山核桃甾醇提取物及其制備方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種山核桃甾醇提取物，該提取物中總甾醇重量含量為10～50%，并且所述的總甾醇包括β-谷甾醇、巖皂甾醇、菜油甾醇和豆甾醇?？傜薮贾械摩?谷甾醇重量含量為70-95%，并且β-谷甾醇、巖皂甾醇、菜油甾醇、豆甾醇之間的重量比為70～95:1～10:2～12:1～15。本發(fā)明還同時提供了上述山核桃甾醇提取物的制備方法。該山核桃甾醇提取物能用于制備降血脂的藥物、日用化妝品、或保健品。
【專利說明】山核桃留醇提取物及其制備方法和用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及農(nóng)副產(chǎn)品深加工及綜合利用領(lǐng)域。更具體地涉及一種從山核桃中提取的植物留醇類提取物及其制法和用途。
【背景技術(shù)】
[0002]山核桃(Carya)又名“小胡桃”、核桃楸，系國家3級保護的瀕危植物。屬胡桃科、胡桃屬植物，起源于第三紀(jì)及白堊紀(jì)，是被子植物中較古老的類群之一。山核桃生長在氣候優(yōu)越、土壤肥沃、植被茂盛的自然環(huán)境中，屬純野生果類，是集山地之靈氣哺育而成，無任何公害污染的天然綠色食品。山核桃屬種類較多，約有30種，主產(chǎn)美洲，我國有臨安山核桃、大別山山核桃、湖南山核桃、貴州山核桃和云南山核桃5種，另從美洲弓丨入栽培美國山核桃。山核桃屬中種植量較大的為美國山核桃和臨安山核桃。美國山核桃年產(chǎn)量為78000噸-18000噸，市場價值可達200億到400億美元。臨安山核桃主產(chǎn)于浙、皖交界的天目山區(qū)，臨安是浙江山核桃主產(chǎn)地之一。截至2011年，杭州市山核桃種植面積超過80萬畝，產(chǎn)值超過23億元。
[0003]山核桃中天然活性成分種類較多，除基本的營養(yǎng)成分外，山核桃中含有的主要功能性成分有:酚酸、黃酮、留體類、萜類、生物堿、活性多糖、維生素等，其中以酚酸、生育酚、甾醇等為主。目前對山核桃活性成分的研究多局限在具有本國資源特色的山核桃品種上，有其是美國山核桃的研究較為全面和深入。
[0004]中國是山核桃生產(chǎn)、利用和研究的古國。然而國內(nèi)科研工作者對山核桃資源的深入開發(fā)和利用上仍處 于探索階段，如利用山核桃制備膳食纖維、分離活性蛋白、多糖，開發(fā)聞營養(yǎng)的飼料等。
[0005]Laura等(2010)研究山核桃中酚酸含量極為豐富，主要含有鞣花酸、沒食子酸、綠原酸、對羥基苯甲酸，其中鞣花酸為其主要成分。Margit等(2006)系統(tǒng)研究了 10種常見堅果中的生育酚種類和含量，研究表明美國山核桃生育酚以Y -生育酚為主，其含量可達生育酚總量的90%以上。
[0006]然而，迄今為止人們多山核桃中的許多構(gòu)成成分和功能還了解較少。為了更有效地開發(fā)和利用山核桃資源，本領(lǐng)域迫切需要發(fā)現(xiàn)和開發(fā)山核桃中具有有益功能的各種成分。
[0007]植物留醇是3位為羥基的留體化合物，以環(huán)戊烷全氫菲為主體骨架，天然植物甾醇種類繁多，主要包括谷留醇、豆留醇、菜籽留醇和菜油留醇四種無甲基留醇。一般認(rèn)為，植物油及其加工產(chǎn)品是植物留醇最豐富的天然來源，其次是谷物副產(chǎn)品和堅果。玉米油、菜籽油、米糠油、小麥胚芽油、黑麥、小麥、大麥和燕麥都含有豐富的留醇。關(guān)于植物甾醇的應(yīng)用，迄今已發(fā)表了大量的著作，領(lǐng)域涉及醫(yī)藥、化妝品、食品、飼料、光學(xué)產(chǎn)品、油漆、顏料、樹脂、造紙、紡織、殺蟲劑及除草劑等。以植物留醇為原料，可合成幾乎所有的留體藥物，其在世界范圍內(nèi)是一個有著40億美元的產(chǎn)業(yè)。因此，植物留醇的分離和純化得到了人們的高度重視。[0008]植物油精煉副產(chǎn)物，制糖副產(chǎn)物以及造紙廢液中都具有豐富的留醇。其中，植物油精煉副產(chǎn)物是留醇的主要來源。從原料中提取留醇通常分兩步進行。先從原料中提取粗甾醇，然后再進一步精制。常用方法包括溶劑結(jié)晶法、分子蒸餾法、酶法、干式皂化法和絡(luò)合法。但這些工藝均還不夠理想，或是耗費大量易燃有機溶劑，或是產(chǎn)品純度不高，或是高溫易使甾醇分解。
[0009]目前現(xiàn)有的山核桃提取物，其總甾醇僅包含谷甾醇和豆甾醇。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0010]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種從山核桃中提取的植物留醇類提取物一山核桃留醇提取物及其制備方法和用途。
[0011]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種山核桃留醇提取物，該提取物中總甾醇重量含量為10~50%，并且所述的總留醇包括β-谷留醇、巖皂留醇、菜油留醇和豆留醇(基本由上述4種留醇組成)。
[0012]作為本發(fā)明的山核桃甾醇提取物的改進:總甾醇中的β_谷甾醇含量為70-95%，并且β -谷甾醇、巖皂甾醇、菜油甾醇、豆甾醇之間的重量比為70~95:1~10:2~12:1~15。
[0013]作為本發(fā)明的山核桃留醇提取物的進一步改進:該提取物中總留醇重量含量為20-40%，并且總甾醇中的β-谷甾醇含量為75-90%。
[0014]作為本發(fā)明的山核桃甾醇提取物的進一步改進:β_谷甾醇、巖皂甾醇、菜油甾醇、豆甾醇之間的重量比為75~90:2~10:2~10:2~11。
[0015]作為本發(fā)明的山核桃甾醇提取物的進一步改進:β_谷甾醇、巖皂甾醇、菜油甾醇、豆甾醇之間的重量比例為76.5:9.6:2.9:11。
[0016]本發(fā)明還提供了上述山核桃留醇提取物的制備方法，包括以下步驟:
[0017]I)、將山核桃粉碎(20-40目)后作為原料，在分離釜中，于下述條件對原料進行超臨界流體萃取:萃取劑為CO2，萃取壓力為15~35MPa，萃取溫度為40~70V,分離溫度為30~50°C,分離壓力為4~8MPa,循環(huán)動態(tài)萃取I~5h ;
[0018]2)、從分離釜中取出萃取物，經(jīng)干燥(于50~60°C干燥40~60分鐘)，從而獲得山核桃留醇提取物。
[0019]作為本發(fā)明的山核桃甾醇提取物的制備方法的改進:步驟I)中的萃取壓力為20~30MP，萃取溫度為45~65°C，使用夾帶劑，所述夾帶劑的用量為山核桃重量的5~15% ;所述夾帶劑為Cl~C4的醇類有機溶劑(即，Cl~C4的醇類有機溶劑中的任意一種)或Cl~C4的酮類有機溶劑(即，Cl~C4的酮類有機溶劑中的任意一種)。
[0020]本發(fā)明還同時提供了利用上述山核桃甾醇提取物制備而得的組合物，由
0.01-99.9wt%的山核桃留醇提取物和作為余量的可接受載體組成。
[0021]作為本發(fā)明的組合物的改進:組合物為藥物組合物、保健品組合物、食品組合物或化妝品組合物。
[0022]本發(fā)明還同時提供了上述山核桃甾醇提取物的用途:用于制備降血脂的藥物、日用化妝品、或保健品。
[0023]本發(fā)明人經(jīng)過多年深入研究，對山核桃的各種成分進行了提取分離，獲得了一種可有效消炎、防治心腦血管疾病、降血脂的提取物，對該提取物的研究表明，該提取物主要含β-谷留醇、巖皂留醇、菜油留醇和豆留醇等成分，在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。
[0024]如本文所用，山核桃指山核桃樹的果實。可用于本發(fā)明山核桃可以是山核桃仁，也可以是山核桃皮，也可以是山核桃加工過程中產(chǎn)生的廢棄物，如山核桃殼和廢果等。優(yōu)選原料是山核桃殼和山核桃仁。
[0025]本發(fā)明采用的原料可以進行預(yù)處理，也可以不經(jīng)過預(yù)處理。一種優(yōu)選原料是粉末形式的山核桃仁。例如，收集山核桃仁、山核桃皮、山核桃殼，打成漿壓榨或直接晾曬到一定程度，再干燥到含水量約5~10%，將其粉碎到約20~40目的粉末。
[0026]可用于本發(fā)明的山核桃品種沒有特別限制，可以是不同種的山核桃，優(yōu)選臨安山核桃和美國山核桃。
[0027]如本文所用，“本發(fā)明的活性物質(zhì)”指山核桃甾醇提取物。
[0028]如本文所用，“本發(fā)明的活性物質(zhì)制劑”或“本發(fā)明的活性組合物”指含有山核桃甾醇提取物的組合物，包括藥物組合物和保健品組合物。
[0029]本發(fā)明的山核桃留醇提取物宜用超臨界流體萃取技術(shù)提取，雖然也可其他方法提取。
[0030]一種優(yōu)選的方法是采用超臨界流體萃取技術(shù)從山核桃及其加工廢棄物(山核桃殼)中提取留醇類化合物。在一優(yōu)選方式中，萃取劑為CO2，萃取壓力為15~35MPa，萃取溫度為40~70°C，分離溫度為30~50°C，分離壓力為4~8MPa，并可以在萃取過程中加入醇或酮作為夾帶劑，起到增效作用。
[0031]在更優(yōu)選的方式中，將`約20-40目山核桃粉末放入超臨界萃取釜中，萃取劑選CO2,CO2經(jīng)壓縮機升壓同時對萃取釜加溫，當(dāng)萃取壓力達到15~35MPa，萃取溫度達到40~70°C時，開始循環(huán)；在循環(huán)過程中，CO2和萃取物在分離器中經(jīng)減壓，將萃取物在分離器中析出，CO2循環(huán)使用，分離釜I設(shè)定分離壓力為6~8MPa、溫度為35~45°C，分離釜2設(shè)定分離壓力為4~7MPa、溫度為30~35°C ;在萃取過程中使用或不使用夾帶劑的狀態(tài)下，循環(huán)動態(tài)萃取I~5h，使用的夾帶劑可以是Cl~C4的醇或酮類有機溶劑(如甲醇、乙醇、丙酮等)，用量一般為原料重量的5~15%。萃取完成后，從分離釜中取出萃取物，經(jīng)低溫干燥后，就得到山核桃留醇提取物，并從分離釜中回收夾帶劑(在使用夾帶劑的狀態(tài)下)，停機從萃取釜中取出萃余物。
[0032]本發(fā)明的山核桃甾醇提取物是一種以谷甾醇、巖皂甾醇、菜油甾醇、豆甾醇為主的混合物。用Liebermann Burchard分光光度法檢測，以β -谷留醇為標(biāo)準(zhǔn)品,測得提取物中總甾醇的含量為10~50% (較佳地為20~40%);用UPLC技術(shù)分析，其中β _谷甾醇含量(相對于總甾醇而言)為70~95% (較佳為75~90%)，β -谷甾醇、巖皂甾醇、菜油甾醇、豆甾醇之間比例為70~95:1~10:2~12:1~15。更佳地為75~90:2~10:2~10:2 ~11。
[0033]本發(fā)明的山核桃甾醇提取物具有消炎、降血脂等有益作用，因此可用于制備防治心腦血管疾病(降血脂)的藥物、日用化妝品、保健品。因此，本發(fā)明還提供了一種含有本發(fā)明的山核桃留醇提取物作為有效成份的組合物(包括藥物組合物、保健品組合物、食品組合物和化妝品組合物等)。此外，本發(fā)明的山核桃留醇提取物還可用于制備降血脂、降膽固醇等防治心腦血管疾病的藥物、保健品和食品。[0034]在獲得山核桃留醇提取物后，可用常規(guī)方法將其與藥學(xué)上、食品學(xué)上或保健品或化妝品上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑相混合，形成本發(fā)明的藥物組合物、食品組合物、保健品組合物或化妝品組合物。這類載體包括(但并不限于):鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其組合。
[0035]以藥物組合物或保健品組合物為例，它們可以為固態(tài)(如顆粒劑、片劑、凍干粉、栓劑、膠囊、舌下含片)或液態(tài)(如口服液)或其他合適的形狀。本發(fā)明的活性成分(山核桃甾醇提取物))的含量通常為組合物重量的0.01-99.9%,較佳地為1-99%，更較佳地為2_95%，進一步更佳地為5-90%，最佳地10-80%。
[0036]藥物組合物可以為單劑或多劑形式。按施用劑量計，通常含有10_2000mg/劑，較佳地約20-1OOOmg/劑，更佳地50-500mg/劑。
[0037]本發(fā)明的藥物組合物可以通過常規(guī)途徑進行給藥，優(yōu)選方式是口服。藥物制劑應(yīng)與給藥方式相匹配。本發(fā)明藥物的施用量，按山核桃留醇提取物計算，通常為每天約
0.l-500mg/kg 體重,較佳地約 0.5_50mg/kg 體重。
[0038]本發(fā)明的主要優(yōu)點是:
[0039](a)提供了一種來源廣闊、組成明晰、品質(zhì)優(yōu)良、質(zhì)量可控、用途廣泛并具有多種生理和藥理活性的山核桃留醇提取物。
[0040](b)通過超臨界CO2流體萃取技術(shù)實現(xiàn)了山核桃及其加工廢棄物中植物留醇的高效提取，并且工藝操作簡便，得到的山核桃留醇提取物質(zhì)量好，品質(zhì)穩(wěn)定。 【專利附圖】
【附圖說明】
[0041]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的【具體實施方式】作進一步詳細(xì)說明。
[0042]圖1為山核桃甾醇提取物的超高效液相色譜圖；
[0043]圖2山核桃甾醇提取物中植物甾醇的結(jié)構(gòu)圖。
【具體實施方式】
[0044]下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0045]通用方法
[0046]I)山核桃甾醇提取物中植物甾醇含量測定-Liebermann Burchard比色法
[0047]將樣品用三氯甲烷萃取溶解后取下層三氯甲烷層。準(zhǔn)確移取Iml三氯甲烷樣品溶液，加入醋酐2ml和濃硫酸I滴，振蕩搖勻后用Icm的比色杯在625nm波長處測定吸光值。每一個樣品平行測定2次，以β_谷留醇為標(biāo)準(zhǔn)品，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線換算成相應(yīng)的總留醇含量，取平均值得到樣品中植物總留醇的含量。
[0048]2)山核桃甾醇提取物的有效成分分析——超高效液相色譜(UPLC)
[0049]通過使用超高效液相色譜分析萃取物中存在的甾醇成分和含量。UPLC條件:Waters公司的超高效液相色譜，ACQUITY BEH C18色譜柱(2.1mm
1.d.* 150mm, 1.7 μ m, Waters),流動相為乙腈:水=9:1,流速為 0.6mL/min,柱溫為 40°C,檢測波長為210nm。檢測掃面范圍為210nm至400nm。[0050]以下實施例中所選用的超臨界萃取儀為常規(guī)的一萃二分CO2循環(huán)式，包括萃取釜、分離釜、CO2儲罐、夾帶劑泵等。
[0051]實施例1、一種山核桃甾醇提取物的制備方法:
[0052]將臨安山核桃剝殼后，將山核桃仁打成漿，初步曬干后，再用微波干燥到水分含量為5%(重量％)，粉碎成20目的山核桃粉末5kg作為原料，并將其放入超臨界萃取釜中，升溫到50°C，開動柱塞泵泵入CO2，通過預(yù)熱器進入萃取釜中，當(dāng)壓力達到25MPa，開始循環(huán)；開啟夾帶劑泵，使10%原料重量的乙醇通過預(yù)熱器后同時進入萃取釜；在循環(huán)過程中，0)2和萃取物在分離器中經(jīng)減壓，將萃取物在分離器中析出，CO2循環(huán)使用，分離釜I設(shè)定分離壓力為8MPa、溫度為40°C，分離釜2設(shè)定分離壓力為5MPa、溫度為30°C;萃取4h后，從分離釜
1、2中取出萃取物60g，得率為1.2%，經(jīng)低溫干燥(B卩，于50-60°C干燥50分鐘)后，得到45g的山核桃留醇提取物，并從分離釜1、2中回收夾帶劑；停機從萃取釜中取出萃余物。
[0053]對提取物進行成分分析，結(jié)果如圖1-2所示。[0054]圖1表明山核桃甾醇提取物成分包括:9min左右為巖皂甾醇，Ilmin左右為菜油甾醇，12min左右為豆甾醇，16min左右為β -谷甾醇。
[0055]圖2證實了提取物中含有巖阜甾醇(fucosterol)、菜油甾醇(campesterol)、豆甾醇(stigmasterol)、β -谷留醇(β -sitosterol)。
[0056]UPLC法分析山核桃甾醇提取物的成分含量，其總甾醇含量為25.6%，β-谷甾醇為19.6% (即，總甾醇中谷甾醇的含量為76.56%)，β-谷甾醇、巖皂甾醇、菜油甾醇、豆甾醇之間的重量比例為76.5:9.6:2.9:11。
[0057]實施例2、一種山核桃甾醇提取物的制備方法:
[0058]將美國山核桃殼殼初步曬干后用熱風(fēng)(70~90°C)干燥到水分含量為5%，粉碎成20目的山核桃殼粉末5kg作為原料，并將其放入超臨界萃取釜中，升溫到60°C，開動柱塞泵泵入CO2，通過預(yù)熱器進入萃取釜中，當(dāng)壓力達到30MPa，開始循環(huán)；開啟夾帶劑泵，使10%的丙酮通過預(yù)熱器后同時進入萃取釜；在循環(huán)過程中，CO2和萃取物在分離器中經(jīng)減壓，將萃取物在分離器中析出，CO2循環(huán)使用，分離釜I設(shè)定分離壓力為8MPa、溫度為45°C，分離釜2設(shè)定分離壓力為5MPa、溫度為30°C ;萃取2.5h后，從分離釜1、2中取出萃取物35g，得率為0.7%，經(jīng)低溫干燥后，得到31g的山核桃取物，并從分離釜1、2中回收夾帶劑；停機從萃取釜中取出萃余物。
[0059]對提取物進行成分分析，結(jié)果同實施例1。UPLC法分析提取物的成分含量，其總甾醇含量為31.7%，β -谷甾醇含量為25.4% (即，總甾醇中β -谷甾醇的含量為80.12%)，β -谷甾醇、巖皂甾醇、菜油甾醇、豆甾醇比例為80.2:3.5:6.4:9.9。
[0060]實施例3、一種山核桃甾醇提取物的制備方法:
[0061]將云南山核桃仁粉碎后打成漿，經(jīng)壓榨除水初步曬干后，用微波干燥到水分含量為5%，粉碎成20目的山核桃仁粉末6kg，并將其放入超臨界萃取釜中，升溫到45°C，開動柱塞泵入CO2，通過預(yù)熱器進入萃取釜中，當(dāng)壓力達到20MPa，開始循環(huán)；在循環(huán)過程中，CO2和萃取物在分離器中經(jīng)減壓，將萃取物在分離器中析出，CO2循環(huán)使用，分離釜I設(shè)定分離壓力為6MPa、溫度為35°C，分離釜2設(shè)定分離壓力為5MPa、溫度為30°C;萃取Ih后，從分離釜1、2中取出萃取物60g，得率為1.0%，經(jīng)低溫干燥后，得到49g的山核桃留醇提取物；停機并從萃取爸中取出萃余物。[0062]對提取物進行成分分析，結(jié)果同實施例1。UPLC法分析提取物的成分含量，其總甾醇含量為37.1%，β-谷甾醇含量為32.8%卿，總甾醇中β-谷甾醇的含量為88.4%)，β-谷甾醇、巖皂甾醇、菜油甾醇、豆甾醇之間比例為88.5:2:7.5:2。
[0063]實施例4、一種山核桃甾醇提取物的制備方法:
[0064]將湖南山核桃仁和殼磨碎后打成漿，經(jīng)壓榨除水后初步曬干后，用微波干燥到水分含量為5%，粉碎成20目的粉末6kg，并將其放入超臨界萃取釜中，升溫到50°C，開動柱塞泵泵入CO2，通過預(yù)熱器進入萃取釜中，當(dāng)壓力達到到15MPa，開始循環(huán)；開啟夾帶劑泵，使10%的乙醇通過預(yù)熱器后同時進入萃取釜；在循環(huán)過程中，0)2和萃取物在分離器中經(jīng)減壓，將萃取物在分離器中析出，CO2循環(huán)使用，分離釜I設(shè)定分離壓力為7MPa、溫度為40°C，分離釜2設(shè)定分離壓力為5MPa、溫度為30°C ;萃取2.5h后，從分離釜1、2中取出萃取物90g，得率為1.8%，經(jīng)低溫干燥后，得到78g的山核桃留醇提取物，從分離釜1、2中回收夾帶劑，停機從萃取爸中取出萃余物。
[0065]對提取物進行成分分析，結(jié)果同實施例1。UPLC法分析提取物的成分含量，其總甾醇含量為27.3%，β -谷甾醇含量為22.4% (即，總甾醇中β -谷甾醇的含量為82.05%),β-谷甾醇、巖皂甾醇、菜油甾醇、豆甾醇之間比例為81.9:6.5:3.8:7.8。
[0066]實施例5、一種山核桃甾醇提取物的制備方法:
[0067]將貴州山核桃皮切碎后初步曬干后，用微波干燥到水分含量為5%，粉碎成20目的粉末5kg，并將其放入超臨界萃取釜中，升溫到50°C，開動柱塞泵泵入CO2，通過預(yù)熱器進入萃取釜中，當(dāng)壓力達到到25MPa，開始循環(huán)；在循環(huán)過程中，CO2和萃取物在分離器中經(jīng)減壓，將萃取物在分離器中析出，CO2循環(huán)使用，分離釜I設(shè)定分離壓力為8MPa、溫度為45°C，分離釜2設(shè)定分離壓力為5MPa、溫度為30°C;萃取4h后，從分離釜1、2中取出萃取物45g，得率為0.9%，經(jīng)低溫干燥后，得到37g的山核桃留醇提取物，停機并從萃取釜中取出萃余物。
[0068]對提取物進行成分分 析，結(jié)果同實施例1。UPLC法分析提取物的成分含量，其總甾醇含量為22.9%, β -谷甾醇含量為19.8% (即，總甾醇中β -谷甾醇的含量為86.46%),β-谷甾醇、巖皂甾醇、菜油甾醇、豆甾醇之間比例為86.6:2:8.7:3.6。
[0069]活性測試1、將實施例1所得的山核桃留醇提取物進行如下性能檢測
[0070]山核桃甾醇提取物的降血脂作用:
[0071]清潔級實驗大鼠飼養(yǎng)室，溫度23±2°C，日溫差±1°C，濕度50~70%，噪音< 50dB，光照150~200Lx，12h:12h明暗交替。飲水及方式:去離子水，自由飲水。喂養(yǎng)方式:上午8:00~8:30之間喂食，除正常對照組喂普通飼料外，其余各組喂高脂飼料(自由采食)。90只體重在150~170g的SD雄性大鼠，用基礎(chǔ)飼料作3d適應(yīng)性飼養(yǎng)后，隨機分為正常對照組(10只)和高脂造模組(80只)。造模組參照徐叔云的《藥理實驗方法學(xué)》喂飼高脂飼料，飼養(yǎng)期間，隔日記錄進食量，每周稱重，4周后測定空腹血清TC，當(dāng)TC值>3.0Ommol/L即確定為高脂血癥動物模型，選出60只，隨機分為山核桃留醇提取物低中高三個劑量組、β -谷留醇組、洛伐他汀試驗組和模型對照組，每組10只。三個劑量的山核桃甾醇提取物組、谷留醇組、洛伐他汀組、正常對照、模型對照組分別按表灌飼給藥，持續(xù)60d，飼養(yǎng)期間，正常對照組喂飼普通飼料，其余組仍喂飼高脂飼料，記錄進食量，每周稱重，并收集糞便，烘干稱重。分別于實驗第20、40、60d禁食12h，大鼠眼眶靜脈叢取血，制備血清，在日立7060全自動生化分析儀上測定血清中TC、TG、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和堿性磷酸酶(ALP)含量。斷頸處死，取肝臟，稱重，計算肝臟指數(shù)；另取肝大葉，用于測定肝中TC和TG含量。采用SPSS Vl0.0和SAS8.0軟件包進行統(tǒng)計。計量資料先經(jīng)正態(tài)分布和方差齊性檢驗，方差不齊性采用非參數(shù)檢驗。同組樣本前后比較采用配對t檢驗。所有數(shù)據(jù)以(x±SD)表示。
[0072]表1、山核桃留醇提取物(PBS25)大鼠降脂試驗的組別設(shè)計
【權(quán)利要求】
1.山核桃留醇提取物，其特征在于:該提取物中總留醇重量含量為10~50%，并且所述的總留醇包括谷留醇、巖皂留醇、菜油留醇和豆甾醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山核桃留醇提取物，其特征在于:總留醇中的β_谷甾醇重量含量為70-95%，并且β_谷甾醇、巖皂甾醇、菜油甾醇、豆甾醇之間的重量比為70~95:1 ~10:2 ~12:1 ~15。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的山核桃留醇提取物，其特征在于:該提取物中總留醇重量含量為20-40%，并且總甾醇中的β-谷甾醇重量含量為75-90%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的山核桃留醇提取物，其特征在于:β-谷留醇、巖皂甾醇、菜油甾醇、豆甾醇之間的重量比為75~90:2~10:2~10:2~11。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的山核桃甾醇提取物，其特征在于:β-谷甾醇、巖皂甾醇、菜油甾醇、豆甾醇之間的重量比例為76.5:9.6:2.9:11。
6.如權(quán)利要求1~5任一所述的山核桃留醇提取物的制備方法，其特征在于包括以下步驟: 1)、將山核桃粉碎后作為原料，在分離釜中，于下述條件對原料進行超臨界流體萃取:萃取劑為CO2，萃取壓力為15~35MPa，萃取溫度為40~70°C，分離溫度為30~50°C，分離壓力為4~8MPa,循環(huán)動態(tài)萃取I~5h ; 2)、從分離釜中取出萃取物，經(jīng)干燥，從而獲得山核桃留醇提取物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的山核桃留醇提取物的制備方法，其特征在于:· 步驟I)中的萃取壓力為20~30MP，萃取溫度為45~65°C，使用夾帶劑，所述夾帶劑的用量為山核桃重量的5~15% ;所述夾帶劑為Cl~C4的醇類有機溶劑或Cl~C4的酮類有機溶劑。
8.利用如權(quán)利要求1~5任意一種山核桃留醇提取物制備而得的組合物，其特征在于:由0.01-99.9wt%的山核桃留醇提取物和作為余量的可接受載體組成。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其特征在于:所述組合物為藥物組合物、保健品組合物、食品組合物或化妝品組合物。
10.如權(quán)利要求1~5任意一種山核桃留醇提取物的用途，其特征在于:用于制備降血脂的藥物、日用化妝品、或保健品。
【文檔編號】A61K8/63GK103845396SQ201410077926
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2014年3月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月5日
【發(fā)明者】陸柏益, 楊佳佳, 胡銀洲, 毛淑琴, 周菲, 蔣易蓉, 洪雅雯 申請人:浙江大學(xué)