植物乳桿菌發(fā)酵液和納米氧化鋅抑菌組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了植物乳桿菌發(fā)酵液和納米氧化鋅抑菌聯(lián)合物，屬于醫(yī)藥領(lǐng)域。抑菌組合物中植物乳桿菌發(fā)酵液與納米氧化鋅兩者合用對(duì)抑制大腸桿菌O157、臘樣芽胞桿菌起到聯(lián)合抑菌的作用。本發(fā)明的一種植物乳桿菌發(fā)酵液與納米氧化鋅抑菌混合物與現(xiàn)有的技術(shù)相比，解決了常規(guī)抑菌方法中納米氧化鋅用難以溶于水的問題，同時(shí)采用兩種抑菌物質(zhì)減少了微生物耐酸的發(fā)生機(jī)率、降低了其對(duì)人體的毒性，更加安全。
【專利說明】植物乳桿菌發(fā)酵液和納米氧化鋅抑菌組合物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及一種抑菌混合物。
【背景技術(shù)】
[0002]無機(jī)抗菌劑及其制品，以具有安全、可靠、穩(wěn)定和持久的抗菌性能等獨(dú)特的功能，成為當(dāng)前抗菌材料領(lǐng)域的研究開發(fā)熱點(diǎn)，并普遍受到人們的關(guān)注，成為大家主要研究的對(duì)象。其中納米氧化鋅為白色固體，穩(wěn)定性好，高溫下不變色、不分解、價(jià)格低廉、資源豐富，己成為無機(jī)抗菌劑研究的熱點(diǎn)之一，同時(shí)鋅元素為動(dòng)物和人體內(nèi)的必需元素，其在體內(nèi)具有廣泛的生理、生化功能，同時(shí)也被稱為“生命元素”。納米氧化鋅作為抑菌劑在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域已引起廣泛關(guān)注。
[0003]納米氧化鋅制成抑菌劑需制成液體，但納米氧化鋅難以溶于水，以至于難以體現(xiàn)其抑菌性能。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]針對(duì)納米氧化鋅難以溶于水以至于難以體現(xiàn)其抑菌性能的問題，本發(fā)明人經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)，植物乳桿菌 發(fā)酵液能增強(qiáng)納米氧化鋅的溶解度。此外，植物乳桿菌代謝能產(chǎn)生有機(jī)酸、雙乙酰、過氧化氫和細(xì)菌素等物質(zhì)，這些物質(zhì)也能夠抑制病原菌和腐敗菌，故植物乳桿菌發(fā)酵液也能增強(qiáng)納米氧化鋅的抑菌性能，同時(shí)使微生態(tài)制劑具有特殊保健功能。本發(fā)明的目的在于提供一種植物乳桿菌和納米氧化鋅混合物，提高納米氧化鋅的溶解度，減少微生物耐藥性的產(chǎn)生。
[0005]本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:
一種植物乳桿菌發(fā)酵液和納米氧化鋅抑菌組合物，含有植物乳桿菌發(fā)酵液、納米氧化
鋅；
所述植物乳桿菌發(fā)酵液制備包括如下步驟:取植物乳桿菌單菌落接種于5mL的MRS培養(yǎng)液中，厭氧培養(yǎng)至菌濃度在IO8 CFU/mL的植物乳桿菌發(fā)酵液；所述納米氧化鋅為IOmg/mL的納米氧化鋅膠體溶液。植物乳桿菌發(fā)酵液在生產(chǎn)后也可以直接凍干保存，使用時(shí)稀釋。
[0006]抑制大腸桿菌0157和臘樣芽孢桿菌時(shí)，植物乳桿菌發(fā)酵液與納米氧化鋅的體積比為9:1。
[0007]本發(fā)明還涉及所述抑菌組合物在制備抑制大腸桿菌0157藥物中的應(yīng)用。
[0008]本發(fā)明還涉及所述抑菌組合物在制備抑制臘樣芽孢桿菌藥物中的應(yīng)用。
[0009]本發(fā)明抑菌組合物植物乳桿菌發(fā)酵液能增強(qiáng)納米氧化鋅的溶解度。此外，植物乳桿菌能代謝產(chǎn)生有機(jī)酸、雙乙酰、過氧化氫和細(xì)菌素等物質(zhì)，這些物質(zhì)也能夠抑制病原菌和腐敗菌，植物乳桿菌發(fā)酵液有協(xié)同增強(qiáng)納米氧化鋅的抑菌性能，同時(shí)使微生態(tài)制劑具有特殊保健功能。
【具體實(shí)施方式】[0010]所用菌株、試劑均為常規(guī)市售菌株、試劑。
[0011]實(shí)施例1
1，植物乳桿菌發(fā)酵液制備包括如下步驟:以植物乳桿菌為出發(fā)菌株，MRS為液體培養(yǎng)基，接植物乳桿菌(購自ATCC編號(hào)為ATCC 8014)單菌落于5mL的MRS為液體培養(yǎng)基中，于37°C厭氧培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)24h，即可以得到菌濃度在IO8 CFU/mL的植物乳桿菌發(fā)酵液。
[0012]2，納米氧化鋅膠體溶液的制備:取阿拉丁公司生產(chǎn)的納米氧化鋅0.01g溶于ImL的蒸懼水中，震蕩混勻得到10mg/mL的納米氧化鋅膠體溶液。
[0013]3、植物乳桿菌和納米氧化鋅聯(lián)合抑菌作用。
[0014]a細(xì)菌的培養(yǎng)
挑取LB瓊脂培養(yǎng)基上的大腸桿菌0157的單菌落于IOmL LB肉湯培養(yǎng)基中，置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h，再按I %的接種量接種于5 mL的LB肉湯培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)5h后，取I mL上述菌液用IxPBS水連續(xù)稀釋兩個(gè)梯度，最終的菌液大約為IO8 CFU/mL。
[0015]b植物乳桿菌發(fā)酵液和納米氧化鋅在抑菌性能上的聯(lián)合作用
分別取900 μ L上述已稀釋好的菌液于1.5 mL滅菌的離心管中，向I號(hào)離心管中加入100 μ L植物乳桿菌發(fā)酵液，向2號(hào)離心管中加入100 μ L濃度為10 mg/mL的納米氧化鋅膠體溶液，向3號(hào)離心管中加入100 μ L納米氧化鋅膠體溶液和植物乳桿菌發(fā)酵液的混合液(1:9)，向4號(hào)離心管中加入100 μ LlxPBS水，置于37°C恒溫震蕩培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 h。每組實(shí)驗(yàn)平行三次。
[0016]c平板計(jì)數(shù)
將實(shí)驗(yàn)組待測(cè)液和空白組都用IxPBS連續(xù)稀釋4個(gè)梯度，10_2、10_3、10_4各取出10 μ L分別均勻涂布在LB固體平板上；平板吹干后，37°C倒置培養(yǎng)12 h，長(zhǎng)出菌落后計(jì)數(shù)，以30-300個(gè)菌落形成單位(CFU)為有效的計(jì)數(shù)范圍。
[0017]實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
【權(quán)利要求】
1.一種植物乳桿菌發(fā)酵液和納米氧化鋅抑菌組合物，其特征在于含有植物乳桿菌發(fā)酵液、納米氧化鋅。
2.如權(quán)利要求1所述的抑菌組合物，其特征在于所述植物乳桿菌發(fā)酵液制備包括如下步驟:取植物乳桿菌單菌落接種于5mL的MRS培養(yǎng)液中，厭氧培養(yǎng)至菌濃度在108CFU/mL的植物乳桿菌發(fā)酵液；所述納米氧化鋅為10mg/mL的納米氧化鋅膠體溶液。
3.如權(quán)利要求1所述的抑菌組合物，其特征在于抑制大腸桿菌0157和臘樣芽孢桿菌時(shí)，植物乳桿菌發(fā)酵液與納米氧化鋅的體積比為9:1。
4.如權(quán)利要求1~2任一所述抑菌組合物在制備抑制大腸桿菌0157藥物中的應(yīng)用。
5.如權(quán)利要求 1~2任一所述抑菌組合物在制備抑制臘樣芽孢桿菌藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K33/30GK103977025SQ201410179431
【公開日】2014年8月13日 申請(qǐng)日期:2014年4月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月30日
【發(fā)明者】許恒毅, 況慧娟, 段宏, 沈駿, 邴雙飛 申請(qǐng)人:南昌大學(xué)