一種主動靶向固體脂質(zhì)納米載體及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及主動靶向固體脂質(zhì)納米載體及其制備方法與應(yīng)用，可有效解決現(xiàn)有腫瘤治療藥物副作用大、治療效果不佳的問題，其解決的技術(shù)方案是，由腫瘤靶向分子、碳納米管和化療藥物構(gòu)成，所述的腫瘤靶向分子為葉酸；所述的碳納米管為單壁碳納米管及其衍生物、多壁碳納米管及其衍生物的一種；所述的化療藥物為多西他賽，本發(fā)明原料來源豐富，成本低，副作用小，能有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，是腫瘤靶向治療中藥物載體上的創(chuàng)新。
【專利說明】一種主動靶向固體脂質(zhì)納米載體及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，特別是一種主動靶向固體脂質(zhì)納米載體及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]碳納米管(carbon nanotubes, CNT)具有中空納米結(jié)構(gòu)與獨特的理化性質(zhì),如特殊的光學(xué)性質(zhì)、大的比表面積、高的熱穩(wěn)定性和化學(xué)惰性以及大離域η鍵等，并具有獨特的跨膜能力。碳納米管可以有效攜帶蛋白質(zhì)、抗體、多肽、藥物和核酸等生物活性物質(zhì)，通過細(xì)胞內(nèi)吞作用被動穿過多種細(xì)胞膜，從而成為人們關(guān)注的藥物載體，在藥物、核酸轉(zhuǎn)運方面具有潛在應(yīng)用價值。碳納米管對700~IlOOnm范圍的近紅外光具有高吸收特性，同時生物系統(tǒng)對此范圍的近紅外光具有高度透過性，因此可利用碳納米管的光熱轉(zhuǎn)換特性對腫瘤進(jìn)行激光熱療。碳納米管是藥物轉(zhuǎn)運載體，同時也是發(fā)揮熱療效應(yīng)的主體，可作為化療藥物增敏劑和靶向熱敏劑。但是純碳納米管不溶于水和許多有機溶劑，且在溶液中易聚集成束，難以分散，具有一定的生物毒性，限制其在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用。
[0003]固體脂質(zhì)納米粒(solid lipid nano-particles, SLN)是20世紀(jì)90年代初發(fā)展起來的新一代亞微粒給藥系統(tǒng)，粒徑在10~1000 nm,以固態(tài)天然或合成的類脂如卵磷脂、三酰甘油等為載體，將藥物包裹或夾嵌于類脂核中制成的固體膠粒給藥系統(tǒng)，以毒性低、生物相容性好、生物可降解的固態(tài)天然或合成的類脂為載體，將藥物吸附或包裹于脂質(zhì)膜中制成的新一代納米粒給藥系統(tǒng)，具有可以控制藥物釋放、避免藥物的降解或泄漏以及良好的靶向性等優(yōu)點。
[0004]主動祀向給藥系統(tǒng)(active targeting drug delivery system)是用修飾的藥物載體作為“導(dǎo)彈”，將藥物定向地運送到靶區(qū)濃集發(fā)揮藥效的藥物傳遞系統(tǒng)。主動靶向給藥系統(tǒng)因其靶向性較強、毒副作用小，越來越受到醫(yī)藥界的重視，目前研究較多的是腫瘤靶向給藥系統(tǒng)。腫瘤組織的病理生理`特征與正常組織存在顯著不同，主要表現(xiàn)為腫瘤部位血管滲透性強，大分子藥物、載體等可通過滲透和滯留增強效應(yīng)，即EPR效應(yīng)穿透血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入腫瘤組織，可長時間、高濃度蓄積在腫瘤部位。如果在藥物或載體表面連接親水性聚合物如聚乙二醇、吐溫-80等，可抵抗調(diào)理素的調(diào)理作用，在體循環(huán)中長期滯留而不被單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)捕獲，有效蓄積在實體瘤部位，更好地發(fā)揮主動靶向作用。
[0005]目前，通過固體脂質(zhì)納米載體負(fù)載碳納米管和化療藥物，并通過腫瘤靶向分子修飾形成主動靶向藥物轉(zhuǎn)運系統(tǒng)，特別是在腫瘤熱化治療藥物中的應(yīng)用尚未見報道。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006]針對上述情況，克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種主動靶向固體脂質(zhì)納米載體及其制備方法與應(yīng)用，以腫瘤靶向分子作為靶彈頭，結(jié)合碳納米管光熱轉(zhuǎn)換特性，實現(xiàn)腫瘤熱化療聯(lián)合靶向治療，可有效解決現(xiàn)有腫瘤治療藥物副作用大、治療效果不佳的問題。[0007]本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，由腫瘤靶向分子、碳納米管和化療藥物構(gòu)成，所述的腫瘤靶向分子為葉酸；所述的碳納米管為單壁碳納米管及其衍生物、多壁碳納米管及其衍生物的一種；所述的化療藥物為多西他賽。
[0008]所述的主動靶向固體脂質(zhì)納米載體的制備方法，由以下步驟實現(xiàn):
1)稱取95~IlOmg碳納米管，放入250mL燒瓶中，加入120mL的混酸和質(zhì)量濃度為30%過氧化氫溶液11~13mL，所述的混酸是由體積比的濃硫酸:濃硝酸=3:1，超聲清洗4h，再加入1000mL超純水稀釋,使用0.45 μ m微孔濾膜和布氏漏斗抽濾,再用超純水沖洗至pH中性，60°C真空干燥，得羧基化碳納米管；
2)取羧基化碳納米管45~55mg，加入25~35mg1-乙基_(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(EDC.HCl)，10~15mg N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)，置于燒瓶中，超聲分散2h ；同時取葉酸45~55mg,加入20~35mgl_乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、10~15mgN-羥基琥拍酰亞胺，置于燒瓶中，超聲分散2h ;將二者混合，以1000r/min攪拌24h使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺、葉酸，在60°C下真空干燥24h，得葉酸靶向碳納米管；
3)取5~15mg葉酸祀向碳納米管、10~30mg多西他賽,置于15mL試管中，加入8~12mg/mL泊洛沙姆188溶液l(T30mL，超聲3~5h，得負(fù)載藥物的葉酸靶向碳納米管溶液；
4)取5(T60mg單硬脂酸甘油酯、1.5~2.5mg多西他賽，置于燒杯中，75°C加熱熔融，作為油相；然后取35~45mg磷脂，置于燒杯中，加入濃度為lmg/mL負(fù)載藥物的葉酸靶向碳納米管溶液3~5mL，磁力攪拌，加熱至75°C，作為水相；在磁力攪拌下，將水相趁熱滴加同溫度的油相中，1000r/min磁力攪拌1.5~2.5h，然后400w探超分散40次，0.45 μ m濾膜過濾，得主動靶向固體脂質(zhì)納米載體。
`[0009]所述的主動靶向固體脂質(zhì)納米載體有效用于制備抗腫瘤藥物，實現(xiàn)主動靶向固體脂質(zhì)納米載體在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0010]所述的主動靶向固體脂質(zhì)納米載體，可以用于靜脈注射、肌肉注射、瘤內(nèi)注射和皮下注射、透皮給藥、體內(nèi)植入。
[0011]本發(fā)明的主動靶向固體脂質(zhì)納米載體可以負(fù)載碳納米管和化療藥物，特別是難溶性藥物。碳納米管具有光熱轉(zhuǎn)換特性和腫瘤靶向性的特點，結(jié)合對腫瘤部位進(jìn)行激光照射，可促使藥物轉(zhuǎn)運系統(tǒng)在腫瘤部位釋放藥物，從而實現(xiàn)腫瘤熱化靶向治療的作用；本發(fā)明體物理化學(xué)穩(wěn)定性良好，制備條件簡單可行，原料來源豐富，成本低，副作用小，能有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，是腫瘤靶向治療中藥物載體上的創(chuàng)新。
【具體實施方式】
[0012]以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的【具體實施方式】作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0013]實施例1
本發(fā)明在具體實施中，可由以下步驟實現(xiàn):
I)稱取95mg碳納米管，放入250mL圓底燒瓶中，加入120mL的混酸和質(zhì)量濃度為30%過氧化氫溶液llmL，所述的混酸是由體積比的濃硫酸:濃硝酸=3:1，用超聲波清洗器超聲4h,再加入1000mL超純水稀釋,使用0.45 μ m微孔濾膜和布氏漏斗抽濾,再用超純水沖洗至pH中性，60°C真空干燥，得羧基化碳納米管；
2)取羧基化碳納米管45mg,加入25mg1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽，IOmg N-羥基琥拍酰亞胺,置于燒瓶中，超聲分散2h ;同時取葉酸45mg,加入20mgl-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、IOmgN-羥基琥珀酰亞胺，置于燒瓶中，超聲分散2h ;將二者混合，以1000r/min攪拌24h使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺、葉酸，在60°C下真空干燥24h，得葉酸靶向碳納米管；
3)取5mg葉酸祀向碳納米管、IOmg多西他賽,置于15mL試管中，加入10mg/mL泊洛沙姆188溶液10mL，超聲3h，得負(fù)載藥物的葉酸靶向碳納米管溶液；
4)取50mg單硬脂酸甘油酯、1.5mg多西他賽，置于燒杯中，75°C加熱熔融，作為油相?’然后取35mg磷脂,置于燒杯中,加入濃度為lmg/mL負(fù)載藥物的葉酸祀向碳納米管溶液3mL,磁力攪拌，加熱至75°C，作為水相；在磁力攪拌下，將水相趁熱滴加同溫度的油相中，1000r/min磁力攪拌1.5h,然后400w探超分散40次,0.45 μ m濾膜過濾,得主動祀向固體脂質(zhì)納米載體。
[0014]實施例2
本發(fā)明在具體實施中，也可由以下步驟實現(xiàn):
1)稱取IOOmg碳納米管，放入250mL燒瓶中，加入120mL的混酸和質(zhì)量濃度為30%過氧化氫溶液12mL，所述的混酸是由體積比的濃硫酸:濃硝酸=3:1，用超聲波清洗器超聲4h，再加入1000mL超純水稀釋,使用0.45 μ m微孔濾膜和布氏漏斗抽濾,再用超純水沖洗至pH中性，60°C真空干燥，得羧基化碳納米管；
2)取羧基化碳納米管50mg，加入30mg1-乙基_(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽，12mg N-羥基琥拍酰亞胺,置于燒瓶中，超聲分散2h ;同時取葉酸50mg,加入27mgl_乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、12mgN-羥基琥珀酰亞胺，置于燒瓶中，超聲分散2h ;將二者混合，以1000r/min攪拌24h使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺、葉酸，在60°C下真空干燥24h，得葉酸靶向碳納米管；
3)取IOmg葉酸祀向碳納米管、20mg多西他賽,置于15mL試管中，加入10mg/mL泊洛沙姆188溶液20mL，超聲4h，得負(fù)載藥物的葉酸靶向碳納米管溶液；
4)取55mg單硬脂酸甘油酯、2mg多西他賽，置于燒杯中，75°C加熱熔融，作為油相；然后取40mg磷脂,置于燒杯中,加入濃度為lmg/mL負(fù)載藥物的葉酸祀向碳納米管溶液4mL,磁力攪拌，加熱至75°C，作為水相；在磁力攪拌下，將水相趁熱滴加同溫度的油相中，1000r/min磁力攪拌2h，然后400w探超分散40次，0.45 μ m濾膜過濾，得主動靶向固體脂質(zhì)納米載體。
[0015]實施例3
本發(fā)明在具體實施中，還可由以下步驟實現(xiàn):
1)稱取1lOmg碳納米管，放入250mL燒瓶中，加入120mL的混酸和質(zhì)量濃度為30%過氧化氫溶液13mL，所述的混酸是由體積比的濃硫酸:濃硝酸=3:1，用超聲波清洗器超聲4h，再加入1000mL超純水稀釋,使用0.45 μ m微孔濾膜和布氏漏斗抽濾,再用超純水沖洗至pH中性，60°C真空干燥，得羧基化碳納米管；
2)取羧基化碳納米管55mg,加入35mg1-乙基_(3_ 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽，15mg N-羥基琥拍酰亞胺,置于燒瓶中，超聲分散2h ;同時取葉酸55mg,加入35mgl_乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、15mgN-羥基琥珀酰亞胺，置于燒瓶中，超聲分散2h ;將二者混合，以1000r/min攪拌24h使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺、葉酸，在60°C下真空干燥24h，得葉酸靶向碳納米管；
3)取15mg葉酸祀向碳納米管、30mg多西他賽,置于15mL試管中，加入30mL泊洛沙姆188溶液(lOmg/mL)超聲5h，得負(fù)載藥物的葉酸靶向碳納米管溶液；
4)取60mg單硬脂酸甘油酯、2.5mg多西他賽，置于燒杯中，75°C加熱熔融，作為油相；然后取45mg磷脂,置于燒杯中，加入濃度為lmg/mL負(fù)載藥物的葉酸祀向碳納米管溶液5mL,磁力攪拌，加熱至75°C，作為水相；在磁力攪拌下，將水相趁熱滴加同溫度的油相中，1000r/min磁力攪拌2.5h,然后400w探超分散40次,0.45 μ m濾膜過濾,得主動祀向固體脂質(zhì)納米載體。
[0016]本發(fā)明在腫瘤治療藥物中的應(yīng)用分為體外和體內(nèi)兩部分:
(O體外:將本發(fā)明的葉酸靶向多西他賽固體脂質(zhì)納米載體加入到腫瘤細(xì)胞中進(jìn)行培養(yǎng)，給藥后4h后用780~IlOOnm波長的寬波長光源或者808nm激光中光照，光照時間I~5min,繼續(xù)培養(yǎng)24h，測定腫瘤細(xì)胞的存活率。
[0017]上述癌細(xì)胞為:器官表面或者內(nèi)部出現(xiàn)的各種實體瘤，肺癌，鼻咽癌，食道癌，胃癌，肝癌，大腸癌，乳腺癌，卵巢癌，膀胱癌，白血病，胰腺癌，宮頸癌，喉癌，甲狀腺癌，舌癌，腦瘤(顱內(nèi)腫瘤)，小腸腫瘤，膽囊癌，膽管癌，腎癌，前列腺癌，陰莖癌，睪丸腫瘤，子宮內(nèi)膜癌，絨毛膜癌，陰道惡性腫瘤，外陰惡性腫瘤，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤，皮膚癌，惡性黑色素瘤中的一種。
[0018](2)體內(nèi):將本發(fā)明的葉酸靶向多西他賽固體脂質(zhì)納米載體靜脈注射到荷瘤小鼠體內(nèi)，給藥后4h后用780~IlOOnm波`長的寬波長光源或者808nm激光中光照，光照時間I~5min，測量荷瘤小鼠的腫瘤體積大小。
[0019]上述荷瘤小鼠為:器官表面或者內(nèi)部出現(xiàn)的各種實體瘤，肺癌，鼻咽癌，食道癌，胃癌，肝癌，大腸癌，乳腺癌，卵巢癌，膀胱癌，白血病，胰腺癌，宮頸癌，喉癌，甲狀腺癌，舌癌，腦瘤(顱內(nèi)腫瘤)，小腸腫瘤，膽囊癌，膽管癌，腎癌，前列腺癌，陰莖癌，睪丸腫瘤，子宮內(nèi)膜癌，絨毛膜癌，陰道惡性腫瘤，外陰惡性腫瘤，霍奇金病，非霍奇金淋巴瘤，皮膚癌，惡性黑色素瘤中的一種。
[0020]相關(guān)試驗資料如下:
一、使用光照射本發(fā)明葉酸靶向多西他賽固體脂質(zhì)納米載體對腫瘤細(xì)胞生長活性的測
定
通過激光照射藥物轉(zhuǎn)運系統(tǒng)在體外抗腫瘤活性實驗:將MCF-7乳腺癌細(xì)胞(由上海細(xì)胞庫提供)用作待考察的癌細(xì)胞。將人乳腺癌細(xì)胞MCF-7用含有10%胎牛血清，1%雙抗的RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，將其置于5% C02、37°C的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)，隔天換液，3~4天用0.25%胰蛋白酶(含0.02% EDTA)消化傳代一次，待細(xì)胞長至80%時進(jìn)行相關(guān)實驗。所有實驗均選用對數(shù)生長期的細(xì)胞。用SRB法檢測葉酸靶向多西他賽固體脂質(zhì)納米載體對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7的細(xì)胞毒作用。取對數(shù)生長期的細(xì)胞，常規(guī)消化成單細(xì)胞懸液后計數(shù)，鋪板細(xì)胞的濃度為5 X IO3個/孔，將其接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔加入200 μ L培養(yǎng)基。然后置于5%C02、37°C的細(xì)胞孵育箱中常規(guī)培養(yǎng)。待24h細(xì)胞全部貼壁后，棄去原培養(yǎng)基，實驗組分別加入終濃度為0.001,0.01,0.l、l、10ymol/L培養(yǎng)基稀釋的葉酸靶向的多西他賽固體脂質(zhì)納米粒，每個濃度6個復(fù)孔，空白細(xì)胞組加入空白培養(yǎng)基，設(shè)6個復(fù)孔，作為對照組，繼續(xù)置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。光照組加藥后4h,808nm激光照射I~5min,光照結(jié)束后將細(xì)胞培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。分別培養(yǎng)24h、48h、72h后取出96孔板，每個復(fù)孔加入50 μ L的50%預(yù)冷TCA即終濃度為10%，37°C固定5~15min后移至4°C冰箱靜置lh，輕輕甩去固定液，每個復(fù)孔用超純水洗5遍,甩干后自然干燥。每孔加100 μ L SRB液,室溫避光染色30min, 1%醋酸液洗5遍,空氣干燥。最后加入150 μ L Tris堿液(10mmol/L, ρΗ=10.5)溶解,用全自動酶標(biāo)儀于515nm波長處測定OD值。按照公式:抑制率=1 一(試驗組OD值/空白細(xì)胞組OD值)X 100%計算各個濃度的生長抑制率。
[0021]實驗證明，當(dāng)用808nm激光照射2min,本發(fā)明藥物轉(zhuǎn)運載體的加入明顯抑制MCF-7細(xì)胞的增殖。
[0022]二、光照射時，本發(fā)明葉酸祀向多西他賽固體脂質(zhì)納米載體體內(nèi)抗腫瘤活性的測定。
[0023]取小鼠S180腹水瘤細(xì)胞，用注射用生理鹽水以3:1比例稀釋后，每只小鼠于腹腔注射0.3mL，小鼠喂養(yǎng)7天后，抽取小鼠S180腹水瘤細(xì)胞，計數(shù)后以注射用生理鹽水稀釋成濃度為2X IO6個/mL的細(xì)胞懸液，皮下接種與小鼠右前肢上部。小鼠接種腫瘤7d后，取其中36只腫瘤體積≥IOOmm3昆明小鼠，隨機分為6組，每組6只。具體分組如下:(I)對照組(生理鹽水組);(2)生理鹽水激光組；(3)藥物溶液組；(4)藥物溶液激光組；(5)制劑組；(6)制劑激光組。6組均采用靜脈給藥的方式，其中光照組使用的光源為808nm近紅外光源，功率為2W，給藥4h后激光照射腫瘤部位，一次照射時間為2min。隔天給藥一次，每次注射生理鹽水或者藥物溶液或者1.5mg/mL的制劑溶液200 μ L，共給藥7次。整個實驗過程中每日觀察小鼠生活狀態(tài)，每2d稱其體重并使用游標(biāo)卡尺測量小鼠肉瘤的長徑(A)與短徑
(B)，按公式腫瘤體積
【權(quán)利要求】
1.一種主動靶向固體脂質(zhì)納米載體，其特征在于，由腫瘤靶向分子、碳納米管和化療藥物構(gòu)成，所述的腫瘤靶向分子為葉酸；所述的碳納米管為單壁碳納米管及其衍生物、多壁碳納米管及其衍生物的一種；所述的化療藥物為多西他賽。
2.權(quán)利要求1所述的主動靶向固體脂質(zhì)納米載體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)稱取95~IlOmg碳納米管，放入250mL燒瓶中，加入120mL的混酸和質(zhì)量濃度為30%過氧化氫溶液11~13mL，所述的混酸是由體積比的濃硫酸:濃硝酸=3: 1，超聲清洗4h，再加入1000mL超純水稀釋,使用0.45 μ m微孔濾膜和布氏漏斗抽濾,再用超純水沖洗至pH中性，60°C真空干燥，得羧基化碳納米管； 2)取羧基化碳納米管45~55mg，加入25~35mg1-乙基_(3_ 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽，10~15mg N-羥基琥珀酰亞胺，置于燒瓶中，超聲分散2h ;同時取葉酸45~55mg,加入20~35mgl_乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、10~15mgN-羥基琥珀酰亞胺，置于燒瓶中，超聲分散2h ;將二者混合，以1000r/min攪拌24h使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺、葉酸，在60°C下真空干燥24h，得葉酸靶向碳納米管； 3)取5~15mg葉酸祀向碳納米管、10~30mg多西他賽,置于15mL試管中，加入8~12mg/mL泊洛沙姆188溶液l0~30mL，超聲3~5h，得負(fù)載藥物的葉酸靶向碳納米管溶液； 4)取50~60mg單硬脂酸甘油酯、1.5~2.5mg多西他賽，置于燒杯中，75°C加熱熔融，作為油相；然后取35~45mg磷脂，置于燒杯中，加入濃度為lmg/mL負(fù)載藥物的葉酸靶向碳納米管溶液3~5mL，磁力攪拌，加熱至75°C，作為水相；在磁力攪拌下，將水相趁熱滴加同溫度的油相中，1000r/min磁力攪拌1.5~2.5h，然后400w探超分散40次，0.45 μ m濾膜過濾，得主動靶向固體脂質(zhì)納米載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的主動靶向固體脂質(zhì)納米載體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)稱取95mg碳納米管，放入250mL圓底燒瓶中，加入120mL的混酸和質(zhì)量濃度為30%過氧化氫溶液llmL，所述的混酸是由體積比的濃硫酸:濃硝酸=3:1，用超聲波清洗器超聲4h,再加入1000mL超純水稀釋,使用0.45 μ m微孔濾膜和布氏漏斗抽濾,再用超純水沖洗至pH中性，60°C真空干燥，得羧基化碳納米管； 2)取羧基化碳納米管45mg,加入25mg1-乙基_ (3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽，IOmg N-羥基琥拍酰亞胺,置于燒瓶中，超聲分散2h ;同時取葉酸45mg,加入20mgl-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、IOmgN-羥基琥珀酰亞胺，置于燒瓶中，超聲分散2h ;將二者混合，以1000r/min攪拌24h使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺、葉酸，在60°C下真空干燥24h，得葉酸靶向碳納米管； 3)取5mg葉酸祀向碳納米管、IOmg多西他賽,置于15mL試管中，加入10mg/mL泊洛沙姆188溶液10mL，超聲3h，得負(fù)載藥物的葉酸靶向碳納米管溶液； 4)取50mg單硬脂酸甘油酯、1.5mg多西他賽，置于燒杯中，75°C加熱熔融，作為油相?’然后取35mg磷脂,置于燒杯中,加入濃度為lmg/mL負(fù)載藥物的葉酸祀向碳納米管溶液3mL,磁力攪拌，加熱至75°C，作為水相；在磁力攪拌下，將水相趁熱滴加同溫度的油相中，1000r/min磁力攪拌1.5h,然后400w探超分散40次,0.45 μ m濾膜過濾,得主動祀向固體脂質(zhì)納米載體。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述主動靶向固體脂質(zhì)納米載體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)稱取IOOmg碳納米管，放入250mL燒瓶中，加入120mL的混酸和質(zhì)量濃度為30%過氧化氫溶液12mL，所述的混酸是由體積比的濃硫酸:濃硝酸=3:1，用超聲波清洗器超聲4h，再加入1000mL超純水稀釋,使用0.45 μ m微孔濾膜和布氏漏斗抽濾,再用超純水沖洗至pH中性，60°C真空干燥，得羧基化碳納米管； 2)取羧基化碳納米管50mg，加入30mg1-乙基_(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽，12mg N-羥基琥拍酰亞胺,置于燒瓶中，超聲分散2h ;同時取葉酸50mg,加入27mgl_乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、12mgN-羥基琥珀酰亞胺，置于燒瓶中，超聲分散2h ;將二者混合，以1000r/min攪拌24h使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺、葉酸，在60°C下真空干燥24h，得葉酸靶向碳納米管； 3)取IOmg葉酸祀向碳納米管、20mg多西他賽,置于15mL試管中，加入10mg/mL泊洛沙姆188溶液20mL，超聲4h，得負(fù)載藥物的葉酸靶向碳納米管溶液； 4)取55mg單硬脂酸甘油酯、2mg多西他賽，置于燒杯中，75°C加熱熔融，作為油相；然后取40mg磷脂,置于燒杯中,加入濃度為lmg/mL負(fù)載藥物的葉酸祀向碳納米管溶液4mL,磁力攪拌，加熱至75°C，作為水相；在磁力攪拌下，將水相趁熱滴加同溫度的油相中，1000r/min磁力攪拌2h，然后400w 探超分散40次，0.45 μ m濾膜過濾，得主動靶向固體脂質(zhì)納米載體。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述主動靶向固體脂質(zhì)納米載體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)稱取IlOmg碳納米管，放入250mL燒瓶中，加入120mL的混酸和質(zhì)量濃度為30%過氧化氫溶液13mL，所述的混酸是由體積比的濃硫酸:濃硝酸=3:1，用超聲波清洗器超聲4h，再加入1000mL超純水稀釋,使用0.45 μ m微孔濾膜和布氏漏斗抽濾,再用超純水沖洗至pH中性，60°C真空干燥，得羧基化碳納米管； 2)取羧基化碳納米管55mg,加入35mg1-乙基_ (3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽，15mg N-羥基琥拍酰亞胺,置于燒瓶中，超聲分散2h ;同時取葉酸55mg,加入35mgl_乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、15mgN-羥基琥珀酰亞胺，置于燒瓶中，超聲分散2h ;將二者混合，以1000r/min攪拌24h使其充分反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束于透析袋中透析48h，除去未反應(yīng)的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺、葉酸，在60°C下真空干燥24h，得葉酸靶向碳納米管； 3)取15mg葉酸祀向碳納米管、30mg多西他賽,置于15mL試管中，加入10mg/mL泊洛沙姆188溶液30mL，超聲5h，得負(fù)載藥物的葉酸靶向碳納米管溶液； 4)取60mg單硬脂酸甘油酯、2.5mg多西他賽，置于燒杯中，75°C加熱熔融，作為油相；然后取45mg磷脂,置于燒杯中，加入濃度為lmg/mL負(fù)載藥物的葉酸祀向碳納米管溶液5mL,磁力攪拌，加熱至75°C，作為水相；在磁力攪拌下，將水相趁熱滴加同溫度的油相中，1000r/min磁力攪拌2.5h,然后400w探超分散40次,0.45 μ m濾膜過濾,得主動祀向固體脂質(zhì)納米載體。
6.權(quán)利要求1或2-5任何一項所述的主動靶向固體脂質(zhì)納米載體，其特征在于，所述的載體的粒徑為10CT300nm,電位為_40mv。
7.權(quán)利要求1或2-5任何一項所述的主動靶向固體脂質(zhì)納米載體，其特征在于，所述的載體在制備抗腫瘤藥物中 的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K9/51GK103768039SQ201410004665
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2014年1月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月3日
【發(fā)明者】祝俠麗, 張振中, 黃勝楠, 謝瑩霞, 黃河清, 張英杰, 侯琳, 李志 , 張慧娟, 焦曉靜 申請人:鄭州大學(xué)