一種白花蛇舌草的活性部位及其制備方法、應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】一種白花蛇舌草的活性部位及其制備方法、應(yīng)用，屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】。該活性部位由以下步驟制得：取白花蛇舌草，加15～20倍量的95%乙醇，回流提取，過濾，合并提取液，減壓回收溶劑，得提取物；提取物用熱水溶解，過濾，大孔樹脂柱層析，用乙醇溶液進行洗脫，收集洗脫液，減壓回收溶劑，得洗脫物；洗脫物再用水溶解，過濾，聚酰胺柱層析，用水洗脫，收集水洗脫液，減壓濃縮，干燥，得活性部位。本發(fā)明采用的方法簡單，適合工業(yè)化生產(chǎn)；所采用的分離材料價廉可反復(fù)使用，降低了成本；最后所得的活性部位雜質(zhì)少，純度高，藥效更明顯。
【專利說明】一種白花蛇舌草的活性部位及其制備方法、應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種白花蛇舌草的活性部位及其制備方法、應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]白花蛇舌草0?辦diffusa Willd.)為茜草科植物，有清熱解毒，利尿消腫，活血止痛等功效。廣泛分布于廣東、廣西、湖南、福建、浙江等南方各省。內(nèi)服多用于治療惡性腫瘤、肝炎、闌尾炎、泌尿系統(tǒng)感染、支氣管炎、扁桃體炎、喉炎等疾病，外用可治療毒蛇咬傷、癰腫疔瘡等等。白花蛇舌草主要含有黃酮類、蒽醌類、萜類和留醇類等化學(xué)成分，藥理作用包括抗腫瘤、抗氧化、抗菌、免疫調(diào)節(jié)和保肝等作用。在中醫(yī)臨床上，常以白花蛇舌草為主藥治療乙型病毒性肝炎患者。但其治療乙型肝炎的物質(zhì)基礎(chǔ)一直不夠明確，迄今未見白花蛇舌草的活性部位治療乙型肝炎的報道。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計提供一種白花蛇舌草的活性部位及其制備方法、應(yīng)用的技術(shù)方案。
[0004]所述的一種白花蛇舌草的活性部位，其特征在于通過以下步驟制得:
1)取白花蛇舌草，加15~20倍量的95%乙醇，回流提取，過濾，合并提取液，減壓回收溶劑，得提取物；
2)提取物用熱水溶解，過濾，大孔樹脂柱層析，用乙醇溶液進行洗脫，收集洗脫液，減壓回收溶劑，得洗脫物；
3)洗脫物再用水溶解，過濾，聚酰胺柱層析，用水洗脫，收集水洗脫液，減壓濃縮，干燥，得活性部位。
[0005]所述的一種白花蛇舌草的活性部位，其特征在于所述的步驟I)中回流提取3次，第一次2小時,第二次1.5小時,第三次I小時。
[0006]所述的一種白花蛇舌草的活性部位，其特征在于所述的步驟2)中熱水溫度為70~80°C，大孔樹脂的型號為D101、AB-8、NKA-9、HPD-400中的一種，乙醇濃度為30~60%。
[0007]所述的一種白花蛇舌草的活性部位，其特征在于所述的步驟3)中聚酰胺型號為PA6 或 PA66。
[0008]所述的一種白花蛇舌草的活性部位在制備治療乙型肝炎藥物中的應(yīng)用。
[0009]所述的一種白花蛇舌草的活性部位的制備方法，其特征在于包括以下步驟:
1)取白花蛇舌草，加15~20倍量的95%乙醇，回流提取，過濾，合并提取液，減壓回收溶劑，得提取物；
2)提取物用熱水溶解，過濾，大孔樹脂柱層析，用乙醇溶液進行洗脫，收集洗脫液，減壓回收溶劑，得洗脫物；
3)洗脫物再用水溶解，過濾，聚酰胺柱層析，用水洗脫，收集水洗脫液，減壓濃縮，干燥，得活性部位。
[0010]所述的一種白花蛇舌草的活性部位的制備方法，其特征在于所述的步驟I)中回流提取3次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次I小時。
[0011]所述的一種白花蛇舌草的活性部位的制備方法，其特征在于所述的步驟2)中熱水溫度為70~80°C，大孔樹脂的型號為DlOl、AB-8、NKA-9、HPD-400中的一種，乙醇濃度為30 ~60%0
[0012]所述的一種白花蛇舌草的活性部位的制備方法，其特征在于所述的步驟3)中聚酰胺型號為PA6或PA66。
[0013]本發(fā)明具有以下有益效果:
1、本發(fā)明提取純化所采用的方法簡單，適合工業(yè)化生產(chǎn)；所采用的分離材料價廉可反復(fù)使用，降低了成本；最后所得的活性部位雜質(zhì)少，純度高，藥效更明顯。
[0014]2、本發(fā)明所得的活性部位主要含有環(huán)烯醚萜類成分，以雞屎藤次苷甲酯為對照品，采用比色法(二硝基苯肼法顯色反應(yīng))測得總環(huán)烯醚萜的含量大于80%。
[0015]3、該活性部位對四氯化碳和氨基半乳糖致大鼠急性肝損傷具有保肝作用，對鴨乙肝病毒(DHBV)具有抗病毒與保護肝細胞的作用。
【具體實施方式】
[0016]以下結(jié)合實施例來進一步說明本發(fā)明。
[0017]實施例1:` 取白花蛇舌草1kg，粉碎成粗粉，第一次加入20倍量95%乙醇，回流提取2小時，過濾，得提取液I ;第二次加入18倍量95%乙醇，回流提取1.5小時，過濾，得提取液II ;第三次加入15倍量95%乙醇，回流提取I小時，過濾，得提取液III ;合并三次提取液，減壓回收乙醇至無醇味，得提取物流浸膏；用70~80°C的熱水IL溶解提取物，過濾，過DlOl大孔樹脂柱，依次用水、10%乙醇、50%乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味，得洗脫物；在洗脫物中加入300ml水溶解，過濾，過PA6聚酰胺柱，用6倍量柱體積的水洗脫，得水洗脫物，減壓濃縮，干燥，得活性部位5.Sg。
[0018]實施例2:
取白花蛇舌草1kg，粉碎成粗粉，第一次加入20倍量95%乙醇，回流提取2小時，過濾，得提取液I ;第二次加入18倍量95%乙醇，回流提取1.5小時，過濾，得提取液II ;第三次加入15倍量95%乙醇，回流提取I小時，過濾，得提取液III ;合并三次提取液，減壓回收乙醇至無醇味，得提取物流浸膏；用70~80°C的熱水IL溶解提取物，過濾，過AB-8大孔樹脂柱，依次用水、10%乙醇、60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味，得洗脫物；在洗脫物中加入300ml水溶解，過濾，過PA6聚酰胺柱，用6倍量柱體積的水洗脫，得水洗脫物，減壓濃縮，干燥，得活性部位5.2g。
[0019]實施例3:
取白花蛇舌草1kg，粉碎成粗粉，第一次加入20倍量95%乙醇，回流提取2小時，過濾，得提取液I ;第二次加入18倍量95%乙醇，回流提取1.5小時，過濾，得提取液II ;第三次加A 15倍量95%乙醇，回流提取I小時，過濾，得提取液III ;合并三次提取液，減壓回收乙醇至無醇味，得提取物流浸膏；用70~80°C的熱水IL溶解提取物，過濾，過NKA-9大孔樹脂柱，依次用水、10%乙醇、30%乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味，得洗脫物；在洗脫物中加入300ml水溶解，過濾，過PA66聚酰胺柱，用6倍量柱體積的水洗脫，得水洗脫物，減壓濃縮，干燥，得活性部位4.7g。
[0020]實施例4:
取白花蛇舌草1kg，粉碎成粗粉，第一次加入20倍量95%乙醇，回流提取2小時，過濾，得提取液I ;第二次加入18倍量95%乙醇，回流提取1.5小時，過濾，得提取液II ;第三次加入15倍量95%乙醇，回流提取I小時，過濾，得提取液III ;合并三次提取液，減壓回收乙醇至無醇味，得提取物流浸膏；用70~80°C的熱水IL溶解提取物，過濾，過HPD-400大孔樹脂柱，依次用水、10%乙醇、40%乙醇洗脫，收集40%乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至無醇味，得洗脫物；在洗脫物中加入300ml水溶解，過濾，過PA66聚酰胺柱，用6倍量柱體積的水洗脫，得水洗脫物，減壓濃縮，干燥，得活性部位5.3g。
[0021]實施例5:所得活性部位的保肝和抗乙肝病毒實驗
1、活性部位(由實施例1制得)對四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護作用健康雄性昆明種小鼠60只，隨機分為正常對照組，模型組，陽性對照(聯(lián)苯雙酯，150mg/kg)組，高(400mg/kg)、中(200mg/kg)、低(100mg/kg)劑量組，每組 10 只，每天灌胃給藥2次，連續(xù)7d。末次給藥后，每只小鼠按10mL/kg腹腔注射以植物油配制的0.1%CC14溶液,24h后，眼內(nèi)目此靜脈叢取血0.8mL,放置30min, 3000r/min離心5min,取血清,按試劑盒操作要求測定ALT和AST (見表1);取肝臟，稱總重，求算肝臟指數(shù)；取匯管區(qū)肝臟組織，以10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，HE染色，做病理組織學(xué)檢查。
[0022]表1活性部位對四氯化碳致肝損傷小鼠血清ALT和AST活力的影響(
【權(quán)利要求】
1.一種白花蛇舌草的活性部位，其特征在于通過以下步驟制得: .1)取白花蛇舌草，加15~20倍量的95%乙醇，回流提取，過濾，合并提取液，減壓回收溶劑，得提取物； .2)提取物用熱水溶解，過濾，大孔樹脂柱層析，用乙醇溶液進行洗脫，收集洗脫液，減壓回收溶劑，得洗脫物； .3)洗脫物再用水溶解，過濾，聚酰胺柱層析，用水洗脫，收集水洗脫液，減壓濃縮，干燥，得活性部位。
2.如權(quán)利要求1所述的一種白花蛇舌草的活性部位，其特征在于所述的步驟I)中回流提取3次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次I小時。
3.如權(quán)利要求1所述的一種白花蛇舌草的活性部位，其特征在于所述的步驟2)中熱水溫度為70~80°C，大孔樹脂的型號為D101、AB-8、NKA-9、HPD-400中的一種，乙醇濃度為.30 ~60%0
4.如權(quán)利要求1所述的一種白花蛇舌草的活性部位，其特征在于所述的步驟3)中聚酰胺型號為PA6或PA66。
5.如權(quán)利要求1所述 的一種白花蛇舌草的活性部位在制備治療乙型肝炎藥物中的應(yīng)用。
6.一種白花蛇舌草的活性部位的制備方法，其特征在于包括以下步驟: . 1)取白花蛇舌草，加15~20倍量的95%乙醇，回流提取，過濾，合并提取液，減壓回收溶劑，得提取物； .2)提取物用熱水溶解，過濾，大孔樹脂柱層析，用乙醇溶液進行洗脫，收集洗脫液，減壓回收溶劑，得洗脫物； . 3)洗脫物再用水溶解，過濾，聚酰胺柱層析，用水洗脫，收集水洗脫液，減壓濃縮，干燥，得活性部位。
7.如權(quán)利要求6所述的一種白花蛇舌草的活性部位的制備方法，其特征在于所述的步驟I)中回流提取3次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次I小時。
8.如權(quán)利要求6所述的一種白花蛇舌草的活性部位的制備方法，其特征在于所述的步驟2)中熱水溫度為70~80°C，大孔樹脂的型號為D101、AB-8、NKA-9、HPD-400中的一種，乙醇濃度為30~60%。
9.如權(quán)利要求6所述的一種白花蛇舌草的活性部位的制備方法，其特征在于所述的步驟3)中聚酰胺型號為PA6或PA66。
【文檔編號】A61K36/748GK103610798SQ201310615336
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月28日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月28日
【發(fā)明者】張永勇, 潘家榮 申請人:中國計量學(xué)院