聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物及其制備方法和用途
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物及其制備方法和用途，其特點(diǎn)是用聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物的雙親性形成膠束作為基因、藥物和造影劑的載體，進(jìn)一步構(gòu)建多功能納米復(fù)合粒子。該三嵌段聚合物材料生物相容性好，形成的納米膠束中間層可以交聯(lián)，構(gòu)建的納米復(fù)合粒子結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、能進(jìn)一步功能化修飾。構(gòu)建的多功能納米復(fù)合粒子用于動(dòng)脈粥樣硬化斑塊顯影，腫瘤顯影或藥物控釋。
【專(zhuān)利說(shuō)明】聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物及其制備方法和用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯(Polyethylene glycol-Polyaminoacid-Polyester)三嵌段高分子聚合物及其制備方法和用途，屬于生物醫(yī)藥材料、藥物遞送以及分子影像學(xué)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]目前多功能復(fù)合納米粒子(如光響應(yīng)納米粒子、磁響應(yīng)納米粒子和電響應(yīng)納米粒子)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于分子影像、藥物傳輸、基因轉(zhuǎn)染、細(xì)胞分選等生物學(xué)領(lǐng)域。用于構(gòu)建多功能復(fù)合納米粒子的材料有很多，如樹(shù)狀大分子、無(wú)機(jī)納米顆粒、雙親性嵌段聚合物。其中雙親性嵌段聚合物運(yùn)用最廣泛(Adv Drug Deliv Rev 1996 ; 21 (2): 107-16)，大部分為兩嵌段聚合物，如聚乙二醇-聚己內(nèi)酯(J Control Release 2004;98 (3):415-26)、聚乙二醇-聚丙交酯(Langmuir 2003; 19:8428-8435)等。雙親性嵌段聚合物在高于臨界膠束濃度的時(shí)候，在水溶液中通過(guò)親疏水作用形成納米膠束，膠束的疏水核內(nèi)包裹疏水性藥物、功能性無(wú)機(jī)納米顆粒(Science 2002; 298 (5599): 1759-62)，親水性外殼可復(fù)合基因(Adv Drug Deliv Rev 2002; 54 (2): 203-22)，通過(guò)共價(jià)鍵引入功能性小分子(如小分子磁共振造影劑、突光分子、帶有放射性標(biāo)記的小分子或活性多肽)(Angew Chem Int Ed Engl2004; 43 (46):6323-7)。增強(qiáng)納米膠束的穩(wěn)定性，降低雙親性嵌段聚合物的臨界膠束濃度可提高其納米復(fù)合粒子的藥物傳輸、基因轉(zhuǎn)染效率，有助于該類(lèi)材料的生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用。因此成為雙親性嵌段聚合物的研究熱點(diǎn)。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003]本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供一種聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物及其制備方法和用途，其特點(diǎn)是用此類(lèi)雙親性聚合物形成膠束作為基因、藥物和造影劑的載體，進(jìn)一步構(gòu)建多功能納米復(fù)合粒子。該多功能納米復(fù)合粒子應(yīng)用于動(dòng)脈粥樣硬化斑塊顯影，用于腫瘤顯影，藥物控釋。
[0004]本發(fā)明的目的由以下技術(shù)措施實(shí)現(xiàn)，其中所述原料份數(shù)除特殊說(shuō)明外，均為摩爾份數(shù)。
[0005]聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為:
[0006]
#今 R“KViV4、okH
R3 O
[0007]其中，
[0008]R1 = -CH3> -CH2 (CH2) 0 ~5C00H、-CH2 (CH2) 0 ~50H、-CH2 (CH2) 0 ~5NH2、-CH2 (CH2) 0 ~5sh、-CH2 (CH2) 0 ~5n3、-CH2 (CH2) 0 ~5C E CH;[0009]R2 = -CoNHCH2CHy-(CH2)1^p-COCH2CH2CONHCH2CH2;
[0010]R3 = -CH2COOH, -CH2CH2COOH, -CH2CH2CH2CH2NH2;
[0011]R4 = -(CH2) -CH (CH3)
[0012]m、n和q相互獨(dú)立地是10~500。
[0013]聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物的制備方法包括以下步驟:
[0014](I)聚乙二醇-聚氨基酸兩嵌段聚合物的制備
[0015]在惰性氣體保護(hù)下，稱(chēng)取0.1摩爾份干燥的一端為氨基的聚乙二醇于反應(yīng)瓶中，用5-100份無(wú)水二氯甲烷溶解，再稱(chēng)取0.5-10摩爾份的氨基酸-N-環(huán)碳酸酐，用無(wú)水N，N- 二甲基甲酰胺0.5-10份溶解后一并加入上述反應(yīng)瓶中，于溫度20-50°C反應(yīng)12-72 h，蒸發(fā)除溶劑，用5-30份氯仿溶解產(chǎn)物，在50-300份冰乙醚中沉淀，收集沉淀，再溶解于5-30份氯仿中，在50-300份冰乙醚中沉淀，重復(fù)三次，獲得聚乙二醇-聚氨基酸兩嵌段聚合物；
[0016]其中，惰性氣體為氬氣、氮?dú)饣蚝庵械娜我环N；氨基酸為L(zhǎng)-谷氨酸-Y -芐酯、L-天門(mén)冬氨酸-β -芐酯、O-芐基-L-酪氨酸或N-芐氧羰基-L-賴(lài)氨酸中的任一種；
[0017](2)聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物的制備
[0018]反應(yīng)瓶中稱(chēng)取0.1摩爾份的聚乙二醇-聚氨基酸兩嵌段聚合物和0.5-10摩爾份的聚酯單體，在惰性氣體保護(hù)下，加入5-50份的無(wú)水二氧六環(huán)、甲苯或芐醚溶解，再加入
0.0001-0.1摩爾份的辛酸亞錫，然后將反應(yīng)瓶置于溫度105-160°c反應(yīng)12_72h，蒸發(fā)除溶劑，用5-30份氯仿溶解產(chǎn)物，在5 0-300份冰乙醚中沉淀，收集沉淀，再溶解于5-30份氯仿中，在50-300份冰乙醚中沉淀，重復(fù)三次，獲得聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物；
[0019]其中，惰性氣體為氬氣、氮?dú)饣蚝庵械娜我环N；聚酯單體為己內(nèi)酯或丙交酯；
[0020](3)聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物去側(cè)基保護(hù)
[0021]將0.1摩爾份的聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物加入高壓反應(yīng)釜中，用100-400份四氫呋喃溶解后加入0.8 %的鈀碳，通入2-10個(gè)大氣壓的氫氣，于溫度30_50°C反應(yīng)24-72 h，過(guò)濾除鈀碳，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除四氫呋喃，獲得去側(cè)基聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物。
[0022]所述，聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物的用途之一
[0023](I)聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物納米膠束的制備
[0024]將聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物溶解在有機(jī)溶劑中，配置濃度為5-20mg/ml的溶液，取0.5-10份溶液，在溫度25_30°C，超聲功率130W，振幅65%，滴入到5-100份的水相溶劑中，其中水相溶劑為純水或pH值為4-12的磷酸緩沖溶液，震蕩搖勻；通過(guò)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方法除去水相溶液中殘留的有機(jī)溶劑，制得聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物納米膠束；
[0025]其中，有機(jī)溶劑為氯仿、四氫呋喃或乙醇中的任一種；
[0026](2)聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物膠束裝載納米晶體
[0027]a、將濃度為2-10 mg/ml單一分散在有機(jī)相的納米晶體加入試劑瓶中，通過(guò)真空干燥或使用惰性氣體吹干的方式去除有機(jī)溶劑，然后稱(chēng)取納米晶體0.001-0.5份；
[0028]b、將0.005-1份的三嵌段聚合物溶解在0.5-10份有機(jī)相溶劑中溶解后加入到上述納米晶體中，震蕩混合均勻；將上述有機(jī)溶液在溫度25-30°C，超聲功率130W，振幅65%，加入到5-100份水相溶劑中，其中水相溶劑為純水或pH值為4-12的磷酸緩沖溶液，震蕩搖勻；通過(guò)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方法除去上述水相溶液中殘留的有機(jī)溶劑，制得三嵌段聚合物包裹納米晶體的納米膠束；
[0029]其中，有機(jī)相溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃或乙醇中的任一種；納米晶體為Fe3O4納米晶體、Y -Fe2O3納米晶體、ZnFe2O4納米晶體、MnFe2O4納米晶體、CoFe2O4納米晶體、FePt納米晶體、Au納米晶體、Ag納米晶體、CdSe納米晶體、CdZnS納米晶體、CdSe/ZnS納米晶體或CdSe/CdS納米晶體中的任一種；
[0030](3)聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物膠束裝載疏水性藥物
[0031]稱(chēng)取疏水性藥物0.001-0.5份和三嵌段聚合物0.005-1份，混合溶解到0.5-10份有機(jī)相溶劑中，混合均勻后，在溫度25-30°C，超聲功率130W，振幅65%，加入到5-100份水相溶劑中，其中水相溶劑為純水或PH值為4-12的磷酸緩沖溶液，震蕩搖勻；通過(guò)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方法除去上述水相溶液中殘留的有機(jī)溶劑，制得三嵌段聚合物包裹藥物的納米膠束；
[0032]其中，有機(jī)相溶劑為三氯甲烷、四氫呋喃或乙醇中的任一種；疏水性藥物為阿霉素、紫杉醇或順鉬中的任一種；
[0033]所述聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物的用途之二
[0034]I)聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物膠束的膠束內(nèi)交聯(lián)
[0035]將濃度為1-10 mg/ml的聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯類(lèi)三嵌段聚合物膠束溶液5份，加入0.005-0.05份的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽，室溫反應(yīng)10-30min，再加入0.001-0.01份的交聯(lián)劑攪拌過(guò)夜，透析12_24h制得氨基酸層交聯(lián)的聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯類(lèi)三嵌段聚合物膠束；
[0036]2)以聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物膠束為平臺(tái)，構(gòu)建多功能納米復(fù)合粒子
[0037](I)三嵌段聚合物制備的膠束粒子表面通過(guò)化學(xué)共價(jià)鍵修飾引入小分子配體，進(jìn)
一步與金屬離子螯合用于磁共振或核素顯影；
[0038]其中，化學(xué)共價(jià)鍵修飾是通過(guò)羧基與氨基的縮合反應(yīng)，羧基與羥基的酯化反應(yīng)，炔基與疊氮的點(diǎn)擊反應(yīng)，鹵代物與氨基的反應(yīng)，氨基與醛基的反應(yīng)；
[0039](2)三嵌段聚合物制備的膠束粒子表面通過(guò)化學(xué)修飾引入熒光分子用于熒光標(biāo)記；
[0040]其中，化學(xué)修飾是通過(guò)羧基與氨基的縮合反應(yīng)，羧基與羥基的酯化反應(yīng)，炔基與疊氮的點(diǎn)擊反應(yīng)，鹵代物與氨基的反應(yīng)，氨基與醛基的反應(yīng)；
[0041 ] (3)三嵌段聚合物制備的膠束粒子表面通過(guò)化學(xué)修飾引入功能性短肽用于細(xì)胞或組織靶向；
[0042]其中，化學(xué)修飾是通過(guò)羧基與氨基的縮合反應(yīng)，羧基與羥基的酯化反應(yīng)，炔基與疊氮的點(diǎn)擊反應(yīng)，鹵代物與氨基的反應(yīng)，氨基與醛基的反應(yīng)；接入的功能性短肽為:精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸或穿膜肽。
[0043]所述交聯(lián)劑為乙二胺或1，4- 丁二胺。
[0044]所述小分子配體為I, 4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷I, 4，7，10-四乙酸、I, 4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷N，N’，N” -三乙酸或二乙基三胺五乙酸中的任一種。
[0045]所述金屬離子為:Mn、Fe、Co、N1、Cu、Ga、Tc、Gd中的+2價(jià)或+3價(jià)離子。[0046]性能測(cè)試
[0047]1.采用氫核磁譜對(duì)制備三嵌段聚合物過(guò)程中的中間產(chǎn)物及最終產(chǎn)物進(jìn)行表征；詳見(jiàn)圖1-3和圖6-8所示，根據(jù)產(chǎn)物分子中不同氫原子與譜圖中的峰面積、位移一一對(duì)應(yīng)，結(jié)果表明得到的產(chǎn)物與目標(biāo)產(chǎn)物一致。
[0048]2.采用掃描電鏡對(duì)形成的三嵌段聚合物納米膠束內(nèi)交聯(lián)進(jìn)行表征；詳見(jiàn)圖4A和圖4B所示，分別將交聯(lián)前和交聯(lián)后的膠束凍干后，在有機(jī)溶劑中溶解，通過(guò)掃描電鏡觀察，交聯(lián)前的膠束散開(kāi)，而交聯(lián)后的膠束仍保持球型狀態(tài)。
[0049]3.采用電位粒徑測(cè)試儀對(duì)裝載四氧化三鐵的三嵌段聚合物納米膠束進(jìn)行粒徑測(cè)試；詳見(jiàn)圖5所示。
[0050]4.采用電位粒徑測(cè)試儀對(duì)形成的三嵌段聚合物納米膠束進(jìn)行粒徑和電位測(cè)試；詳見(jiàn)圖9所示。
[0051]本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn):
[0052]I該三嵌段聚合物由聚氨基酸、聚酯和聚乙二醇組成，生物相容性好。
[0053]2通過(guò)兩步聚合反應(yīng)制備了聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯類(lèi)三嵌段雙親性聚合物。
[0054]3該三嵌段雙親性聚合物可對(duì)納米晶體和疏水性藥物進(jìn)行包裹，實(shí)現(xiàn)將納米晶體和疏水性藥物從有機(jī)相轉(zhuǎn)移至水相中，轉(zhuǎn)移到水相后納米晶體原有的物理學(xué)特性不發(fā)生改變，所制備的納米復(fù)合粒子粒徑可調(diào)。
[0055]4該三嵌段聚合物形成的納米膠束中間層可交聯(lián)，構(gòu)建的納米復(fù)合粒子結(jié)構(gòu)穩(wěn)定、能進(jìn)一步功能化修飾。
[0056]5該三嵌段雙親性聚合物構(gòu)建的納米復(fù)合粒子可用于復(fù)合基因，做為基因轉(zhuǎn)染載體。
[0057]6該三嵌段雙親性聚合物構(gòu)建的納米復(fù)合粒子表面可進(jìn)行多種化學(xué)基團(tuán)修飾，引入光學(xué)、磁共振或核素等影像分子，可用于標(biāo)記細(xì)胞，可用于體內(nèi)多功能顯影成像。
【專(zhuān)利附圖】
【附圖說(shuō)明】
[0058]圖1為制備端甲基醚聚乙二醇-聚-L-天冬氨酸-聚己內(nèi)酯(CH3-PEG-PAsp-PCL)中，中間產(chǎn)物端甲基醚聚乙二醇-聚-L-天門(mén)冬氨酸-β -芐酯的氫核磁譜。
[0059]圖2為制備端甲基醚聚乙二醇-聚-L-天冬氨酸-聚己內(nèi)酯(CH3-PEG-PAsp-PCL)中，中間產(chǎn)物端甲基醚聚乙二醇-聚-L-天冬氨酸-β -芐基-聚己內(nèi)酯的氫核磁譜。
[0060] 圖3為制備端甲基醚聚乙二醇-聚-L-天冬氨酸-聚己內(nèi)酯(CH3-PEG-PAsp-PCL)中，最終產(chǎn)物端甲基醚聚乙二醇-聚-L-天冬氨酸-聚己內(nèi)酯的氫核磁譜。
[0061]圖4A端甲基醚聚乙二醇-聚-L-天冬氨酸-聚己內(nèi)酯(CH3-PEG-PAsp-PCL)膠束溶解于氯仿中的掃描電鏡圖片。
[0062]圖4B端甲基醚聚乙二醇-聚-L-天冬氨酸-聚己內(nèi)酯(CH3-PEG-PAsp-PCL)膠束交聯(lián)后再溶解于氯仿中的掃描電鏡圖片。
[0063]圖5為聚乙二醇-聚-L-天冬氨酸-聚己內(nèi)酯包裹Fe304納米晶體構(gòu)建的納米復(fù)合粒子的粒度分布(動(dòng)態(tài)光散射法)。
[0064]圖6為制備端氨基聚乙二醇-聚-L-天冬氨酸-聚己內(nèi)酯(NH2-PEG-PAsp-PCL)中，中間產(chǎn)物端氮、氮二芐基聚乙二醇-聚-L-天門(mén)冬氨酸-β -芐酯的氫核磁譜。[0065]圖7為制備端氨基聚乙二醇-聚-L-天冬氨酸-聚己內(nèi)酯(NH2-PEG-PAsp-PCL)中，中間產(chǎn)物端氮、氮二芐基聚乙二醇-聚-L-天門(mén)冬氨酸-β -芐酯-聚己內(nèi)酯的氫核磁
-1'TfeP曰。
[0066]圖8為制備端氨基聚乙二醇-聚-L-天冬氨酸-聚己內(nèi)酯(NH2-PEG-PAsp-PCL)中，終產(chǎn)物端氨基聚乙二醇-聚-L-天門(mén)冬氨酸-聚己內(nèi)酯的氫核磁譜。
[0067]圖9為聚乙二醇-聚-L-天冬氨酸-聚己內(nèi)酯納米膠束的粒度分布(動(dòng)態(tài)光散射法)。
【具體實(shí)施方式】
[0068]下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行具體的描述，有必要在此指出的是本實(shí)施例只用于對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明，不能理解為對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，該領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員可以根據(jù)上述本發(fā)明的內(nèi)容做出一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整。
[0069]實(shí)施例1:端甲基醚聚乙二醇-聚-L-天冬氨酸-聚己內(nèi)酯(CH3-PEG-PAsp-PCL)的制備步驟及工藝參數(shù)
[0070]化學(xué)反應(yīng)式為:
[0071]
【權(quán)利要求】
1.一種聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物，其特征在于該三嵌段聚合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式為:
2.按照權(quán)利要求1所述，聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟，按重量計(jì)為: (1)聚乙二醇-聚氨基酸兩嵌段聚合物的制備 在惰性氣體保護(hù)下，稱(chēng)取0.1摩爾份干燥的一端為氨基的聚乙二醇于反應(yīng)瓶中，用5-100份無(wú)水二氯甲烷溶解，再稱(chēng)取0.5-10摩爾份的氨基酸-N-環(huán)碳酸酐，用無(wú)水N，N-二甲基甲酰胺0.5-10份溶解后一并加入上述反應(yīng)瓶中，于溫度20-50°C反應(yīng)12-72 h，蒸發(fā)除溶劑，用5-30份氯仿溶解產(chǎn)物，在50-300份冰乙醚中沉淀，收集沉淀，再溶解于5-30份氯仿中，在50-300份冰乙醚中沉淀，重復(fù)三次，獲得聚乙二醇-聚氨基酸兩嵌段聚合物； 其中，惰性氣體為氬氣、氮?dú)饣蚝庵械娜我环N；氨基酸為L(zhǎng)-谷氨酸-Y -芐酯、L-天門(mén)冬氨酸-β -芐酯、O-芐基-L-酪氨酸或N-芐氧羰基-L-賴(lài)氨酸中的任一種； (2)聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物的制備 反應(yīng)瓶中稱(chēng)取0.1摩爾份的聚乙二醇-聚氨基酸兩嵌段聚合物和0.5-10摩爾份的聚酯單體，在惰性氣體保護(hù)下，加入5-50份的無(wú)水二氧六環(huán)、甲苯或芐醚溶解，再加入0.0001-0.1摩爾份的辛酸亞錫，然后將反應(yīng)瓶置于溫度105-160°c反應(yīng)12_72h，蒸發(fā)除溶劑，用5-30份氯仿溶解產(chǎn)物，在50-300份冰乙醚中沉淀，收集沉淀，再溶解于5-30份氯仿中，在50-300份冰乙醚中沉淀，重復(fù)三次，獲得聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物； 其中，惰性氣體為氬氣、氮?dú)饣蚝庵械娜我环N；聚酯單體為己內(nèi)酯或丙交酯； (3)聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物去側(cè)基保護(hù) 將0.1摩爾份的聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物加入高壓反應(yīng)釜中，用100-400份四氫呋喃溶解后加入0.8 %的鈀碳，通入2-10個(gè)大氣壓的氫氣，于溫度30_50°C反應(yīng)24-72 h，過(guò)濾除鈀碳，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除四氫呋喃，獲得去側(cè)基聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物。
3.按照權(quán)利要求1所述，聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物的用途之一，其特征在于: (I)聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物納米膠束的制備 將聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物溶解在有機(jī)溶劑中，配置濃度為5-20mg/ml的溶液，取0.5-10份溶液，在溫度25-30°C，超聲功率130W，振幅65%，滴入到5-100份的水相溶劑中，其中水相溶劑為純水或PH值為4-12的磷酸緩沖溶液，震蕩搖勻；通過(guò)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方法除去水相溶液中殘留的有機(jī)溶劑，制得聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物納米膠束； 其中，有機(jī)溶劑為氯仿、四氫呋喃或乙醇中的任一種；； (2)聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物膠束裝載納米晶體 a、將濃度為2-10mg/ml單一分散在有機(jī)相的納米晶體加入試劑瓶中，通過(guò)真空干燥或使用惰性氣體吹干的方式去除有機(jī)溶劑，然后稱(chēng)取納米晶體0.001-0.5份； b、將0.005-1份的三嵌段聚合物溶解在0.5-10份有機(jī)相溶劑中溶解后加入到上述納米晶體中，震蕩混合均勻；將上述有機(jī)溶液在溫度25-30°C，超聲功率130W，振幅65%，加入到5-100份水相溶劑中，其中水相溶劑為純水或pH值為4-12的磷酸緩沖溶液，震蕩搖勻；通過(guò)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方法除去上述水相溶液中殘留的有機(jī)溶劑，制得三嵌段聚合物包裹納米晶體的納米I父束； 其中，有機(jī)相溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃或乙醇中的任一種；納米晶體為Fe3O4納米晶體、Y -Fe2O3納米晶體、ZnFe2O4納米晶體、MnFe2O4納米晶體、CoFe2O4納米晶體、FePt納米晶體、Au納米晶體、Ag納米晶體、CdSe納米晶體、CdZnS納米晶體、CdSe/ZnS納米晶體或CdSe/CdS納米晶體中的任一種； (3)聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物膠束裝載疏水性藥物 稱(chēng)取疏水性藥物0.001-0.5份和三嵌段聚合物0.005-1份，混合溶解到0.5-10份有機(jī)相溶劑中，混合均勻后，在溫度25-30°C，超聲功率130W，振幅65%，加入到5-100份水相溶劑中，其中水相溶劑為純水或PH值為4-12的磷酸緩沖溶液，震蕩搖勻；通過(guò)減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方法除去上述水相溶液中殘留的有機(jī)溶劑，制得三嵌段聚合物包裹藥物的納米膠束； 其中，有機(jī)相溶劑為三氯甲烷、四氫呋喃或乙醇中的任一種；疏水性藥物為阿霉素、紫杉醇或順鉬中的任一種。
4.按照權(quán)利要求3所述聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物的用途之二，其特征在于: 1)聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物膠束的膠束內(nèi)交聯(lián) 將濃度為1-10 mg/ml的聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯類(lèi)三嵌段聚合物膠束溶液5份，加入0.005-0.05份的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽，室溫反應(yīng)10-30min，再加入0.001-0.01份的交聯(lián)劑攪拌過(guò)夜，透析12-24h制得氨基酸層交聯(lián)的聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯類(lèi)三嵌段聚合物膠束； 2)以聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物膠束為平臺(tái)，構(gòu)建多功能納米復(fù)合粒子 (1)三嵌段聚合物制備的膠束粒子表面通過(guò)化學(xué)共價(jià)鍵修飾引入小分子配體，進(jìn)一步與金屬離子螯合用于磁共振或核素顯影； 其中，化學(xué)共價(jià)鍵修飾是通過(guò)羧基與氨基的縮合反應(yīng)，羧基與羥基的酯化反應(yīng)，炔基與疊氮的點(diǎn)擊反應(yīng)，鹵代物與氨基的反應(yīng)，氨基與醛基的反應(yīng)； (2)三嵌段聚合物制備的膠束粒子表面通過(guò)化學(xué)修飾引入熒光分子用于熒光標(biāo)記； 其中，化學(xué)修飾是通過(guò)羧基與氨基的縮合反應(yīng)，羧基與羥基的酯化反應(yīng)，炔基與疊氮的點(diǎn)擊反應(yīng)，鹵代物與氨基的反應(yīng)，氨基與醛基的反應(yīng)；(3)三嵌段聚合物制備的膠束粒子表面通過(guò)化學(xué)修飾引入功能性短肽用于細(xì)胞或組織革巴向; 其中，化學(xué)修飾是通過(guò)羧基與氨基的縮合反應(yīng)，羧基與羥基的酯化反應(yīng)，炔基與疊氮的點(diǎn)擊反應(yīng)，鹵代物與氨基的反應(yīng)，氨基與醛基的反應(yīng)；接入的功能性短肽為:精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸或穿膜肽。
5.按照權(quán)利要求4所述聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物的用途之二，其特征在于交聯(lián)劑為乙二胺或1，4- 丁二胺。
6.按照權(quán)利要求4所述聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物的用途之二，其特征在于小分子配體為1，4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷I, 4，7，10-四乙酸、I, 4，7，10-四氮雜環(huán)十二烷N，N’，N” -三乙酸或二乙基三胺五乙酸中的任一種。
7.按照權(quán)利要求4所述聚乙二醇-聚氨基酸-聚酯三嵌段聚合物的用途之二，其特征在于金屬離子為:Mn、Fe、Co、N 1、Cu、Ga、Tc、Gd中的+2價(jià)或+3價(jià)離子。
【文檔編號(hào)】A61K31/704GK103467729SQ201310345062
【公開(kāi)日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2013年8月9日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月9日
【發(fā)明者】艾華, 吳昌強(qiáng), 劉林 申請(qǐng)人:四川大學(xué)