一種治療帕金森病的復(fù)方大黃藥物及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體涉及一種治療帕金森病的藥物組合物。該藥物組合物是由以下重量份的原料制成的：大黃1～3，秦艽1～3，假耬斗菜1～3。該藥物組合物采用藥學(xué)中常規(guī)的制藥方法制備成片劑、丸劑、硬膠囊劑、顆粒劑、口服液。該藥物組合物可用于制備治療帕金森病的藥物。
【專利說明】[0001] 一種治療帕金森病的復(fù)方大黃藥物及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及一種由大黃、秦艽、假耬斗菜組成的具有治療帕金森病 作用的藥物組合物。
[0003]
【背景技術(shù)】
[0004] 帕金森病（Parkinson' s disease，PD)是一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，老年人多 見，平均發(fā)病年齡為60歲左右，40歲以下起病的青年帕金森病較少見。我國65歲以上人 群ro的患病率大約是1. 7%。大部分帕金森病患者為散發(fā)病例，僅有不到10%的患者有家族 史。帕金森病最主要的病理改變是中腦黑質(zhì)多巴胺（dopamine, DA)能神經(jīng)元的變性死亡， 由此而引起紋狀體DA含量顯著性減少而致病。導(dǎo)致這一病理改變的確切病因目前仍不清 楚，遺傳因素、環(huán)境因素、年齡老化、氧化應(yīng)激等均可能參與ro多巴胺能神經(jīng)元的變性死亡 過程。
[0005] 帕金森50%?80%的病例起病隱襲，首發(fā)癥狀通常是一側(cè)手部的4?8Hz的靜止 性"捻丸樣"震顫。這種震顫在肢體靜止時最為顯著，在肢體執(zhí)行活動時減弱，在睡眠中消 失；情緒緊張或疲勞能使震顫加重，通常震顫在雙手，雙臂與雙腿最為嚴(yán)重，癥狀出現(xiàn)的先 后順序也是手部最早，腿部最遲，下頜、舌頭、前額與眼瞼也能出現(xiàn)震顫，但發(fā)聲不受影響， 許多病人只表現(xiàn)僵直；帕金森病患者出現(xiàn)震顫，僵直進(jìn)展性加重，動作變得愈來愈慢(動作 緩慢)，愈來愈少(動作過少)，愈來愈難發(fā)動(動作缺失)。僵直再加上動作過少可能促成肌 肉酸痛與疲乏的感覺。面無表情，成為面具臉，口常張開，眨眼減少，可能造成與抑郁癥相 混淆，軀體姿勢前屈。病人發(fā)現(xiàn)開步很困難；步態(tài)拖曳，步距縮小，兩上肢齊腰呈固定屈曲 位，行走時兩上肢沒有自然的擺動，步態(tài)可以出現(xiàn)并非有意的加速，病人為了避免跌倒而轉(zhuǎn) 入奔走，出現(xiàn)慌張步態(tài)。由于姿勢反射的喪失，病人身體的重心可發(fā)生移位而出現(xiàn)前沖或后 沖。講話聲音減弱，出現(xiàn)特征性的單調(diào)而帶口吃狀的吶吃。動作過少加上對遠(yuǎn)端肌肉控制 的障礙可引起寫字過小癥以及執(zhí)行日常生活活動時日益加重的困難，大約50%的病例有癡 呆癥狀，而且抑郁癥也屬常見。
[0006] 帕金森病的起病緩慢，早期癥狀并不十分明顯，且存在個體差異，一般分以下四種 情況： (1)靜止性震顫：震顫往往是發(fā)病最早期的表現(xiàn)，通常會出現(xiàn)單側(cè)手指搓丸樣運(yùn)動，其 后會發(fā)展為同側(cè)下肢和對側(cè)肢體在靜止時出現(xiàn)不自主的有節(jié)律顫抖，早期在變換位置或運(yùn) 動時，癥狀可減輕或停止。震顫會隨情緒變化而加劇。
[0007] (2)肌強(qiáng)直：早期多從單側(cè)肢體開始，患者感覺關(guān)節(jié)僵硬及肌肉發(fā)緊。影響到面肌 時，會出現(xiàn)表情呆板的"面具臉"；影響到軀干、四肢及髖膝關(guān)節(jié)呈特殊的屈曲姿勢。
[0008] (3)運(yùn)動遲緩：早期患者上肢的精細(xì)動作變慢，如系鞋帶、扣紐扣等動作比以前緩 慢許多，甚至無法順利完成。寫字也逐漸變得困難，筆跡彎曲，越寫越小，稱為"小寫癥"。
[0009] (4)姿勢和步態(tài)異常：由于四肢、軀干、頸部肌肉強(qiáng)直使患者站立時呈現(xiàn)特殊屈曲 的姿勢，頭前傾，軀干腹屈，肘關(guān)節(jié)屈曲，腕關(guān)節(jié)伸直，前部內(nèi)收，髖和膝關(guān)節(jié)略彎曲。行走時 起步困難，一旦開步，身體前傾，步伐小而越走越快，不能及時停步，即"慌張步態(tài)"。行進(jìn)中， 患側(cè)上肢的協(xié)同擺動減少以至消失；轉(zhuǎn)身困難，以致要用連續(xù)數(shù)個小碎步才可。
[0010] 此外，有時患者還會合并出現(xiàn)語言減少和聲音低沉單調(diào)、吞咽困難、流涎、睡眠障 礙、抑郁或癡呆等癥狀。
[0011] 本發(fā)明提供了一種治療帕金森病的藥物組合物，研究表明該組合物對帕金森病具 有較好的治療效果。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0012] 本發(fā)明的目的是提供一種治療帕金森病的藥物組合物。
[0013] 本發(fā)明的另一目的是提供藥物組合物的制備方法。
[0014] 本發(fā)明的還提供該藥物組合物在制備治療帕金森病以及老年癡呆藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明的目的是通過以下方式實現(xiàn)的： 一種治療帕金森病的藥物組合物，是由以下重量份的原料制成的：大黃1?3,秦艽 1?3,假耬斗菜1?3。
[0016] 所述藥物組合物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的：大黃1，秦艽2,假耬斗菜3。 [0017] 所述藥物組合物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的：大黃2,秦艽3,假耬斗菜2。 [0018] 所述藥物組合物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的：大黃3,秦艽1，假耬斗菜1。 [0019] 所述藥物組合物采用藥學(xué)中常規(guī)的制藥方法制備成口服制劑。
[0020] 所述藥物組合物制備成的口服制劑為片劑、丸劑、硬膠囊劑、顆粒劑、口服液。
[0021] 所述藥物組合物優(yōu)選采用如下方法制備：取大黃、秦艽、假耬斗菜，混合，加入5? 10倍量的水煎煮2?4次，每次0. 5?2小時，提取液合并，濾過，濾液濃縮，干燥，粉碎成細(xì) 粉，加入輔料，混勻，裝入硬膠囊，即得。
[0022] 所述藥物組合物可用于制備治療帕金森病的藥物。
[0023] 所述藥物組合物還可用于制備治療老年癡呆癥的藥物。
[0024] 本發(fā)明所述的藥物組合物中的大黃，為寥科大黃屬植物掌葉大黃、唐古特大黃或 藥用大黃的根莖及根。掌葉大黃，Rheum. palmatumL·，多年生高大草本。根莖粗壯。莖直 立，1? 2米左右，中空，光滑無毛。基生葉大，有粗壯的肉質(zhì)長柄，約與葉片等長；葉片寬心形 或近厘巡，徑達(dá)40cm以上，3?7掌狀深裂，每裂片常再羽狀分裂，上面流生乳頭狀小突起， 下面有柔毛；莖生葉較小，有短柄；托葉鞘筒狀，密生短柔毛?；ㄐ虼髨A錐狀，頂生；花梗纖 細(xì)，中下部有關(guān)節(jié)。花紫紅色或帶紅紫色；花被片6,長約1. 5_，成2輪；雄蕊9 ;花柱3。瘦 果有3棱，沿棱生翅，頂端微凹陷，基部近心形，暗褐色。花期6?7月，果期7?8月。生 于山地林緣或草坡，喜歡陰濕的環(huán)境，野生或栽培。分布于陜西、甘肅東南部、青海、四川西 部、云南西北部及西藏東部。唐古特大黃，R.palmatumL. Var.tanguticumMaxim. exRegel. [R.tanguticumMaxin. Ex. Balf·]，多年生高大草本，高2米左右。莖無毛或有毛。根生葉 略呈圓形或?qū)捫男?，直?0?70厘米，3?7掌狀深裂，裂片狹長，常再作羽狀淺裂，先端銳 尖，基部心形；莖生葉較小，柄亦較短。圓錐花序大形，幼時多呈濃紫色，亦有綠白色者，分枝 緊密，小枝挺直向上；花小，具較長花梗；花被6, 2輪；雄蕊一般9枚；子房三角形，花柱3。 瘦果三角形，有翅，頂端圓或微凹，基部心形。花期6?7月。果期7?8月。本種與掌葉 大黃極相似，主要區(qū)別為：葉片深裂，裂片常呈三角狀披針形或狹線形，裂片窄長?；ㄐ蚍种?緊密，向上直立，緊貼干莖。生于山地林緣較陰濕的地方。分布于四川、西藏東北部、甘肅、 青海。藥用大黃，R. officinale Bail 1.，本種與上2種的主要不同點是：基生葉5淺裂，淺裂 片呈大齒形或?qū)捜切?；托葉鞘膜質(zhì)，較透明，上有短毛?；ㄝ^大，淡黃綠色，花蕾橢圓形，果 枝開展，翅果邊緣不透明。生于山地林緣或草坡。分布于河南系部、湖北西部、四川、貴州、 云南、陜西、甘肅等地。性味：苦，寒。功效：攻積滯；清濕熱；瀉火；涼血；祛瘀；解毒。主治： 實熱便秘；熱結(jié)胸痞；濕熱瀉??；黃疸；淋病冰腫腹?jié)M；小便不利；目赤；咽喉腫痛；口舌生 瘡；胃熱嘔吐；吐血；咯血；衄血；便血；尿血；蓄血；經(jīng)閉；產(chǎn)后瘀滯腹痛；癥瘕積聚；跌打 損傷；熱毒癰瘍；丹毒;燙傷。
[0025] 本發(fā)明所述的藥物組合物中的秦艽，為龍膽科龍膽屬植物秦艽、粗莖秦艽、麻花 究、或達(dá)烏里秦究的干燥根。秦究，Gentiana macrophylla Pall.，多年生草本，高20?60 厘米。主根粗長，圓柱形，上粗下細(xì)，扭曲不直，有少數(shù)分枝，中部多呈羅紋狀；根莖部有許 多纖維狀殘存基葉。莖直立或斜上，圓柱形，光滑無毛。基生葉多叢生，無柄，葉披針形或長 圓狀披針形，長達(dá)40厘米，寬3?5厘米，先端尖，全緣，主脈5條；莖生葉3?4對，對生， 基部連合?；ǘ嗉身斏扒o上部腋生的輪傘花序；花萼管一側(cè)裂開過半，萼齒淺；花冠筒 狀，深藍(lán)紫色，長約2厘米，先端5裂，裂片間有5片短小褶片；雄蕊5,著生于花冠管中部；子 房長圓狀，無柄。蒴果長圓形或橢圓形。種子橢圓形，褐色，無翅，有光澤?；ㄆ??9月。 果期8?10月。生于草地及濕坡上。分布黑龍江、遼寧、內(nèi)蒙古、河北、山西、陜西、河南、寧 夏、甘肅、青海、新疆及四川等地。粗莖秦究，G. crassicaulis Duthie ex Burk.，與上種相 似，高20?40厘米。主根莖粗大，大部或全部分裂為小根，相互纏繞扭結(jié)一起。葉片較大， 窄橢圓形或橢圓狀披針形?；ㄇo粗壯而短，稍傾斜，花多數(shù)，在莖頂簇生呈頭狀，稀腋生作 輪狀；花萼管僅于頂端一側(cè)開裂，萼齒極淺或無；花冠壺狀，黃色或藍(lán)紫色，長約3厘米，裂 片先端微尖，內(nèi)部有斑點；雄蕊5;子房長圓形，有柄。蒴果內(nèi)藏，長圓形，無柄?；ㄆ??9 月，果期9?10月。生于海拔2100?4500米的高山草甸、山坡草地、灌叢及林緣。分布于 四川、貴州、云南、西藏、甘肅、青海。麻花究，G. straminea Maxim·，與上種相似，高10?20 厘米?；~多叢生，無柄，葉片較大，披針形；莖生葉對生，較小?；ㄝ^少成聚傘花序，有長 梗；花萼筒黃綠色，膜質(zhì)，一側(cè)開裂，萼齒2?5 ;花冠管狀，黃色，漏斗形，先端5裂，裂片卵 圓形；雄蕊5,著生于花冠管中下部；子房上位，1室，有2個側(cè)膜胎座。蒴果，開裂為2個果 瓣，橢圓狀披針形。種子褐色，有光澤，狹長圓形。花期7?9月。果期8?10月。生于海 拔2000?5000米的高山、草甸、溪邊。分布于湖北、四川、西藏、甘肅、青海、寧夏。達(dá)烏里 秦究，G. dahurica Fisch.,與上一種相似，根單一或稍分枝，向左扭轉(zhuǎn)，細(xì)長圓柱形，直徑不 足1厘米。葉片長窄披針形，無柄；莖生葉較小，對生，無柄，線狀披針形至線形。花常較多 或1?3朵，頂生，成輪傘花序；花萼管部通常不開裂；裂片5,不整齊，線形，先端漸尖；花冠 深藍(lán)色；雄蕊5,花絲線狀鉆形；子房長圓形，無柄，花柱線形，柱頭2裂。蒴果橢圓形。種子 淡褐色，有光澤。花期7?8月，果期9?10月。生于海拔800?4500米的田埂、路旁、河 灘沙地、向陽山坡草地及干草原等地。分布于華北、東北、西北、四川等地。性味：辛、苦，微 寒。功能：袪風(fēng)濕，舒筋絡(luò)，清虛熱，退黃。主治：風(fēng)濕痹痛，籃胝拘攣，骨節(jié)酸痛，日晡潮熱， 小兒疳積發(fā)熱。
[0026] 本發(fā)明所述的藥物組合物中的假耬斗菜，為毛茛科擬耬斗菜屬植物擬耬斗菜的葉 或地上部分° 擬樓斗菜，Paraquilegia microphylla (Royle) Drunmm. et Hutch. [Isopyrum microphyllum Royle]，多年生草本，全株無毛。根狀莖細(xì)圓柱形或近紡錘形，粗2?6mm。 葉基生；葉柄長2. 5?11cm ;通常為一至二回三出復(fù)葉；葉片長1. 2?3cm，一回裂片具細(xì) 長柄，小葉寬菱形或腎狀寬菱形，長5?8mm，寬5?10mm，3深裂，深裂片再2?3細(xì)裂，末 回裂片倒披針形、橢圓狀倒披針形或線形，寬〇. 5?2mm。花葶1?3,長3?18cm ;苞片 2,生于花下3?33mm處，對生或近對生，倒披針形，長4?12mm，基部有膜質(zhì)鞘；花兩性， 直徑2. 8?5cm ;萼片5,花瓣狀，淡堇色或淡紫紅色，偶為白色，倒卵形或橢圓狀倒卵形，長 1. 4?2. 5cm，寬0· 9?1. 5cm，先端近圓形；花瓣5,小，倒卵形或卵狀長圓橢圓形，長約5mm, 先端微凹，下部淺囊狀；雄蕊多數(shù)，長4?7mm,花絲狹線形，花藥長0. 8?1mm ;心皮5?8， 無毛。瞢莢果，長6?11mm，_短，長約2mm。種子狹卵球形，長1. 3?1. 8mm，褐色，一側(cè)有 狹翅?；ㄆ??8月，果期8?9月。生于海拔2700-5200m的高山山地、石壁或巖石上。分 布于甘肅、青海、新疆、四川、云南、西藏。性味：味苦；澀；性寒。功能主治：活血祛瘀；斂瘡 止血。主跌打損傷；經(jīng)閉；痛經(jīng)；外傷出血；金瘡；傷口久不愈合；崩漏下血。
[0027] 通過如下實驗研究驗證本發(fā)明的技術(shù)效果： 實驗一：本發(fā)明復(fù)方大黃藥物對帕金森小鼠影響的實驗研究 帕金森病（Parkinson' s disease, PD)又名震顫麻搏。是一種常發(fā)于中老年人的慢性 神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，主要病理變化是選擇性中腦黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元喪失，紋狀體多巴胺含 量顯著性減少，導(dǎo)致錐體外系一系列癥狀。其特征是動作的緩慢與缺失，肌肉僵直，靜止性 震顫和姿勢不穩(wěn)。近年來，項目組一直致力于PD的研究，用百草枯成功制備了昆明種小鼠 的ro模型，又提出了治療ro的理論。本項研究就是觀察本發(fā)明復(fù)方大黃藥物對帕金森病 (Parkinson' sdisease，PD)小鼠的行為學(xué)、黑質(zhì)腦區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量的影響。驗證 本發(fā)明復(fù)方大黃藥物對ro (帕金森病）的療效，并為臨床上治療帕金森病（PD)提供進(jìn)一步 的依據(jù)。
[0028] 1材料與方法 1. 1材料 1. 1. 1動物昆明種雄性小鼠200只，體重35±3g，購自北京中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心。
[0029] 1. 1. 2 藥物 (1) 百草枯（paraquat，PQ):購自山東僑昌化學(xué)有限公司； (2) 秋水仙堿（0. 5mg/片）：西雙版納藥業(yè)有限公司； (3) 美多巴（250mg/片）：購自上海羅氏制藥有限公司； (4) 本發(fā)明復(fù)方大黃藥物：取干燥的大黃600g、秦艽200g、假耬斗菜200g，加5000mL水 煎煮，煎煮2次，每次1小時，提取液合并，濾過，濾液濃縮，干燥，即得。
[0030] (5)大黃提取物：取干燥的大黃1000g，加5000mL水煎煮，煎煮2次，每次1小時， 提取液合并，濾過，濾液濃縮，干燥，即得。
[0031] (6)秦艽提取物：取干燥的秦艽1000g，加5000mL水煎煮，煎煮2次，每次1小時， 提取液合并，濾過，濾液濃縮，干燥，即得。
[0032] (7)假耬斗菜提取物：取干燥的假耬斗菜1000g，加5000mL水煎煮，煎煮2次，每次 1小時，提取液合并，濾過，濾液濃縮，干燥，即得。
[0033] (8)大黃與秦艽的提取物：取干燥的大黃750g、秦艽250g，加5000mL水煎煮，煎煮 2次，每次1小時，提取液合并，濾過，濾液濃縮，干燥，即得。
[0034] (9)大黃與假耬斗菜的提取物：取干燥的大黃750g、假耬斗菜250g，加5000mL水 煎煮，煎煮2次，每次1小時，提取液合并，濾過，濾液濃縮，干燥，即得。
[0035] (10)秦艽與假耬斗菜的提取物：取干燥的秦艽500g、假耬斗菜500g，加5000mL水 煎煮，煎煮2次，每次1小時，提取液合并，濾過，濾液濃縮，干燥，即得。
[0036] 1. 1. 3試劑鹽酸、酸性正丁醇、正庚烷、PBS液等自行配制；DAB試劑盒、TH抗體I 抗等購自武漢博士德生物有限公司。
[0037] 1. 1. 4儀器小鼠轉(zhuǎn)棒測試機(jī)：浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器實驗廠；小鼠自主活動測試儀： 成都泰盟科技有限公司；熒光光度計：日本島津。
[0038] 1. 2分組及造模方法取雄性7周齡昆明種小鼠200只，適應(yīng)一周后隨機(jī)分為10 組，每組20只?？瞻讓φ战M：每天一次灌胃蒸餾水10mL · kg4小鼠體重，每周一次腹腔注 射生理鹽水10mL · kg4小鼠體重；其余9組每周一次腹腔注射PQ :10mL · kg4小鼠體重，且 每天灌胃一次秋水仙堿，按成人給藥量的4倍，即10mg 小鼠體重，持續(xù)7周造模給藥。 此外，陽性對照組：每天灌胃一次美多巴，按照成人給藥量的7. 5倍，即按125mg · kf1小鼠 體重的劑量給藥，持續(xù)給藥至造模后一周；本發(fā)明復(fù)方大黃藥物組：每天灌胃一次本發(fā)明 復(fù)方大黃藥物20g生藥· kg<小鼠體重；大黃提取物組：每天灌胃一次大黃提取物20g生 藥《kf1小鼠體重；秦艽提取物組：每天灌胃一次秦艽提取物20g生藥小鼠體重；假耬 斗菜組：每天灌胃一次假耬斗菜提取物20g生藥· kf1小鼠體重；大黃與秦艽的提取物組： 每天灌胃一次大黃與秦艽的提取物20g生藥小鼠體重；大黃與假耬斗菜的提取物組： 每天灌胃一次大黃與假耬斗菜的提取物20g生藥· kf1小鼠體重；秦艽與假耬斗菜的提取 物組：每天灌胃一次秦艽與假耬斗菜的提取物20g生藥小鼠體重；均持續(xù)給藥至造模 后一周。相同條件下飼養(yǎng)，觀察小鼠的行為學(xué)改變，然后做小鼠黑質(zhì)腦區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的 含量檢測[多巴胺（DA)、去甲腎上腺素（ΝΕ)、5-羥色胺（5-ΗΤ)]和腦組織的病理學(xué)檢測。
[0039] 1. 3檢測方法 1. 3. 1轉(zhuǎn)棒實驗正常小鼠具有攀爬能力，這需要適當(dāng)?shù)奈樟εc運(yùn)動協(xié)調(diào)性，采用轉(zhuǎn)棒 實驗來檢測小鼠給予PQ后的運(yùn)動功能障礙。停止給藥一周后，將小鼠放于轉(zhuǎn)棒測試儀上， 每次放10只，按每分鐘20轉(zhuǎn)的速度轉(zhuǎn)動，記錄小鼠3分鐘內(nèi)掉下來的次數(shù)。
[0040] 1.3.2自主活動測定停止給予PQ -周后，將小鼠放入自主活動測試儀的活動箱 中，每次同時測定10只小鼠，每個箱中1只小鼠，放入后讓小鼠適應(yīng)3分鐘再開始測試，當(dāng) 計算機(jī)進(jìn)入測定程序后，由計算機(jī)自動記錄小鼠10分鐘內(nèi)活動和站立的次數(shù)。
[0041] 1. 3. 3 DA、ΝΕ、5-ΤΗ含量的測定行為學(xué)檢測完畢后，每組分別取10只小鼠做黑質(zhì) 腦區(qū)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)含量測定。將小鼠斷頭取腦，稱重后迅速保存在液氮中。測定時取出標(biāo) 本置于勻漿器中，加入10倍的酸性正丁醇制成勻漿。手工震蕩5分鐘，置于臺式離心機(jī)中以 2000r/min的速度離心20分鐘，分別取上清液2. 5mL加入正庚烷5mL和0. 1Ν鹽酸1. 2mL， 手工震蕩5分鐘，置于臺式離心機(jī)中以2000r/min的速度離心10分鐘，取下層水相后分別 測定04、呢、5-^。參照張更榮等（張更榮，范迪興，朱建華，等.血清5-羥色胺、多巴胺的 同時提取和熒光分光光度測定法[J].臨床檢驗雜志，1989,7 (1):13-14)提供方法測定與 ro相關(guān)的去甲腎上腺素（NE)、多巴胺（DA)及其5-羥色胺（5-TH)的含量。
[0042] 1. 3. 4黑質(zhì)及紋狀體的酪氨酸羥化酶（TH)染色每組取剩余的10只小鼠經(jīng)10% 的水合氯醛腹腔注射麻醉后，破胸經(jīng)心臟快速灌注生理鹽水50mL (37°C)后灌注4%多聚甲 醛（4°C)50mL。灌注時間各為20分鐘。迅速斷頭取腦，置于30%蔗糖與4%多聚甲醛溶液 (4°C)后固定，靜置過夜至組織下沉。取出標(biāo)本后用恒溫冰凍切片機(jī)（_20°C)連續(xù)切片，片 厚50 μ m。挑取黑質(zhì)及紋狀體部位切片放入0. 01M PBS液內(nèi)待染。切片入0. 01M PBS液中浸 洗（lminX3)，入1N鹽酸抗原修復(fù)30min ,用蒸饋水浸洗（1111；[11\3)，3%雙氧水消除內(nèi)源性 過氧化物酶的活性l0min，用蒸餾水浸洗（IminX 3)，0. 01M PBST浸洗（IminX 3)，入5%正常 羊血清封閉30min，傾去血清后不洗，直接加入適當(dāng)稀釋的TH抗體1抗（1% BSA-O. 01M PBST 稀釋）室溫過夜。切片入0. 01MPBST中浸洗（lminX3)。入1:300生物素標(biāo)記的II抗3小 時。切片用0.01MPBST浸洗（lminX3)。切片入1:300辣根酶標(biāo)記的鏈霉卵白素 III抗2? 3小時。再入0. 01MPBST浸洗（2minX3)，DAB顯色10?30min，然后入水充分浸洗，裱片， 自然干燥。顯微鏡下觀察TH陽性細(xì)胞的形態(tài)變化。
[0043] 1. 3. 5實驗數(shù)據(jù)采用^ ±s表示，應(yīng)用SPSS 10. 0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，多組 間數(shù)據(jù)采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗。P〈0. 05則有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0044] 2 結(jié)果 2. 1行為學(xué)變化 治療給藥1周后觀察小鼠的行為學(xué)變化，每組20只小鼠做轉(zhuǎn)棒實驗和自主活動測試， 結(jié)果見表1。
[0045] 表1行為學(xué)檢測結(jié)果
【權(quán)利要求】
1. 一種具有治療帕金森病的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份 的原料制成的：大黃1?3,秦究1?3,假耬斗菜1?3。
2. 如權(quán)利要求1藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原料制成 的：大黃1，秦艽2,假耬斗菜3。
3. 如權(quán)利要求1藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原料制成 的：大黃2,秦艽3,假耬斗菜2。
4. 如權(quán)利要求1藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原料制成 的：大黃3,秦艽1，假耬斗菜1。
5. 如權(quán)利要求1?4任意一項所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物采用藥學(xué) 中常規(guī)的制藥方法制備成口服制劑。
6. 如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物采用藥學(xué)中常規(guī)的制 藥方法制備成片劑、丸劑、硬膠囊劑、顆粒劑、口服液。
7. 如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物采用如下方法制備：取 大黃、秦艽、假耬斗菜，混合，加入5?10倍量的水煎煮2?4次，每次0. 5?2小時，提取 液合并，濾過，濾液濃縮，干燥，粉碎成細(xì)粉，加入輔料，混勻，裝入硬膠囊，即得。
8. 如權(quán)利要求1?4任意一項所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物在制備治 療帕金森病藥物中的應(yīng)用。
9. 如權(quán)利要求1?4任意一項所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物在制備治 療老年癡呆癥藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P25/16GK104042695SQ201410316785
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年7月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月4日
【發(fā)明者】唐冬蕾, 黃金勇 申請人:伏廣珍