一種苦杏仁多糖及低聚糖的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種苦杏仁多糖及低聚糖的制備方法，可有效解決苦杏仁多糖及低聚糖的制備及杏仁多糖在制備增強免疫力的藥物和保健品中的應(yīng)用和苦杏仁低聚糖在制備抗氧化的藥物、保健品、食品添加劑及化妝品中的應(yīng)用的問題，制備的苦杏仁多糖在制備增強免疫力的藥物和保健品中的應(yīng)用，制備的苦杏仁低聚糖在制備抗氧化的藥物、保健品、食品添加劑及化妝品中的應(yīng)用，本發(fā)明制備方法簡單，易操作，方法簡單，原料豐富，產(chǎn)品應(yīng)用面廣，以苦杏仁為原料同時制備苦杏仁多糖及低聚糖，開發(fā)了苦杏仁藥材的應(yīng)用范圍，開拓了苦杏仁多糖及低聚糖的應(yīng)用價值，具有很好的社會效益和經(jīng)濟效益，是中藥上的巨大創(chuàng)新。
【專利說明】一種苦杏仁多糖及低聚糖的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是涉及一種苦杏仁多糖及低聚糖的制備方法及應(yīng)用?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]苦杏仁，別名:杏仁，為薔薇科植物山杏Prunus armeniaca L.var.ansu Maxim.、西伯利亞杏 Prunus sibirica L.、東北杏 Prunus mandshurica(Maxim.)Koehne 或杏 Prunusarmeniaca L.的干燥成熟種子。具有降氣止咳平喘、潤腸通便、抗炎鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、降血糖、降血脂等作用。臨床主要用于咳嗽氣喘，胸滿痰多，腸燥便秘。現(xiàn)在對其有效成分的研究主要涉及苦杏仁苷、蛋白、酶、黃酮、脂肪油等成分，對其中多糖的研究較少，對苦杏仁低聚糖的研究尚未見報道，并且如何解決一體化制備苦杏仁多糖及低聚糖也未見有公開報導(dǎo)。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明的目的就是提供一種苦杏仁多糖及低聚糖的制備方法，可有效解決苦杏仁多糖及低聚糖的制備及杏仁多糖在制備增強免疫力的藥物和保健品中的應(yīng)用和苦杏仁低聚糖在制備抗氧化的藥物、保健品、食品添加劑及化妝品中的應(yīng)用的問題。
[0004]本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，一種苦杏仁多糖及低聚糖的制備方法，包括以下步驟:
[0005](1)取去皮的苦杏仁，加苦杏仁重量5-10倍的石油醚，置于閃式提取器中提取l-3min,過濾，得苦杏仁藥渣A，將苦杏仁藥渣A揮發(fā)去石油醚，晾干，加苦杏仁重量6_15倍的體積濃度為78% -82%的乙醇，浸泡30min，50°C _65°C回流提取0.5h_3h，過濾，得提取液和苦杏仁藥渣B，苦杏仁藥渣B備用，提取液40°C -50°C減壓揮盡乙醇，4000r/min離心15min，得上清液即為苦杏仁低聚糖部位浸膏，將苦杏仁低聚糖部位浸膏依次經(jīng)過大孔吸附樹脂柱、活性炭柱、陽離子交換樹脂柱、陰離子交換樹脂柱，得洗脫液，最后將所得洗脫液減壓濃縮，冷凍干燥即得苦杏仁低聚糖；
[0006](2)在步驟(1)中的苦杏仁藥渣B中加苦杏仁藥渣B重量6-10倍的水，浸泡30min，置于閃式提取器中提取l_3min，過濾，得第一次濾液和苦杏仁藥渣C ;在苦杏仁藥渣C中加入苦杏仁藥渣C重量6-10倍的水浸泡5-10min，過濾，得第二次濾液，合并兩次濾液，真空濃縮至苦杏仁重量的5-8倍，離心，得上清液，即為苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照2:1-4:1的重量比混合，用pH5.0-7.0的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液溶解，制成濃度為0.5% -1.2%的混合蛋白酶溶液；將苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按體積比1:0.5-0.8混合，35°C -60°C水浴5_10h，得酶解液，將酶解液滅酶后放至室溫，sevage法脫蛋白，得苦杏仁多糖溶液，苦杏仁多糖溶液減壓回收溶劑至苦杏仁重量的1.2-2.0倍，4000r/m離心15min，取上清液即得苦杏仁多糖濃縮液，將苦杏仁多糖濃縮液在攪拌下加入體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為75% -80%，靜置12h，濾去上部液體，得底部沉淀物，用無水乙醇洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，20-50°C下減壓干燥，即得苦杏仁多糖；實現(xiàn)以苦杏仁為原料制備苦杏仁多糖及低聚糖，并有效用于制備增強免疫力的藥物和保健品，實現(xiàn)苦杏仁多糖及低聚糖在制備增強免疫力的藥物和保健品中的應(yīng)用，苦杏仁低聚糖在制備抗氧化的藥物、保健品、食品添加劑及化妝品中的應(yīng)用。
[0007]所述的大孔吸附樹脂為D-101型大孔吸附樹脂或AB-8型大孔吸附樹脂，陽離子交換樹脂為強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂，陰離子交換樹脂為強堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂。
[0008]本發(fā)明制備方法簡單，易操作，方法簡單，原料豐富，產(chǎn)品應(yīng)用面廣，以苦杏仁為原料同時制備苦杏仁多糖及低聚糖，開發(fā)了苦杏仁藥材的應(yīng)用范圍，苦杏仁多糖可用于制備增強免疫力的藥物和保健品，苦杏仁低聚糖可用于制備抗氧化的藥物、保健品、食品添加劑及化妝品，開拓了苦杏仁多糖及低聚糖的應(yīng)用價值，具有很好的社會效益和經(jīng)濟效益，是中藥上的巨大創(chuàng)新。
【具體實施方式】
[0009]以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的具體情況作詳細(xì)說明。 [0010]本發(fā)明在具體實施中，可由以下實施例給出:
[0011]實施例1
[0012]本發(fā)明在具體實施中，包括以下步驟:
[0013](I)取去皮的苦杏仁，加苦杏仁重量5倍的石油醚，置于閃式提取器中提取lmin，過濾，得苦杏仁藥渣A，將苦杏仁藥渣A揮發(fā)去石油醚，晾干，加苦杏仁重量6倍的體積濃度為78 %的乙醇，浸泡30min，50°C回流提取0.5h，過濾，得提取液和苦杏仁藥渣B，苦杏仁藥渣B備用，提取液40°C減壓揮盡乙醇，4000r/min離心15min，得上清液即為苦杏仁低聚糖部位浸膏，將苦杏仁低聚糖部位浸膏依次經(jīng)過AB-8型大孔吸附樹脂柱、活性炭柱、強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂柱、強堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂柱，得洗脫液，最后將所得洗脫液減壓濃縮，冷凍干燥即得苦杏仁低聚糖；
[0014](2)在步驟(1)中的苦杏仁藥渣B中加苦杏仁藥渣B重量6倍的水，浸泡30min，置于閃式提取器中提取lmin，過濾，得第一次濾液和苦杏仁藥渣C ;在苦杏仁藥渣C中加入苦杏仁藥渣C重量6倍的水浸泡5min，過濾，得第二次濾液，合并兩次濾液，真空濃縮至苦杏仁重量的5倍，離心，得上清液，即為苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照2:1的重量比混合，用PH5.0的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液溶解，制成濃度為0.5%的混合蛋白酶溶液；將苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按體積比1:0.5混合，35°C水浴5h，得酶解液，將酶解液90°C °C下滅酶1min后放至室溫，sevage法脫蛋白，得苦杏仁多糖溶液，將苦杏仁多糖溶液減壓回收溶劑至苦杏仁重量的1.2倍，4000r/m離心15min，取上清液即得苦杏仁多糖濃縮液，苦杏仁多糖濃縮液在攪拌下加入體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為75 %，靜置12h，濾去上部液體,得底部沉淀物,用無水乙醇洗去沉淀物中的水分,再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，20°C下減壓干燥，即得苦杏仁多糖。
[0015]實施例2
[0016]本發(fā)明在具體實施中，包括以下步驟:[0017](I)取去皮的苦杏仁，加苦杏仁重量7倍的石油醚，置于閃式提取器中提取2.7min，過濾，得苦杏仁藥渣A，將苦杏仁藥渣A揮發(fā)去石油醚，晾干，加苦杏仁重量8.5倍的體積濃度為79%的乙醇，浸泡30min，55°C回流提取2h，過濾，得提取液和苦杏仁藥渣B，苦杏仁藥渣B備用，提取液45°C減壓揮盡乙醇，4000r/min離心15min，得上清液即為苦杏仁低聚糖部位浸膏，將苦杏仁低聚糖部位浸膏依次經(jīng)過D-101型大孔吸附樹脂柱、活性炭柱、強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂柱、強堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂柱，得洗脫液，最后將所得洗脫液減壓濃縮，冷凍干燥即得苦杏仁低聚糖；
[0018](2)在步驟(1)中的苦杏仁藥渣B中加苦杏仁藥渣B重量8倍的水，浸泡30min，置于閃式提取器中提取2min，過濾，得第一次濾液和苦杏仁藥渣C ;在苦杏仁藥渣C中加入苦杏仁藥渣C重量8倍的水浸泡7.5min，過濾，得第二次濾液，合并兩次濾液，真空濃縮至苦杏仁重量的6.5倍，離心，得上清液，即為苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照3.5:1的重量比混合，用pH6.5的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液溶解，制成濃度為0.7%的混合蛋白酶溶液；將苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按體積比1:0.6混合，50°C水浴8h，得酶解液，將酶解液95°C下滅酶20min后放至室溫，sevage法脫蛋白，得苦杏仁多糖溶液，苦杏仁多糖溶液減壓回收溶劑至苦杏仁重 量的1.5倍，4000r/m離心15min，取上清液即得苦杏仁多糖濃縮液，將苦杏仁多糖濃縮液在攪拌下加入體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為77%，靜置12h，濾去上部液體，得底部沉淀物，用無水乙醇洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，35°C下減壓干燥，SP得苦杏仁多糖。
[0019]實施例3
[0020]本發(fā)明在具體實施中，包括以下步驟:
[0021](I)取去皮的苦杏仁，加苦杏仁重量10倍的石油醚，置于閃式提取器中提取3min，過濾，得苦杏仁藥渣A，將苦杏仁藥渣A揮發(fā)去石油醚，晾干，加苦杏仁重量15倍的體積濃度為82%的乙醇，浸泡30min，65°C回流提取3h，過濾，得提取液和苦杏仁藥渣B，苦杏仁藥渣B備用，提取液50°C減壓揮盡乙醇，4000r/min離心15min，得上清液即為苦杏仁低聚糖部位浸膏，將苦杏仁低聚糖部位浸膏依次經(jīng)過AB-8型大孔吸附樹脂柱、活性炭柱、強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂柱、強堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂柱，得洗脫液，最后將所得洗脫液減壓濃縮，冷凍干燥即得苦杏仁低聚糖；
[0022](2)在步驟(1)中的苦杏仁藥渣B中加苦杏仁藥渣B重量10倍的水，浸泡30min，置于閃式提取器中提取3min，過濾，得第一次濾液和苦杏仁藥渣C ;在苦杏仁藥渣C中加入苦杏仁藥渣C重量10倍的水浸泡lOmin，過濾，得第二次濾液，合并兩次濾液，真空濃縮至苦杏仁重量的8倍，離心，得上清液，即為苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照4:1的重量比混合，用pH7.0的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液溶解，制成濃度為1.2%的混合蛋白酶溶液；將苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按體積比1:0.8混合，60°C水浴10h，得酶解液，將酶解液100°C下滅酶30min后放至室溫，sevage法脫蛋白，得苦杏仁多糖溶液，苦杏仁多糖溶液減壓回收溶劑至苦杏仁重量的2.0倍，4000r/m離心15min，取上清液即得苦杏仁多糖濃縮液，將苦杏仁多糖濃縮液在攪拌下加入體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為80%，靜置12h，濾去上部液體，得底部沉淀物，用無水乙醇洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，50°C下減壓干燥，SP得苦杏仁多糖。
[0023]實施例4
[0024]本發(fā)明在具體實施中，包括以下步驟:
[0025](I)取去皮的苦杏仁10kg，加石油醚80kg，置于閃式提取器中提取l_3min，過濾，得苦杏仁藥渣A，將苦杏仁藥渣A揮發(fā)去石油醚，晾干，加10kg的體積濃度為81 %的乙醇，浸泡30min，56°C回流提取1.3h，過濾，得提取液和苦杏仁藥渣B，苦杏仁藥渣B備用，提取液40°C減壓揮盡乙醇，4000r/min離心15min，得上清液即為苦杏仁低聚糖部位浸膏，將苦杏仁低聚糖部位浸膏依次經(jīng)過大孔吸附樹脂柱、活性炭柱、陽離子交換樹脂柱、陰離子交換樹脂柱，得洗脫液，最后將所得洗脫液減壓濃縮，冷凍干燥即得苦杏仁低聚糖；
[0026](2)在步驟(1)中的苦杏仁藥渣B中加水80kg，浸泡30min，置于閃式提取器中提取2.8min，過濾，得第一次濾液和苦杏仁藥渣C ;在苦杏仁藥渣C中加水60kg浸泡8min，過濾，得第二次濾液，合并兩次濾液，真空濃縮至58kg，離心，得上清液，即為苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照2:1的重量比混合，用pH5.0-7.0的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液溶解，制成濃度為I %的混合蛋白酶溶液；將苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按體積比1:0.8混合，60°C水浴1h,得酶解液,將酶解液100°C下滅酶20min后放至室溫，sevage法脫蛋白，得苦杏 仁多糖溶液，苦杏仁多糖溶液減壓回收溶劑至20kg，4000r/m離心15min，取上清液即得苦杏仁多糖濃縮液，將苦杏仁多糖濃縮液在攪拌下加入體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為80%，靜置12h，濾去上部液體，得底部沉淀物，用無水乙醇洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，20-50°C下減壓干燥，即得苦杏仁多糖。
[0027]上述制備的2種活性成分經(jīng)苯酚-硫酸法(常規(guī)測定方法，是公知技術(shù))測定，其糖含量均不低于80 %。經(jīng)HPGPC法(公知技術(shù))測定，苦杏仁低聚糖的分子量均在300-2000之間。
[0028]上述僅是給出的幾個實施例，在研制中，發(fā)明人經(jīng)反復(fù)多次實驗，均取得了相同或相近似的結(jié)果，方法科學(xué)有效，原料豐富，產(chǎn)品應(yīng)用面廣，具有實際的應(yīng)用價值，并對苦杏仁多糖及低聚糖進行反復(fù)的試驗均取得了滿意的技術(shù)效果，有關(guān)試驗資料如下:
[0029]苦杏仁多糖的免疫活性實驗
[0030]一.試驗材料
[0031]1.試驗動物:18.5~23g昆明種清潔劑小鼠，雌雄各半。由鄭州大學(xué)實驗動物中心提供。
[0032]2.實驗試藥:本發(fā)明方法制備的苦杏仁多糖(含量為84.33% )，瑞士染液，香菇多糖(湖北廣仁藥業(yè)有限公司)，環(huán)磷酰胺(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司)，枸櫞酸鈉，氯化鈣，氯化鈉，酒石酸鉀鈉，氯化鉀，葡萄糖，磷酸氫二鉀，磷酸二氫鉀，酚紅。
[0033]二.試驗方法
[0034]1.苦杏仁多糖對正常小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響
[0035]取小鼠50只，體重18.5~23g，雌雄各半，隨機均勻分為5組。分別灌服小、中、大劑量的苦杏仁多糖水溶液(10mg/ml,20mg/ml,40mg/ml ；0.2ml/10g),香燕多糖混懸液(5mg/ml ；0.2ml/10g)及同體積的生理鹽水(0.2ml/10g)。每天給藥I次,連續(xù)給藥7天。于7天早上各組小鼠均腹腔注射5%雞紅細(xì)胞生理鹽水混懸液0.5ml。于第7天灌胃給藥后2h，注射5%雞紅細(xì)胞4h后，脫頸椎處死小鼠，腹腔注入漢氏液2.5ml，輕揉小鼠腹部；然后剪開小鼠腹部皮膚，在腹膜上剪一小孔，用吸管吸取腹腔液2ml置于試管中，混勻；吸取少許腹腔液滴于載玻片上，液點大小約為1.5CmX2Cm。將載玻片放在鋪有濕紗布的糖瓷盤中，37°C孵育30min，生理鹽水沖去附著的細(xì)胞，瑞氏染液染色，自來水沖洗晾干；顯微鏡下
觀察小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬情況，并計算吞噬百分率和吞噬指數(shù)。
[0036]
【權(quán)利要求】
1.一種苦杏仁多糖及低聚糖的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)取去皮的苦杏仁，加苦杏仁重量5-10倍的石油醚，置于閃式提取器中提取l-3min，過濾，得苦杏仁藥渣A，將苦杏仁藥渣A揮發(fā)去石油醚，晾干，加苦杏仁重量6-15倍的體積濃度為78% -82%的乙醇，浸泡30min，50°C _65°C回流提取0.5h_3h，過濾，得提取液和苦杏仁藥渣B，苦杏仁藥渣B備用，提取液40°C -50°C減壓揮盡乙醇，4000r/min離心15min，得上清液即為苦杏仁低聚糖部位浸膏，將苦杏仁低聚糖部位浸膏依次經(jīng)過大孔吸附樹脂柱、活性炭柱、陽離子交換樹脂柱、陰離子交換樹脂柱，得洗脫液，最后將所得洗脫液減壓濃縮，冷凍干燥即得苦杏仁低聚糖； (2)在步驟(1)中的苦杏仁藥渣B中加苦杏仁藥渣B重量6-10倍的水，浸泡30min，置于閃式提取器中提取l_3min，過濾，得第一次濾液和苦杏仁藥渣C ;在苦杏仁藥渣C中加入苦杏仁藥渣C重量6-10倍的水浸泡5-10min，過濾，得第二次濾液，合并兩次濾液，真空濃縮至苦杏仁重量的5-8倍，離心，得上清液，即為苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照2:1-4:1的重量比混合，用pH5.0-7.0的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液溶解，制成濃度為0.5% -1.2%的混合蛋白酶溶液；將苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按體積比1:.0.5-0.8混合，35°C -60°C水浴5_10h，得酶解液，將酶解液滅酶后放至室溫，sevage法脫蛋白，得苦杏仁多糖溶液，苦杏仁多糖溶液減壓回收溶劑至苦杏仁重量的1.2-2.0倍，40001./m離心15min，取上清液即得苦杏仁多糖濃縮液，將苦杏仁多糖濃縮液在攪拌下加入體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為75% -80%，靜置12h，濾去上部液體，得底部沉淀物，用無水乙醇洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，20-50°C下減壓干燥，即得苦杏仁多糖；所述的大孔吸附樹脂為D-101型大孔吸附樹脂或AB-8型大孔吸附樹脂，陽離子交換樹脂為強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂，陰離子交換樹脂為強堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的苦杏仁多糖及低聚糖的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)取去皮的苦杏仁，加苦杏仁重量5倍的石油醚，置于閃式提取器中提取lmin，過濾，得苦杏仁藥渣A，將苦杏仁藥渣A揮發(fā)去石油醚，晾干，加苦杏仁重量6倍的體積濃度為.78 %的乙醇，浸泡30min，50°C回流提取0.5h，過濾，得提取液和苦杏仁藥渣B，苦杏仁藥渣B備用，提取液40°C減壓揮盡乙醇，4000r/min離心15min，得上清液即為苦杏仁低聚糖部位浸膏，將苦杏仁低聚糖部位浸膏依次經(jīng)過AB-8型大孔吸附樹脂柱、活性炭柱、強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂柱、強堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂柱，得洗脫液，最后將所得洗脫液減壓濃縮，冷凍干燥即得苦杏仁低聚糖； ( 2)在步驟(1)中的苦杏仁藥渣B中加苦杏仁藥渣B重量6倍的水，浸泡30min，置于閃式提取器中提取lmin，過濾，得第一次濾液和苦杏仁藥渣C ;在苦杏仁藥渣C中加入苦杏仁藥渣C重量6倍的水浸泡5min，過濾，得第二次濾液，合并兩次濾液，真空濃縮至苦杏仁重量的5倍，離心，得上清液，即為苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照2:1的重量比混合，用PH5.0的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液溶解，制成濃度為0.5%的混合蛋白酶溶液；將苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按體積比1:0.5混合，35°C水浴5h，得酶解液，將酶解液.900C °C下滅酶1min后放至室溫，sevage法脫蛋白，得苦杏仁多糖溶液，將苦杏仁多糖溶液減壓回收溶劑至苦杏仁重量的1.2倍，4000r/m離心15min，取上清液即得苦杏仁多糖濃縮液，苦杏仁多糖濃縮液在攪拌下加入體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為75%，靜置12h，濾去上部液體，得底部沉淀物，用無水乙醇洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，20°C下減壓干燥，即得苦杏仁多糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的苦杏仁多糖及低聚糖的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)取去皮的苦杏仁，加苦杏仁重量7倍的石油醚，置于閃式提取器中提取2.7min,過濾，得苦杏仁藥渣A，將苦杏仁藥渣A揮發(fā)去石油醚，晾干，加苦杏仁重量8.5倍的體積濃度為79%的乙醇，浸泡30min，55°C回流提取2h，過濾，得提取液和苦杏仁藥渣B，苦杏仁藥渣B備用，提取液45°C減壓揮盡乙醇，4000r/min離心15min，得上清液即為苦杏仁低聚糖部位浸膏，將苦杏仁低聚糖部位浸膏依次經(jīng)過D-1Ol型大孔吸附樹脂柱、活性炭柱、強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂柱、強堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂柱，得洗脫液，最后將所得洗脫液減壓濃縮，冷凍干燥即得苦杏仁低聚糖； (2)在步驟(1)中的苦杏仁藥渣B中加苦杏仁藥渣B重量8倍的水，浸泡30min，置于閃式提取器中提取 2min，過濾，得第一次濾液和苦杏仁藥渣C ;在苦杏仁藥渣C中加入苦杏仁藥渣C重量8倍的水浸泡7.5min，過濾，得第二次濾液，合并兩次濾液，真空濃縮至苦杏仁重量的6.5倍，離心，得上清液，即為苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照3.5:1的重量比混合，用PH6.5的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液溶解，制成濃度為0.7%的混合蛋白酶溶液；將苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按體積比1:0.6混合，50°C水浴8h，得酶解液，將酶解液95°C下滅酶20min后放至室溫，sevage法脫蛋白，得苦杏仁多糖溶液，苦杏仁多糖溶液減壓回收溶劑至苦杏仁重量的1.5倍，4000r/m離心15min，取上清液即得苦杏仁多糖濃縮液，將苦杏仁多糖濃縮液在攪拌下加入體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為77%，靜置12h，濾去上部液體，得底部沉淀物，用無水乙醇洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，35°C下減壓干燥，即得苦杏仁多糖。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的苦杏仁多糖及低聚糖的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)取去皮的苦杏仁，加苦杏仁重量10倍的石油醚，置于閃式提取器中提取3min，過濾，得苦杏仁藥渣A，將苦杏仁藥渣A揮發(fā)去石油醚，晾干，加苦杏仁重量15倍的體積濃度為82%的乙醇，浸泡30min，65°C回流提取3h，過濾，得提取液和苦杏仁藥渣B，苦杏仁藥渣B備用，提取液50°C減壓揮盡乙醇，4000r/min離心15min，得上清液即為苦杏仁低聚糖部位浸膏，將苦杏仁低聚糖部位浸膏依次經(jīng)過AB-8型大孔吸附樹脂柱、活性炭柱、強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂柱、強堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂柱，得洗脫液，最后將所得洗脫液減壓濃縮，冷凍干燥即得苦杏仁低聚糖； (2)在步驟(1)中的苦杏仁藥渣B中加苦杏仁藥渣B重量10倍的水，浸泡30min，置于閃式提取器中提取3min，過濾，得第一次濾液和苦杏仁藥渣C ;在苦杏仁藥渣C中加入苦杏仁藥渣C重量10倍的水浸泡lOmin，過濾，得第二次濾液，合并兩次濾液，真空濃縮至苦杏仁重量的8倍，離心，得上清液，即為苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照4:1的重量比混合，用PH7.0的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液溶解，制成濃度為1.2%的混合蛋白酶溶液；將苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按體積比1:0.8混合，60°C水浴10h，得酶解液，將酶解液100°c下滅酶30min后放至室溫，sevage法脫蛋白，得苦杏仁多糖溶液，苦杏仁多糖溶液減壓回收溶劑至苦杏仁重量的2.0倍，4000r/m離心15min，取上清液即得苦杏仁多糖濃縮液，將苦杏仁多糖濃縮液在攪拌下加入體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為80%，靜置12h，濾去上部液體，得底部沉淀物，用無水乙醇洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，50°C下減壓干燥，即得苦杏仁多糖。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的苦杏仁多糖及低聚糖的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)取去皮的苦杏仁10kg，加石油醚80kg，置于閃式提取器中提取l_3min，過濾，得苦杏仁藥渣A，將苦杏仁藥渣A揮發(fā)去石油醚，晾干，加10kg的體積濃度為81 %的乙醇，浸泡30min，56°C回流提取1.3h，過濾，得提取液和苦杏仁藥渣B，苦杏仁藥渣B備用，提取液40°C減壓揮盡乙醇，4000r/min離心15min，得上清液即為苦杏仁低聚糖部位浸膏，將苦杏仁低聚糖部位浸膏依次經(jīng)過大孔吸附樹脂柱、活性炭柱、陽離子交換樹脂柱、陰離子交換樹脂柱，得洗脫液，最后將所得洗脫液減壓濃縮，冷凍干燥即得苦杏仁低聚糖； (2)在步驟(1)中的苦杏仁藥渣B中加水80kg，浸泡30min，置于閃式提取器中提取2.8min，過濾，得第一次濾液和苦杏仁藥渣C ;在苦杏仁藥渣C中加水60kg浸泡8min，過濾，得第二次濾液，合并兩次濾液，真空濃縮至58kg，離心，得上清液，即為苦杏仁粗多糖液；取木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，按照2:1的重量比混合，用pH5.0-7.0的Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液溶解，制成濃度為I %的混合蛋白酶溶液；將苦杏仁粗多糖液和混合蛋白酶溶液按體積比1:0.8混合，60°C水浴1h,得酶解液,將酶解液100°C下滅酶20min后放至室溫，sevage法脫蛋白，得苦杏仁多糖溶液，苦杏仁多糖溶液減壓回收溶劑至20kg，4000r/m離心15min，取上清液即得苦杏仁多糖濃縮液，將苦杏仁多糖濃縮液在攪拌下加入體積濃度為95%的乙醇，使?jié)饪s液中含醇量為80%，靜置12h，濾去上部液體，得底部沉淀物，用無水乙醇洗去沉淀物中的水分，再用丙酮洗去沉淀物中的無水乙醇，最后用無水乙醚洗去沉淀物中的丙酮，20-50°C下減壓干燥，即得苦杏仁多糖。
6.權(quán)利要求1或2-5中任意一項所述方法制備的苦杏仁多糖在制備增強免疫力的藥物和保健品中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求1或2-5中任意一項所述方法制備的苦杏仁低聚糖在制備抗氧化的藥物、保健品、食品添加劑及化妝品中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P37/04GK104031169SQ201410315741
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年7月2日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月2日
【發(fā)明者】劉富崗, 馮素香, 吳兆宇, 王蒙蒙, 李曉玉, 郝蕊 申請人:河南中醫(yī)學(xué)院