專利名稱：降血壓多肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品領(lǐng)域，具體地說，是天然食品中水解得到的多肽作為血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angiotensin Converting Enzyme, ACE)抑制劑的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
ACE (血管緊張素轉(zhuǎn)化酶，Angiotensin Converting Enzyme)在人體內(nèi)的作用是把血管緊張素 I (Angiotensin I Converting Enzyme)轉(zhuǎn)化成血緊張素 II (Angiotensin
IIConverting Enzyme)，同時還會使血管舒緩激肽失活，而血管緊張素II為強(qiáng)烈的血管收縮物質(zhì)，從而使體內(nèi)血壓升高。ACE是一種金屬肽酶，含有I個結(jié)合Zn2+的位點(diǎn)，這就是與底物結(jié)合的“必須結(jié)合位點(diǎn)(Obligatory Binding Site)”。Zn2+結(jié)合位點(diǎn)是ACE催化反應(yīng)的活性基團(tuán)所在部位。各種ACE抑制物的共同作用是與ACE活性部位的Zn2+結(jié)合，使之失活。降血壓肽是由數(shù)個氨基酸組成的肽，是對ACE活性區(qū)域親和力較強(qiáng)的競爭性抑制劑，它們與ACE的親和力比血管緊張素轉(zhuǎn)化酶I(AngI)或舒緩激肽更強(qiáng)，而且也較不容易從ACE結(jié)合區(qū)釋放，降低ACE活性或使其失去活性，從而阻礙ACE催化血管緊張素I轉(zhuǎn)化成血管緊張素II，使血管不收縮，以及催化水解舒緩激肽成為失活片段的兩種生化反應(yīng)過程，起到降血壓的作用。
發(fā)明內(nèi)容
本申請的發(fā)明人在研究降血壓多肽的過程中發(fā)現(xiàn)，天然食品水解產(chǎn)物中得到的多肽有些具有明顯的抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)的活性；經(jīng)過大量的篩選和測序，獲得了多個具有抑制ACE活性的多肽序列。因此，本發(fā)明的第一個目的在于提供降血壓多肽，所述降血壓多肽的氨基酸序列具有 SEQ ID NO:USEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID NO:4、SEQID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7, SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14 和 SEQ ID NO: 15 中任一項(xiàng)所述的序列。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，所述降血壓多肽的氨基酸序列具有SEQ ID NO:5、SEQID NO:7和SEQ ID NO:8中任一項(xiàng)所述的序列。本發(fā)明的第二個目的在于提供所述降血壓多肽在制備降血壓藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的第三個目的在于提供所述降血壓多肽在制備食品中的應(yīng)用。本發(fā)明的第四個目的在于提供所述降血壓多肽在制備保健品中的應(yīng)用。根據(jù)本發(fā)明，所述降血壓多肽用于抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性。
本發(fā)明的有益效果:經(jīng)過大量篩選和測序，本發(fā)明從天然食品的水解物中篩選到15種降血壓多肽，均具有明顯的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的抑制活性，為治療高血壓的食品、藥物或保健品的開發(fā)利用開辟了一條全新的途徑，具有非常廣泛的應(yīng)用前景。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合具體實(shí)施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。應(yīng)理解，以下實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中，ACE抑制活性的測定原理及方法步驟如下:多肽的ACE抑制活性測定采用體外模擬測定，體外ACE抑制率測試原理為:底物馬尿酰組氨酰亮氨酸(HHL)在ACE的催化作用下，可以生產(chǎn)馬尿酸(HA)與一個組氨酸和亮氨酸結(jié)合的二肽，通過高效液相色譜的檢測方法測定馬尿酸的含量，進(jìn)而可以間接測定ACE活性；而降血壓多肽存在時可以抑制ACE的活性，致使HA的生成減少，從而間接反應(yīng)了降血壓多肽的活性。測試方法步驟如下:選取印pendof(EP)管作為反應(yīng)器，編號1、2、3、4等，I號管加Λ 20 μ L去離子水作為對照，2、3、4等管加入20 μ L的ACE抑制劑，同時各管內(nèi)加入10 μ L的底物HHL，37°C溫浴5min，然后加入10 μ L的ACE啟動反應(yīng)，在37°C水浴中反應(yīng)40min，反應(yīng)結(jié)束后,加入100 μ LlM HCl終止反應(yīng)。反應(yīng)液進(jìn)行高速離心,過0.45 μ m的濾頭，然后利用高效液相色譜(HPLC)測定。HPLC條件是:15%乙腈:85%水(0.1%TFA)，檢測波長228nm，柱溫30°C，上樣量10 μ L。ACE抑制率(X)按下式計算:X= (Α 對照-Al) /A 對照 X 100%式中:X—ACE抑制率(％)A對照一對照組生成HA的峰面積Al—實(shí)驗(yàn)組生成HA的峰面積。實(shí)施例1-15、降血壓多肽的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制活性的測定從天然食品中經(jīng)蛋白酶水解后獲得的產(chǎn)物中，經(jīng)過大規(guī)模篩選后獲得具有ACE抑制活性的多肽共15個，其氨基酸序列分別如表I中SEQ ID NO:1 SEQID NO:15所示。這些序列的長度從幾個到十幾個不等，由于序列短，即使用化學(xué)合成方法也很容易獲得，因此對于其獲得方法不再詳細(xì)描述。
`
采取體外模擬測定方法測定上述降血壓多肽對ACE的抑制活性，結(jié)果如表I所示。表1、降血壓多肽的ACE抑制活性的測定結(jié)果
權(quán)利要求
1.降血壓多肽，其特征在于，所述降血壓多肽的氨基酸序列具有SEQID NO:USEQ IDN0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID NO:8,SEQ ID NO:9,SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO: 12,SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:15中任一項(xiàng)所述的序列。
2.如權(quán)利要求1所述的降血壓多肽，其特征在于，所述降血壓多肽的氨基酸序列具有SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7 和 SEQ ID NO:8 中任一項(xiàng)所述的序列。
3.如權(quán)利要求1或2所述的降血壓多肽在制備降血壓藥物中的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求1或2所述的降血壓多肽在制備食品中的應(yīng)用。
5.如權(quán)利要求1或2所述的降血壓多肽在制備保健品中的應(yīng)用。
6.如權(quán)利要求3 5中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述降血壓多肽用于抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的活性 。
全文摘要
本發(fā)明公開了15種降血壓多肽，氨基酸序列具有SEQ ID NO1、SEQ ID NO2、SEQ ID NO3、SEQ ID NO4、SEQ ID NO5、SEQ ID NO6、SEQ ID NO7、SEQ ID NO8、SEQ ID NO9、SEQ ID NO10、SEQ ID NO11、SEQ ID NO12、SEQ ID NO13、SEQ ID NO14和SEQ ID NO15中任一項(xiàng)所述的序列。本發(fā)明提供的降血壓多肽具有明顯的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶的抑制活性，為治療高血壓的食品、藥物或保健品的開發(fā)利用開辟了一條全新的途徑，具有非常廣泛的應(yīng)用前景。
文檔編號A61K38/06GK103172698SQ20131012403
公開日2013年6月26日 申請日期2013年4月10日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月10日
發(fā)明者謝靜莉, 方明, 李鵬, 吳燕玲, 杜磊, 魏東芝 申請人:華東理工大學(xué)