一種腦蛋白水解物的制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，本發(fā)明提供了一種腦蛋白水解物的制備方法，包括原料處理、前處理、復(fù)合酶水解、調(diào)節(jié)pH值、超濾及納濾的步驟。本發(fā)明所述制備方法簡(jiǎn)單，易于工業(yè)化生產(chǎn)；該方法采用一定比例的復(fù)合酶進(jìn)行水解，得到腦蛋白水解物具有肽含量高，活力高等優(yōu)點(diǎn)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種腦蛋白水解物的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種腦蛋白水解物的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 腦蛋白水解物類(lèi)藥物是近年應(yīng)用最多生化藥物之一。在國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究領(lǐng)域及市 場(chǎng)上占有重要地位。腦蛋白水解物作為健康、新鮮動(dòng)物大腦組織經(jīng)酶解提取的一種活性腦 多肽類(lèi)物質(zhì)，含有多種人腦必須氨基酸及腦磷脂、卵磷脂、肽類(lèi)神經(jīng)生長(zhǎng)因子等重要元素， 能以多種方式作用于中樞神經(jīng)，調(diào)節(jié)和改善神經(jīng)元的代謝，促進(jìn)突觸的形成，誘導(dǎo)神經(jīng)元的 分化，并進(jìn)一步保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞免受各種缺血和神經(jīng)毒素的損害。它可以通過(guò)血腦屏障，促進(jìn) 腦內(nèi)蛋白質(zhì)的合成，影響呼吸鏈，具有抗缺氧的保護(hù)能力，改善腦內(nèi)能量代謝，激活腺苷酸 環(huán)化酶催化其他激素系統(tǒng)，提供神經(jīng)遞質(zhì)、肽類(lèi)激素及輔酶前體。目前，臨床上主要采用腦 蛋白水解物制成注射劑，用于治療癡呆和腦功能障礙、腦發(fā)育不全、腦萎縮、神經(jīng)衰弱、腦外 傷綜合癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染、腦膜炎、老年性癡呆、抑郁癥、精神病或腦血管代謝失調(diào)等多 種疾病，同時(shí)能有效增強(qiáng)學(xué)習(xí)記憶能力
[0003] CN200410022091. 5公開(kāi)了一種腦蛋白水解物的制備方法，該發(fā)明通過(guò)先后使用胃 蛋白酶、胰蛋白酶進(jìn)行酶解的方法制備腦蛋白水解物，該方法工序復(fù)雜，且要調(diào)節(jié)酸堿性， 可能出現(xiàn)蛋白質(zhì)變性等問(wèn)題。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 基于上述原因， 申請(qǐng)人:在研究過(guò)程中，得到一種新的方法：該方法采用復(fù)合酶水 解、調(diào)節(jié)pH值、超濾和納濾相結(jié)合的步驟，特別是使用一定比例的復(fù)合酶，得到腦蛋白水解 物，該腦袋白水解物，具有肽和總氮含量高，活力數(shù)值高，藥理活性更強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。
[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種腦蛋白水解物的制備方法。
[0006] 具體而言，本發(fā)明提供了：
[0007] -種腦蛋白水解物的制備方法，該方法包括以下步驟：
[0008] a)原料處理：將新鮮或冷凍保存的豬腦去除表面的包膜及血管，洗凈，浙干水分， 備用；
[0009] b)前處理：將步驟a)所得的豬腦切碎后加入到2?5倍重量水中，室溫條件下勻 漿，冷凍貯藏；
[0010] c)復(fù)合酶水解：將步驟b)所得豬腦漿，加入復(fù)合酶，溫度40-50°C水解，復(fù)合酶的 重量百分比為豬腦漿的〇. 5% -3%，水解3-8小時(shí)，水解結(jié)束后于沸水中保持8-15min滅 酶，冷卻后調(diào)節(jié)pH為6-7,過(guò)濾，最后超濾膜過(guò)濾水解液去除分子量大于IOkDa的水解產(chǎn)物， 收集超濾水解液于4°C條件下儲(chǔ)存；
[0011] d)濃縮：將步驟c)所得超濾水解液用100?IOOODa的納濾膜進(jìn)行濃縮，濃縮液 凍干，即得腦蛋白粉末。
[0012] 所述復(fù)合酶由嗜熱菌蛋白酶、中性蛋白酶組成。
[0013] 所述嗜熱菌蛋白酶的酶活力為40萬(wàn)U /克。
[0014] 所述中性蛋白酶的酶活力為10萬(wàn)U /克。
[0015] 復(fù)合酶中嗜熱菌蛋白酶、中性蛋白酶重量比為（0.5?3) :(1?5)。
[0016] 作為優(yōu)選，所述復(fù)合酶中嗜熱菌蛋白酶、中性蛋白酶重量比為1 :2。
[0017] 上述所述的制備方法得到的腦蛋白水解物為原料制備成口服制劑或注射制劑。
[0018] 本發(fā)明所述的嗜熱菌蛋白酶、中性蛋白酶均購(gòu)自上海寶豐生化有限公司。
[0019] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)和積極效果：
[0020] 1、由該制備方法簡(jiǎn)單，易于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0021] 2、由該方法制備腦蛋白粉末肽含量高，活力高，藥理活性強(qiáng)。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 以下通過(guò)【具體實(shí)施方式】的描述對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但這并非是對(duì)本發(fā)明的限 制，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想，可以做出各種修改或改進(jìn)，但是只要不脫離本 發(fā)明的基本思想，均在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
[0023] 本發(fā)明下述試驗(yàn)是在多次創(chuàng)造性試驗(yàn)基礎(chǔ)上，進(jìn)行的結(jié)論性驗(yàn)證試驗(yàn)。
[0024] 實(shí)驗(yàn)例1動(dòng)物藥效學(xué)試驗(yàn)
[0025] 試驗(yàn)藥物：市售復(fù)方腦蛋白水解物片（購(gòu)自大連貝爾藥業(yè)有限公司）、本發(fā)明實(shí)施 例5制得的樣品，以蒸餾水配成所需濃度的溶液，供口服給藥使用。
[0026] 1)對(duì)小鼠低壓缺氧狀態(tài)的影響
[0027] 取18_21g小鼠150只，雌雄各半，隨機(jī)分為3組，按表1所示的藥物劑量灌胃給 藥，30分鐘后，將三組運(yùn)行同時(shí)投入真空倉(cāng)內(nèi)，密閉，減壓抽真空，當(dāng)對(duì)照組小鼠死亡達(dá)半數(shù) 以上時(shí)，通氣后繼續(xù)觀察30分鐘，記錄各組動(dòng)物的死亡數(shù)。
[0028] 結(jié)果見(jiàn)表1。
[0029] 表1小鼠耐缺氣試駘研究
【權(quán)利要求】
1. 一種腦蛋白水解物的制備方法，其特征在于：該方法包括以下步驟： a) 原料處理：將新鮮或冷凍保存的豬腦去除表面的包膜及血管，洗凈，浙干水分，備 用； b) 前處理：將所得的豬腦切碎后加入到2?5倍重量水中，室溫條件下勻漿，冷凍貯 藏； c) 復(fù)合酶水解：將冷凍貯藏所得豬腦漿，加入復(fù)合酶，溫度40-50°C水解，復(fù)合酶的重 量百分比為豬腦漿的0. 5% -3%，水解3-8小時(shí)，水解結(jié)束后于沸水中保持8-15min滅酶， 冷卻后調(diào)節(jié)pH為6-7,過(guò)濾，超濾膜過(guò)濾水解液去除分子量大于10kDa的水解產(chǎn)物，收集超 濾水解液于4°C條件下儲(chǔ)存； d) 濃縮：將超濾水解液用100?lOOODa的納濾膜進(jìn)行濃縮，濃縮液凍干，即得腦蛋白 提取物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腦蛋白水解物的制備方法，其中所述復(fù)合酶由嗜熱菌蛋 白酶、中性蛋白酶組成。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種腦蛋白水解物的制備方法，其中所述嗜熱菌蛋白酶的酶 活力為40萬(wàn)U/克。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種腦蛋白水解物的制備方法，其中所述中性蛋白酶的酶活 力為10萬(wàn)U/克。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種腦蛋白水解物的制備方法，其中所述復(fù)合酶中嗜熱菌蛋 白酶、中性蛋白酶重量比為（0. 5?3) : (1?5)。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種腦蛋白水解物的制備方法，其中所述復(fù)合酶中嗜熱菌蛋 白酶、中性蛋白酶重量比為1 :2。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的一種腦蛋白水解物的制備方法，其中制備方法得到 的腦蛋白水解物為原料制備成口服制劑或注射制劑。
【文檔編號(hào)】A61P39/00GK104511007SQ201310442847
【公開(kāi)日】2015年4月15日 申請(qǐng)日期:2013年9月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月26日
【發(fā)明者】曹捷, 高帆, 周戰(zhàn), 尚磊 申請(qǐng)人:西藏易明西雅醫(yī)藥科技股份有限公司