一種羅布麻葉總多酚的制備方法及用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種羅布麻葉總多酚的制備方法及用途，該方法是將羅布麻葉干燥、提取、過濾、回收濾液、減壓濃縮、回收乙醇，再將濃縮液通過大孔樹脂進(jìn)行純化、真空干燥，得到羅布麻葉總多酚，其含量達(dá)到45-48%。通過本發(fā)明所述方法獲得的羅布麻葉總多酚經(jīng)初步的活性篩選試驗證明：羅布麻葉總多酚具有蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP1B）抑制劑作用，可用于治療糖尿病的藥物、保健品或食品的用途。
【專利說明】一種羅布麻葉總多酚的制備方法及用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]一種羅布麻葉總多酚的制備方法及用途。
【背景技術(shù)】
[0002]羅布麻(Apocynum venetum L.)屬于夾竹桃科羅布麻屬植物，又稱小花羅布麻、羅布紅麻，據(jù)《中國植物志》記載，其又名野麻、野茶、紅麻、茶葉花、澤漆麻、牛茶等。
[0003]羅布麻易于同大花羅布麻混淆，有人根據(jù)羅布麻與大花羅布麻植物學(xué)上的差異，將本屬細(xì)分成兩屬三種，即羅布麻屬和白麻屬，羅布麻屬有羅布麻(Apocynum venetumL.)，又稱小花羅布麻、羅布紅麻，也就是本發(fā)明的原材料；白麻屬有兩種植物:其一為大葉白麻(Poacynum Hendersonii Woodson),別名大花羅布麻,其二為白麻(Poacynum pictumSchrenk Baill),別名紫斑羅布麻。
[0004]羅布麻(Apocynum venetum L.)作為中國傳統(tǒng)中藥，收載于2010版《中國藥典》一部196頁，“以其干燥葉入藥，性味甘、苦、涼，歸肝經(jīng)，具有平肝安神，清熱利水之功效，用于治療肝陽眩暈，心悸失眠，神經(jīng)衰弱，浮腫尿少，高血壓，腎炎浮腫?！?br>
[0005]羅布麻因其稀少珍貴，被稱為“麻中極品”，是一種世界上稀有野生植物。羅布麻為夾竹桃科羅布麻屬多年生宿根草本植物， 直立半灌木，高一般1.5~3米，具有乳汁；枝條對生或互生，呈紫紅或淡紅色圓筒狀，光滑無毛；葉對生，在分枝處為近生，具柄，葉柄基部及腋間具腺體；其葉質(zhì)脆，其完整葉片呈橢圓狀披針形或卵圓形狀披針形，長I~5厘米，寬0.5~2厘米，顏色為淡綠或灰綠色，頂端急尖至鈍，具有短尖頭，兩面均無毛，葉脈纖細(xì)于下表面突起，葉柄細(xì)，長約4毫米；花冠圓筒狀鐘形，花冠筒長約6-8毫米，直徑3-2毫米，呈紫紅色或粉紅色。羅布麻分布于北緯36~55度之間的北美洲、歐洲及亞洲的溫帶地區(qū)。羅布麻主要生長在鹽堿荒地、沙漠邊緣、河流兩岸、河泊周圍、沖積平原及戈壁荒灘。在我國分布較廣，西北、華北、華東及東北各省均有分布，但以新疆沙漠地區(qū)生長的羅布麻品質(zhì)最佳。
[0006]羅布麻是一種具有非常優(yōu)越的生態(tài)效益和社會效益的野生植物。羅布麻為多年生宿根草本植物，根系發(fā)達(dá)，可以生長在干旱的沙漠邊緣和戈壁灘上，可以起到防風(fēng)固沙，美化沙漠和戈壁的綠色生態(tài)植物，同時，羅布麻是一種開發(fā)潛力巨大的經(jīng)濟(jì)作物。羅布麻花小而多，芳香美麗，花期較長，一般花期在4~9月，是一種良好的蜜源植物；羅布麻嫩葉經(jīng)蒸炒揉制加工后，制成羅布麻茶，以茶飲用，口感較好，不僅能解渴，還具有降血壓、清涼去火、防頭暈和中暑等功效。羅布麻以葉入藥，收載于《中國藥典》，具有多種藥理活性。
[0007]根據(jù)對各地羅布麻化學(xué)成分研究，已定性的成分有黃酮類、鞣質(zhì)類(單寧)、兒茶素類、脂肪酸醇酯類、醇類、香豆素類、有機酸類、糖類、氨基酸類、礦物元素等。近年來，大量的藥理研究表明羅布麻葉提取物不僅具有降血壓、降血脂、降糖、抗抑郁等藥理活性，而且還具有抗過敏、抗癌、抗福射、抗氧化和延緩衰老等保健功能。
[0008]Kim, D.W等研究了羅布麻葉的降血壓機制，實驗證明羅布麻葉提取液對給藥后的大鼠自發(fā)性高血壓心臟收縮壓明顯降低，鈉、鉀和蛋白質(zhì)的排泄量均變化很小。張素瓊等研究了羅布麻葉中的鞣質(zhì)和黃酮類成分均可以調(diào)節(jié)血脂，改善動脈粥樣硬化早期病變的作用。Takako Yokozawa等的研究表明，羅布麻中的酹類化合物對高級糖基化終產(chǎn)物的形成有抑制作用。鄭梅竹等人通過經(jīng)典抗抑郁評價模型小鼠強迫游泳實驗，結(jié)果顯示羅布麻總黃酮提取物具有明顯的抗抑郁活性，其藥效與氟西汀相似，并做了更進(jìn)一步研究，結(jié)果顯示羅布麻葉總黃酮提取物能夠促進(jìn)小鼠抗抑郁基因CREB、BDNF的表達(dá)。Fan，W.Z.等研究了羅布麻葉對肝臟的保護(hù)作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)羅布麻葉中的黃酮化合物對D-半乳糖胺和腫瘤壞死因子誘導(dǎo)的大鼠肝損傷顯示出了強烈的抑制作用。其保護(hù)肝臟的作用機制可能為抑制血清中腫瘤壞死因子含量的增加 。
[0009]羅布麻的主要成分是多酚類成分，主要包括鞣質(zhì)類、黃酮類、兒茶素類，除此之外，氨基酸類等有效成分含量豐富，且均具有很好的生物活性。我國新疆是種植羅布麻的主要地區(qū)之一，對野生羅布麻進(jìn)行大量的種植，種植面積廣，并且由于新疆獨特的地理位置、和氣候條件，使得新疆產(chǎn)的羅布麻品質(zhì)較好。因此，對羅布麻葉總多酚純化富集工藝進(jìn)行優(yōu)化，利于更好的對其進(jìn)行開發(fā)和利用，并為羅布麻相關(guān)產(chǎn)品的進(jìn)一步開發(fā)提供物質(zhì)基礎(chǔ)，更好的發(fā)揮其藥理作用和保健功效。本發(fā)明是通過溶劑提取的方法對羅布麻葉總多酚進(jìn)行提取，再通過大孔樹脂對其進(jìn)行分離純化，該方法簡單、可行，便于工業(yè)放大。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0010]本發(fā)明目的在于，提供一種羅布麻葉總多酚的制備方法及用途，該方法是將羅布麻葉干燥、提取、過濾、回收濾液、減壓濃縮、回收乙醇，再將濃縮液通過大孔樹脂進(jìn)行純化、真空干燥，得到羅布麻葉總多酚，其含量達(dá)到45-48%。通過本發(fā)明所述方法獲得的羅布麻葉總多酚經(jīng)初步的活性篩選試驗證明:羅布麻葉總多酚具有蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPlB)抑制劑作用，可用于治療糖尿病的藥物或保健品的用途。
[0011]本發(fā)明所述的一種羅布麻葉總多酚的制備方法，按下列步驟進(jìn)行:
[0012]a.取羅布麻干燥葉，用質(zhì)量體積比10-30倍量的濃度為30 — 70%乙醇采用水浴加熱提取，水浴溫度為40-80°C，提取1-3次，每次提取時間l_3h，收集提取液，減壓回收乙醇；
[0013]b.將步驟a提取液濃縮至總多酚濃度6.0mg/mL,再將濃縮液用大孔樹脂進(jìn)行純化，吸附流速為l_3BV/h，先用水洗除雜，水洗體積為2 - 5BV，水洗流速為2 — 5BV/h進(jìn)行脫除雜，再用濃度為30% - 70%的乙醇洗脫，乙醇洗脫量為2 - 4BV,乙醇洗脫速度為2 —4BV/h ；
[0014]c.收集步驟b的乙醇洗脫液，真空干燥，即可得到羅布麻葉總多酚含量45-48%。
[0015]步驟b中提取液濃縮至總多酹濃度6.0mg/mL采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,溫度45°C。
[0016]步驟b 中的大孔樹脂型號為 AB-8、D101、HPD-100、HPD-300、HPD-450、HPD-600 或HPD-700。
[0017]所述方法獲得的羅布麻葉總多酚在制備治療降血糖的藥物中的用途。
[0018]所述方法獲得的羅布麻葉總多酚在制備治療降血糖的保健品或食品添加劑中的用途。
[0019]本發(fā)明所述的羅布麻葉總多酚的制備方法，通過對不同型號的大孔樹脂對純化物總多酚含量的影響；大孔樹脂不同上樣液濃度對總多酚吸附率的影響；大孔樹脂不同吸附速度對純化物總多酚含量的影響；大孔樹脂最大上樣量，大孔樹脂解吸劑對純化物總多酚含量的影響；50%乙醇的動態(tài)解吸；大孔樹脂除雜水用量；大孔樹脂解吸測試如下:
[0020]10種大孔樹脂對羅布麻葉總多酚的靜態(tài)吸附與解吸試驗:
[0021]取不同型號的相當(dāng)于Ig干樹脂重量的各型號大孔樹脂，95%乙醇浸泡過夜，純水洗凈，分別加入4ImL —定質(zhì)量濃度(P J的提取液于250mL錐形瓶中，25°C震蕩(90r/min)12h，取上清液，測得總多酚質(zhì)量濃度Pe (mg/mL)，濾去提取液后樹脂經(jīng)50mL純水清洗，再加入50%乙醇50mL，于相同條件下進(jìn)行解析，解吸3h后，過濾，測定解吸液中總多酚質(zhì)量濃度為Pd (mg/mL)，分別按下式計算吸附量、解吸量、解吸率，從中篩選出性能最好的大孔樹脂進(jìn)行后續(xù)實驗，結(jié)果見圖1 ;
[0022]吸附量(mg/g干樹脂)=(P 0-p e) XV0/m
[0023]解吸量(mg/g干樹脂)=P dXVd/m
[0024]解吸率=解吸量X 100%/吸附量
[0025]其中:P C1—提取液中總多酚質(zhì)量濃度(mg/mL)，Vtl—提取液體積(mL)，Vd—解吸液體積(mL), m一干樹脂質(zhì)量(g);
[0026]結(jié)果顯示(圖1)，10種大孔樹脂中，對羅布麻總多酚吸附量較高的是HPD-300、HPD-100和AB-8，但HPD-450的解吸量最大。綜合考慮，最后選擇吸附量最大，解吸量較好的HPD-300大孔樹脂。
[0027]上樣液濃度的篩選試驗: [0028]取13.4g (相當(dāng)于4g干樹脂)HPD-300大孔樹脂，95%乙醇浸泡過夜，裝柱，純水洗凈。將總多酚含量為12.36mg/mL的羅布麻葉總多酚提取液90ml，分別加水0、40ml，70ml、140ml 水稀釋(含量分別為 12.4mg/mL、8.5mg/mL、6.0mg/mL>4.0mg/mL),以 2BV/h 的流速進(jìn)行吸附，用純水洗樹脂至流出液無色，收集流出液，分別測定流出液中總多酚含量，計算不同上樣液濃度下HPD-300樹脂的吸附量。
[0029]如結(jié)果顯示(圖2)，總多酚上樣量相同，濃度不同的情況下，上樣液濃度約為6.0mg/mL，吸附量達(dá)到最大，上樣液濃度為4.0mg/mL時，其吸附量反而降低。因此，選擇濃度6.0mg/mL為最佳上樣液濃度。
[0030]吸附速率的篩選:
[0031]取13.4g(相當(dāng)于4g干樹脂)HPD_300大孔樹脂，95%乙醇浸泡過夜，裝柱，純水洗凈。取羅布麻葉提取液140ml (濃度為6.0mg/mL)4份，分別以lBV/h、2BV/h、3BV/h和4BV/h的流速進(jìn)行吸附，用純水洗樹脂至流出液無色，收集流出液，分別測定流出液中總多酚含量，計算不同上樣液濃度下HPD-300樹脂的吸附量。
[0032]結(jié)果顯示(圖3)，上樣液流速從I至4BV/h，總多酚吸附量隨著上樣液流速的增加而減小，吸附速率為lBV/h時，總多酚吸附量最大，但考慮到工作效率，則選擇2BV/為最佳上樣流速。
[0033]泄露曲線考察試驗:
[0034]取13.4(相當(dāng)于4g干樹脂)HPD-300大孔樹脂，95%乙醇浸泡過夜，裝柱，純水洗凈。取羅布麻葉提取液(總多酚濃度為6.0mg/mL)，上HPD-300大孔樹脂柱，以2BV/h流速進(jìn)行吸附后，按照每次0.5BV收集殘液，測定其總多酚含量，結(jié)果見圖4:
[0035]從圖4泄露曲線來看，上樣量從8BV開始，總多酚泄露量增加明顯，到9.5 一10.5BV后趨于動態(tài)吸附平衡，10.5BV后泄露量又開始增加，確定上樣量為8BV時，樹脂柱達(dá)到吸附飽和。
[0036]解吸劑的篩選試驗:
[0037]取13.4g(相當(dāng)于4g干樹脂)HPD-300大孔樹脂，95%乙醇浸泡過夜，裝柱，純水洗凈。取羅布麻提取液140mL (總多酚濃度為6.0mg/mL), 5份，分別上HPD-300大孔樹脂柱，以2BV/h流速進(jìn)行吸附后，用純水洗樹脂至洗脫液無色，再分別用體積分?jǐn)?shù)10%、30%、50%、70%和90%的乙醇溶液洗脫，流速為2BV/h，用量為6BV，收集解吸液，分別測定其總多酚含量，結(jié)果如圖5:
[0038]從圖5結(jié)果可以看出，總多酚解吸率與洗脫劑濃度的關(guān)系，用70%乙醇洗脫時，解吸率達(dá)到最大。70%乙醇與50%乙醇洗脫，解吸率相差很小，考慮到生產(chǎn)成本，則選擇50%乙醇為洗脫劑。
[0039]解吸劑用量體積的篩選試驗:
[0040]取13.4g (相當(dāng)于4g干樹脂)HPD-300大孔樹脂，95%乙醇浸泡過夜，裝柱，純水洗凈。取羅布麻葉提取液8BV(濃度為6.0mg/mL),上HPD-300大孔樹脂柱，以lBV/h流速進(jìn)行吸附后，用純水洗樹脂洗至流出液幾近無色，以體積分?jǐn)?shù)50%的乙醇溶液洗脫，按照每次
0.5BV收集解吸液，測定其總多酚含量，結(jié)果見圖6:
[0041]洗脫劑用量達(dá)到3BV時，洗脫下來的總多酚含量已經(jīng)很少，繼續(xù)增加洗脫劑的用量，趨勢基本上穩(wěn)定，由此確定洗脫劑的用量為3BV柱體積。
[0042]除雜水用量的篩選試驗:
[0043]取13.4g (相當(dāng)于4g干樹脂)HPD-300大孔樹脂，95%乙醇浸泡過夜，裝柱，純水洗凈。取羅布麻葉提取液8BV (濃度為6.0mg/mL),上HPD-300大孔樹脂柱，以2BV/h流速進(jìn)行吸附后，用純水洗樹脂除雜，按照每次IBV收集流出液，測定其總多酚含量，結(jié)果見圖7:
[0044]圖7可以看出，用水量達(dá)到5BV時，流出液中總多酚的含量明顯減少，且流出液接近無色，因此，除雜用水量選擇5BV合適。
[0045]本發(fā)明所述的羅布麻葉總多酚的制備方法及用途，具有以下優(yōu)點:
[0046]本發(fā)明所述的整個實驗方法中，以食用乙醇和水作為溶劑，價格低廉、無毒，乙醇可回收再利用；采用的大孔樹脂為目前國內(nèi)醫(yī)藥行業(yè)常用的大孔樹脂，安全性較高，價格較低，且可重復(fù)利用。通過本發(fā)明所述方法獲得的羅布麻葉總多酚用Folin-Ciocalteu比色法測定總多酚含量，含量可達(dá)到45-48%。通過體外活性實驗測定，具有良好的降血糖活性?！緦＠綀D】
【附圖說明】:
[0047]圖1為本發(fā)明10種不同型號大孔樹脂對純化物總多酚吸附量和解吸量的影響圖，其中一□一為吸附率，一顯一為解析率；
[0048]圖2為本發(fā)明使用HPD-300大孔樹脂，不同濃度上樣液對純化物總多酚含量的影響圖；
[0049]圖3為本發(fā)明使用HPD-300大孔樹脂，不同吸附速度對純化物總多酚含量的影響圖；
[0050]圖4為本發(fā)明使用HPD-300大孔樹脂，吸附泄露曲線圖；
[0051]圖5為本發(fā)明使用HPD-300大孔樹脂，不同濃度解吸劑對純化物總多酚含量的影響圖；
[0052]圖6為本發(fā)明使用HPD-300大孔樹脂，50%乙醇的動態(tài)解吸曲線圖；[0053]圖7為本發(fā)明使用HPD-300大孔樹脂，水洗除雜用量圖。
【具體實施方式】:
[0054]本發(fā)明將結(jié)合具體實施例作進(jìn)一步說明，但不限于本實施例范圍；
[0055]實施例1.[0056]a、取羅布麻干燥葉25g，用質(zhì)量體積比10倍量的濃度為50%乙醇采用水浴加熱回流，水浴溫度為70°C，提取3次，時間2h，收集提取液，減壓回收乙醇；
[0057]b、采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,溫度45°C,將步驟a提取液濃縮至總多酹濃度6.0mg/mL,再將濃縮液用型號為HPD-300大孔樹脂進(jìn)行純化，上樣液吸附速率為lBV/h，然后水洗，水洗脫體積為4BV，水洗流速為3BV/h，再用濃度為50%乙醇洗脫，乙醇洗脫量為4BV，乙醇洗脫速度為2BV/h ；
[0058]C、收集步驟b的乙醇洗脫液，真空干燥，即可得到羅布麻葉總多酚含量為48%產(chǎn)品O
[0059]實施例2.[0060]a、取羅布麻干燥葉25g，用質(zhì)量體積比20倍量的濃度為40%乙醇采用水浴加熱回流，水浴溫度為60°C，提取2次，時間3h，收集提取液，減壓回收乙醇；
[0061]b、采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,溫度45°C將步驟a提取液濃縮至質(zhì)量濃度6.0mg/mL,再將濃縮液用型號為HPD-100大孔樹脂進(jìn)行純化，上樣液吸附速率為2BV/h，然后水洗，水洗脫體積為4BV，水洗流速為4BV/h，再用濃度為30%乙醇洗脫，乙醇洗脫量為3BV，乙醇洗脫速度為3BV/h ；
[0062]C、收集步驟b的乙醇洗脫液，真空干燥，即可得到羅布麻葉總多酚46%產(chǎn)品。
[0063]實施例3.[0064]a.取羅布麻干燥葉25g，用質(zhì)量體積比25倍量的濃度為30%乙醇采用水浴加熱回流，水浴溫度為50°C，提取3次，時間2h，收集提取液，減壓回收乙醇；
[0065]b.采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,溫度45°C將步驟a提取液濃縮至質(zhì)量濃度6.0mg/mL,再將濃縮液用型號為HPD-450大孔樹脂進(jìn)行純化，上樣液吸附速率為lBV/h，然后水洗，水洗脫體積為3BV，水洗流速為2BV/h，再用濃度為40%乙醇洗脫，乙醇洗脫量為4BV，乙醇洗脫速度為2BV/h ；
[0066]c.收集步驟b的乙醇洗脫液，真空干燥，即可得到羅布麻葉總多酚含量為47%產(chǎn)品O
[0067]實施例4.[0068]a.取羅布麻干燥葉25g，用質(zhì)量體積比15倍量的濃度為60%乙醇采用水浴加熱回流，水浴溫度為40°C，提取I次，時間3h，收集提取液，減壓回收乙醇；
[0069]b.采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,溫度45°C將步驟a提取液濃縮至質(zhì)量濃度6.0mg/mL,再將濃縮液用型號為HPD-600大孔樹脂進(jìn)行純化，上樣液吸附速率為3BV/h，然后水洗，水洗脫體積為2BV，水洗流速為5BV/h，再用濃度為40%乙醇洗脫，乙醇洗脫量為2BV，乙醇洗脫速度為3BV/h ；
[0070]c.收集步驟b的乙醇洗脫液，真空干燥，即可得到羅布麻總多酚含量為45%產(chǎn)品。
[0071]實施例5.[0072]a.取羅布麻干燥葉25g，用質(zhì)量體積比10倍量的濃度為50%乙醇采用水浴加熱回流，水浴溫度為80°C，提取2次，時間2h，收集提取液，減壓回收乙醇；
[0073]b.采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，溫度45°C將步驟a提取液濃縮至質(zhì)量濃度6.0mg/mL，再將濃縮液用型號為HPD-700大孔樹脂進(jìn)行純化，上樣液吸附速率為3BV/h，然后水洗，水洗脫體積為4BV，水洗流速為3BV/h，再用濃度為50%乙醇洗脫，乙醇洗脫量為4BV，乙醇洗脫速度為4BV/h ； [0074]c.收集步驟b的乙醇洗脫液，真空干燥，即可得到羅布麻總多酚含量為45%產(chǎn)品。
[0075]實施例6.[0076]a.取羅布麻干燥葉25g，用質(zhì)量體積比30倍量的濃度為70%乙醇采用水浴加熱回流，水浴溫度為70°C，提取3次，時間2h，收集提取液，減壓回收乙醇；
[0077]b.采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,溫度45°C將步驟a提取液濃縮至質(zhì)量濃度6.0mg/mL,再將濃縮液用大孔樹脂HPD-600進(jìn)行純化，上樣液吸附速率為lBV/h，然后水洗，水洗脫體積為5BV，水洗流速為4BV/h，再用濃度為70%乙醇洗脫，乙醇洗脫量為3BV，乙醇洗脫速度為2BV/h ；
[0078]c.收集步驟b的乙醇洗脫液，真空干燥，即可得到羅布麻葉總多酚含量為47%產(chǎn)品O
[0079]實施例7.[0080]a.取羅布麻干燥葉25g，用質(zhì)量體積比20倍量的60%乙醇采用水浴加熱回流，水浴溫度為60°C，提取I次，時間3h，收集提取液，減壓回收乙醇；
[0081]b.采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,溫度45°C將步驟a提取液濃縮至質(zhì)量濃度6.0mg/mL,再將濃縮液用型號為AB-8大孔樹脂進(jìn)行純化，上樣液吸附速率為2BV/h，然后水洗，水洗脫體積為3BV，水洗流速為3BV/h，再用濃度為60%乙醇洗脫，乙醇洗脫量為3BV，乙醇洗脫速度為3BV/h ；
[0082]c.收集步驟b的乙醇洗脫液，真空干燥，即可得到羅布麻葉總多酚含量為46%產(chǎn)品O
[0083]實施例8.[0084]a.取羅布麻干燥葉25g，用質(zhì)量體積比15倍量的50%乙醇采用水浴加熱回流，水浴溫度為60°C，提取2次，時間3h，收集提取液，減壓回收乙醇；
[0085]b.采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,溫度45°C將步驟a提取液濃縮至質(zhì)量濃度6.0mg/mL,再將濃縮液用型號為DlOl大孔樹脂進(jìn)行純化，上樣液吸附速率為2BV/h，然后水洗，水洗脫體積為4BV，水洗流速為3BV/h，再用濃度為60%乙醇洗脫，乙醇洗脫量為4BV，乙醇洗脫速度為2BV/h ；
[0086]c.收集步驟b的乙醇洗脫液，真空干燥，即可得到羅布麻葉總多酚含量為45%產(chǎn)品O
[0087]實施例9.[0088]羅布麻葉總多酚不同洗脫物降血糖體外篩選一蛋白絡(luò)氨酸磷酸酶IB(PTPlB)抑制實驗:
[0089]a.取羅布麻干燥葉，用質(zhì)量體積比15倍量的50%乙醇采用水浴加熱回流，水浴溫度為70°C，提取2次，時間3h，收集提取液，減壓回收乙醇；[0090]b.采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，溫度45°C將步驟a提取液濃縮至質(zhì)量濃度為6.0mg/mL,取5份，分別將5份濃縮液上大孔樹脂進(jìn)行純化，上樣液吸附速率為lBV/h，然后水洗，水洗脫體積為5BV，水洗流速為4BV/h，再用濃度分別為10%、30%、50%、70%、90%的乙醇溶液洗脫，洗脫劑量均為4BV，洗脫速度均為2BV/h ；
[0091]c.分別收集步驟b乙醇洗脫液，真空干燥，即分別得到組分為10%、30%、50%、70%和90%乙醇洗脫固形物。
[0092]將所得組分為10%、30%、50%、70%和90%乙醇洗脫物和粗提物進(jìn)行降糖體外篩選，以上樣品均用水溶解成 10mg/mL、5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.62mg/mL, 0.31mg/mL、0.15mg/mL、0.078mg/mL、0.039mg/mL、0.020mg/mL的溶液；陽性對照化合物為蛋白絡(luò)氨酸磷酸酶IB (PTPlB)抑制劑為3- (3，5- 二溴-4-羥基-苯甲酰基)_2_乙基-苯并呋喃_6_磺酸基-(4-(噻唑-2-胺磺酰)-苯基)-酰胺；取179 μ L PTPlB酶工作液加入96孔板，再加I μ L樣品為樣品組；取179 μ L PTPlB酶工作液加入96孔板，再加I μ L樣品為樣品組，20 μ L PBS緩沖液為樣品空白組，取179 μ L PTPlB酶工作液加入96孔板，再加I μ L水，20 μ L ρΝΡΡ為酶活組；取179 μ L PTPlB酶工作液加入96孔板，再加I μ L /K，20 μ LPBS緩沖液為酶活空白組；震勻后反應(yīng)5min。再放置5min后，加入20 μ LpNPP,震勻后室溫避光反應(yīng)30min ;以酶標(biāo)儀405nm處檢測OD值，以不加底物為空白(用水代替)，根據(jù)下式計算抑制率，用IC5tl計算軟件得出樣品和陽性對照的IC5tl值。
[0093]抑制率(％) =[1-(樣品組OD值-空白組OD值)/ (酶活組OD值-酶活空白組)]X 100% ；
[0094]結(jié)果顯示:羅布麻葉總多酚不同洗脫物降糖體外活性篩選一蛋白絡(luò)氨酸磷酸酶IB(PTPlB)抑制實驗的IC5tl見表2: [0095]表 2
【權(quán)利要求】
1.一種羅布麻葉總多酚的制備方法，其特征在于按下列步驟進(jìn)行: a.取羅布麻干燥葉，用質(zhì)量體積比10-30倍量的濃度為30— 70%乙醇米用水浴加熱提取，水浴溫度為40-80°C，提取1-3次，每次提取時間l_3h，收集提取液，減壓回收乙醇； b.將步驟a提取液濃縮至總多酚濃度6.0mg/mL,再將濃縮液用大孔樹脂進(jìn)行純化，吸附流速為l_3BV/h，先用水洗除雜，水洗體積為2 - 5BV,水洗流速為2 — 5BV/h進(jìn)行脫除雜，再用濃度為30% - 70%的乙醇洗脫，乙醇洗脫量為2 - 4BV,乙醇洗脫速度為2 — 4BV/h ； c.收集步驟b的乙醇洗脫液，真空干燥，即可得到羅布麻葉總多酚含量45-48%。
2. 如權(quán)利要求1中所述的方法，其特征在于步驟b中提取液濃縮至總多酚濃度6.0mg/mL采用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，溫度45 °C。
3.如權(quán)利要求1中所述的方法，其特征在于步驟b中的大孔樹脂型號為AB-8、DlOUHPD-100、HPD-300、HPD-450、HPD-600 或 HPD-700。
4.如權(quán)利要求1中所述方法獲得的羅布麻葉總多酚在制備治療降血糖的藥物中的用途。
5.如權(quán)利要求1中所述方法獲得的羅布麻葉總多酚在制備治療降血糖的保健品或食品添加劑的用途。
【文檔編號】A61K36/24GK103520233SQ201310509440
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年10月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月24日
【發(fā)明者】阿吉艾克拜爾·艾薩, 石麗娟, 阿布力米提·伊力, 賀飛 申請人:中國科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所