一種負載有靶向抗癌藥物的plga微米顆粒的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種負載有靶向抗癌藥物的PLGA微米顆粒的制備方法。本發(fā)明把吉西他濱轉(zhuǎn)化成4-(N)硬脂酰衍生物(GEM-C18)，可以使其更穩(wěn)定更均勻的復(fù)合到聚乳酸-羥基乙酸共聚物微米顆粒中，同時不減弱吉西他濱的細胞內(nèi)藥物活性。熒光標記的GEM-C18-聚乳酸-羥基乙酸共聚物微米顆粒對非惡性癌(SV-HUC-1)、低級或高級癌(5637，HT-1376)的尿路上皮細胞粘附力與抗增殖和抗代謝效應(yīng)都有顯著的提高。本發(fā)明產(chǎn)品在靶向殺滅癌細胞以及癌癥治療方面具有臨床應(yīng)用前景。
【專利說明】—種負載有靶向抗癌藥物的PLGA微米顆粒的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種PLGA微米顆粒的制備，尤其涉及一種負載有可以用于靶向治療的抗癌藥物吉西他濱的PLGA微米顆粒的制備。
【背景技術(shù)】
[0002]根據(jù)流行病學(xué)趨勢預(yù)警，膀胱癌是一種嚴重的內(nèi)科病情。通過膀胱灌注可以使藥物很好的進入到治療位點，但是膀胱灌注治療中尿路上皮細胞對藥物的生物利用度較低，而且由于病人的依從性和實際操作性，單次膀胱灌注治療的最長時間限制在120min以內(nèi)。各種不同的先進策略如新穎的APIs和裝置輔助方法可用來優(yōu)化藥物接觸。
[0003]核苷類似物吉西他濱，由于其光譜抗腫瘤活性及良好的安全性特點，用作新一代化療，吉西他濱本身作為一種前體藥物，需要通過核苷轉(zhuǎn)運(Hentl)和特定激酶作用下在細胞內(nèi)轉(zhuǎn)化成具有活性的三磷酸形式，來使DNA斷裂，引起凋亡，但轉(zhuǎn)運蛋白和激酶的表達或活性水平變化，會造成吉西他濱在敏感性及耐藥性方面的嚴重缺陷；同時吉西他濱半衰期較短，需要相當(dāng)高的注射劑量。雙親性吉西他濱的藥代動力學(xué)和藥理學(xué)特點有了改善，它的優(yōu)點包括不依賴于蛋白運載而主要靠基于擴散的跨膜攝取和對于脫氨的低易感性，這兩點都被證明和其在體內(nèi)外活性水平的增強直接相關(guān)。但是轉(zhuǎn)化為親脂性衍生物后，吉西他濱在水溶液環(huán)境中的溶解性非常有限。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]吉西他濱也已被做成脂質(zhì)體或顆粒運輸體系。在很多情況下，根據(jù)所使用的生物材料，載藥平臺決定了藥物的`整體性能，可能會實現(xiàn)持續(xù)釋放和對酶降解的低易感性，并可以通過表面修飾生物分子實現(xiàn)靶向。通過膀胱內(nèi)灌注治療直接進入到尿路上皮組織，已成為降低膀胱癌高復(fù)發(fā)率的一個非常有前景的手段。
[0005]本發(fā)明結(jié)合一種具有藥理學(xué)上優(yōu)勢的前體藥物方法和藥代動力學(xué)上有利的聚糖靶向運載體系，用來增強吉西他濱對于尿路上皮細胞的治療效果。把吉西他濱轉(zhuǎn)化成其4-(N)硬脂酰衍生物(GEM-C18)，可以使其更穩(wěn)定更均勻的復(fù)合到聚乳酸-羥基乙酸共聚物微米顆粒中，同時不減弱吉西他濱的細胞內(nèi)藥物活性。具體制備步驟如下:
[0006](I) 4-(N)硬脂酰衍生物(GEM-C18)的合成與分離:將IOOmg硬脂酸、119ul (0.5mmol)三丁基胺溶解到5ml四氫呋喃中并冷卻到_10°C, 65ul (0.5mmol)異丁基氯甲酸溶解到5ml四氫呋喃中，將其滴加到上述冷卻好的溶液中，反應(yīng)混合物在充氮氣條件下攪拌30min ;將吉西他濱(148mg,0.5mmol)和硫代巴比妥酸(TBA) (119 u 1,0.5mmol)的5ml無水DMF溶液小心加入,混合物在室溫下攪拌36h,?；瓿珊笳舭l(fā)掉多余的溶劑,剩余物溶解在IOmL的二氯甲烷和乙醇(94/6，V/V)的混合溶劑中；混合物離心，懸浮液用硅凝膠色譜純化。
[0007](2)聚乳酸-羥基乙酸共聚物負載GEM-C18微米顆粒的制備:500 y g的PLGA和IOOmg的GEM-C18溶解到3mL乙基醋酸中然后冷卻到4°C ;含有PLGA和GEM-C18的有機相用超聲分散50s的方法分散到含有穩(wěn)定劑的5.0mL的水溶液中，得到的乳液稀釋到IOOmL后磁力攪拌2h以蒸發(fā)掉有機相；懸浮液在不大于200mbar的壓力下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)30min完成顆粒的硬化和剩余溶劑的去除。gem-c18-plga-mp用多次離心的方法從聚合物中分離出來，每次2800~3500rpm離心15~30min后重新分散到同樣體積的4-(2-羥乙基)哌嗪-1-乙烷磺酸緩沖液中。
[0008]熒光標記的GEM-C18-聚乳酸-羥基乙酸共聚物微米顆粒，表面修飾麥胚凝集素(WGA)或者人血清蛋白(HSA)對非惡性癌(SV-HUC-1)、低級或高級癌(5637，HT-1376)的尿路上皮細胞粘附力與抗增殖和抗代謝效應(yīng)都有顯著的提高。與麥胚凝集素修飾的GEM-C18-聚乳酸-羥基乙酸共聚物微米顆粒更廣泛更持久的結(jié)合，會引起藥理特征的變化，顯著提高細胞毒性，還可以在短時間限制(120min)內(nèi)使灌輸給藥有最大響應(yīng)。在靶向殺滅癌細胞以及癌癥治療方面具有臨床應(yīng)用前景。
【具體實施方式】
[0009]為了加深對本發(fā)明的理解，下面結(jié)合具體實例對本發(fā)明做進一步的詳述:
[0010](I) 4-(N)硬脂酰衍生物(GEM-C18)的合成與分離:將IOOmg硬脂酸、119ul (0.5mmol)三丁基胺溶解到5ml四氫呋喃中并冷卻到_10°C, 65ul (0.5mmol)異丁基氯甲酸溶解到5ml四氫呋喃中，將其滴加到上述冷卻好的溶液中，反應(yīng)混合物在充氮氣條件下攪拌30min ;將吉西他濱(148mg,0.5mmol)和硫代巴比妥酸(TBA) (119 u 1,0.5mmol)的5ml無水DMF溶液小心加入,混合物在室溫下攪拌36h,酰化完成后蒸發(fā)掉多余的溶劑,剩余物溶解在IOmL的二氯甲烷和乙醇(94/6，V/V)的混合溶劑中；混合物離心，懸浮液用硅凝膠色譜純化。
[0011](2)聚乳酸-羥基乙酸共聚物負載GEM-C18微米顆粒的制備:500 Ug的PLGA和IOOmg的GEM-C18溶解到3mL乙基醋酸中然后冷卻到4°C ;含有PLGA和GEM-C18的有機相用超聲分散50s的方法分散到含有穩(wěn)定劑的5.0mL的水溶液中，得到的乳液稀釋到IOOmL后磁力攪拌2h以蒸發(fā)掉有機相；懸浮液在不大于200mbar的壓力下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)30min完成顆粒的硬化和剩余溶劑的去除。gem-c18-plga-mp用多次離心的方法從聚合物中分離出來，每次2800rpm離心30min后重新分散到同樣體積的4-(2-羥乙基)哌嗪-1-乙烷磺酸緩沖液中。
【權(quán)利要求】
1.一種負載有靶向抗癌藥物的PLGA微米顆粒的制備方法，其步驟如下: (1)4-(N)硬脂酰衍生物(GEM-C18)的合成與分離: 將IOOmg硬脂酸、119ul(0.5mmol)三丁基胺溶解到5ml四氫呋喃中并冷卻到-10°C，65ul(0.5mmol)異丁基氯甲酸溶解到5ml四氫呋喃中，將其滴加到上述冷卻好的溶液中，反應(yīng)混合物在充氮氣條件下攪拌30min ;將吉西他濱(148mg，0.5mmol)和硫代巴比妥酸(TBA)(119 V- 1,0.5mmol)的5ml無水DMF溶液小心加入；混合物在室溫下攪拌36h,?；瓿珊笳舭l(fā)掉多余的溶劑，剩余物溶解在IOmL的二氯甲烷和乙醇(94/6，V/V)的混合溶劑中，混合物離心，懸浮液用硅凝膠色譜純化； (2)聚乳酸-羥基乙酸共聚物負載GEM-C18微米顆粒的制備: 500 ii g的PLGA和IOOmg的GEM-C18溶解到3mL乙基醋酸中然后冷卻到4°C ;含有PLGA和GEM-C18的有機相用超聲分散50s的方法分散到含有穩(wěn)定劑的5.0mL的水溶液中，得到的乳液稀釋到IOOmL后磁力攪拌2h ;懸浮液在不大于200mbar的壓力下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)30min,GEM-C18-PLGa-MP用多次離心的方法從聚合物中分離出來，每次2800~3500rpm離心15~30min后重新分散到4-(2-羥乙基)哌嗪-1-乙烷磺酸緩沖液中。
2.如權(quán)利要求1所述的PLGA微米顆粒的制備方法，其特征在于:所述4-(2-羥乙基)哌嗪-1-乙烷磺酸緩沖液與GEM-C18-PLGa-MP的體積比為1:1。
3.如權(quán)利要求1 所述的PLGA微米顆粒的制備方法，其特征在于:所述離心速度和時間分別為 2800rpm 和 30min。
【文檔編號】A61P35/00GK103599073SQ201310586081
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年11月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月15日
【發(fā)明者】韓志超, 許杉杉, 佴剛 申請人:無錫中科光遠生物材料有限公司