心腦欣膠囊在制備治療帕金森藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了心腦欣膠囊在制備治療帕金森藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明證實(shí)心腦欣對(duì)帕金森小鼠行為學(xué)的改善較明顯，顯著提高模型小鼠腦紋狀體DA和HVA含量及黑質(zhì)區(qū)TH陽(yáng)性表達(dá)。心腦欣膠囊各劑量組顯著改善帕金森小鼠的運(yùn)動(dòng)癥狀，有效地提高腦紋狀體內(nèi)多巴胺及其代謝產(chǎn)物的含量。
【專利說明】心腦欣膠囊在制備治療帕金森藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及心腦欣膠囊在制備治療帕金森藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 帕金森?。≒D)是人類第二大中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，多發(fā)病于50歲以后，是危 害老年人生命健康的一類疾病。帕金森病的臨床三大表現(xiàn)包括靜止性震顫、運(yùn)動(dòng)遲緩、肌強(qiáng) 直和姿勢(shì)步態(tài)障礙等。我國(guó)的ro患病率在30?60歲之間的為0. 5%，60歲以上為1 %，80 歲以上人群的發(fā)病率超過5%，對(duì)老年人健康生活影響極大。隨著全世界人口老齡化，對(duì)該 病的研究已越來越受到人們的重視。目前臨床治療常用藥物為左旋多巴、美多巴等，但因其 不良反應(yīng)如"開關(guān)效應(yīng)"等應(yīng)用受到限制。
[0003] 心腦欣膠囊為三普藥業(yè)股份有限公司產(chǎn)品，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20025866,主治益氣養(yǎng)陰、 活血化瘀，但治療帕金森病癥還未見報(bào)道。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 發(fā)明目的：本發(fā)明的目的在于提供心腦欣膠囊的一種新用途。
[0005] 技術(shù)方案：本發(fā)明公開了心腦欣膠囊在制備治療帕金森藥物中的應(yīng)用。
[0006] 上述心腦欣膠囊，可以由重量份數(shù)為3?6份的紅景天，5?15份的枸杞，3?9 份的沙棘組成。
[0007] 有益效果：本發(fā)明證實(shí)心腦欣對(duì)帕金森小鼠行為學(xué)的改善較明顯，顯著提高模型 小鼠腦紋狀體DA和HVA含量及黑質(zhì)區(qū)TH陽(yáng)性表達(dá)。心腦欣膠囊各劑量組顯著改善帕金森 小鼠的運(yùn)動(dòng)癥狀，有效地提高腦紋狀體內(nèi)多巴胺及其代謝產(chǎn)物的含量。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0008]圖1為L(zhǎng)C-MS/MS法測(cè)定紋狀體內(nèi)DA含量（A為標(biāo)準(zhǔn)品圖譜，B為樣品圖譜）；
[0009] 圖2為L(zhǎng)C-MS/MS法測(cè)定紋狀體內(nèi)HVA含量（A為標(biāo)準(zhǔn)品圖譜，B為樣品圖譜）； [0010]圖3為心腦欣膠囊對(duì)MPTP致小鼠腦黑質(zhì)TH陽(yáng)性表達(dá)的影響（注：A?F分別 是空白組，模型組，美多巴組，心腦欣膠囊低、中、高劑量組）；
[0011] 圖4為心腦欣膠囊對(duì)C57BL/6小鼠TH陽(yáng)性表達(dá)累積光密度的影響（注：與空白組 相比，#P〈〇. 05, ##P〈0. 01 ;與模型組相比，*P〈0. 05, #P〈0. 01。）
【具體實(shí)施方式】
[0012] 實(shí)施例1 :
[0013] 心腦欣膠囊由重量份數(shù)為3份的紅景天、5份的枸杞和3份的沙棘混合而成。
[0014] 實(shí)施例2 :
[0015] 心腦欣膠囊由重量份數(shù)為4份的紅景天、10份的枸杞和6份的沙棘混合而成。
[0016] 實(shí)施例3:
[0017] 心腦欣膠囊由重量份數(shù)為5份的紅景天、12份的枸杞和8份的沙棘混合而成。
[0018] 實(shí)施例4:
[0019] 心腦欣膠囊由重量份數(shù)為6份的紅景天、15份的枸杞和9份的沙棘混合而成。
[0020] 實(shí)施例5 :
[0021] 心腦欣膠囊治療帕金森癥的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
[0022] 1 材料：
[0023] 1.1藥物心腦欣膠囊由三普藥業(yè)提供，批號(hào)120803;多巴絲肼片（左旋多 巴200mg+卞絲肼50mg/片），批號(hào)：SH1574,上海羅氏制藥有限公司；1-甲基-4-苯 基-1，2, 3, 6-四氫吡啶（MPTP)，多巴胺（DA)，高香草酸（HVA)，兔酪氨酸羥化酶（TH)多克隆 抗體均購(gòu)自美國(guó)sigma公司。
[0024] 1. 2 儀器AcquityUPLC/QuattroPremierXEmiromassTechnologies系統(tǒng)， Waters串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜（Waters美國(guó)），MasslynxV4. 1工作軟件（Waters美國(guó)），高速冷 凍離心機(jī)，C18 色譜柱（2. 1X100mmi.d.，1. 7XlCT6m;Waters)等。
[0025] 1. 3動(dòng)物C57BL/6種小鼠，雄性，18_22g，由揚(yáng)州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供，合格證 號(hào)SCXK(蘇）2012-0004。動(dòng)物分籠飼養(yǎng)，保持12h晝夜節(jié)律，室溫22±1°C，自由飲水?dāng)z食。
[0026] 1.4溶液的配制磷酸鹽緩沖液（PBS)的配制：8.00gNaCl，0.20gKCl，1.44g Na2HP04, 0 . 24gKH2P04溶于800ml的雙蒸水中，用HC1調(diào)制PH至7. 4,加水定容至1000ml。
[0027] 2 方法
[0028] 2. 1動(dòng)物分組及造模方法小鼠隨機(jī)分成6組：心腦欣膠囊低劑量組、中、高劑量組 (167、333、50〇11^/1^)、多巴絲肼片組（12〇11^/1^)，模型組、空白組。除空白組外，每只小鼠 每天腹腔注射20mg/kgMPTP，空白組腹腔注射等體積的生理鹽水，連續(xù)5d。造模后2d，按 0.lml/10g給藥體積灌胃給藥；模型組和空白組給予等量的生理鹽水，連續(xù)給藥14d。測(cè)定 其給藥d7、dl4的行為學(xué)變化，小鼠處死后測(cè)定神經(jīng)遞質(zhì)及代謝產(chǎn)物DA、HVA、D0PAC和黑質(zhì) TH表達(dá)情況。
[0029] 2. 2行為學(xué)實(shí)驗(yàn)
[0030] 2.2. 1爬桿實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菣z測(cè)模型小鼠肢體運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)情況。將一直徑為25cm的軟 木球固定于一根長(zhǎng)60cm粗lcm的桿頂端，桿上纏上黑膠帶以防打滑，然后將被測(cè)小鼠頭向 下放到小球上，并記錄小鼠從桿頂上下來所需要的時(shí)間。
[0031] 2.2.2曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖菧y(cè)定模型小鼠自主活動(dòng)次數(shù)。將小鼠放入開野測(cè)定盒內(nèi)， 適應(yīng)2min，測(cè)之后4min內(nèi)小鼠穿格次數(shù)和直立次數(shù)，并作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。每測(cè)一只小鼠后，清 理干凈盒內(nèi)小鼠排泄物，再進(jìn)行測(cè)定。
[0032] 2. 2. 3游泳實(shí)驗(yàn)評(píng)分目的是測(cè)定模型小鼠肢體運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)情況。將受試小鼠放入一 個(gè)2500ml規(guī)格的燒杯中，加水至水高度16cm，水溫為25°C?30°C。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下：在受試 時(shí)間內(nèi)能連續(xù)不斷游泳者記3. 0分；大部分時(shí)間游泳僅偶爾漂浮者記2. 5分；漂浮時(shí)間占 整個(gè)受試時(shí)間50%以上者記2. 0分；偶爾游泳者記1. 5分；偶爾用后肢游動(dòng)者并漂浮在一 邊者記1. 0分。最后計(jì)算得分情況。
[0033] 2. 3對(duì)神經(jīng)遞質(zhì)及代謝產(chǎn)物DA，HVA含量的影響
[0034]在行為學(xué)測(cè)試后每組取3只小鼠處死。斷頭取腦，于冰扳上剝離紋狀體，液氮保 存。取組織按1:15加入混合溶液（lmol/LK2HP04:lmol/LKH2P04 = 80:20)于冰浴中充分 勻漿混勻，加入勻漿液體積一半的10%HCL04。充分渦旋后，在4°C以12000rpm離心15min后精密吸取上清液，用10m〇l/LNaOH調(diào)節(jié)PH至7. 0保存在-80°C待測(cè)。
[0035]流動(dòng)相：水（含0? 5%。的甲酸）一乙腈（82:18)，流速：0? 8mL?min-1，柱溫為常溫， 進(jìn)樣20ul，采用LC-MS/MS法測(cè)定DA，HVA含量，用MasslynxV4. 1工作軟件分析結(jié)果。
[0036] 2. 4對(duì)小鼠中腦組織形態(tài)學(xué)的影響：
[0037] 2. 4. 1灌注：各組動(dòng)物用水合氯醛麻醉后后迅速左心室插管（黑色頭皮針），剪開 右心耳使回心血液流出，接入注射器lOOmLPBS快速左心灌注后，之后用100ml4%多聚甲酵 溶液注射器快速左心灌注固定，此時(shí)可見小鼠出現(xiàn)顫抖和尾巴翅起表示灌注成功，待快速 灌注完成時(shí)完整取出腦組織，置于10%福爾馬林中固定24小時(shí)。
[0038] 2.4.2免疫組化：取黑質(zhì)區(qū)域不同部位于冰凍切片機(jī)作連續(xù)冠狀切片，片厚 30um，孵以兔抗TH多克隆抗體，采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法進(jìn)行染色，光 鏡下觀察采圖。采集的圖像用ImageProPlus6.0圖像分析系統(tǒng)對(duì)
[0039] TH陽(yáng)性表達(dá)進(jìn)行分析。
[0040] 2. 5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
[0041] 所有數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差G土d表示，采用t檢驗(yàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析，P〈0. 05 為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0042] 3 結(jié)果
[0043] 3. 1對(duì)MPTP致小鼠的行為學(xué)影響
[0044] 3. 1. 1爬桿實(shí)驗(yàn)：
[0045]如表1所示，致模后模型組小鼠明顯比空白組小鼠的的爬桿時(shí)間慢（P〈0. 05)， 表示小鼠的肢體協(xié)調(diào)能力已出現(xiàn)顯著性減退。多巴絲肼片組小鼠爬桿時(shí)間比模型組有明 顯的縮短（P〈〇. 05)，心腦欣低、中劑量組對(duì)小鼠爬桿時(shí)間也有顯著的減少作用（P〈0. 05， P〈0. 05)，高劑量組對(duì)爬桿時(shí)間也有減少作用。
[0046] 表1心腦欣膠囊對(duì)MPTP致ro小鼠爬桿時(shí)間的影響（I土 &n= 10)
[0047]
【權(quán)利要求】
1. 心腦欣膠囊在制備治療帕金森藥物中的應(yīng)用。
2. 權(quán)利要求1所述的心腦欣膠囊，其特征在于，由重量份數(shù)為3?6份的紅景天，5? 15份的枸杞，3?9份的沙棘組成。
【文檔編號(hào)】A61K36/815GK104257876SQ201410276266
【公開日】2015年1月7日 申請(qǐng)日期:2014年6月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月19日
【發(fā)明者】史公權(quán), 鄒存生, 馬俊倉(cāng) 申請(qǐng)人:三普藥業(yè)有限公司