專利名稱：具有抗腫瘤活性的四氫吡啶并吡喃-單克隆抗體cd14結合物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及具有抗腫瘤活性的四氫吡啶并吡喃-單克隆抗體CD14結合物及其制備方法和應用；具體 為一類能高效抑制人白血病K562細胞系、卵巢癌MDR-MB-231細胞系及肝癌SMMC-7721細胞系增殖的四氫吡啶并吡喃與單克隆抗體CD14的結合物(代號為CD14-TPP)的制備，及作為治療白血病、卵巢癌和肝癌等單抗藥物的先導化合物。屬于化學生物藥物領域。
背景技術：
白血病、卵巢癌及肝癌是發(fā)病率很高的三大常見惡性腫瘤，然而現(xiàn)有技術沒有理想的聞效治療上述癌癥的藥物。白血病是一類造血干細胞克隆性疾病。好發(fā)于青少年，其發(fā)病率排在青少年腫瘤的第一位，所以對人類的危害更為明顯和突出。慢性白血病中的K562細胞系，因其自身凋亡的抵抗力強于其他細胞系，為此，抑制K562細胞的增殖成為治療白血病非常重要的手段。卵巢癌是女性最常見的腫瘤之一，雖然其發(fā)病率僅次于子宮頸癌和子宮體癌而列居第三位，然而因卵巢癌致死者卻占各類婦科腫瘤的首位，對婦女生命造成嚴重威脅。。肝癌是死亡率僅次于胃癌和食道癌的第二大常見惡性腫瘤。肝癌中的SMMC-7721細胞系，其抵抗凋亡的能力比其他肝癌細胞系強，為此，抑制SMMC-7721細胞系的增殖成為治療肝癌的重要手段。然而，現(xiàn)在臨床上常用的化療藥物的共同的缺點是選擇性不強，對正常細胞和腫瘤細胞幾乎具有相同的殺傷作用，因此，毒性較大，對骨髓、消化道細胞和生殖細胞也有很強的殺傷作用。據(jù)公開號為CN102285993A的專利報道，四氫吡啶并吡喃衍生物(I )(簡寫為TPP)具有高效抑制人白血病K562細胞、卵巢癌MDR-MB-231細胞及肝癌SMMC-7721細胞的增殖的生物活性，其抑制上述三種癌細胞增殖的IC5tl均值低于抗癌藥5-氟尿嘧啶，具有潛在的實用性。然而，四氫吡啶并吡喃衍生物TPP的選擇性不高，對正常細胞有一定的毒性，在一定程度上限制了它們在抗癌藥物上的應用。為了解決上述問題，近年來已有將抗癌藥與單克隆抗體(簡稱單抗)結合，制成單克隆抗體藥物(簡稱單抗藥物)的相關報道，單抗藥物能對腫瘤相關靶點顯示特異性結合，對腫瘤細胞有選擇性殺傷作用，并在動物實驗中有顯著的療效。為此，研制單抗藥物有巨大的潛力，單抗藥物將在腫瘤治療中發(fā)揮重要作用。由于編碼為⑶14的單克隆抗體(簡稱單抗⑶14)對人白血病K562、卵巢癌MDR-MB-231及肝癌SMMC-7721等細胞系具有高度特異性，將其與具有高效抑制人白血病K562細胞系、卵巢癌MDR-MB-231細胞系及肝癌SMMC-7721細胞系增殖活性的四氫吡啶并吡喃衍生物(代號為TPP) (I )結合，制成TPP與單抗CD14結合的單抗藥物先導化合物(代號為⑶14-TPP) (II )，使⑶14-TPP能靶向于特定的腫瘤細胞，大大降低其對正常組織細胞的毒性。為此，單抗藥物先導化合物CDH-TPP(II)有望成為極具臨床應用潛力的抗癌新藥。
發(fā)明內容
本發(fā)明目的是為了提供一類具有抗腫瘤活性的四氫吡啶并吡喃-單克隆抗體⑶14結合物(簡寫為⑶14-TPP)，該⑶14-TPP結合物是一類可作為治療白血病、卵巢癌和肝癌藥物的單抗藥物的先導化合物。本發(fā)明的第二個目的是為了提供該單抗藥物的先導化合物CD14-TPP的制備方法。本發(fā)明的第三個目的是將該單抗藥物的先導化合物CD14-TPP用于制備治療白血病、卵巢癌和肝癌的抗腫瘤藥物。⑶14-TPP能高效抑制人白血病K562細胞、卵巢癌MDR-MB-231細胞及肝癌SMMC-7721細胞的增殖，其抑制上述三種癌細胞增殖的IC5tl均值低于抗癌藥5-氟尿嘧啶。該CD14-TPP體內急性毒性低，對小鼠正常骨髓細胞的毒性較低，具有潛在的實用性。本發(fā)明的目的是通過以下技術方案來實現(xiàn)的。本發(fā)明提供的單抗藥物的先導化合物⑶14-TPP，具有高效抑制人白血病K562細胞系、卵巢癌MDR-MB-231細胞系及肝癌SMMC-7721細胞系增殖的活性，且對小鼠正常骨髓細胞的毒性較低，該抗白血病、卵巢癌和肝癌的單抗藥物的先導化合物CD14-TPP的結構式如式(II)所示
權利要求
1.具有抗腫瘤活性的四氫吡啶并吡喃-單克隆抗體CD14結合物，其特征在于結構式如式(II)所示
2.根據(jù)權利要求I所述的具有抗腫瘤活性的四氫吡啶并吡喃-單克隆抗體CD14結合物，其特征在于=R2中苯基、芐基、吡啶基和四氫呋喃基中的取代基為C「C6的烴基,C1-C6的烴氧基，氟，氯，溴，氰基，硝基，羧基，酯基，羰基和磺酸基等中的一種或兩種。
3.權利要求I所述具有抗腫瘤活性的四氫吡啶并吡喃-單克隆抗體CD14結合物的制備方法，其特征在于具體步驟如下 取IOmg式(I )化合物，溶于O. ImL DMSO中，向上述溶液中依次加入濃度為O. lmol/L的DCC溶液O. ImL和濃度為2 μ g/mL的⑶14 O. 05、. 2mL,然后用生理鹽水將上述混合溶液稀釋至lmL。37°C反應2(Tl20min，得到式(II)結合物；反應方程式為
4.根據(jù)權利要求3所述的制備方法，其特征在于濃度為2μ g/mL的CD14的用量為O.ImL ;37°C 反應時間為 30min。
5.根據(jù)權利要求I所述的具有抗腫瘤活性的四氫吡啶并吡喃-單克隆抗體CD14結合物，其特征在于應用于制備治療白血病、卵巢癌和肝癌藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一類具有抗腫瘤活性的四氫吡啶并吡喃-單克隆抗體CD14結合物及其制備方法和應用，這種結合物的結構如式(Ⅱ)所示在縮合劑DCC的作用下，CD14單抗分子中碳端的氨基酸殘基與四氫吡啶并吡喃衍生物中吡喃環(huán)上的氨基結合，得到通式為式(Ⅱ)的單克隆抗體結合物CD14-TPP。CD14-TPP能高效抑制人白血病K562細胞系、卵巢癌MDR-MB-231細胞系及肝癌SMMC-7721細胞系增殖，其抑制上述三種癌細胞系增殖的IC50值均明顯低于常規(guī)化療藥物5-氟尿嘧啶(5Fu)。式(Ⅱ)結合物對小鼠正常骨髓細胞的毒性較低，可用于制備治療白血病、卵巢癌及肝癌的藥物。
文檔編號A61K47/48GK102898522SQ201210401778
公開日2013年1月30日 申請日期2012年10月19日 優(yōu)先權日2012年10月19日
發(fā)明者孫傳文, 肖笛, 李靜, 薛思佳, 李興玉 申請人:上海師范大學