山蘇萃取物及其用途
【專利摘要】一種山蘇萃取物，供制備改善攝護(hù)腺疾病的藥物或保健食品，包含焦脫鎂葉綠酸-a甲酯、脫鎂葉綠酸-a甲酯、1-亞麻油酸-3-亞麻酸-甘油酯、1-亞麻酸-2,3-雙棕梠酸-甘油酯，以及1,3-雙棕梠酸-甘油酯。該山蘇萃取物通過一包含下列步驟的方法所制得：一溶劑萃取步驟，即使用一萃取溶劑，對一山蘇樣品進(jìn)行萃取處理，使該山蘇樣品與該萃取溶劑的重量體積比(w/v,g/ml)為50至60mg/ml，并回收得一萃取物；以及一管柱層析步驟，利用水和乙醇作為流動相，進(jìn)行該萃取物的層析分離處理，以獲得數(shù)個區(qū)分物，沖提先后而編號為區(qū)段a至區(qū)段i，擷選該區(qū)段b、c、d或其組合物經(jīng)減壓濃縮及冷凍干燥后，即得該山蘇萃取物。
【專利說明】山蘇萃取物及其用途
【技術(shù)領(lǐng)域】[0001]本發(fā)明關(guān)于一種植物萃取物及其用途，特別是關(guān)于一種山蘇萃取物以及其在改善攝護(hù)腺疾病的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]攝護(hù)腺又稱前列腺(Prostate)，位于膀胱出口處，包圍著尿道，為男性特有的生殖
器官之一。
[0003]良性攝護(hù)腺肥大(Benign Prostatic Hyperplasia,簡稱BPH)為男性常見的良性腫瘤，好發(fā)于五十歲以上的男性，其致病機(jī)轉(zhuǎn)仍未臻明了，目前推測與年齡增長及荷爾蒙分泌相關(guān)。一般而言，攝護(hù)腺的擴(kuò)大會直接壓迫尿道，導(dǎo)致尿道過度收縮、內(nèi)壓上升而引起排尿障礙，如尿路中斷、頻尿、漏尿及殘尿感等癥狀，嚴(yán)重時可導(dǎo)致尿毒癥或腎衰竭。良性攝護(hù)腺肥大雖不致提高罹患攝護(hù)腺癌的危險率，然良性攝護(hù)腺肥大與攝護(hù)腺癌早期的癥狀相近，不易區(qū)分，恐誤導(dǎo)攝護(hù)腺癌的正確診斷，延誤就診或影響患者心情。
[0004]現(xiàn)有良性攝護(hù)腺肥大的治療可仰賴手術(shù)切除或藥物，手術(shù)切除的預(yù)后期較長且風(fēng)險略高，因此內(nèi)科用藥仍為主要的治療手段，常見的現(xiàn)有藥物包含甲型交感神經(jīng)阻斷劑(alpha adrenergic blockers),如 Minipress、Dibenyline、Hytrin、Doxaben、Xatral 等，以及荷爾蒙抑制劑，但是，前述兩種藥物皆有衍生副作用的可能，可能引發(fā)姿勢性低血壓、尿失禁、鼻塞、疲倦以及性功能障礙等問題，又，該常用藥物若與其它藥物并服(如感冒藥、心血管疾病用藥或降血壓藥)更可能導(dǎo)致嚴(yán)重的醫(yī)療傷害，造成患者難忍的煎熬。此外，另有研究指出長期服用該常用藥物會提高罹癌(嚴(yán)重的攝護(hù)腺癌及乳癌)的機(jī)率，于患者而言更是雪上加霜。
[0005]近年來，自歐美國家興起自然回歸與健康養(yǎng)生的概念，使得傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)(traditional medicine, TM)或輔助替代醫(yī)學(xué)(complementary and alternativemedicine, CAM)漸為風(fēng)行，因此，與攝護(hù)腺疾病相關(guān)的傳統(tǒng)中草藥與天然植物的開發(fā)備受重視，陸續(xù)有醫(yī)用爺紅素、南瓜子、鋸棕櫚(Saw Palmetto)、非洲刺李(Pygeum Africana)及黃體素等天然植物或其成分對于男性攝護(hù)腺保健具有明顯療效的報導(dǎo)，然而，前述天然植物多有療效不明顯(如茄紅素、南瓜子對于攝護(hù)腺疾病的治療效果有限)，或是受限于原料產(chǎn)地或萃取效率等問題，如鋸棕櫚及非洲刺李僅產(chǎn)于非洲或大西洋、加勒比海沿岸，原料取得不易且萃取效率又隨萃取原料的部位而多有變動，因而損及其應(yīng)用層面；又，部分天然植物恐有衍生副作用的可能性，如鋸棕櫚易造成胃部不適、惡心、便秘或腹瀉(節(jié)錄自網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù):http://liaozha1.pujia.com/thread-500003-1, html),雖不至造成嚴(yán)重的后遺癥，但終會使服用者感到不適，難獲一致性的認(rèn)同。
[0006]因此，若能進(jìn)一步找到對攝護(hù)腺肥大具有顯著療效的植物藥物，應(yīng)用于治療及預(yù)防用藥的開發(fā)，必然為各界所引領(lǐng)期盼，以有效改善人類攝護(hù)腺問題。
[0007]山蘇(Asplenium nidus L.)屬鐵角蕨類,為多年生大型食用性植物,原產(chǎn)于中國臺灣及東南亞一帶，常生于陰濕的樹干或巖石細(xì)縫上，目前在臺灣各地皆已在平地農(nóng)改大量量產(chǎn)栽種。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)記載，山蘇富含多種營養(yǎng)成份及膳食纖維，山蘇嫩葉為亞種食材適合于炒菜，長期食用安全性高，具有預(yù)防高血壓、糖尿病等功效，是現(xiàn)代人預(yù)防便秘，大腸癌的健康蔬菜，卻未見其在改善攝護(hù)腺疾病的相關(guān)報導(dǎo)與應(yīng)用。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0008]本發(fā)明的主要目的是提供一種山蘇萃取物，含有抑制雄性素的天然活性成分，可有效改善男性攝護(hù)腺相關(guān)的疾病。
[0009]本發(fā)明的次一目的是提供一種山蘇萃取物，對于荷爾蒙受體調(diào)控具有顯著調(diào)控功能，該山蘇萃取物便于取得、分離而可應(yīng)用于改善男性攝護(hù)腺的藥物組成分或保健食品的開發(fā)。
[0010]本發(fā)明的再一目的是提供山蘇萃取物在改善男性攝護(hù)腺疾病的用途，是將前述的山蘇萃取物作為一活性成分，應(yīng)用于治療或預(yù)防男性攝護(hù)腺疾病的藥物組成分或保健食品的開發(fā)。
[0011]為達(dá)到前述發(fā)明目的，本發(fā)明所運(yùn)用的技術(shù)手段及借助該技術(shù)手段所能達(dá)到的功效包含有:
[0012]一種山蘇萃取物，包含焦脫鎂葉綠酸_a甲酯、脫鎂葉綠酸-a甲酯、1_亞麻油酸-3-亞麻酸-甘油酯、1-亞麻酸-2，3-雙棕梠酸-甘油酯，以及1，3-雙棕梠酸-甘油酯。
[0013]本發(fā)明的山蘇萃取物，其中，該山蘇萃取物借助一包含下列步驟的方法所制得:一溶劑萃取步驟，是使用一萃取溶劑，對一山蘇樣品進(jìn)行萃取處理，使該山蘇樣品與該萃取溶劑的重量體積比(w/v，g/ml)為50至60mg/mL，并回收得一萃取物；以及一管柱層析步驟，利用水和乙醇作為流動相，進(jìn)行該萃取物的層析分離處理，以獲得數(shù)個區(qū)分物，洗滌先后而編號為區(qū)段a至區(qū)段i，擷選該區(qū)段c經(jīng)減壓濃縮及冷凍干燥后，即得該山蘇萃取物。
[0014]本發(fā)明的山蘇萃取物，其中，該管柱層析步驟為擷選該區(qū)段b經(jīng)減壓濃縮及冷凍干燥后，即得該山蘇萃取物。
[0015]本發(fā)明的山蘇萃取物，其中，該管柱層析步驟為擷選該區(qū)段d經(jīng)減壓濃縮及冷凍干燥后，即得該山蘇萃取物。
[0016]本發(fā)明的山蘇萃取物，其中，該溶劑萃取步驟的萃取溶劑為95%的乙醇。
[0017]本發(fā)明的山蘇萃取物，其中，該溶劑萃取步驟的萃取溶劑為水。
[0018]本發(fā)明的山蘇萃取物，其中，該方法更包含一采選步驟，即選摘整株山蘇花含根為該山蘇樣品。
[0019]以及，一種山蘇萃取物的用途，是將該山蘇萃取物作為一活性物質(zhì)，應(yīng)用于制備用以治療攝護(hù)腺疾病的藥物組成物。
[0020]本發(fā)明的山蘇萃取物的用途，是將該山蘇萃取物作為一活性物質(zhì)，應(yīng)用于制備用以治療攝護(hù)腺疾病的保健食品。
[0021]本發(fā)明的山蘇萃取物的用途，該攝護(hù)腺疾病包含攝護(hù)腺肥大、攝護(hù)腺癌及攝護(hù)腺炎。
[0022]本發(fā)明的山蘇萃取物的用途，其中，該山蘇萃取物是以口服方式投予一生物個體。
[0023]本發(fā)明的山蘇萃取物的用途，其中，該山蘇萃取物的投予量為每天每單位體重(kg)的該生物個體投予10至50毫克，較佳為每天每單位體重(kg)的該生物個體投予50毫克。
[0024]本發(fā)明的山蘇萃取物具有抑制雄性素的天然活性成分，因此，可有效改善由荷爾蒙受體失調(diào)所引發(fā)的疾病，特別是男性攝護(hù)腺相關(guān)的疾病，且不致引發(fā)副作用。該山蘇萃取物可通過工業(yè)化或通過超臨界萃取步驟而制得，而應(yīng)用于治療或預(yù)防男性攝護(hù)腺疾病的藥物組成份或保健食品的開發(fā)，以改善男性攝護(hù)腺的問題，為本發(fā)明的功效。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0025]圖1為本發(fā)明的焦脫鎂葉綠酸_a甲酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)圖。
[0026]圖2為本發(fā)明的脫鎂葉綠酸_a甲酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)圖。
[0027]圖3為本發(fā)明的1-亞麻油酸-3-亞麻酸-甘油酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)圖。
[0028]圖4為本發(fā)明的1-亞麻酸_2，3-雙棕梠酸-甘油酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)圖。
[0029]圖5為本發(fā)明的1，3-雙棕梠酸-甘油酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)圖。
[0030]圖6為本發(fā)明山蘇萃取物的萃取方法流程圖。
[0031]圖7為本發(fā)明山蘇萃取物的沖提區(qū)段圖。
[0032]圖8為本發(fā)明山蘇萃取物的又一萃取方法流程圖。
[0033]圖9為本發(fā)明山蘇萃取物對于雄性素的抑制效果示意圖。
[0034]圖10為本發(fā)明山蘇萃取物對于雄性素的抑制效果示意圖。
[0035]圖11為本發(fā)明山蘇萃取物對于攝護(hù)腺基層肌成纖維細(xì)胞的抑制作用示意圖。
[0036]圖12為本發(fā)明山蘇萃取物對于攝護(hù)腺癌細(xì)胞株的抑制作用示意圖。
[0037]圖13為本發(fā)明山蘇萃取物的劑量與抑制攝護(hù)腺癌細(xì)胞能力的關(guān)系圖。
[0038]圖14a為本發(fā)明山蘇萃取物降低小鼠攝護(hù)腺指數(shù)示意圖。
[0039]圖14b為本發(fā)明山蘇萃取物提升小鼠排尿量示意圖。
[0040]圖14c為本發(fā)明山蘇萃取物降低小鼠飲水量示意圖。
[0041]圖15為本發(fā)明山蘇萃取物抑制攝護(hù)腺肥大的病理特征示意圖。
[0042] (本發(fā)明)
[0043]SI溶劑萃取步驟
[0044]S2管柱層析步驟
[0045]S3采選步驟。
【具體實(shí)施方式】
[0046]為讓本發(fā)明的上述及其它目的、特征及優(yōu)點(diǎn)能更明顯易懂，下文特舉本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并配合附圖，作詳細(xì)說明如下:
[0047]請參照圖1至圖5所示，本發(fā)明的山蘇萃取物，包含該圖1所示的焦脫鎂葉綠酸-a甲酯(pyropheophorbide a methyl ester ;C34H36N40_,占該山蘇萃取物總重量的 5%)、該圖 2所示的脫鎂葉綠酸-a甲酯(pheophorbide a methyl ester ;C35H36N405,占該山蘇萃取物總重量的3.4%)、該圖3所示的1-亞麻油酸-3-亞麻酸-甘油酯(l-linleoyl-3-linolenoyl-glycerol ；C39H66O5,占該山蘇萃取物總重量的2.9%)、該圖4所示的1-亞麻酸_2，3-雙棕梠酸-甘油酯(l-linleoyl-2, 3-dipalmitoyl-rac-glycerol ；C53H98O6,占該山蘇萃取物總重量的5.4%),以及該圖5所示的1，3-雙棕相酸-甘油酯(1，3-dipalmitoyl-sn-glycerol ；C35H68O5,占該山蘇萃取物總重量的7.3%)。該山蘇萃取物可有效抑制雄性素的分泌及抗發(fā)炎，從而改善男性攝護(hù)腺疾病。
[0048]請參照圖6所示，本發(fā)明的山蘇萃取物是通過包含下列步驟的萃取方法所獲得:溶劑萃取步驟SI以及管柱層析步驟S2。該溶劑萃取步驟SI，是使用95%的乙醇或水作為萃取溶劑，對一山蘇樣品進(jìn)行萃取處理，而得一萃取物，其中該山蘇樣品與該萃取溶劑的重量體積比(w/v, g/ml)為 50 至 60mg/mL。
[0049]該管柱層析步驟S2，是以硅膠管柱為固定相，水和乙醇作為流動相，進(jìn)行該萃取物的層析分離處理，以獲得數(shù)個區(qū)分物，該區(qū)分物依洗滌先后而編號為區(qū)段a至區(qū)段i，擷選區(qū)段b、C、d或其組合，經(jīng)減壓濃縮及冷凍干燥處理后，即得本發(fā)明的山蘇萃取物。
[0050]更詳言之，該管柱層析步驟S2是利用自動化中型管柱液相層析儀(Flash LC)進(jìn)行該萃取物的層析分離處理，較佳是選用C18的蛋白純化反應(yīng)相柱(reverse phasecolumn)作為固定相，以提升萃取率，再依序利用不同比例的流動相進(jìn)行沖提，分段收集沖提液而得數(shù)個區(qū)分物，如該圖7所示。該數(shù)個區(qū)分物依其沖提的先后而分別為區(qū)段a至i，擷取區(qū)段b、c、d或其組合物經(jīng)減壓濃縮及冷凍干燥后，即得本發(fā)明的山蘇萃取物。其中，本發(fā)明的流動相是由乙醇及水混合成線性梯度，該乙醇及水的混合是由70%乙醇提升至100%乙醇(V/V)。
[0051 ] 請參照圖8所示，本發(fā)明的山蘇萃取物更佳是于該溶劑萃取步驟SI之前，先操作一采選步驟S3，即選摘整株山蘇花含根為該山蘇樣品，以獲得活性成分較高的山蘇萃取物，該山蘇樣品可選自于山蘇花(Asplenium antiquum Makino ;又稱鳥巢蕨、巢蕨)或臺灣山蘇花(Asplenium nidus Linn ;又稱臺灣巢蕨、臺灣鳥巢蕨),較佳為采用臺灣山蘇花(Asplenium nidus Linn )的整株含根,該臺灣山蘇花在中國臺灣的分布及栽種面積較廣，可周年生產(chǎn)，較利于本發(fā)明山蘇萃取物的制備及原料取得，再者，臺灣山蘇花多為無農(nóng)業(yè)污染的清潔蔬菜，少病蟲害或農(nóng)藥污染等問題，可提升本發(fā)明山蘇萃取物的安全性。
[0052]本發(fā)明的山蘇萃取物經(jīng)科學(xué)驗證而證實(shí)具有抗發(fā)炎及抑制雄性素的有效成分，包含焦脫鎂葉綠酸_a甲酯、脫鎂葉綠酸_a甲酯、1-亞麻油酸-3-亞麻酸-甘油酯、1-亞麻酸-2，3-雙棕梠酸-甘油酯及1，3-雙棕梠酸-甘油酯，因此，可調(diào)控于荷爾蒙受體發(fā)揮預(yù)期功能，進(jìn)而改善由荷爾蒙受體失調(diào)所引發(fā)的疾病，如男性攝護(hù)腺疾病(包含良性攝護(hù)腺肥大、攝護(hù)腺癌及攝護(hù)腺炎)、男女尿失禁、男女雄性禿以及女性更年期障礙等。
[0053]又，該山蘇萃取物可便于萃取、分離，而具有應(yīng)用于新藥開發(fā)的潛力。即將該山蘇萃取物作為一活性成分，應(yīng)用于治療或預(yù)防前述疾病的藥物組成分或保健食品的開發(fā)，特別是用以改善男性攝護(hù)腺疾病的藥物組成分或保健食品，進(jìn)而改善國人健康問題。本發(fā)明的山蘇萃取物可以單獨(dú)使用于相關(guān)藥物的組成分或保健食品的開發(fā)，或者搭配醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑、賦形劑、鹽類或其它營養(yǎng)成分等而組合一復(fù)合物。此外，該山蘇萃取物更可以通過進(jìn)一步加工而制備成任何適用于口服的劑型，如錠劑、膠囊、粉劑、丸劑、液劑或發(fā)酵物等，或者與其它食品或飲料組合以制成更適于取用的食品樣態(tài)。
[0054]為證實(shí)本發(fā)明的山蘇萃取物確實(shí)具有抑制雄性素的功能，特操作如下方所示的試驗，然其應(yīng)用并不以此為限:
[0055]本試驗是按前述的萃取方法，依序操作該采選步驟S3、該溶劑萃取步驟SI及該管柱層析步驟S2，利用95%酒精作為萃取溶劑進(jìn)行山蘇樣品的萃取處理，再由該自動化中型管柱液相層析儀，以C18的蛋白純化反應(yīng)相柱進(jìn)行分離所獲得的九個區(qū)段(a至i)。請參照圖9及圖10所示，該九個區(qū)段分別與攝護(hù)腺癌細(xì)胞22Rv/103E單獨(dú)培養(yǎng)，或者與該攝護(hù)腺癌細(xì)胞22Rv/103E及攝護(hù)腺基層成肌纖維母細(xì)胞(stromal myofibroblast) -WPMY-1共同培養(yǎng)，再分別測定該九個區(qū)段對于雄性素的抑制活性。
[0056]其結(jié)果顯示，區(qū)段b、c及d，在與攝護(hù)腺癌細(xì)胞22Rv/103E單獨(dú)培養(yǎng)(如圖9所示)，或者與該攝護(hù)腺癌細(xì)胞22Rv/103E103E及攝護(hù)腺基層成肌纖維母細(xì)胞(stromalmyofibroblast)-WPMY-1共同培養(yǎng)(如圖10所示)的情況下，均對該雄性素具有明顯的抑制效果，且該抑制效果與該區(qū)段b、c及d的劑量成正比。
[0057]請參照圖11及圖12所示，為該九個區(qū)段對該攝護(hù)腺基層成肌纖維母細(xì)胞-WPMY-1及攝護(hù)腺癌細(xì)胞株-LNCaP生長的影響。該九個區(qū)段分別與該攝護(hù)腺基層肌成纖維細(xì)胞-WPMY-1及該攝護(hù)腺癌細(xì)胞株-LNCaP細(xì)胞共同培養(yǎng)48小時，利用SRB染劑對培養(yǎng)后的細(xì)胞進(jìn)行染色，再分別測定其細(xì)胞活性。其結(jié)果顯示，該區(qū)段b、c及d確實(shí)可抑制該攝護(hù)腺基層成肌纖維母細(xì)胞-WPMY-1及該攝護(hù)腺癌細(xì)胞株-LNCaP的生長，且該抑制作用與該區(qū)段b、c及d的劑量成正本。
[0058]請參照圖13所示，為該區(qū)段b、c及d的組合物對該攝護(hù)腺基層成肌纖維母細(xì)胞-WPMY-1 (I)及該攝護(hù)腺癌細(xì)胞株-LNCaP(2)生長的影響。利用細(xì)胞群落生長分析法(colony formation assay)測定該組合物在不同劑量下,對該攝護(hù)腺基層成肌纖維母細(xì)胞-WPMY-1及該攝護(hù)腺癌細(xì)胞株-LNCaP的抑制能力，其結(jié)果顯示，該組合物的劑量與該組合物對攝護(hù)腺癌細(xì)胞生長的抑制能力為成正向關(guān)系，并且，較高劑量(如100μ g/mL)的該組合物更會造成攝護(hù)腺癌細(xì)胞死亡。該組合物對于該攝護(hù)腺基層肌成纖維細(xì)胞-WPMY-1及該攝護(hù)腺癌細(xì)胞株-LNCaP的半抑制劑量(IC5tl值)分別為11.63 μ g/mL及13.19 μ g/mL。
[0059]此外，為證實(shí)本發(fā)明的山蘇萃取物可以有效改善小鼠攝護(hù)腺肥大癥狀，遂進(jìn)行以下試驗，惟其應(yīng)用范疇并不以此為限:
[0060]本試驗選用C57BL/6Jnarl雄性小鼠(購自國家動物中心)，該小鼠為飼養(yǎng)于中研院農(nóng)業(yè)生物科技研究中心SPF動物房`，飼養(yǎng)環(huán)境為22°C，光照時間與黑暗時間各為12小時。
[0061]本試驗是以皮下注射脫氧腎上腺素(phenyl印hrine，簡稱PE，施用量為每單位體重公斤施予15毫克脫氧腎上腺素)，以活化α 1-腎上腺素受體，進(jìn)而誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生攝護(hù)腺肥大現(xiàn)象(其誘導(dǎo)期間為每周注射五次脫氧腎上腺素，且連續(xù)注射五周)；并且同時口服喂食不同劑量的本發(fā)明的山蘇萃取物，觀察受試小鼠的攝護(hù)腺指數(shù)(prostate index，簡稱PI，即攝護(hù)腺內(nèi)側(cè)部位濕重/小鼠體重)、小鼠排尿狀況及飲水狀況，分別紀(jì)錄于圖14a、圖14b及圖14c ;并且于犧牲小鼠后，取其攝護(hù)腺進(jìn)行切片染色，其結(jié)果如圖15所示。
[0062]請參照圖14a所示，相較于控制組，施予脫氧腎上腺素的小鼠(PE組)的攝護(hù)腺指數(shù)顯著上升，表示該小鼠產(chǎn)生攝護(hù)腺內(nèi)側(cè)部位腫大的現(xiàn)象，該小鼠同時有排尿減少，以及飲水量減少等現(xiàn)象；而同時喂食山蘇酒萃物(ANE組，未經(jīng)管柱層析步驟，劑量為每天每單位體重公斤小鼠喂食100毫克)或本發(fā)明的山蘇萃取物(Lo組，劑量為每天每單位體重公斤小鼠喂食10毫克；或把組,每天每單位體重公斤小鼠喂食50毫克)均可以有效減緩小鼠攝護(hù)腺指數(shù)的變化，也可以緩解小鼠排尿減少及飲水量增加的問題(P < 0.01，請參照圖14b及圖14c)，其中，以每天每單位體重公斤小鼠喂食50毫克的本發(fā)明山蘇萃取物(Hi組)的效果最佳。是以，本發(fā)明的山蘇萃取物可以有效緩解生物體的攝護(hù)腺肥大現(xiàn)象。[0063]接著，將上述五組小鼠(控制組、PE組、ANE組、Lo組及Hi組)犧牲后，取攝護(hù)腺進(jìn)行切片，并進(jìn)行蘇木精_伊紅染色(Hematoxylin-eosin staining,簡稱H&E staining),相較于控制組，施予脫氧腎上腺素的小鼠(PE組)可以觀察到上皮細(xì)胞增生現(xiàn)象，使PE組小鼠泌尿道腔室面積顯著減小，表示PE組小鼠的分泌腺體受到壓縮(如圖15的ii所示)，而同時喂食山蘇酒萃物(ANE組)或本發(fā)明的山蘇萃取物(Lo組或Hi組)均可以有效減緩上述上皮細(xì)胞增生現(xiàn)象(如圖15的ii1、iv及V所示)。
[0064]此外，請參照圖15的vii至xi所示,本試驗更以梅生氏三色染色法(Masson’ strichrome staining),觀察各組切片的膠原蛋白的分布狀況,控制組的膠原蛋白分布范圍較廣(如圖15的vii所示，黃色箭頭所指藍(lán)色區(qū)域即為膠原蛋白)，更可以于攝護(hù)腺基質(zhì)觀察到網(wǎng)狀纖維的分布(如橘色箭頭所指區(qū)域)，而PE組小鼠的切片則較難觀察到此一現(xiàn)象(如圖15的viii所示)，而同時喂食本發(fā)明的山蘇萃取物(Hi組)則可以有效回復(fù)上述現(xiàn)象(如圖15的ix所示)。
[0065]是以，本發(fā)明的山蘇萃取物可以有效舒緩脫氧腎上腺素造成的攝護(hù)腺肥大現(xiàn)象，增加小鼠排尿量，并且也可以減緩攝護(hù)腺肥大造成的病理特征，可以作為改善男性攝護(hù)腺問題的活性物質(zhì)，應(yīng)用于制備用以治療攝護(hù)腺疾病的藥物組成分或保健食品。
[0066]本發(fā)明山蘇萃取物的實(shí)際應(yīng)用如下方實(shí)施例所示，但其應(yīng)用并不以此例為限:
[0067]本實(shí)施例按前述的萃取方法，依序操作該采選步驟S3、溶劑萃取步驟SI及管柱層析步驟S2，以制得該山蘇萃取物。請參照第I表所示，該山蘇萃取物提供給88名不同年齡層的攝護(hù)腺疾病患者服用，平均二至四星期內(nèi)可改善患者的排尿狀況，同時未引發(fā)任何副作用，有助于攝護(hù)腺肥大、攝護(hù)腺炎或攝護(hù)腺癌的治療。
[0068]攝護(hù)腺肥大的病征之一就是頻尿與夜尿，本發(fā)明的山蘇萃取物可將頻尿與夜尿的頻率降至與正常人無異。將前述8 8名患者試驗前后的情況，依據(jù)國際攝護(hù)腺癥狀評分表(International Prostate Symptom Score, 1-PSS)進(jìn)行分析,在 2 至 4 周內(nèi)進(jìn)步分?jǐn)?shù)平均至少達(dá)約20至30分，遠(yuǎn)高于市售現(xiàn)用營養(yǎng)補(bǔ)充產(chǎn)品的平均2-3分，以及藥物治療的平均14分。
[0069]第I表:88名攝護(hù)腺疾病患的使用結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一種山蘇萃取物，包含: 焦脫鎂葉綠酸-a甲酯； 脫鎂葉綠酸_a甲酯； 1-亞麻油酸-3-亞麻酸-甘油酯； 1-亞麻酸_2，3-雙棕梠酸-甘油酯；以及 1,3-雙棕梠酸-甘油酯。
2.如權(quán)利要求1所述的山蘇萃取物，其特征在于，該山蘇萃取物通過一包含下列步驟的方法所制得: 一個溶劑萃取步驟，即使用一個萃取溶劑，對一個山蘇樣品進(jìn)行萃取處理，使該山蘇樣品與該萃取溶劑的重量體積比(w/v, g/ml)為50至60mg/ml,并回收得一個萃取物；以及 一個管柱層析步驟，利用乙醇和水混合成線性梯度作為流動相，進(jìn)行該萃取物的層析分離處理，其中乙醇及水的混合是由70%乙醇提升至100%乙醇(V/V)，以獲得數(shù)個區(qū)分物，依沖提順序而編號為區(qū)段a至i，擷選該區(qū)段c經(jīng)減壓濃縮及冷凍干燥后，即得該山蘇萃取物。
3.如權(quán)利要求2所述的山蘇萃取物，其特征在于，該管柱層析步驟是擷選該區(qū)段b經(jīng)減壓濃縮及冷凍干燥后，即得該山蘇萃取物。
4.如權(quán)利要求2所述的山蘇萃取物，其特征在于，該管柱層析步驟是擷選該區(qū)段d經(jīng)減壓濃縮及冷凍干燥后，即得該山蘇萃取物。`
5.如權(quán)利要求2所述的山蘇萃取物，其特征在于，該溶劑萃取步驟的萃取溶劑是95%的乙醇。
6.如權(quán)利要求2所述的山蘇萃取物，其特征在于，該溶劑萃取步驟的萃取溶劑是水。
7.如權(quán)利要求2所述的山蘇萃取物，其特征在于，該方法更包含一采選步驟，是選整株山蘇花含根為該山蘇樣品。
8.如權(quán)利要求7所述的山蘇萃取物，其特征在于，該采選步驟，是選用山蘇花(Asplenium antiquum Makino)的整株植物含根為該山蘇樣品。
9.如權(quán)利要求7所述的山蘇萃取物，其特征在于，該采選步驟，是選用臺灣山蘇花(Asplenium nidus Linn)的整株植物含根為該山蘇樣品。
10.一種如權(quán)利要求1、2、3或4所述的山蘇萃取物的用途，是將該山蘇萃取物作為一個活性物質(zhì)，應(yīng)用于制備用以治療攝護(hù)腺疾病的藥物組成分。
11.一種如權(quán)利要求1、2、3或4所述的山蘇萃取物的用途，是將該山蘇萃取物作為一個活性物質(zhì)，應(yīng)用于制備用以治療攝護(hù)腺疾病的保健食品。
12.如權(quán)利要求10或11所述的山蘇萃取物的用途，其特征在于，該攝護(hù)腺疾病包含攝護(hù)腺肥大、攝護(hù)腺癌及攝護(hù)腺炎。
13.如權(quán)利要求10或11所述的山蘇萃取物的用途，其特征在于，該山蘇萃取物是以口服方式投予一個生物個體。
14.如權(quán)利要求10或11所述的山蘇萃取物的用途，其特征在于，該山蘇萃取物的投予量是每天每單位體重(kg)的該生物個體投予10至50毫克。
15.如權(quán)利要求14所述的山蘇萃取物的用途，其特征在于，該山蘇萃取物的投予量是每天每單位體重(kg)的該生物個體投予50毫克。
【文檔編號】A61P13/08GK103505457SQ201310261724
【公開日】2014年1月15日 申請日期:2013年6月27日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月27日
【發(fā)明者】黃昆暄, 莊哲仁, 蕭培文, 蔡佳芮 申請人:景鑫生物科技有限公司, 中央研究院