沒食子酸酯衍生物的抗流感用途
【專利摘要】本發(fā)明公開了三種沒食子酸酯衍生物在預(yù)防和治療流感疾病中的應(yīng)用。本發(fā)明的創(chuàng)新之處在于：三種沒食子酸酯衍生物對所有類型流感病毒均具有神經(jīng)氨酸酶抑制作用；具有抗流感病毒作用；可以抑制流感病毒所致炎癥因子和炎癥化學(xué)趨化因子的產(chǎn)生；具有較強的自由基清除作用。該類化合物有望成為防治流感的候選物作深入研究與開發(fā)。
【專利說明】沒食子酸醒衍生物的抗流感用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥新化學(xué)成分的制備方法、新的藥理作用及其在預(yù)防和治療流感疾 病中的應(yīng)用，屬中藥【技術(shù)領(lǐng)域】。 技術(shù)背景
[0002] 流感病毒是常見呼吸道感染原，在老年人、嬰幼兒W及合并慢性疾病的人群中危 害尤為嚴重。1918年，有史W來最嚴重的HlNl流感爆發(fā)，在全球造成約5000萬人死亡。 1997年我國香港地區(qū)出現(xiàn)冊Nl人感染禽流感病例W來，我國大陸地區(qū)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)37例冊Nl 感染病例（WHO, 2009)。截至2009年4月，全球累計出現(xiàn)471病例，死亡人數(shù)為282人，死 亡率達60 % (WHO, 2010)。2009年新型甲型化Nl流感席卷全球，截至2010年1月17日， 共計209個國家報告了實驗室確診的148例HlNl流感病例，已造成至少14142名患者死亡 (WHO, 2010)。每年冬春季出現(xiàn)的季節(jié)性流感W及突發(fā)的新型流感大爆發(fā)時刻威脅著人類的 生命、健康和安全。
[0003] 目前有效的抗流感手段主要有疫苗接種和感染后及時服用化療藥物。新型HlNl 流感來襲，流感疫苗的及時接種在人群中起到了重要保護作用。但流感疫苗的有效性是建 立在疫苗的病毒毒株與將要流行或環(huán)境中存在的流感病毒毒株相似的基礎(chǔ)之上，而流感 病毒抗原的高度易變性大大降低了人們預(yù)測流感爆發(fā)的準確性，使常規(guī)流感疫苗對于預(yù) 防流感爆發(fā)與阻止流感傳播的有效性受到嚴重影響，并對不可預(yù)見的新流感病毒束手無 策。而臨床上用于抗流感病毒的化療藥物主要有兩種類型：一種是病毒M2蛋白抑制劑， 如金剛焼胺（amantadine)和金剛己胺（rimantadine)。該類藥物僅對甲型流感病毒有效， 已經(jīng)產(chǎn)生較為廣泛的耐藥，并且常常伴有中樞神經(jīng)系統(tǒng)副作用，通常不作為首選用藥。另 一類藥物是神經(jīng)氨酸酶（neuraminidase, NA)抑制劑，如扎那米韋（zanamivir)、奧塞米韋 (oseltamivir)。盡管該類藥物對于甲、己型流感病毒均有效，但其原料供應(yīng)短缺，合成工藝 復(fù)雜，大規(guī)模生產(chǎn)及應(yīng)用受到極大限制。
[0004] 目前已有的抗流感化療藥物除了制備工藝復(fù)雜，生產(chǎn)成本高，價格昂貴，隨著其應(yīng) 用日益廣泛，耐藥毒株的產(chǎn)生成為臨床治療的難題。據(jù)統(tǒng)計，每年人際間傳播的毒株中耐藥 毒株占15?92%。近年來，人流感A型冊N2病毒對金剛焼胺的耐藥比率不斷上升，目前已 超過90%的耐藥率，該種耐藥性是由病毒M2蛋白上單個氨基酸的突變替換造成的。而神經(jīng) 氨酸酶的耐藥性也有上升的趨勢，2007年至2008年在歐洲分離得到的A型HlNl病毒中，對 奧塞米韋產(chǎn)生耐藥的占14%。最近冊Nl毒株中也出現(xiàn)了神經(jīng)氨酸酶的耐藥性。為了抑制 耐藥性產(chǎn)生W及耐藥毒株的傳播，要求抗流感藥物具有多種抗病毒作用機制。流感病毒感 染常常引起炎性癥狀、免疫力低下及過氧化損傷，因此要求抗流感藥物在具有抗流感病毒 作用的同時又具有抗炎免疫、抗氧化作用。
[0005] 本實驗室即"藥物祀點研究與新藥篩選"北京市重點實驗室，已開展抗流感藥物的 篩選與發(fā)現(xiàn)研究多年，已建立了一系列抗流感藥物篩選模型。通過對樣品庫中10余萬個樣 品的流感病毒神經(jīng)氨酸酶（NA)抑制劑高通量篩選，發(fā)現(xiàn)了一批具有NA抑制活性的化合物， 其中表沒食子兒茶素沒食子酸醋及其類似物不僅具有顯著的體外抗流感病毒活性，包括NA 抑制活性和細胞水平的抗流感病毒活性，還具有顯著的抗炎和抗氧化作用。
[0006] 本專利中涉及的化合物表沒食子兒茶素-7-沒食子酸 圧pigallocatechin-7-gallate，10688]，其制備方法可見專利報道[中國發(fā)明專利，申請 號：200610033697.引，涉及的化合物表沒食子兒茶素沒食子酸醋（EGCG，14080)，其制備方 法可見文獻報道[Lai SM, Gu JY, Huang BH, Qiang CM, Lee WL Preparative separation and purification of epigalIocatechin gallate from green tea extracts using a silica adsorbent containing^ -cyclodextrin.J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2012, 887-888:112-21.]，涉及的表兒茶素沒食子酸醋（ECG，16048) 的制備方法可見文獻報道[Yamauchi R, Sasaki K,化 shida !(.Identification of epigallocatechin-3-gallate in green tea polyphenols as a potent inducer of p53-dependent apoptosis in the human lung cancer cell line A549. Toxicol In Vitro. 2009, 23(5) :8：M-9.]。
[0007] EGCG 和 ECG 已有抗 HIV 活性報道[Jiang F, Chen W, Yi K, Wu Z, Si Y,化n W, aiao Y. The evaluation of catechins that contain a galloyl moiety as potential HIV-I integrase inhibitors. Clin Immunol. 2010, 137(3) :347-56. ]，EGCG 抗流感病毒作用研究 也有文獻報道[肖瀟，楊占秋，石麗橋，劉猜，陳文。表沒食子兒茶素沒食子酸醋抗流感病毒 作用的研究。中國中藥雜志，2008, 33 (22) : 2678-82.]，在本發(fā)明中用作陽性對照藥。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0008] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了一類新的具有多祀點多途徑藥效 作用的抗流感藥物。
[0009] 為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案。
[0010] 從流感病毒的重要祀點神經(jīng)氨酸酶建立NA抑制劑篩選模型，評價化合物的NA抑 制活性。
[0011] 利用realtime-PCR分析病毒HA在細胞中的拷貝數(shù)，W評價化合物對流感病毒復(fù) 制的作用。
[0012] 建立流感病毒誘導(dǎo)的細胞病變藥效評價模型，評價化合物在細胞水平的抗流感病 毒活性。
[0013] 因流感病毒感染常常引起許多炎性癥狀及過氧化損傷癥狀，為了綜合評價活性化 合物的生物活性，除了評價其NA抑制活性、對病毒復(fù)制的影響、細胞水平的抗流感病毒活 性及活性特異性，還評價了其抗炎免疫活性及抗氧化活性，W便找到新型有效的抗流感藥 物。
[0014] 一種從圍誕樹中分離得到的表沒食子兒茶素-7-沒食子酸醋，簡稱化合物10688 圧pigallocatechin-7-gallate]及其在制備抗流感藥物中的應(yīng)用，其化學(xué)結(jié)構(gòu)：
[0015]
【權(quán)利要求】
1. 式I所示的表沒食子兒茶素?7?沒食子酸酯在制備預(yù)防、緩解和\或治療流感藥物 中的應(yīng)用，
2. 式I所示的表沒食子兒茶素沒食子酸酯類似物II在制備預(yù)防、緩解和\或治療流感 藥物中的應(yīng)用
其中，R選自氫原子或甲基。
3. 観權(quán)利要求2的應(yīng)用，其特征在于，所述的表沒食子兒茶素沒食子酸酷類似物 自如下化合物 滿
：Q'：
4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項的應(yīng)用，其特征在于，所述的預(yù)防、緩解和\或治療流感 是預(yù)防、緩解和\或治療由流感病毒引起的各種感冒癥狀。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項的應(yīng)用，其特征在于，所述的預(yù)防、緩解和\或治療流感 是通過抑制流感病毒神經(jīng)氨酸酶的作用及抑制流感病毒的復(fù)制，抑制流感病毒的感染、復(fù) 制和傳播。 1
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項的應(yīng)用，其特征在于，所述的預(yù)防、緩解和\或治療流感 是是通過改善流感病毒引起的機體炎性癥狀和自由基損傷。
【文檔編號】A61K31/353GK104224770SQ201310231536
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2013年6月9日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月9日
【發(fā)明者】劉艾林, 陳若蕓, 杜冠華, 祖勉, 劉超, 王洪慶, 周偉玲, 馮章英, 馬林 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所