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一種腦蛋白水解物制備方法

文檔序號:1262821閱讀:517來源:國知局
一種腦蛋白水解物制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術領域】,本發(fā)明提供了一種腦蛋白水解物的制備方法,包括原料處理、木瓜蛋白酶水解、復合酶水解、調(diào)節(jié)pH、滅菌及納濾的步驟。本發(fā)明所述制備方法簡單,易于工業(yè)化生產(chǎn);由該方法制備腦蛋白粉末肽含量高,活力高。
【專利說明】一種腦蛋白水解物制備方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術領域】,具體涉及一種腦蛋白水解物的制備方法。

【背景技術】
[0002] 腦蛋白水解物類藥物是近年應用最多生化藥物之一。在國內(nèi)外相關研究領域及市 場上占有重要地位。腦蛋白水解物作為健康、新鮮動物大腦組織經(jīng)多酶酶解提取的一種活 性腦多肽類物質,含有多種人腦必須氨基酸及腦磷脂、卵磷脂、肽類神經(jīng)生長因子等重要元 素,能以多種方式作用于中樞神經(jīng),調(diào)節(jié)和改善神經(jīng)元的代謝,促進突觸的形成,誘導神經(jīng) 元的分化,并進一步保護神經(jīng)細胞免受各種缺血和神經(jīng)毒素的損害。它可以通過血腦屏障, 促進腦內(nèi)蛋白質的合成,影響呼吸鏈,具有抗缺氧的保護能力,改善腦內(nèi)能量代謝,激活腺 苷酸環(huán)化酶催化其他激素系統(tǒng),提供神經(jīng)遞質、肽類激素及輔酶前體。目前,臨床上主要采 用腦蛋白水解物制成注射劑,用于治療癡呆和腦功能障礙、腦發(fā)育不全、腦萎縮、神經(jīng)衰弱、 腦外傷綜合癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染、腦膜炎、老年性癡呆、抑郁癥、精神病或腦血管代謝失調(diào) 等多種疾病,同時能有效增強學習記憶能力
[0003] CN200410022091. 5公開了一種腦蛋白水解物的制備方法,該發(fā)明通過先后使用胃 蛋白酶、胰蛋白酶進行酶解的方法制備腦蛋白水解物,該方法工序復雜,且要調(diào)節(jié)酸堿性, 可能出現(xiàn)蛋白質變性等問題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 基于上述原因, 申請人:在研究過程中,得到一種的方法:該方法采用木瓜蛋白酶水 解、復合酶水解、調(diào)節(jié)PH值和納濾相結合的步驟,特別是使用一定比例的復合酶,得到腦蛋 白水解物,該腦蛋白水解物,具有肽和總氮含量高,活力數(shù)值高,藥理活性更強的優(yōu)點。
[0005] 具體而言,本發(fā)明提供了:
[0006] -種腦蛋白水解物的制備方法,該方法包括以下步驟:
[0007] a)原料處理:將新鮮或冷凍保存的豬腦去除表面的包膜及血管,切成小塊后用 0. 5?5%氫氧化鈉溶液浸泡12?48小時,取出洗凈,浙干水分,備用;
[0008] b)酶水解:在盛放豬腦的反應釜中加水,按5000-10000U/g底物的比例加入自植 物提取的木瓜蛋白酶,攪拌,酶解4-6小時;
[0009] c)復合酶水解:將步驟b)所得產(chǎn)物中加入復合酶,攪拌,酶解5-10小時;
[0010] d)滅菌:將步驟C)所得產(chǎn)物調(diào)節(jié)pH為6-7后,升溫至80-85 °C,滅酶8_12min, 冷卻至室溫后加入活性炭,攪拌2-5小時后過濾,得濾液;
[0011] e)濃縮:將步驟d)所得濾液用100?IOOODa的納濾膜進行超濾,收集截留液;
[0012] f)將收集的截留液進行噴霧干燥,得到所述腦蛋白水解物。
[0013] 所述復合酶為來自解淀粉芽孢桿菌的細菌蛋白酶、來自地衣芽孢桿菌的細菌蛋白 酶組成的混合物。
[0014] 所述來自解淀粉芽孢桿菌的細菌蛋白酶的酶活力為40萬U/克。
[0015] 所述來自地衣芽孢桿菌的細菌蛋白酶的酶活力為10萬u/克。
[0016] 所述復合酶中自解淀粉芽孢桿菌的細菌蛋白酶、來自地衣芽孢桿菌的細菌蛋白酶 重量比為(0.5?3) :(1?5)。
[0017] 所述復合酶中自解淀粉芽孢桿菌的細菌蛋白酶、來自地衣芽孢桿菌的細菌蛋白酶 重量比優(yōu)選1 :2。
[0018] 上述所述的制備方法得到的腦蛋白水解物為原料制備成口服制劑或注射制劑。
[0019] 本發(fā)明所述的來自解淀粉芽孢桿菌的細菌蛋白酶、來自地衣芽孢桿菌的細菌蛋白 酶、木瓜蛋白酶均購自上海寶豐生化有限公司。
[0020] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比具有以下優(yōu)點和積極效果:
[0021] 1、采用木瓜蛋白酶和復合酶的兩步酶解的工藝保證最大程度上實現(xiàn)原料的水 解;
[0022] 2、用活性炭脫臭,充分利用活性炭的吸附作用和助濾作用,提高了產(chǎn)品含量,同時 縮短了工藝時間;
[0023] 3、采用納濾膜進行膜分離,有效去除了小分子雜質,同時還對料液進行了濃縮,大 幅降低了噴霧干燥過程的能耗;
[0024] 4、本發(fā)明所述制備方法簡單,易于工業(yè)化生產(chǎn);
[0025] 5、由該方法制備腦蛋白粉末肽含量高,活力高。

【具體實施方式】
[0026] 以下通過【具體實施方式】的描述對本發(fā)明作進一步說明,但這并非是對本發(fā)明的限 制,本領域技術人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想,可以做出各種修改或改進,但是只要不脫離本 發(fā)明的基本思想,均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0027] 本發(fā)明下述試驗是在多次創(chuàng)造性試驗基礎上,進行的結論性驗證試驗。
[0028] 實驗例1動物藥效學試驗
[0029] 試驗藥物:市售復方腦蛋白水解物片(購自大連貝爾藥業(yè)有限公司)、本發(fā)明實施 例5制得的樣品,以蒸餾水配成所需濃度的溶液,供口服給藥
[0030] 使用。
[0031] 1)對小鼠低壓缺氧狀態(tài)的影響
[0032] 取18_21g小鼠150只,雌雄各半,隨機分為3組,按表1所示的藥物劑量灌胃給 藥,30分鐘后,將三組運行同時投入真空倉內(nèi),密閉,減壓抽真空,當對照組小鼠死亡達半數(shù) 以上時,通氣后繼續(xù)觀察30分鐘,記錄各組動物的死亡數(shù)。
[0033] 結果見表1。
[0034] 表1小鼠耐缺氧試驗研究
[0035]

【權利要求】
1. 一種腦蛋白水解物的制備方法,其特征在于該方法包括以下步驟: a) 原料處理:將新鮮或冷凍保存的豬腦去除表面的包膜及血管,切成小塊后用0. 5? 5%氫氧化鈉溶液浸泡12?48小時,取出洗凈,浙干水分,備用; b) 酶水解:在盛放豬腦的反應釜中加水,按5000-10000U/g底物的比例加入自植物提 取的木瓜蛋白酶,攪拌,酶解4-6小時; c) 復合酶水解:將木瓜蛋白酶水解產(chǎn)物中加入復合酶,攪拌,酶解5-10小時; d) 滅菌:將復合酶水解得到產(chǎn)物調(diào)節(jié)pH為6-7后,升溫至80-85 °C,滅酶8_12min, 冷卻至室溫后加入活性炭,攪拌2-5小時后過濾,得濾液; e) 濃縮:將濾液用100?lOOODa的納濾膜進行超濾,收集截留液; f) 將收集的截留液進行噴霧干燥,得到所述腦蛋白水解物。
2. 根據(jù)權利要求1所述的一種腦蛋白水解物的制備方法,其中所述復合酶為來自解淀 粉芽孢桿菌的細菌蛋白酶、來自地衣芽孢桿菌的細菌蛋白酶組成的混合物。
3. 根據(jù)權利要求2所述的一種腦蛋白水解物的制備方法,其中所述來自解淀粉芽孢桿 菌的細菌蛋白酶的酶活力為40萬U/克。
4. 根據(jù)權利要求2所述的一種腦蛋白水解物的制備方法,其中所述來自地衣芽孢桿菌 的細菌蛋白酶的酶活力為10萬U/克。
5. 根據(jù)權利要求2所述的一種腦蛋白水解物的制備方法,其中所述復合酶中自解淀粉 芽孢桿菌的細菌蛋白酶、來自地衣芽孢桿菌的細菌蛋白酶重量比為(0.5?3) :(1?5)。
6. 根據(jù)權利要求5所述的一種腦蛋白水解物的制備方法,其中所述復合酶中來自解淀 粉芽孢桿菌的細菌蛋白酶、來自地衣芽孢桿菌的細菌蛋白酶重量比為1 :2。
7. 根據(jù)權利要求1-6任一項所述的一種腦蛋白水解物的制備方法,制備方法得到的腦 蛋白水解物為原料制備成口服制劑或注射制劑。
【文檔編號】A61P39/00GK104511008SQ201310442849
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2013年9月26日 優(yōu)先權日:2013年9月26日
【發(fā)明者】曹捷, 高帆, 周戰(zhàn), 尚磊 申請人:西藏易明西雅醫(yī)藥科技股份有限公司
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