抗體制劑的制作方法
【專利摘要】抗BAFFR抗體配制成液體制劑，其包含高濃度的抗體活性成分用于向患者遞送抗體而沒有高水平的抗體聚集。水性藥物組合物可包含糖、緩沖劑、表面活性劑和/或游離氨基酸中的一種或多種。DSM 225422009.04.29
【專利說明】抗體制劑
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及針對BAFFR(BAFF受體）的抗體的藥物制劑，用于制備它的方法和該制 劑的應(yīng)用。
[0002] 背景
[0003] BAFFR :BAFF對對于參與過渡B細(xì)胞的成熟，對于成熟B細(xì)胞的生存和活化，以及 對于響應(yīng)于T細(xì)胞依賴性抗原的同種型類別轉(zhuǎn)換都是至關(guān)重要的。BAFF及其受體BAFFR 對于惡性B細(xì)胞的生存和生長也很重要。此外，BAFFR通常在前B細(xì)胞上不表達(dá)，但最近 表明，在人ALL(B_系急性淋巴細(xì)胞白血病）細(xì)胞上表達(dá)（Parameswaran，2010，Cancer Res. 70 (I I) 4346-4356)。罹患自身免疫性病癥或癌癥的患者由過量BAFF水平介導(dǎo)的自身 反應(yīng)性B細(xì)胞的去除和不適當(dāng)?shù)拇婊?活化的阻斷代表了充分驗證的治療目標(biāo)。因此，抗 BAFFR抗體，特別是能夠有抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC)和阻斷結(jié)合BAFFR的配 體的抗體可提供對自身免疫性疾病和B細(xì)胞瘤的有效治療劑。
[0004] 針對BAFFR的抗體從例如W02010/007082中獲知并包括表征為包含具有SEQ ID NO :1的氨基酸序列的Vh結(jié)構(gòu)域和具有SEQ ID NO :2的氨基酸序列的' 結(jié)構(gòu)域的抗體?？?體M0R6654是一種這樣的抗體（IgGl 〇。它具有SEQ ID NO :9的重鏈氨基酸序列和SEQ ID NO : 10的輕鏈氨基酸序列。這一抗體可由SEQ ID NO : 14和15來表達(dá)，優(yōu)選在缺少巖 藻糖基轉(zhuǎn)移酶的宿主細(xì)胞中，例如在具有失活的FUT8(-/_)基因的哺乳動物細(xì)胞系中，以 提供具有增強(qiáng)的ADCC的功能性的非巖藻糖基化抗BAFFR抗體。這種抗體在下文中被稱為 M0R6654B。生產(chǎn)非巖藻糖基化抗體的替代方法是本領(lǐng)域已知的。
[0005] 治療性抗體通常被配制成或者是水性形式以備腸胃外給藥用或者是作為凍干物 以在給藥前與合適的稀釋劑重構(gòu)。
[0006] 國際申請PCT/EP2011/072248公開了凍干物，其可以重構(gòu)以得到具有高濃度的抗 體活性成分和低水平的抗體聚集的溶液用于遞送至患者。高濃度的抗體因為它們減少了必 須被遞送給患者的給藥體積而是有用的。減少的給藥體積將向患者遞送固定劑量所花費(fèi)的 時間減至最低。
[0007] 然而，配制成含有高濃度抗體的藥物組合物可能具有短的貯存期限并且所配制的 抗體可能會在儲存期間由于化學(xué)和物理不穩(wěn)定性而失去生物活性。其中，已知聚集、脫酰胺 和氧化是抗體降解的最常見的原因。另外，聚集可以潛在地導(dǎo)致患者增加的免疫反應(yīng)，從而 導(dǎo)致安全性問題。因此，必須使在藥物組合物中的抗體聚集最小化或防止它。
[0008] 因此，本發(fā)明的目的是提供進(jìn)一步的以及改良的藥物組合物，其包含抗BAFFR抗 體，配制以例如允許沒有或基本上沒有抗體聚集的高濃度的抗BAFFR抗體。
[0009] 本發(fā)明的另一個目的是提供一種適合皮下給藥的抗BAFFR抗體制劑。皮下注射的 優(yōu)點(diǎn)在于，它允許醫(yī)生以對患者相當(dāng)短的干預(yù)執(zhí)行它。此外，可以訓(xùn)練患者自己執(zhí)行皮下注 射。
[0010] 這一目標(biāo)通過本發(fā)明的藥物水性組合物得以滿足。
[0011] 本發(fā)明的水性組合物包含高濃度的抗BAFFR抗體，但沒有或基本沒有聚集的抗 體，因而尤其適合皮下給藥。
[0012] 在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種具有pH為5. 0-7.0的水性組合物，并且包含
[0013] (i)抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有18-165mg/mL的濃度，并且其中所述抗 BAFFR抗體包含分別是SEQ ID N0:3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID N0:6、 7 和 8 的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3，
[0014] (ii)穩(wěn)定劑，
[0015] (iii)緩沖劑，
[0016] (iv)表面活性齊[J,和任選地，
[0017] (V)氨基酸。
[0018] 特別是，本發(fā)明提供了一種具有pH為5. 5-6. 5的水性組合物，并且包含
[0019] (i)抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有18-165mg/mL的濃度，并且其中所述抗 BAFFR抗體包含分別是SEQ ID N0:3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID N0:6、 7 和 8 的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3，
[0020] (ii)蔗糖、海藻糖或甘露醇作為穩(wěn)定劑，
[0021] (iii)組氨酸、檸檬酸鹽或琥珀酸鹽作為緩沖劑，
[0022] (iv)聚山梨酯20、泊洛沙姆188或羥丙基-β-環(huán)糊精作為表面活性劑，和任選 地，
[0023] (V)精氨酸作為氨基酸。
[0024] 在一個實施方案中，如本文在各實施方案所描述的本發(fā)明的水性組合物包含濃度 在20mg/mL和150mg/mL之間，尤其是在80mg/mL和150mg/mL之間，尤其是在100mg/mL和 150mg/mL之間的抗BAFFR抗體。
[0025] 在一個實施方案中，如本文在各實施方案所描述的本發(fā)明的水性組合物包含糖作 為穩(wěn)定劑，尤其是蔗糖、甘露醇或海藻糖，其濃度在80mM和300mM之間，尤其是在120mM和 270mM之間，尤其是在120mM和220mM之間。
[0026] 在一個實施方案中，如本文在各實施方案所描述的本發(fā)明的水性組合物包含表 面活性劑，尤其是聚山梨酯20或泊洛沙姆188,其濃度在0. 01 %和-0. 1 %之間，尤其是在 0. 02%和 0. 06%之間。
[0027] 在一個實施方案中，如本文在各實施方案所描述的本發(fā)明的水性組合物包含緩沖 齊U，尤其是組氨酸、檸檬酸鹽或琥珀酸鹽，其濃度在5mM和50mM之間，尤其是濃度在15mM和 25mM之間，尤其是在18mM和22mM之間，尤其是20mM。
[0028] 在一個實施方案中，如本文在各實施方案所描述的本發(fā)明的水性組合物另外包含 氨基酸，尤其是精氨酸或精氨酸-HCl，其濃度在2mM和SOmM之間。
[0029] 在一個實施方案中，如本文在各實施方案所描述的本發(fā)明的水性組合物包含濃度 在IlOmM和250mM之間的鹿糖或海藻糖。
[0030] 在一個具體的實施方案中，本發(fā)明提供了具有pH為5. 5-6. 5的水性組合物，并且 包含
[0031] (i)抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有18mg/mL-165mg/mL的濃度，并且其中所述抗 BAFFR抗體包含分別是SEQ ID N0:3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID N0:6、 7 和 8 的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3，
[0032] (ii)80mM-300mM蔗糖、海藻糖或甘露醇作為穩(wěn)定劑，
[0033] (iii) 5mM-50mM組氨酸、檸檬酸鹽或琥珀酸鹽作為緩沖劑，
[0034] (iv)0.01% -0. 1%聚山梨酯20或泊洛沙姆188,或者羥丙基-β-環(huán)糊 精作為表面活性劑，和任選地，
[0035] (V) 2mM-80mM精氨酸，尤其是精氨酸-HCl。
[0036] 在另一具體實施方案中，本發(fā)明提供了具有pH為5. 5-6. 5的水性組合物，并且包 含
[0037] (i)抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有20mg/mL-150mg/mL的濃度，并且其中所述抗 BAFFR抗體包含分別是SEQ ID N0:3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID N0:6、 7 和 8 的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3，
[0038] (ii) 110mM-250mM鹿糖或海藻糖作為穩(wěn)定劑，
[0039] (iii) 15mM-25mM組氨酸、檸檬酸鹽或琥珀酸鹽作為緩沖劑，
[0040] (iv)高達(dá)0. 02 % -0. 06 %聚山梨酯20或泊洛沙姆188或者羥丙 基-β -環(huán)糊精作為表面活性劑，和任選地，
[0041] (v)2mM-80mM精氨酸，尤其是精氨酸-HC1。
[0042] 在又另一個具體的實施方案中，本發(fā)明提供了具有pH為5. 5-6. 5的水性組合物， 并且包含
[0043] (i)抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有20mg/mL-150mg/mL的濃度，并且其中所述抗 BAFFR抗體包含分別是SEQ ID N0:3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID N0:6、 7 和 8 的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3，
[0044] (ii) 120mM-220mM蔗糖或海藻糖作為穩(wěn)定劑，
[0045] (iii) 18mM-22mM組氨酸、檸檬酸鹽或琥珀酸鹽作為緩沖劑，
[0046] (iv)高達(dá)0.02%-0.06%聚山梨酯20或泊洛沙姆188或者2, 5mM羥丙基-β-環(huán) 糊精作為表面活性劑，和任選地
[0047] (V) 2mM-80mM精氨酸，尤其是精氨酸-HCl。
[0048] 在另一具體實施方案中，本發(fā)明提供了具有pH為6. 0的水性組合物，并且包含
[0049] (i)抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有150mg/mL的濃度，并且其中所述抗BAFFR抗 體包含分別是SEQ ID NO :3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID NO :6、7和8的 輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3，
[0050] (ii)220mM蔗糖作為穩(wěn)定劑，
[0051] (iii) 20mM組氨酸作為緩沖劑，
[0052] (iv)0. 04%聚山梨酯20作為表面活性劑。
[0053] 在另一具體實施方案中，本發(fā)明提供了一種具有pH為6. 0的水性組合物，并且包 含
[0054] (i)抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有150mg/mL的濃度，并且其中所述抗BAFFR抗 體包含分別是SEQ ID NO :3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID NO :6、7和8的 輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3，
[0055] (ii)220mM海藻糖作為穩(wěn)定劑，
[0056] (iii) 20mM組氨酸作為緩沖劑，
[0057] (iv)0. 04%聚山梨酯20作為表面活性劑。
[0058] 在另一具體實施方案中，本發(fā)明提供了具有pH為6. 0的水性組合物，并且包含
[0059] (i)抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有150mg/mL的濃度，并且其中所述抗BAFFR抗 體包含分別是SEQ ID NO :3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID NO :6、7和8的 輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3，
[0060] (ii) 120mM蔗糖或海藻糖作為穩(wěn)定劑，
[0061] (iii)20mM組氨酸作為緩沖劑，
[0062] (iv)0. 04%聚山梨酯20作為表面活性劑，和
[0063] (v)50mM精氨酸，尤其是精氨酸-HC1。
[0064] 在另一具體實施方案中，本發(fā)明提供了具有pH為6. 0的水性組合物，并且包含
[0065] ⑴抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有20mg/mL的濃度，并且其中所述抗BAFFR抗 體包含分別是SEQ ID NO :3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID NO :6、7和8的 輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3，
[0066] (ii)220mM蔗糖或海藻糖作為穩(wěn)定劑，
[0067] (iii)20mM組氨酸作為緩沖劑，和
[0068] (iv)0. 04%聚山梨酯20作為表面活性劑。
[0069] 在一個實施方案中，本發(fā)明涉及如本文在各實施方案所描述的本發(fā)明的水性組合 物，其中抗BAFFR抗體包含具有氨基酸SEQ ID NO :1的Vh結(jié)構(gòu)域和具有氨基酸SEQ ID NO: 2的'結(jié)構(gòu)域。
[0070] 在本發(fā)明的另一個實施方案中，如本文在各實施方案所描述的本發(fā)明的水性組合 物，其中，抗BAFFR抗體包含SEQ ID NO :9的重鏈區(qū)和SEQ ID NO : 10的輕鏈區(qū)。
[0071] 在一個實施方案中，抗BAFFR抗體是非巖藻糖基化的抗BAFFR抗體。
[0072] 本發(fā)明還提供一種遞送裝置，包含本文在各實施方案所描述的本發(fā)明的水性組合 物。
[0073] 這一遞送裝置可以以包含本文在各實施方案所描述的本發(fā)明的水性組合物的預(yù) 填裝注射器形式提供。
[0074] 在一個實施方案中，本發(fā)明涉及一種向哺乳動物遞送抗BAFFR抗體的方法，包括 給予所述哺乳動物如本文在各實施方案所描述的本發(fā)明的水性組合物的步驟，尤其是以諸 如預(yù)填裝注射器的遞送裝置的形式。
[0075] 本發(fā)明進(jìn)一步提供了如本文在各實施方案所描述的本發(fā)明的組合物或遞送裝置， 或預(yù)填裝注射器，用于治療由BAFF受體介導(dǎo)或可以通過殺死或消耗B細(xì)胞而治療的疾病或 病癥。
[0076] 具體地，如本文在各實施方案所描述的本發(fā)明的藥物組合物或遞送裝置，或預(yù)填 裝注射器可用于治療自身免疫疾病，B細(xì)胞瘤例如淋巴瘤、白血病或骨髓瘤，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié) 炎，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，干燥綜合征或?qū)こＰ蕴彀挴彙?br>
[0077] 本發(fā)明至少部分地是基于，諸如M0R6654和M0R6654B的配制抗體的特性，其當(dāng)以 高濃度配制成液體（水性）組合物時保留顯著的穩(wěn)定性和生物活性特性。
[0078] 如本文所使用的，"水性"藥物組合物是適合于藥物用途的組合物，其中水性載體 是蒸餾水。適合于藥物用途的組合物可以是無菌的、均質(zhì)的和/或等滲的。水性藥物組合 物可直接制備成水性形式，例如即用式預(yù)填裝注射器（"液體制劑"），或者作為凍干物在即 將使用前重構(gòu)。
[0079] 如本文所使用的，術(shù)語"水性藥物組合物"指液體制劑或重構(gòu)的凍干制劑。在某些 實施方案中，本發(fā)明的水性藥物組合物適合于腸胃外給藥于人受試者。在一個具體的實施 方案中，本發(fā)明的水性藥物組合物適合于皮下給藥。
[0080] 如本文所使用的，短語"腸胃外給藥"意指腸內(nèi)和局部給藥以外的給藥方式，通常 通過注射,并且包括但不限于,靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、囊內(nèi)、眶內(nèi)、心內(nèi)、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、 經(jīng)氣管、皮下、表皮下（subcuticular)、關(guān)節(jié)內(nèi)、囊下、蛛網(wǎng)膜下、脊柱內(nèi)、硬膜外和胸骨內(nèi)注 射以及輸注。
[0081] 抗體作為藥物的有效成分的應(yīng)用現(xiàn)在很廣泛，包括產(chǎn)品HERCEPTIN?(曲妥單抗）， RITUXAN?(利妥昔單抗），SYNAGIS?(帕利珠單抗）等。用于將治療性抗體純化至藥用級的 技術(shù)是本領(lǐng)域公知的。
[0082] 該組合物通常將是無熱原的，例如每劑量含< IEU(內(nèi)毒素單位，標(biāo)準(zhǔn)量度），并優(yōu) 選每劑量<0. 1EU。該組合物優(yōu)選是無谷蛋白的。
[0083] 在具體的實施方案中，本發(fā)明的水性藥物組合物展現(xiàn)出低至檢測不到的水平的 抗體聚集或降解，在制造、制備、運(yùn)輸和長期儲存過程中極少甚至是沒有生物活性損失，抗 BAFFR 抗體的濃度是至少約 50mg/mL、100mg/mL、150mg/mL、200mg/mL、250mg/mL 或 300mg/ mL〇
[0084] 在一個方面，本發(fā)明涉及具有高濃度的抗BAFFR抗體的水性藥物組合物。
[0085] 本領(lǐng)域已知這樣的高濃度水性藥物組合物可以在注射前進(jìn)行稀釋，例如，如果特 定的治療性干預(yù)需要較低的抗體濃度或者當(dāng)治療包括兒童的較小體重患者時。適合的濃度 可以是25mg/mL或10mg/mL?？蛇x地，可以以這樣的低濃度生產(chǎn)原始制劑。
[0086] 如本文中使用的，術(shù)語"抗體"包括完整的抗體及其任意的抗原結(jié)合片段（即"抗 原結(jié)合部分"）或其單鏈。天然存在的"抗體"是包含由二硫鍵相互連接的至少2條重鏈 (H)和2條輕鏈（L)的糖蛋白。每條重鏈包含重鏈可變區(qū)（本文中簡寫SVh)和重鏈恒定 區(qū)。重鏈恒定區(qū)包含三個或四個結(jié)構(gòu)域，取決于同種型：〇11、〇12、〇13和〇 14。每條輕鏈包含 輕鏈可變區(qū)（本文中簡寫為')和輕鏈恒定區(qū)。輕鏈恒定區(qū)包含一個結(jié)構(gòu)域Q?？梢詫h 和'進(jìn)一步細(xì)分為高變區(qū)，稱作互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)，其散布著更保守的、稱作構(gòu)架區(qū)（FR)的 區(qū)域。每個Vh和'由三個CDR和四個FR組成，它們從氨基末端到羧基末端以下面的順序 排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈和輕鏈的可變區(qū)含有與抗原相互作用的 結(jié)合結(jié)構(gòu)域?？贵w的恒定區(qū)可以介導(dǎo)免疫球蛋白與宿主組織或因子的結(jié)合，所述組織或因 子包括免疫系統(tǒng)的多種細(xì)胞（例如，效應(yīng)細(xì)胞）和經(jīng)典補(bǔ)體系統(tǒng)的第一組分（Clq)。
[0087] 本文所用的術(shù)語抗體的"抗原結(jié)合部分"（或簡單地"抗原部分"）指保留了與抗原 (例如，BAFFR的一部分）特異性結(jié)合能力的全長抗體或抗體的一個或多個片段。已顯示可 以通過全長抗體的片段執(zhí)行抗體的抗原結(jié)合功能。術(shù)語抗體的"抗原結(jié)合部分"內(nèi)涵蓋的 結(jié)合片段的實例包括Fab片段、由'、V h、(^和CHl結(jié)構(gòu)域組成的單價片段；F (ab) 2片段、包 含通過二硫鍵在鉸鏈區(qū)連接的兩個Fab片段的二價片段；由Vh和CHl結(jié)構(gòu)域組成的Fd片 段；由抗體的單臂的\和V h結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段；由Vh結(jié)構(gòu)域組成的dAb片段（Ward等 人，1989Nature 341:544-546);和分離的互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)。
[0088] 此外，盡管Fv片段的兩個結(jié)構(gòu)域'和Vh由單獨(dú)的基因編碼，但是它們可以用重組 方法通過合成接頭連接，所述接頭使得它們成為一條蛋白質(zhì)鏈，其中 '和Vh區(qū)配對形成單 價分子（稱作單鏈 Fv(scFv);參見例如，Bird 等人，1988Science 242 :423-426 和 Huston 等人，1988Proc. Natl. Acad. Sci. 85 :5879-5883)。此類單鏈抗體還意在被術(shù)語抗體的"抗 原結(jié)合區(qū)域"涵蓋。使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)得到這些抗體片段，并且以與完整 抗體相同的方式篩選所述片段的效用。
[0089] 本文所用的"分離的抗體"指抗體，其基本上沒有具有不同抗原特異性的其他抗 體，例如，特異結(jié)合人BAFFR的分離的抗體基本上無特異結(jié)合不同于BAFFR的抗原的抗體。 然而，特異結(jié)合BAFFR的分離的抗體可以與其他抗原具有交叉反應(yīng)性，如來自其他物種的 BAFFR分子。此外，分離的抗體可以基本上無其他細(xì)胞物質(zhì)和/或化學(xué)品。
[0090] 本文中使用的術(shù)語"單克隆抗體"或"單克隆抗體組合物"指單分子組合物的抗體 分子的制品。單克隆抗體組合物表現(xiàn)出對特定表位的單一的結(jié)合特異性和親和力。
[0091] 本文中使用的術(shù)語"人抗體"包括具有這樣的可變區(qū)的抗體，所述可變區(qū)的構(gòu)架和 ⑶R區(qū)都源自人來源的序列。此外，如果抗體含有恒定區(qū)，則恒定區(qū)也源自此類人序列，例 如，人種系序列或人種系序列的突變版本，或者含有源自人構(gòu)架序列分析的共同構(gòu)架序列 的抗體，例如如Knappik等人（2000. J Mol Biol 296, 57-86)中描述的。
[0092] 可以使用普遍已知的編號方案定義免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域（例如CDR)的結(jié)構(gòu)和 位置，例如Kabat編號方案、Chothia編號方案、Kabat和Chothia的組合（AbM)等（參見 例如，Sequences of Proteins of Immunological Interest, U. S. Department of Health and Human Services (1991)，編著 Kabat 等人；Al Lazikani 等人，（1997) J. Mol. Bio. 273: 927948)。
[0093] 貫穿本說明書中，互補(bǔ)決定區(qū)（"⑶R"）根據(jù)Kabat定義來限定，只是除了⑶RH1， ⑶RHl是用于這一⑶R的由Kabat和Chothia定義的組合所限定的氨基酸段。
[0094] 本發(fā)明的人抗體可以包括不由人序列編碼的氨基酸殘基（例如，通過在體外隨機(jī) 或位點(diǎn)特異性誘變或通過體內(nèi)體細(xì)胞突變導(dǎo)入的突變）。然而，如本文所用的，術(shù)語"人抗 體"不意在包括這樣的抗體，其中來自另一哺乳動物物種（如小鼠）的種系的CDR序列已經(jīng) 被嫁接到人構(gòu)架序列上。
[0095] 術(shù)語"人單克隆抗體"指顯示出單結(jié)合特異性的抗體，所述抗體具有的可變區(qū)中的 構(gòu)架區(qū)和CDR區(qū)都來自人序列。
[0096] 本文所用的術(shù)語"重組人抗體"包括通過重組手段制備、表達(dá)、產(chǎn)生或分離的所有 人抗體，如從對于人免疫球蛋白基因為轉(zhuǎn)基因或轉(zhuǎn)染色體的動物（例如，小鼠）或從其制備 的雜交瘤中分離的抗體，從被轉(zhuǎn)化而表達(dá)人抗體的宿主細(xì)胞分離的抗體，例如，從轉(zhuǎn)染瘤分 離的抗體，從重組的組合人抗體文庫分離的抗體，和通過涉及將人免疫球蛋白基因序列的 全部或部分剪接成其他DNA序列的任何其他手段制備、表達(dá)、產(chǎn)生或分離的抗體。此類重組 人抗體具有可變區(qū)，其中構(gòu)架區(qū)和CDR區(qū)來自人種系免疫球蛋白序列。然而，在一些實施方 案中，此類重組人抗體可以進(jìn)行體外誘變（或者，當(dāng)使用人Ig序列轉(zhuǎn)基因的動物時，體內(nèi)體 細(xì)胞誘變），并且從而重組抗體的V h和 '區(qū)的氨基酸序列是這樣的序列，其盡管來自并且 涉及人種系Vh和 '序列，但是可以不天然在體內(nèi)存在于人抗體種系所有組成成分。
[0097] 本文所用的"同種型"指重鏈恒定區(qū)基因提供的抗體類別（例如IgM、IgA、IgD、IgE 和 IgG 如 IgGl、IgG2、IgG3 或 IgG4)。
[0098] 短語"識別抗原的抗體"和"抗原特異性的抗體"在本文中與術(shù)語"特異性結(jié)合抗 原的抗體"可互換使用。
[0099] 本文所用的"特異性結(jié)合BAFFR多肽"的抗體或"抗-BAFFR抗體"是指以IOOnM或 更低、IOnM或更低、InM或更低的K d結(jié)合SEQ ID N0:13的人BAFFR多肽的抗體。"與不同 于BAFFR的抗原交叉反應(yīng)"的抗體是指以0. 5x KT8M或更小、5x KT9M或更小，或2x KT9M 或更小的Kd結(jié)合該抗原的抗體。"不與特定抗原交叉反應(yīng)"的抗體意指以1.5x KT8M或更 大的KD，或以5-lOx KT8M或lx KT7M或更大的Kd與該抗原結(jié)合的抗體。在一些實施方案 中，不與抗原交叉反應(yīng)的此類抗體在標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合測定中顯示出對于這些蛋白質(zhì)的基本上檢測 不到的結(jié)合。
[0100] 在一個實施方案中，在本發(fā)明的水性藥物組合物中的高濃度的抗BAFFR抗體為至 少50mg/mL。在一個實施方案中，高濃度為至少100mg/mL。在一個實施方案中，高濃度為至 少150mg/mL。在一個實施方案中，高濃度為至少200mg/mL。在一個實施方案中，高濃度為 至少250mg/mL。在一個實施方案中，高濃度為至少270mg/mL。在一個實施方案中，高濃度 為至少300mg/mL。
[0101] 在一個實施方案中，本發(fā)明的水性藥物組合物包含50mg/mL和300mg/mL之間的抗 BAFFR 抗體，例如 M0R6654,尤其是 M0R6654B。
[0102] 在一個實施方案中，本發(fā)明的水性藥物組合物包含75mg/mL和270mg/mL之間的抗 BAFFR 抗體，例如 M0R6654,尤其是 M0R6654B。
[0103] 在一個實施方案中，本發(fā)明的水性藥物組合物包含lOOmg/mL和250mg/mL之間的 抗 BAFFR 抗體，例如 M0R6654,尤其 M0R6654B。
[0104] 在一個實施方案中，本發(fā)明的水性藥物組合物包含lOOmg/mL和200mg/mL之間的 抗BAFFR抗體，例如M0R6654,尤其是M0R6654B。
[0105] 在一個實施方案中，本發(fā)明的水性藥物組合物包含150mg/mL的抗BAFFR抗體，例 如 M0R6654,尤其是 M0R6654B。
[0106] 在一個實施方案中，本發(fā)明的水性藥物組合物包含20mg/mL的抗BAFFR抗體，例如 M0R6654,尤其是 M0R6654B。
[0107] 在一個實施方案中，本發(fā)明的水性藥物組合物包含約50mg/mL，約60mg/mL，約 70mg/mL，約 80mg/mL，約 90mg/mL，約 100mg/mL，約 110mg/mT,,約 120mg/mL，約 130mg/mL，約 140mg/mL，約 150mg/mL，約 160mg/mL，約 170mg/mL，約 180mg/mL，約 190mg/mL，約 200mg/mL， 約 210mg/mL，約 220mg/mL，約 230mg/mL，約 240mg/mL，約 250mg/mL，約 270mg/mL 或約 300mg/ ml的抗BAFFR抗體，例如M0R6654,尤其是M0R6654B。
[0108] 此外，根據(jù)如本文在各實施方案所描述的本發(fā)明的水性藥物組合物是穩(wěn)定的，從 而即使在2-8°C儲存4周后，通過SEC-HPLC測量，總的抗BAFFR抗體的小于5 %、4 %、3 %、 2%、1%、0· 05%或 0· 01%聚集。
[0109] 根據(jù)如本文在各實施方案所描述的本發(fā)明的水性藥物組合物是穩(wěn)定的，從而即使 在2-8°C儲存2個月后，通過SEC-HPLC測量，總抗BAFFR抗體的小于5%、4%、3%、2%、1%、 0.05%或 0.01%聚集。
[0110] 所述水性藥物組合物除了抗BAFFR抗體外，可包含另外的組分如下述一種或多 種：（i)穩(wěn)定劑；（ii)緩沖劑；（iii)表面活性劑；及（iv)游離氨基酸。包括每種這樣的附 加組分可以使得組合物具有抗BAFFR抗體的低聚集。
[0111] 用于本發(fā)明的合適的穩(wěn)定劑可以作用為，例如，粘度增強(qiáng)劑、填充劑、增溶劑和/ 或等等。該穩(wěn)定劑可以是離子型或非離子型（例如，糖）。對于糖，它們包括但不限于，單糖， 例如果糖，麥芽糖，半乳糖，葡萄糖，D-甘露糖，山梨糖等；二糖，例如乳糖，蔗糖，海藻糖，纖 維二糖等；多糖，如棉子糖，松三糖，麥芽糖糊精，葡聚糖，淀粉等；和糖醇，如甘露醇，木糖 醇，麥芽糖醇，乳糖醇，木糖醇山梨糖醇（葡萄糖醇）等。例如，所述糖可以是蔗糖、海藻糖、 棉子糖、麥芽糖、山梨糖醇或甘露醇。所述糖可以是糖醇或氨基糖。蔗糖尤其有用。對于離 子穩(wěn)定劑，它們包括鹽，如NaCl或氨基酸組分如精氨酸-HCl。
[0112] 用于本發(fā)明的合適的緩沖劑包括但不限于，有機(jī)酸鹽，如檸檬酸，抗壞血酸，葡糖 酸，碳酸，酒石酸，琥拍酸，乙酸或苯二甲酸的鹽；Tris，thomethamine鹽酸鹽，或磷酸鹽緩 沖液。此外，氨基酸組分也可以用作緩沖劑。這樣的氨基酸組分包括但不限于甘氨酸和組 氨酸。組氨酸緩沖液尤其有用。
[0113] 所述水性藥物組合物包括這樣的緩沖劑或pH調(diào)節(jié)劑以提供改進(jìn)的pH控制。在一 個實施方案中，本發(fā)明的水性藥物組合物具有在5. 0和8. 0之間、5. 0和7. 0之間、5. 5和 7. 0之間，或5. 5和6. 5之間的pH。在一個具體的實施方案中，本發(fā)明的水性藥物組合物具 有約6. 0的pH。
[0114] 如本文所使用的，術(shù)語"表面活性劑"是指具有兩親結(jié)構(gòu)的有機(jī)物質(zhì)；即，它們由相 反的溶解性傾向的基團(tuán)所組成，通常是油溶性的烴鏈和水溶性的離子基團(tuán)。取決于表面活 性部分的電荷，可以將表面活性劑分類成陰離子活性劑、陽離子活性劑和分散劑用于各種 藥物組合物和生物材料制劑。
[0115] 用于本發(fā)明的合適的表面活性劑包括，但不限于，非離子表面活性劑、離子表面活 性劑和兩性離子表面活性劑。典型的用于本發(fā)明的表面活性劑包括，但不限于，失水山梨糖 醇脂肪酸酯（例如：失水山梨糖醇單辛酸酯、失水山梨糖醇單月桂酸酯、失水山梨糖醇單棕 櫚酸酯），失水山梨糖醇三油酸酯、甘油脂肪酸酯（如甘油單辛酸酯，甘油單肉豆蘧酸酯，甘 油單硬脂酸酯），聚甘油脂肪酸酯（例如十甘油單硬脂酸酯，十甘油二硬脂酸酯，十甘油單 亞油酸酯），聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯（如聚氧乙烯失水山梨糖醇單月桂酸酯，聚氧 乙烯失水山梨糖醇單油酸酯，聚氧乙烯失水山梨糖醇單硬脂酸酯，聚氧乙烯失水山梨糖醇 單棕櫚酸酯，聚氧乙烯失水山梨糖醇三油酸酯，聚氧乙烯失水山梨糖醇三硬脂酸酯），聚氧 乙烯山梨糖醇脂肪酸酯（例如聚氧乙烯山梨糖醇四硬脂酸，聚氧乙烯山梨糖醇四油酸酯）， 聚氧乙烯甘油脂肪酸酯（例如，聚氧乙烯甘油單硬脂酸酯），聚乙二醇脂肪酸酯（例如聚 乙二醇二硬脂酸酯），聚氧乙烯烷基醚（如聚氧乙烯月桂基醚），聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚 (如聚氧乙烯聚氧丙烯二醇，聚氧乙烯聚氧丙烯丙基醚，聚氧乙烯聚氧丙烯十六烷基醚）， 聚氧乙烯烷基苯基醚（如聚氧乙烯壬基苯基醚），聚氧乙烯氫化蓖麻油（例如，聚氧乙烯蓖 麻油，聚氧乙烯氫化蓖麻油），聚氧乙烯蜂蠟衍生物（如聚氧乙烯山梨醇蜂蠟），聚氧乙烯羊 毛脂衍生物（例如，聚氧乙烯羊毛脂），以及聚氧乙烯脂肪酸酰胺（例如，聚氧乙烯硬脂酸 醜胺）；C 1(I_C18燒基硫酸鹽（例如，十TK燒基硫酸納，月桂基硫酸納，油基硫酸納），聚氧乙 烯C ltl-C18烷基醚硫酸鹽，添加了平均2-4摩爾的環(huán)氧乙烷單元（例如，聚氧乙烯月桂基硫酸 鈉），和C 1-C18烷磺基琥珀酸酯鹽（如十二烷基磺基琥珀酸酯鈉）；和天然表面活性劑如卵 磷脂，甘油磷脂，神經(jīng)鞘磷脂（sphingophospholipid)(例如鞘磷脂），和C12-Ci8脂肪酸的鹿 糖酯。組合物可包括這些表面活性劑中的一種或多種。優(yōu)選的表面活性劑是聚氧乙烯失水 山梨糖醇脂肪酸酯如聚山梨酯20、40、60或80。聚山梨酯20 (Tween 20)尤其有用。
[0116] 用于本發(fā)明的合適的游離氨基酸包括但不限于，精氨酸、賴氨酸、組氨酸、鳥氨酸、 異亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸、谷氨酸或天冬氨酸。優(yōu)選的是包括堿性氨基酸即精氨 酸、賴氨酸和/或組氨酸。如果組合物包括組氨酸，則這可作為緩沖劑和游離氨基酸兩者作 用，但是，當(dāng)使用組氨酸緩沖液時，典型是包括非組氨酸游離氨基酸，例如包括組氨酸緩沖 液和賴氨酸。氨基酸可以以其D-和/或L-型存在，但典型是L-型。氨基酸可以任何合適 的鹽存在，例如鹽酸鹽，如精氨酸-HCl。
[0117] 其他考慮的可在本發(fā)明的水性藥物組合物中利用的賦形劑包括，例如，調(diào)味劑、 抗微生物劑、甜味劑、抗氧化劑、抗靜電劑、脂質(zhì)如磷脂或脂肪酸、留類如膽固醇、蛋白質(zhì)賦 形劑如血清白蛋白（人血清白蛋白），重組人白蛋白，明膠，酪蛋白、成鹽相反離子如鈉等 等。這些和另外已知的藥物賦形劑和/或適用于本發(fā)明制劑的添加劑本領(lǐng)域公知的，例如， 列出于"The Handbook of Pharmaceutical Excipients，第 4 版，Rowe 等人編，American Pharmaceuticals Association(2003)；和 Remington :the Science and Practice of Pharmacy,第 21 版，Gennaro 編，Lippincott Williams &Wilkins (2005)，'。
[0118] 本發(fā)明的水性藥物組合物除了抗BAFFR抗體外可包含另外的活性成分。進(jìn)一步的 藥理學(xué)活性劑劑可包括，例如，化學(xué)治療化合物。
[0119] 靶疾病和病癥
[0120] 本發(fā)明的包含抗BAFFR抗體的本發(fā)明的水性藥物組合物可以用于治療、改善或預(yù) 防多種疾病或病癥。包含抗BAFFR抗體的藥物組合物尤其可用于治療BAFFR相關(guān)的病癥如 自身免疫性病癥，例如，系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征、尋常性天皰瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、多發(fā) 性硬化和B細(xì)胞瘤，例如急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL)和B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞白血?。–LL)。
[0121] 如本文所使用的，"BAFFR相關(guān)的病癥"包括與異常的BLyS水平相關(guān)的或由其表征 的病況和/或可以通過消耗或殺死B細(xì)胞來治療的疾病或病況。這些包括但不限于，炎性 病況、自身免疫性疾病、嚴(yán)重感染和器官或組織移植排斥。這些還包括B細(xì)胞瘤。
[0122] 例如，包含抗BAFFR抗體的本發(fā)明的水性藥物組合物可以用于治療、改善或預(yù)防 心臟、肺、心-肺結(jié)合、肝、腎、胰腺、皮膚或角膜移植的接受者，包括同種異體移植物排斥或 異種移植排斥，以及用于預(yù)防移植物抗宿主病，如在骨髓移植后和器官移植相關(guān)的動脈硬 化。此外，本發(fā)明的水性藥物組合物對于實體器官移植和抗體介導(dǎo)的急性和慢性移植排斥 是有用的。
[0123] 本發(fā)明的包含抗BAFFR抗體的水性藥物組合物可用于治療、預(yù)防或改善自身免 疫性疾病和炎性病況，特別是具有包括自身免疫組分的病因的炎性病況，如關(guān)節(jié)炎（例如 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，慢性進(jìn)行性關(guān)節(jié)炎（arthritis chronica progrediente)和變形性關(guān) 節(jié)炎）和風(fēng)濕性疾病，包括涉及骨損失的炎性病況和風(fēng)濕性疾病，炎性疼痛，脊椎關(guān)節(jié)病 (spondyioarhropathies)包括強(qiáng)直性脊椎炎，賴特綜合征，反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎，銀屑病關(guān)節(jié)炎， 和enterophathics關(guān)節(jié)炎,超敏反應(yīng)（包括呼吸道超敏反應(yīng)和皮膚超敏反應(yīng)）和變態(tài)反 應(yīng)。本發(fā)明的抗體可應(yīng)用的特定的自身免疫疾病包括自身免疫性血液學(xué)病癥（包括例如溶 血性貧血，再生障礙性貧血，純紅細(xì)胞性貧血和特發(fā)性血小板減少），獲得性血友病A，冷凝 集素疾病，冷球蛋白血癥，血栓性血小板減少性紫癜，干燥綜合征，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，炎性肌 肉病癥，多發(fā)性軟骨炎，硬皮病，脈管炎如冷球蛋白血癥，大血管血管炎，如巨細(xì)胞動脈炎， 風(fēng)濕性多肌痛，壞死性血管炎，包括抗嗜中性白細(xì)胞胞質(zhì)抗體相關(guān)性脈管炎，Takayasu's動 脈炎，結(jié)節(jié)性多動脈炎，Henoch-Schonlein紫癜，和丘-斯綜合征，IgM介導(dǎo)的神經(jīng)病，血清 陰性spondarthritis，斜視眼陣攣-肌陣攣綜合征，韋格納肉芽腫病，皮肌炎，抗嗜中性白 細(xì)胞胞質(zhì)自身抗體（ANCA)脈管炎，慢性活動性肝炎，重癥肌無力，銀屑病，Steven-Johnson 綜合征，尋常性天皰瘡，落葉型天皰瘡，特發(fā)性口炎性腹瀉，自身免疫性炎性腸?。òㄈ?潰瘍性結(jié)腸炎，克羅恩病和腸易激綜合癥），內(nèi)分泌性眼病，格雷夫斯病，結(jié)節(jié)病，多發(fā)性硬 化，視神經(jīng)脊髓炎，原發(fā)性膽汁性肝硬化，幼年型糖尿病（I型糖尿?。?，眼色素層炎（前、中 和后以及全葡萄膜炎），干燥性角膜結(jié)膜炎和春季角結(jié)膜炎，肺間質(zhì)纖維化，銀屑病關(guān)節(jié)炎 和腎小球腎炎（伴有和不伴有腎病綜合征，例如包括特發(fā)性腎病綜合征或微小病變腎?。?， 急性腎炎狼瘡，腫瘤，皮膚和角膜的炎性疾病，肌炎，骨植入物松動，代謝性病癥，如動脈粥 樣硬化，糖尿病和血脂異常。
[0124] 本發(fā)明的水性藥物組合物也可用于預(yù)防、改善或治療B細(xì)胞瘤。這樣的疾病和病況 的實例包括但不限于，B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤，如小淋巴細(xì)胞淋巴瘤，Iymphoplasmacytoid 淋巴瘤，外套細(xì)胞淋巴瘤，濾泡型淋巴瘤，粘膜相關(guān)淋巴樣組織淋巴瘤，彌漫型大細(xì)胞淋巴 瘤，和伯基特淋巴瘤；急性淋巴細(xì)胞白血病（ALL)，前體B成淋巴細(xì)胞性白血??；B細(xì)胞慢性 淋巴細(xì)胞白血?。–LL)和多發(fā)性骨髓瘤。其它的B細(xì)胞瘤涵蓋在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
[0125] 患者給藥
[0126] 本發(fā)明的藥物組合物可以給予患者。給藥通常是通過輸注或通過注射器。因此， 本發(fā)明提供了一種遞送裝置（例如注射器），其包括本發(fā)明的藥物組合物（例如，預(yù)填裝注 射器）。患者將接受有效量的抗BAFFR抗體作為主要活性成分，即足以治療、改善或預(yù)防目 的疾病或病癥的量。治療效果也可包括減少生理癥狀。用于任何特定受試者的抗體的最佳 有效量和濃度將取決于多種因素，包括患者的年齡、體重（size)、健康和/或性別，病況的 性質(zhì)和程度，特定抗體的活性，身體對其清除率，并且也包括與所述抗體組合給予的任何可 能的其它治療。對于給定情況所遞送的有效量可以在臨床醫(yī)師的判斷范圍內(nèi)來確定。對于 本發(fā)明的目的來說，有效劑量可為約〇· 〇〇5mg/kg至約50mg/kg，或約0· 05mg/kg至約IOmg/ kg。已知的基于抗體的藥物在這方面提供了指導(dǎo)，例如HERCEPTIN?以4mg/kg體重的初始負(fù) 荷劑量給予以及2mg/kg體重的每周維持劑量；RITUXAN tm每周以375mg/m2給予；SYNAGIStm 以15mg/kg體重肌內(nèi)給予；等等。
[0127] 本發(fā)明提供了向哺乳動物遞送單克隆抗體的方法，包括向患者給予本發(fā)明的藥物 組合物的步驟。
[0128] 本發(fā)明還提供了如本文在各實施方案所描述的本發(fā)明的制劑，用作藥物，例如，用 于向哺乳動物遞送抗體，或用于治療、預(yù)防或改善上述疾病和病癥中的一種或多種。
[0129] 哺乳動物優(yōu)選是人，但也可以是，例如，馬或?；蚬坊蜇垺＿@些抗體將理想被選擇 以匹配目標(biāo)物種例如用于人類給藥的人抗體，用于馬的馬抗體，用于狗的犬抗體等。如果天 然宿主抗體是不可獲得的，則可以通過來自供體抗體的⑶R殘基（通常，還有一個或多個框 架殘基）向來自宿主物種的接受者框架的轉(zhuǎn)移來實現(xiàn)從一個物種到另一個的抗體特異性 轉(zhuǎn)移，例如以人源化。馬的、牛的、犬科動物的和貓科動物的抗體是本領(lǐng)域已知的?？贵w將 結(jié)合來自目標(biāo)物種的BAFFR，但它也可與來自其他物種的BAFFR交叉反應(yīng)。
[0130] 劑量可以是單劑量方案或多劑量方案。
[0131] 用于形成本發(fā)明的組合物的成分可以密閉容器提供。
[0132] 抗 BAFFR 抗體
[0133] 本發(fā)明涉及抗BAFFR抗體并且更具體地M0R6654和M0R6654B的制劑。
[0134] 可包括在本發(fā)明的藥物組合物中的一種合適的抗體是人重組抗體M0R6654,在結(jié) 構(gòu)上，其特征如下面進(jìn)一步描述。這樣的分離的抗BAFFR抗體的V h氨基酸序列示出于SEQ ID NO :1。這樣的分離的抗BAFFR抗體的'氨基酸序列示出于SEQ ID NO :2。這樣的分 離的抗BAFFR抗體的全長重鏈氨基酸序列的實例示出于SEQ ID NO :9。這樣的分離的抗 BAFFR抗體的全長輕鏈氨基酸序列的實例示出于SEQ ID NO :10。這樣的分離的抗BAFFR抗 體的重鏈和輕鏈氨基酸序列的另一實例是分別由SEQ ID NO :11和SEQ ID NO: 12的核苷酸 序列編碼的那些?？贵w的重鏈和輕鏈氨基酸序列的另一實例是由質(zhì)粒PBW510中所含的相 應(yīng) DNA 序列所編碼的那些，質(zhì)粒 pBW510 由 Novartis Pharma AG, Forum 1，CH_4002Basel， Switzerland，于 2009年4 月 29 日保藏于DSMZ，Inhoffenstrasse 7B，38124Braunschweig， 德國，保藏編號是DSM22542。
[0135] 可以用于制備本發(fā)明的藥物組合物的其他抗BAFFR抗體包括抗BAFFR抗體，其氨 基酸已經(jīng)通過氨基酸缺失、插入或取代發(fā)生突變，但在上述的重鏈或者輕鏈區(qū)具有不超過 1、2、3、4或5個氨基酸缺失、插入或取代。在具體的實施方案中，這樣的氨基酸改變似乎僅 在框架區(qū)和/或恒定區(qū)出現(xiàn)并且⑶R區(qū)與SEQ ID NO :3,4和5的重鏈⑶R1，⑶R2和⑶R3 以及與SEQ ID NO :6,7和8的輕鏈CDR1，⑶R2和⑶R3區(qū)分別是100%相同的。在一個更 具體的實施方案中，已作出的改變是僅在CDR區(qū)外的保守氨基酸取代。
[0136] 保守氨基酸取代是氨基酸殘基被具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基替換的那些。在本領(lǐng) 域中已經(jīng)定義了具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基家族。這些家族包括具有堿性側(cè)鏈（例如，賴 氨酸、精氨酸、組氨酸），酸性側(cè)鏈（例如，天冬氨酸、谷氨酸），不帶電荷的極性側(cè)鏈（例如， 甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸），非極性側(cè)鏈（例 如，丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸），分支側(cè)鏈（例如， 蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸）和芳香族側(cè)鏈（例如，酪氨酸，苯丙氨酸，色氨酸，組氨酸）的氨 基酸。因此，抗BAFFR抗體的CDR區(qū)外的一個或多個氨基酸殘基可以被來自相同側(cè)鏈家族 的其它氨基酸殘基替換，并且可以測試改變的抗體的保留功能，特別是與BAFFR相同的結(jié) 合特性。
[0137] 抗體一般可以被糖基化。連接于重鏈的(^2結(jié)構(gòu)域的N-連接的聚糖，例如，可以影 響Clq和FcR結(jié)合，并且無糖基化的抗體可對這些受體具有較低的或不同的親和力。聚糖 結(jié)構(gòu)也可以影響活性例如可以根據(jù)在聚糖的雙觸角鏈的末端的半乳糖的糖數(shù)量（0、1或2) 看出補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞死亡的差異?？贵w的聚糖優(yōu)選在給藥后不會導(dǎo)致人免疫原性應(yīng)答。
[0138] 另外或可選地，抗體可以制備成具有改變類型的糖基化，例如具有減少量的或沒 有巖藻糖基殘基的低巖藻糖基化（hypofucosylated)或非巖藻糖基化抗體或具有增加的 二等分GlcNac結(jié)構(gòu)的抗體。此類改變的糖基化模式已顯示出提高抗體的抗體依賴性細(xì)胞 介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC)能力。此種碳水化合物修飾可以通過，例如，在具有改變的糖基化 機(jī)制的宿主細(xì)胞中表達(dá)抗體而實現(xiàn)。具有改變的糖基化機(jī)制的細(xì)胞在本領(lǐng)域已經(jīng)進(jìn)行過描 述并且可以用作表達(dá)本發(fā)明的重組抗體的宿主細(xì)胞，由此產(chǎn)生具有改變的糖基化的抗體。 例如，Hang等人的EP1，176, 195描述了具有功能被破壞的編碼巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶的FUT8基 因的細(xì)胞系，使得在這樣的細(xì)胞系中表達(dá)的抗體表現(xiàn)出低巖藻糖基化或者是缺乏巖藻糖基 殘基。因此，在一個實施方案中，包括在本發(fā)明的藥物組合物中的抗BAFFR抗體是通過在展 現(xiàn)出低巖藻糖基化或非巖藻糖基化模式的細(xì)胞系中重組表達(dá)而產(chǎn)生的，例如，具有編碼巖 藻糖基轉(zhuǎn)移酶的FUT8基因的缺陷表達(dá)的哺乳動物細(xì)胞系。
[0139] 如本文所使用的，術(shù)語M0R6654涵蓋任何類型的糖基化模式。在一個具體的實 施方案中，藥物組合物包括由展現(xiàn)出低巖藻糖基化或非巖藻糖基化模式的細(xì)胞系生產(chǎn)的 M0R6654組成的抗BAFFR抗體，例如M0R6654B，其展現(xiàn)出非巖藻糖基化模式（缺乏巖藻糖基 殘基）。Presta的PCT公開文本W(wǎng)003/035835描述了變體CHO細(xì)胞系Lecl3細(xì)胞，其具有降 低的將巖藻糖結(jié)合到Asn (297)-連接的碳水化合物的能力，也導(dǎo)致在該宿主細(xì)胞中表達(dá)的 抗體的低巖藻糖基化（也參見 Shields，R. L.等人，2002J. Biol. Chem. 277 :26733-26740)。 Umana等人的PCT公開文本W(wǎng)099/54342描述了被改造為表達(dá)糖蛋白修飾性糖基轉(zhuǎn)移酶（例 如，β(1，4)-Ν乙酰葡糖胺基轉(zhuǎn)移酶III (GnTIII))的細(xì)胞系，使得在該經(jīng)改造的細(xì)胞系中 表達(dá)的抗體展現(xiàn)出增加的二等分GlcNac結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致抗體的ADCC活性提高（也參見Umana 等人，1999Nat. Biotech. 17 :176-180)。Eureka Therapeutics 進(jìn)一步描述了遺傳改造的 CHO哺乳動物細(xì)胞，其能產(chǎn)生缺乏巖藻糖基殘基的具有改變的哺乳動物糖基化模式的抗體 (http ://www. eurekainc. com/about_us/companyoverview. html) 〇 或者，可以在被改造用 于哺乳動物樣糖基化模式并且能夠產(chǎn)生缺乏巖藻糖作為糖基化模式的抗體的酵母或絲狀 真菌中生產(chǎn)抗BAFFR抗體（參見例如EP1297172B1)。
[0140] 本發(fā)明所考慮的本文中的抗BAFFR抗體的另一種修飾是聚乙二醇化。抗體可以被 聚乙二醇化，以例如增加抗體的生物（例如血清）半衰期。為了將抗體聚乙二醇化，可在 一個或多個PEG基團(tuán)適合結(jié)合至抗體或抗體片段的條件下，通常將抗體或其片段與聚乙二 醇（PEG)如PEG的反應(yīng)性酯或醛衍生物進(jìn)行反應(yīng)。聚乙二醇化可以通過與反應(yīng)性PEG分子 (或類似的反應(yīng)性水溶性聚合物）的?；磻?yīng)或烷基化反應(yīng)來進(jìn)行。
[0141] 如本文所使用的，術(shù)語"聚乙二醇"旨在涵蓋任何已被用于衍生其他蛋白質(zhì)的PEG 形式，如單（Cl-ClO)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-馬來酰亞胺。在某些實施 方案中，待聚乙二醇化的抗體是無糖基化抗體。聚乙二醇化蛋白質(zhì)的方法是本領(lǐng)域已知的， 并且可以應(yīng)用于本發(fā)明的抗體。參見例如，Nishimura等人的EP 0154 316和Ishikawa等 人的 EP 0401384。
[0142] 抗BAFFR抗體（例如M0R6654)的任何其它天然或非天然的翻譯后修飾被進(jìn)一步 意圖作為可用于制備本發(fā)明的藥物組合物的抗BAFFR抗體的具體實施方案。
[0143] 抗體可以以不含與它們自然地相關(guān)聯(lián)的產(chǎn)品的形式來制備?？贵w的天然環(huán)境的污 染物組分包括材料，如酶、激素或其他宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)。 實施例
[0144] 制備抗BAFFR抗體
[0145] 抗體M0R6654特異性結(jié)合BAFFR并且也描述于以W02010/007082公開的國際申 請。它是通過噬菌體展示獲得的人IgGl κ抗體。其重鏈和輕鏈由SEQ ID NO :9和10組 成。下表1和表2總結(jié)了 M0R6654的序列特征。
[0146] 表1 :對在表2的序列表中列出的序列的簡要說明
[0147]
【權(quán)利要求】
1. 具有pH為5. 0-7. 0的水性組合物，并且包含 (i) 抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有18-165mg/mL的濃度，并且其中所述抗BAFFR抗 體包含分別是SEQ ID NO :3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID NO :6、7和8的 輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3， (ii) 穩(wěn)定劑， (iii) 緩沖劑， (iv) 表面活性劑，和任選地， (v) 氨基酸。
2. 權(quán)利要求1的水性組合物，其具有5. 5-6. 5的pH并且包含 (i) 抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有18-165mg/mL的濃度，并且其中所述抗BAFFR抗 體包含分別是SEQ ID NO :3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID NO :6、7和8的 輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3， (ii) 蔗糖、海藻糖或甘露醇作為穩(wěn)定劑， (iii) 組氨酸、檸檬酸鹽或琥珀酸鹽作為緩沖劑， (iv) 聚山梨酯20、泊洛沙姆188或羥丙基-0 -環(huán)糊精作為表面活性劑，和任選地， (v) 精氨酸作為氨基酸。
3. 權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的水性組合物，其包含濃度在20mg/mL和150mg/mL之間的 抗BAFFR抗體。
4. 前述權(quán)利要求中的任一項的水性組合物，其包含濃度在80mM和300mM之間的蔗糖、 甘露醇或海藻糖。
5. 前述權(quán)利要求中的任一項的水性組合物，其包含濃度在0. 01 %和0. 1 %之間的聚山 梨酯20或泊洛沙姆188。
6. 前述權(quán)利要求中的任一項的水性組合物，其包含濃度在5mM和50mM之間的組氨酸、 檸檬酸鹽或琥珀酸鹽。
7. 前述權(quán)利要求中的任一項的水性組合物，其包含濃度在2mM和80mM之間的精氨酸， 尤其是精氨酸_HC1。
8. 前述權(quán)利要求中的任一項的水性組合物，其包含濃度在110mM和250mM之間的蔗糖 或海藻糖。
9. 前述權(quán)利要求中的任一項的水性組合物，其包含濃度在120mM和220mM之間的蔗糖 或海藻糖。
10. 前述權(quán)利要求中的任一項的水性組合物，其包含濃度在〇. 02%和-0. 06%之間的 聚山梨酯20。
11. 前述權(quán)利要求中的任一項的水性組合物，其包含濃度在15mM和25mM之間的組氨 酸。
12. 前述權(quán)利要求中的任一項的水性組合物，其包含濃度在18mM和22mM之間的精氨 酸，尤其是精氨酸-HC1。
13. 權(quán)利要求1的水性組合物，其具有5. 5-6. 5的pH并且包含 (i)抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有18mg/mL-165mg/mL的濃度，并且其中所述抗 BAFFR抗體包含分別是SEQ ID N0:3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID N0:6、 7 和 8 的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3， (ii) 80mM-300mM蔗糖、海藻糖或甘露醇作為穩(wěn)定劑， (iii) 5mM-50mM組氨酸、檸檬酸鹽或琥珀酸鹽作為緩沖劑， (iv) 0. 01% -0. 1%聚山梨酯20或泊洛沙姆188,或者羥丙基-3-環(huán)糊精作 為表面活性劑，和任選地， (v) 2mM-80mM精氨酸，尤其是精氨酸-HC1。
14. 權(quán)利要求1的水性組合物，其具有5. 5-6. 5的pH并且包含 (i) 抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有20mg/mL-150mg/mL的濃度，并且其中所述抗 BAFFR抗體包含分別是SEQ ID NO:3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID NO:6、 7 和 8 的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3， (ii) 110mM-250mM蔗糖或海藻糖作為穩(wěn)定劑， (iii) 15mM-25mM組氨酸、檸檬酸鹽或琥珀酸鹽作為緩沖劑， (iv) 高達(dá)0. 02% -0. 06%聚山梨酯20或泊洛沙姆188或者羥丙基-環(huán)糊 精作為表面活性劑，和任選地， (v) 2mM-80mM精氨酸，尤其是精氨酸-HC1。
15. 權(quán)利要求1的水性組合物，其具有5. 5-6. 5的pH并且包含 (i) 抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有20mg/mL-150mg/mL的濃度，并且其中所述抗 BAFFR抗體包含分別是SEQ ID NO:3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID NO:6、 7 和 8 的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3， (ii) 120mM-220mM蔗糖或海藻糖作為穩(wěn)定劑， (iii) 18mM-22mM組氨酸、檸檬酸鹽或琥珀酸鹽作為緩沖劑， (iv) 高達(dá)0. 02% -0. 06%聚山梨酯20或泊洛沙姆188或者2, 5mM羥丙基-0 -環(huán)糊精 作為表面活性劑，和任選地 (v) 2mM-80mM精氨酸，尤其是精氨酸-HC1。
16. 權(quán)利要求1的水性組合物，其具有6. 0的pH并且包含 (i) 抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有150mg/mL的濃度，并且其中所述抗BAFFR抗體包 含分別是SEQ ID NO :3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID NO :6、7和8的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3, (ii) 220mM蔗糖作為穩(wěn)定劑， (iii) 20mM組氨酸作為緩沖劑， (iv) 0. 04%聚山梨酯20作為表面活性劑。
17. 權(quán)利要求1的水性組合物，其具有6. 0的pH并且包含 (i) 抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有150mg/mL的濃度，并且其中所述抗BAFFR抗體包 含分別是SEQ ID NO :3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID NO :6、7和8的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3, (ii) 220mM海藻糖作為穩(wěn)定劑， (iii) 20mM組氨酸作為緩沖劑， (iv) 0. 04%聚山梨酯20作為表面活性劑。
18. 權(quán)利要求1的水性組合物，其具有6. 0的pH并且包含 (i) 抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有150mg/mL的濃度，并且其中所述抗BAFFR抗體包 含分別是SEQ ID NO :3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID NO :6、7和8的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3, (ii) 120mM蔗糖作為穩(wěn)定劑， (iii) 20mM組氨酸作為緩沖劑， (iv) 0. 04%聚山梨酯20作為表面活性劑，和 (v) 50mM精氨酸，尤其是精氨酸-HC1。
19. 權(quán)利要求1的水性組合物，其具有6. 0的pH并且包含 (i) 抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有150mg/mL的濃度，并且其中所述抗BAFFR抗體包 含分別是SEQ ID NO :3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID NO :6、7和8的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3, (ii) 120mM海藻糖作為穩(wěn)定劑， (iii) 20mM組氨酸作為緩沖劑， (iv) 0. 04%聚山梨酯20作為表面活性劑，和 (v) 50mM精氨酸，尤其是精氨酸-HC1。
20. 權(quán)利要求1的水性組合物，其具有6. 0的pH并且包含 (i) 抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有20mg/mL的濃度，并且其中所述抗BAFFR抗體包 含分別是SEQ ID NO :3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID NO :6、7和8的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3, (ii) 220mM蔗糖作為穩(wěn)定劑， (iii) 20mM組氨酸作為緩沖劑，和 (iv) 0. 04%聚山梨酯20作為表面活性劑。
21. 權(quán)利要求1的水性組合物，其具有6. 0的pH并且包含 (i) 抗BAFFR抗體，其中所述抗體具有20mg/mL的濃度，并且其中所述抗BAFFR抗體包 含分別是SEQ ID NO :3、4和5的重鏈CDR1、CDR2和CDR3,以及SEQ ID NO :6、7和8的輕鏈 CDR1、CDR2 和 CDR3, (ii) 220mM海藻糖作為穩(wěn)定劑， (iii) 20mM組氨酸作為緩沖劑，和 (iv) 0. 04%聚山梨酯20作為表面活性劑。
22. 前述權(quán)利要求中的任一項的水性組合物，其中所述抗BAFFR抗體包含具有氨基酸 SEQ ID NO :1的VH結(jié)構(gòu)域和具有氨基酸SEQ ID NO :2的 '結(jié)構(gòu)域。
23. 前述權(quán)利要求中的任一項的水性組合物，其中所述抗BAFFR抗體包含SEQ ID NO: 9的重鏈區(qū)和SEQ ID NO :10的輕鏈區(qū)。
24. 前述權(quán)利要求中的任一項的水性組合物，其中所述抗BAFFR抗體是非巖藻糖基化 的。
25. 遞送裝置，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-24中任一項的水性組合物。
26. 預(yù)填裝注射器，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-24中任一項的水性組合物。
27. 向哺乳動物遞送抗BAFFR抗體的方法，其包括給予所述哺乳動物根據(jù)權(quán)利要求 1-24中任一項的水性組合物的步驟。
28. 根據(jù)權(quán)利要求1-24中任一項的水性組合物或權(quán)利要求25的遞送裝置，或權(quán)利要 求26的預(yù)填裝注射器，其用于治療由BAFF受體介導(dǎo)或可以通過殺死或消耗B細(xì)胞而治療 的疾病或病癥。
29. 根據(jù)權(quán)利要求1-24中任一項的水性組合物或權(quán)利要求25的遞送裝置，或權(quán)利要求 26的預(yù)填裝注射器，其用于治療自身免疫疾病。
30. 根據(jù)權(quán)利要求1-24中任一項的水性組合物或權(quán)利要求25的遞送裝置，或權(quán)利要求 26的預(yù)填裝注射器，其用于治療B細(xì)胞瘤如淋巴瘤、白血病或骨髓瘤。
31. 根據(jù)權(quán)利要求1-24中任一項的水性組合物或權(quán)利要求25的遞送裝置，或權(quán)利要求 26的預(yù)填裝注射器，其用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征或?qū)こＰ蕴?皰瘡。
【文檔編號】A61K39/395GK104363920SQ201380031181
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2013年6月11日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月12日
【發(fā)明者】M·柯森扎, C·斯塔克 申請人:諾華股份有限公司