流減少使GFR下降的藥劑所引起。
[0010] ?腎實質(zhì)性急性腎衰竭被細分為四類：腎小管疾病、腎小球疾病、血管疾病和間質(zhì) 疾病。在腎實質(zhì)性急性腎衰竭中，腎實質(zhì)受到損傷。
[0011] ?梗阻后腎衰竭首先引起腎小管壓力增加，從而降低過濾驅(qū)動力。腎后性急性腎 衰竭僅在兩條排尿管均被阻塞，或孤立腎的排出管被阻塞時才會發(fā)生。這種病癥最通常由 下尿路的阻塞造成的。
[0012] 腎前性腎衰竭
[0013] 引起腎前性急性腎衰竭的主要藥劑是血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE)抑制劑和非甾體 抗炎藥（NSAIDs)。對ACE的抑制阻止了血管緊張素 I向血管緊張素 II的轉(zhuǎn)化，這導(dǎo)致血管 緊張素 II水平的降低。血管緊張素 II通過引起出球微動脈收縮來增加腎小球濾過率；其 缺乏使腎小球濾過率降低，這是由于出球微動脈的擴張而引起的。
[0014] 腎實質(zhì)性急性腎衰竭
[0015] 腎小管疾病
[0016] 由RBF下降引起的急性腎小管壞死是住院患者患腎實質(zhì)性急性腎衰竭的最常見 病因。腎血流的減少引起腎實質(zhì)缺血。如果長時間的缺血，就可能發(fā)展為急性腎小管壞死。 這種最初的缺血損傷引發(fā)產(chǎn)生即使在RBF恢復(fù)后還會繼續(xù)導(dǎo)致細胞損傷的氧自由基和酶。 腎小管細胞損傷導(dǎo)致細胞間緊密連接的斷裂，這使得腎小球濾出物回漏并進一步降低有效 的GFR。此外，臨終的細胞脫落進入小管，形成阻塞脫落物，這進一步降低GFR并導(dǎo)致少尿 癥。缺血性急性腎小管壞死通常是可逆的，但是如果缺血嚴重到足以引起皮質(zhì)層壞死，則會 發(fā)生不可逆的腎衰竭。
[0017] 急性腎小管壞死有三個階段。腎損傷在持續(xù)數(shù)小時至數(shù)天的起始階段中發(fā)展。在 持續(xù)數(shù)天至數(shù)周的維持階段期間，腎小球濾過率達到其最低點，且尿排出也處于其最低點。 恢復(fù)階段持續(xù)數(shù)天，通常首先出現(xiàn)后急性腎小管壞死多尿癥。在此階段還會出現(xiàn)由于過量 尿排出導(dǎo)致的血容量不足。盡管產(chǎn)尿量得到恢復(fù)，但由于腎小管功能尚未完全恢復(fù)，患者仍 面臨尿毒癥以及電解質(zhì)和酸的體內(nèi)平衡的難題。
[0018] 腎小球疾病
[0019] 導(dǎo)致ARF的最常見腎小球疾病是腎小球腎炎。腎小球腎炎的特征是高血壓、蛋白 尿和血尿。在腎小球腎炎的眾多類型中，大多數(shù)與慢性腎疾病有關(guān)。大體而言，引起急性腎 衰竭的兩類腎小球腎炎是急進性腎小球腎炎和急性增殖性腎小球腎炎。后一種類型發(fā)生在 患有細菌性心內(nèi)膜炎或其它后傳染性病癥的患者中。
[0020] 血管疾病
[0021] 微血管或大血管疾?。ㄖ饕I動脈阻塞或嚴重腹主動脈疾?。┛梢砸鸺毙阅I衰 竭。
[0022] 間質(zhì)疾病
[0023] 急性間質(zhì)性腎炎通常表現(xiàn)出發(fā)熱、皮疹和嗜曙紅細胞增多。嗜曙紅細胞為陽性的 尿染色預(yù)示患有這種病癥。急性間質(zhì)性腎炎通常是對藥物過敏性反應(yīng)的結(jié)果，但是其也可 以由自身免疫性疾病、感染或浸潤性疾病所引起。
[0024] ARF的恢復(fù)首先依賴于RBF的恢復(fù)。RBF正?；珙A(yù)示著腎功能恢復(fù)的預(yù)后更好。 在腎前性腎衰竭中，循環(huán)血量的恢復(fù)通常是充分的。在腎后性腎衰竭中，尿阻塞的快速緩解 可使血管收縮迅速下降。對于腎實質(zhì)性腎衰竭，單獨的血量恢復(fù)無法恢復(fù)腎功能。對于腎 小球或腎小管疾病，去除腎小管毒素和開始對其進行治療會降低腎入球血管收縮并可逆轉(zhuǎn) ARF。盡管正在探尋急性腎衰竭的病因，但最初的治療應(yīng)該關(guān)注于糾正體液和電解質(zhì)平衡和 尿毒癥。用鹽水復(fù)蘇體液容量不足的患者。然而，更常見的是體液容量過度負荷，特別是在 患者患少尿癥或無尿癥的情況下。
[0025] 現(xiàn)有治療的一個實例是經(jīng)靜脈施用速尿靈（Lasix)。現(xiàn)有治療中的另一個實例是 經(jīng)靜脈施用鈣。利用經(jīng)靜脈施用的胰島素（10個單位）和葡萄糖（25g)、吸入的β-激動劑 或經(jīng)靜脈施用碳酸氫鈉可以使鉀臨時移入細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)。施用聚苯乙烯磺酸鈉（Kayexalate) 和/或利尿劑來實現(xiàn)鉀的排泄。聚苯乙烯磺酸鈉口服給藥（25至50g，混合有100mL20%山 梨醇）或作為灌腸劑給藥（50g，于50mL70%山梨醇和150mL自來水中）。如果這些方法不 能控制鉀水平，則開始進行透析。
[0026] 如果血清碳酸氫鹽水平小于15mEq/L(15mmol/L)或pH小于7. 2,則通常通過靜脈 或口服施用碳酸氫鈉來治療酸中毒。也可以通過口服碳酸氫鈉片劑、30mL劑量的Shohl溶 液或粉末狀碳酸氫鈉對患者進行治療。血清碳酸氫鈉水平和pH應(yīng)該密切相關(guān)。難以減輕 的酸中毒需要進行透析。
[0027] 應(yīng)對全部藥物做出評價，并應(yīng)基于藥物的腎小球濾過率和血清水平調(diào)節(jié)它們的劑 量。
[0028] 有20%至60%的患者需要短期透析，特別是當8^超過1001^/乩(35.7臟〇1/每 升尿液）且血清肌酸酐水平超出5-10mg/dL(442-884ymol/L)的范圍時。透析的適應(yīng)癥包 括對藥理學(xué)治療無反應(yīng)的酸中毒或電解質(zhì)紊亂、對利尿劑無反應(yīng)的體液過多、和尿毒癥。對 于患進行性急性腎衰竭的患者，需要腎病學(xué)家的緊急會診。
[0029] -些上述治療導(dǎo)致（部分）恢復(fù)的腎功能。與未經(jīng)治療人群相比，其它治療導(dǎo)致 功能的改善。然而，仍需要備選的治療。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0030] 本發(fā)明的目的是提供改善腎功能的備選治療，特別是在腎功能至少部分地受損/ 減退的情況中。
[0031] 本發(fā)明提供使用堿性磷酸酶以改善腎功能減退的情況的備選治療。
[0032] 在第一實施方案中，本發(fā)明提供了堿性磷酸酶（AP)在制備改善腎功能減退的藥 物中的用途。
[0033] 術(shù)語"改善"包括使延緩減退、終止減退或至少部分地逆轉(zhuǎn)腎功能的減退。
[0034] 術(shù)語"腎功能減退"通常用于表示通過將至少一種腎相關(guān)參數(shù)的值與所述參數(shù)公 認的或平均（實驗室）值相比，而確定腎功能下降的情況。例如，如果受試者（優(yōu)選人） 尿中蛋白質(zhì)含量（顯著地）大于公認的或平均（實驗室）值，則稱此人患有"腎功能減 退"。相應(yīng)的分析可以在實驗室中進行，也可以在家中進行。例如，自2006年9月起，荷 蘭"Nierstichting"已引入了可以在家中進行的，測試腎功能是否正常的簡單測試（稱為 Niercheck)。此測試針對于尿液中蛋白質(zhì)的含量。
[0035] 可以測試的參數(shù)的其它實例是腎小球濾過率（GFR)、血清肌酸酐水平、電解質(zhì)紊 舌U產(chǎn)尿量、血尿素氮（BUN)、鈣、磷、白蛋白水平、或尿中的紅細胞和白細胞。可以進行的其 它測試是分類全血細胞計數(shù)。優(yōu)選地，對全部可能的患者進行以下尿液檢查：浸漬檢查法、 顯微鏡檢查、鈉和肌酸酐水平和尿摩爾滲透壓濃度測定。
[0036] 如本文實驗部分所公開，也可以分析尿樣品中RNA分子的存在或缺失。優(yōu)選地，所 述RNA分子是mRNA分子。更優(yōu)選地，所述mRNA分子是iNOSmRNA。在最優(yōu)選的實施方案中， 所述RNA從分泌尿的腎細胞中獲得。
[0037] 基于上述分析，確定是否受試者（優(yōu)選人）正患有腎功能減退。例如，GFR降低或 血清肌酸酐水平升高或產(chǎn)尿量下降或上述指標的任意組合是所測試的受試者需要本文所 述治療的明顯指標。
[0038] 因此，在本文所述的用途之前可以有分析步驟，例如，所述分析步驟包括從疑似患 有腎功能減退的受試者中取樣，并分析所述樣品中任何上述給出的參數(shù)（或其組合），并將 所獲得的結(jié)果與平均或公認的值進行比較。適合的樣品的實例是尿樣品或血液樣品。在對 尿和/或血液樣品的分析之外，還可以附加腎超聲檢查。在優(yōu)選的實施方案中，由醫(yī)生或在 醫(yī)生負責(zé)下進行分析。當很明確有腎功能減退時，則開始如本發(fā)明的治療。
[0039] 腎功能減退可以是不同疾病的結(jié)果。腎功能受損的許多病例導(dǎo)致輕微，無癥狀的 疾病，此疾病未被患者察覺，未引起醫(yī)學(xué)關(guān)注且仍未確診。此輕微腎功能受損事件的發(fā)病率 和流行程度尚不確定，但認為其是相當大的。然而，此輕微的功能障礙會發(fā)展為嚴重的問 題，因此早期治療（例如如本文所述）很重要。
[0040] 在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了堿性磷酸酶（AP)在制備改善腎功能減退的 藥物中的用途，其中所述腎功能減退是由腎衰竭引起的。腎衰竭是腎無法正常發(fā)揮功能的 病癥。生理學(xué)上，將腎衰竭描述為腎小球濾過率的下降。在臨床上，其表現(xiàn)為血清肌酸酐升 高。其大致分為兩類：急性腎衰竭和慢性腎衰竭。
[0041] 慢性腎衰竭（CRF)發(fā)展緩慢，并且最初幾乎不表現(xiàn)出癥狀。其可以是大量腎病如 腎小球腎炎、慢性腎盂腎炎和尿潴留的并發(fā)癥。末期腎衰竭（ESRF)是其最終的結(jié)果，在此 類病例中通常需要透析直到找到用于腎移植的供體。在急性腎衰竭中，腎功能幾乎完全被 破壞。在優(yōu)選的實施方案中，所述腎衰竭是急性腎衰竭。
[0042] 如其名稱的意思，急性腎衰竭（ARF)是腎功能的快速進行性損失，通常的特征為 少尿癥（產(chǎn)尿量下降，定量表示為成人小于400mL/天，兒童小于0. 5mL/kg/h或嬰兒小于 lmL/kg/h)、體內(nèi)水分和體液失調(diào)以及電解質(zhì)紊亂。由于其病癥的嚴重性，患有急性腎衰竭 的患者通常需要住院治療。目前，必需確定根本病因以阻止疾病進程，并且需要透析來彌補 治療這些根本病因所需的時間間隔。基于本發(fā)明，即便不知道其根本病因，就可以立即開始 使用堿性磷酸酶的治療，而且不浪費寶貴時間。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了堿性磷 酸酶（AP)在制備改善腎功能減退的藥物中的用途，其中所述腎功能減退是由于腎衰竭所 引起或維持或加重的，且其中腎衰竭是急性腎衰竭，即在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了 堿性磷酸酶（AP)在制備治療由急性腎衰竭（ARF)所引起或維持或加重的腎功能減退的藥 物中的用途。
[0043] 急性腎衰竭可以在慢性腎衰竭的基礎(chǔ)上存在。這被稱為慢性腎衰竭基礎(chǔ)上的急性 腎功能衰竭（AoCRF)。AoCRF的急性部分是可逆的，且治療的目的是使患者恢復(fù)其原始的腎 功能，這通常通過血清肌酸酐來測定。在另一實施方案中，本發(fā)明因此提供了堿性磷酸酶 (AP)在制備改善腎功能減退的藥物中的用途，其中所述腎功能（進一步）下降是由于慢性 腎衰竭基礎(chǔ)上的急性腎功能衰竭引起的。
[0044] 在另一優(yōu)選的實施方案中，腎功能減退是可逆的，即通過根據(jù)本發(fā)明的治療可以 至少使腎功能在某種程度上得到改善。
[0045] 如 Agrawal 和 Swartz(American Family Physician, Aprill，2000volume61，no7 ; cover story)所述，急性腎衰竭的病因可以通過使用步進式方法來確定?；诖宋恼?，技 術(shù)人員能夠很好地將患者細分到3個ARF類別中的任意一個，即確定是否患者患有腎前性 ARF、腎實質(zhì)性ARF或腎后性ARF。
[0046] 例如，診斷腎實質(zhì)性ARF通?；诓∈泛蜕眢w檢查、大于3 %的鈉排泄分數(shù)、 250-300m0sm的尿摩爾滲透壓濃度、活性尿沉淀物來確定。在腎實質(zhì)性急性ARF中，腎實質(zhì) 受到損傷。腎小管細胞的損傷導(dǎo)致某些特定的尿顯微鏡檢查結(jié)果。實質(zhì)損傷引起鈉再吸收 受損并導(dǎo)致上述參數(shù)，例如大于3 %的鈉排泄分數(shù)和250-300m0sm等滲壓的尿摩爾滲透壓 濃度。腎實質(zhì)性急性腎衰竭被細分為四類：腎小管疾病、腎小球疾病、血管疾病和間質(zhì)疾病。
[0047] 急性腎小管壞死是住院患者中腎實質(zhì)性急性腎衰竭的最主要病因。此病癥通常由 缺血或毒素所引起。與腎前性急性腎衰竭不同，在缺血性急性腎小管壞死中，腎小球濾過率 不隨腎血流的恢復(fù)而改善。缺血性急性腎小管壞死通常是可逆的，但是如果缺血嚴重到足 以引起皮質(zhì)層壞死，則會發(fā)生不可逆的腎衰竭。造影劑和抗生素，特別是氨基糖苷是與急性 腎小管壞死最相關(guān)的藥劑。該病癥也可以由來自肌紅蛋白尿（橫紋肌溶解）或血紅蛋白尿 (溶血）中的色素引起。急性腎小管壞死有3個階段。腎損傷在持續(xù)數(shù)小時至數(shù)天的起始 階段中發(fā)展。在持續(xù)數(shù)天至數(shù)周的維持階段期間，腎小球濾過率達到其最低點，且尿排出也 處于其最低點?；謴?fù)階段持續(xù)數(shù)天，通常首先出現(xiàn)后急性腎小管壞死多尿癥。在此階段還 會出現(xiàn)由于過量尿排出導(dǎo)致的血容量不足。盡管產(chǎn)尿量恢復(fù)，但由于腎小管功能尚未完全 恢復(fù)，患者仍面臨尿毒癥和電解質(zhì)和酸的體內(nèi)平衡的難題。持續(xù)監(jiān)測應(yīng)貫穿于急性腎小管 壞死的全部階段。有患急性腎小管壞死風(fēng)險的患者包括那些患有糖尿病、充血性心力衰竭 或慢性腎功能不全的患者?？梢酝ㄟ^迅速治療帶有缺血性或腎前性急性腎衰竭的可逆病因 的患者，并通過在接受腎毒素的患者中保持適當?shù)乃蟻眍A(yù)防急性腎小管壞死。一旦急性 腎小管壞死發(fā)展，則要進行輔助治療。藥物如甘露醇、袢利尿劑、多巴胺和鈣通道阻斷劑在 促進動物利尿上取得了一些成功，但是在人類中并未獲得類似的結(jié)果。
[0048] 在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了堿性磷酸酶（AP)在制備改善腎功能減退的 藥物中的用途，其中所述腎功能減退是由于腎衰竭（優(yōu)選急性腎衰竭）所引起，且其中所述 腎功能減退是由于腎實質(zhì)性急性腎衰竭（優(yōu)選急性腎小管壞死）所引起或維持或加重的。 艮P，本發(fā)明還提供了堿性磷酸酶（AP)在制備治療急性腎小管壞死的藥物中的用途。
[0049] 腎小球腎炎的特征是高血壓、蛋白尿和血尿。腎小球腎炎通常被描述為腎小球發(fā) 炎。在腎小球腎炎的眾多類型中，大多數(shù)與慢性腎疾病有關(guān)。大體而言，引起急性腎衰竭的 兩類腎小球腎炎是急進性腎小球腎炎和急性增殖性腎小球腎炎。后一種類型發(fā)生在患有細 菌性心內(nèi)膜炎或其它后傳染性病癥的患者中。急進性腎小球腎炎可以是原發(fā)疾病，或其可 以在全身疾病后發(fā)生。一旦懷疑有此病癥，必需通過血清學(xué)標記物或腎活檢來檢查可治療 的全身疾病。腎功能在急進性腎小球腎炎患者中快速下降，且在數(shù)天至數(shù)周內(nèi)后會發(fā)展為 末期腎疾病。通常用糖皮質(zhì)激素和環(huán)磷酰胺（Cytoxan)治療急進性腎小球腎炎患者。人們 認為血漿交換對Goodpasture綜合癥患者有利，但尚未證實其也對其它類型的腎小球腎炎 患者有利。
[0050] 此類型的ARF也可以使用堿性磷酸酶來治療，因此，在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明 提供了堿性磷酸酶（AP)在制備改善腎功能減退的藥物中的用途，其中所述腎功能減退是 由于腎衰竭（優(yōu)選急性腎衰竭）所引起，且其中所述腎功能減退是由于腎實質(zhì)性急性腎衰 竭（優(yōu)選腎小球腎炎）所引起或維持或加重的。即，本發(fā)明還提供了堿性磷酸酶（AP)在制 備治療腎小球腎炎的藥物中的用途。
[0051] -般的腎衰竭和具體的急性腎衰竭可以因不同的根本誘因而發(fā)生，或在不同 疾病的病程中發(fā)展，所述疾病如缺血、造影劑色素、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、小血管血管炎、 Henoch- Sch0nleill紫癜、Goodpasture綜合癥、心內(nèi)膜炎、后鏈球菌感染、后肺炎球菌感染、 糖尿病、高血壓、動脈粥樣硬化或癌癥。已知使用某些抗微生物劑（如兩性霉素 B、卡泊芬 凈、萬古霉素、左氧氟沙星和氨基糖苷，如托普霉素和慶大霉素）、其它藥物（如化療藥劑 (如順鉬、卡鉬、甲氨蝶呤）、蛋白酶抑制劑（如茚地那韋和利托那韋）、金、鋰、抗炎藥（如非 甾體抗炎藥、環(huán)孢菌素、他克莫司、西羅莫司）、血壓藥（如血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE)抑制劑 和血管緊張素受體阻斷劑（ARB))、和某些化學(xué)品（如硅酸鹽、烴、重金屬（如0(1、!^、？13)、殺 蟲劑、除草劑、乙二醇和細菌毒素（如破傷風(fēng)、鏈球菌毒素））也可以引起服用或接觸所述藥 劑或化學(xué)品的受試者腎功能減退。
[0052] 本發(fā)明可以用于治療由任何上述誘因所引起或維持或加重的腎功能減退。因此， 在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了堿性磷酸酶（AP)在制備改善腎功能減退的藥物中的 用途，其中所述腎功能減退是由于藥物、藥劑和/或毒素所引起或維持或加重的，所述藥 物、藥劑和/或毒素優(yōu)選自由以下組成的組：抗生素、蛋白酶抑制劑、化療藥劑、抗炎藥、血 壓藥、殺蟲劑、除草劑、乙二醇、造影劑、重金屬和細菌毒素。
[0053] 在另一優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明提供了堿性磷酸酶（AP)在制備改善腎功能減退 的藥物中的用途，其中所獲得的腎功能改善并非通過AP對LPS解毒的結(jié)果。
[0054] 在更優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了堿性磷酸酶（AP)在制備改善腎功能減退 的藥物中的用途，其中所述腎功能減退是由于腎血流下降和/或缺血所引起或維持或加重 的。所述腎血流下降和/或缺血優(yōu)選是由于脫水、心力衰竭、感染性休克、嚴重失血、高血 壓、動脈粥樣硬化和/或血栓形成所引起或維持或加重的。
[0055] 在另一優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明提供了堿性磷酸酶（AP)在制備改善腎功能減退 的藥物中的用途，其中所述腎功能減退是由于腎血流下降和/或缺血所引起或維持或加 重的，其中所述腎血流下降和/或缺血優(yōu)選是由于藥物或藥劑或毒素所引起或維持或加 重的，所述藥物、藥劑和/或毒素優(yōu)選自由以下物質(zhì)組成的組：抗炎藥（最優(yōu)選非留體抗 炎藥）和血壓藥（最優(yōu)選血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE)抑制劑和/或血管緊張素受體阻斷劑 (ARB))。
[0056] 本發(fā)明還提供了堿性磷酸酶（AP)在制備治療或預(yù)防由于（腎）誘導(dǎo)型N0合酶 (iNOS)表達增加所引起的腎功能減退的藥物中的用途。此治療在所謂早期腎損傷/衰竭 的治療中十分有用，且因此可以用于如治療或預(yù)防早期腎病。需要此治療的人群可以很容 易通過測定iNOS含量并將獲得的值與平均水平比較來確定。通過向被診斷為早期腎損傷 /衰竭的個人施用有效量的堿性磷酸酶，可以降低腎iNOS的含量。本發(fā)明人已經(jīng)確定堿性 磷酸酶治療導(dǎo)致腎細胞中iNOS mRNA表達增加的減緩，從而導(dǎo)致N0代謝物尿排泄的減少。 AP治療緩解炎癥反應(yīng)，從而導(dǎo)致對腎iNOS表達誘導(dǎo)的減少，這引起N0代謝物產(chǎn)量減少和鄰 近腎小管損傷的減少。
[0057] 腎衰竭通常伴隨有分泌到尿中的腎細胞的結(jié)構(gòu)損傷。從尿樣品中分離這些細胞和 隨后進行RNA合成分析為腎功能、腎損傷和損傷最終逆轉(zhuǎn)提供了有用的監(jiān)測工具。在實施 例1中，將分泌尿的腎細胞中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS)mRNA的表達用作為腎衰竭的標志 物，且由此可將其用于監(jiān)測損傷和由AP治療所引起的損傷逆轉(zhuǎn)。損傷的根本機制是iNOS 誘導(dǎo)活性氧化物產(chǎn)物（reactive oxide species, R0S)，從而導(dǎo)致腎泄漏。使用此方法可以 監(jiān)測通過iNOS下調(diào)而導(dǎo)致的對ROS的誘導(dǎo)的減少。
[0058] 在另一實施方案中，本發(fā)明提供了 AP在制備改善腎功能減退的藥物中的用途，進 一步包括分析尿樣品中RNA分子的存在或缺失。優(yōu)選地，所述RNA分子是mRNA分子。更優(yōu) 選地，所述mRNA分子是iNOS mRNA。在最優(yōu)選的實施方案中，所述RNA從分泌尿的腎細胞中 獲得。
[0059] 本發(fā)明使用堿性磷酸酶（AP)來改善腎功能減退（或損傷）。
[0060] 堿性磷酸酶（AP)(根據(jù)IUBMB酶命名法為EC3. 1. 3. 1，常用名為堿性磷酸酶）是催 化磷酸酶單酯和H20反應(yīng)生成醇和磷酸鹽的酶。AP的其它名稱為堿性磷酸單酯酶、磷酸單 酯酶、甘油磷酸酶、堿性磷酸水解酶、堿性苯基磷酸酶、正磷酸單酯磷酸水解酶（最適宜堿 性）。AP的系統(tǒng)名稱為磷酸單酯磷酸水解酶（最適宜堿性）。
[0061] AP是廣譜特異性酶，其也可以催化轉(zhuǎn)磷酸作用。已知在人和其它動物中至少有四 種不同但相關(guān)的堿性磷酸酶。它們是腸、胎盤、胎盤樣和肝/骨/腎（或組織非特異性）堿 性磷酸酶。前三種一起位于2號染色體上，而組織非特異性形式則位于1號染色體上。尚 不知道AP具體的生理學(xué)功能，但AP似乎參與大量生理學(xué)過程。
[0062] AP的來源可以是商業(yè)的AP酶、或包含AP酶的任何組合物、和能生產(chǎn)本發(fā)明所述功 能性AP酶的任何手段，如編碼AP蛋白質(zhì)的DNA或RNA核酸。可以將編碼AP的核酸插入到 適合的載體中，如質(zhì)粒、噬菌粒、噬菌體、（逆轉(zhuǎn)錄）病毒、轉(zhuǎn)座子、基因治療載體和能夠誘導(dǎo) 或使AP產(chǎn)生的其它載體。此外天然或重組微生物，如細菌、真菌、原生動物和酵母也可以用 作本發(fā)明所述AP的來源。
[0063] 根據(jù)本發(fā)明所用的包含AP的組合物優(yōu)選包含真核生物AP，更優(yōu)選哺乳動物AP，其 類型可以是組織非特異性AP，如肝-骨或腎類型、或組織特異性，如胎盤AP、腸 AP、胎盤樣 AP。后者也被稱為生殖細胞AP，其位于睪丸、胸腺和某些生殖細胞腫瘤（1)，且與胎盤和腸 形式的堿性磷酸酶緊密相關(guān)（2)。技術(shù)人員能夠熟練地搜索核酸文庫并選擇編碼堿性磷酸 酶的序列。最優(yōu)選地，哺乳動物AP是人或牛AP。因此，在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了 堿性磷酸酶（AP)在制備改善腎功能減退的藥物中的用途，其中所述AP是哺乳動物AP，且更 優(yōu)選地所述AP是人AP。人AP序列的非限定性實例可以在NCBI (Genp印t)集合中找到，且 其包括 NP_001622 (腸 AP)、NP_001623 (胎盤 AP)、NP_112603 (胎盤樣 AP)或 NP_000469 (組 織非特異性AP)。本發(fā)明還包括任何所述序列多態(tài)性的用途。在另一優(yōu)選的實施方案中，所 述AP是胎盤AP、胎盤樣AP、腸 AP或肝/骨/腎AP。
[0064] 在另一優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明提供了 AP在制備改善腎功能減退的藥物中的 用途，其中所述AP是重組的AP。
[0065] 在構(gòu)象方面，堿性磷酸酶大致由兩個結(jié)構(gòu)域構(gòu)成：花冠結(jié)構(gòu)域和活性位點結(jié)構(gòu)域。 活性位點結(jié)構(gòu)域可以分為單獨的部分，如催化殘基和三個金屬離子位點（Znl、Zn2和Mg3)。 從一級結(jié)構(gòu)看，很明顯花冠結(jié)構(gòu)域與形成活性位點結(jié)構(gòu)域的氨基酸側(cè)面連接。堿性磷酸酶 的氨基酸序列和催化和花冠結(jié)構(gòu)域的相對位置是技術(shù)人員已知的。例如，以圖10作為參 考，所述圖10中顯示出四條人堿性磷酸酶的氨基酸序列。這些序列中的花冠結(jié)構(gòu)域用下劃 線標出。
[0066] 堿性磷酸酶存在于從細菌到人類的幾乎所有生物體中。在優(yōu)選的實施方案中，提 供了根據(jù)本發(fā)明的方法，其中AP是包含花冠結(jié)構(gòu)域和催化結(jié)構(gòu)域的分離或重組的堿性磷 酸酶，其中所述花冠結(jié)構(gòu)域和所述催化結(jié)構(gòu)域可以從不同的堿性磷酸酶獲得，且其中所述 不同的磷酸酶中的至少一個是人磷酸酶。其它磷酸酶是如ECAP(大腸桿菌（Escherichia coli)堿性磷酸酶）或七個已知BIAP (牛腸堿性磷酸酶）中的一個。在優(yōu)選的實施方案中， 使用包含花冠結(jié)構(gòu)域和催化結(jié)構(gòu)域的分離或重組的堿性磷酸酶，其中所述花冠結(jié)構(gòu)域和所 述催化結(jié)構(gòu)域獲得自不同的堿性磷酸酶，且其中不同的堿性磷酸酶是人磷酸酶。這一點在 將修飾的磷酸酶隨后用在人治療中的情況下特別有用。希望此（遺傳）修飾的人源磷酸酶 沒有免疫原性或免疫原性很低。然而，技術(shù)人員清楚如果將修飾的磷酸酶用在如"體外"或 "離體"診斷中，修飾的磷酸酶可以由如人和大腸桿菌堿性磷酸酶構(gòu)成，或可以由牛和大腸 桿菌堿性磷酸酶構(gòu)成。
[0067] 在另一優(yōu)選的實施方案中，提供了根據(jù)本發(fā)明的方法，其中AP是包含花冠結(jié)構(gòu)域 和催化結(jié)構(gòu)域的分離或重組的堿性磷酸酶，其中所述花冠結(jié)構(gòu)域和所述催化結(jié)構(gòu)域可以從 不同的堿性磷酸酶獲得，且其中所述花冠結(jié)構(gòu)域是胎盤AP(ALPP)的花冠結(jié)構(gòu)域，且其中所 述催化結(jié)構(gòu)域是腸 AP(ALPI)的催化結(jié)構(gòu)域。優(yōu)選地，所述不同的磷酸酶中的至少一個是人 磷酸酶，且在更優(yōu)選的實施方案中，兩個不同的磷酸酶都是人磷酸酶。
[0068] 基于人堿性磷酸酶的其它優(yōu)選的結(jié)構(gòu)域交換突變體為：
[0069]

【權(quán)利要求】
1. 堿性磷酸酶（AP)在制備改善腎功能減退的藥物中的用途。
2. 如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述腎功能是由腎衰竭引起減退的。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的用途，其中所述腎功能減退是由急性腎衰竭所引起或維持 或加重的。
4. 如權(quán)利要求1至3中任一項所述的用途，其中所述腎功能減退是由于腎實質(zhì)性急性 腎衰竭所引起或維持或加重的。
5. 如權(quán)利要求4所述的用途，其中所述腎實質(zhì)性急性腎衰竭是急性腎小管壞死。
6. 如權(quán)利要求4所述的用途，其中所述腎實質(zhì)性急性腎衰竭是腎小球腎炎。
7. 如權(quán)利要求1至6中任一項所述的用途，其中所述腎功能減退是由于藥物、藥劑和/ 或毒素所引起或維持或加重的。
8. 如權(quán)利要求7所述的用途，其中所述藥物或藥劑或毒素選自由以下物質(zhì)組成的組 中：抗生素、蛋白酶抑制劑、化療藥劑、抗炎藥、血壓藥、殺蟲劑、除草劑、乙二醇、造影劑、重 金屬和細菌毒素。
9. 如權(quán)利要求1至8中任一項所述的用途，其中所述腎功能減退是由于腎血流減少和 /或缺血所引起或維持或加重的。
10. 如權(quán)利要求9所述的用途，其中所述腎血流下降和/或缺血是由于脫水、心力衰竭、 感染性休克、嚴重失血、高血壓、動脈粥樣硬化和/或血栓形成所引起或維持或加重的。
11. 如權(quán)利要求9所述的用途，其中所述腎血流減少和/或缺血是由于藥物或藥劑或毒 素所引起或維持或加重的。
12. 如權(quán)利要求11所述的用途，其中所述藥物或藥劑或毒素選自由以下物質(zhì)組成的組 中：血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE)抑制劑和非留體抗炎藥（NSAIDs)。
13. 如權(quán)利要求1至12中任一項所述的用途，其中所述AP是哺乳動物AP。
14. 如權(quán)利要求1至13中任一項所述的用途，其中所述AP是人AP。
15. 如權(quán)利要求1至14中任一項所述的用途，其中所述AP是胎盤AP、胎盤樣AP、腸 AP 或肝/骨/腎AP。
16. 如權(quán)利要求1至15中任一項所述的用途，其中所述AP是重組的AP。
17. 治療患有腎功能減退的受試者（優(yōu)選人）的方法，包括向需要施用AP的受試者施 用有效量的AP。
【文檔編號】A61P13/12GK104189896SQ201410332389
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2008年1月30日 優(yōu)先權(quán)日:2007年1月30日
【發(fā)明者】魯洛夫·彼得·皮克斯, 蘇珊娜·海姆斯凱科, 馬克溫·保羅·韋爾德斯, 威蘭姆·拉本, 馬提·貝爾納杜斯·弗朗西斯庫斯·武爾費林克 申請人:安-法瑪公司