胡蘆巴總黃酮有效部位制備及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了胡蘆巴中總黃酮有效部位制備方法及應(yīng)用。本發(fā)明在提取過程中先采用滲漉提取法，提取液經(jīng)乙酸乙酯脫脂后，用大孔吸附樹脂進(jìn)行純化，得到含量在60％以上的葫蘆巴總黃酮有效部位。藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該胡蘆巴中總黃酮有效部位對(duì)糖尿病、高血脂方面的疾病具有明顯的治療作用。
【專利說明】胡蘆巴總黃酮有效部位制備及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥提取及應(yīng)用領(lǐng)域，特別涉及一種從葫蘆巴中提取總黃酮的方法及其總黃酮有效部位的應(yīng)用。
技術(shù)背景
[0002]胡蘆巴為豆科植物胡蘆巴屬胡蘆巴(Trigonella foenum-graecum L.)的種子，是一種傳統(tǒng)的中藥材，被多部中藥典籍收錄，記載其有“溫潤陽，逐寒濕?！钡淖饔?。胡蘆巴種子即是一種中草藥又是一種調(diào)味劑，在我國、印度、地中海國家都有種植和應(yīng)用。胡蘆巴干燥成熟種子作為常用中藥已收入《中華人民共和國藥典》。
[0003]胡蘆巴的報(bào)道較多，其中涉及皂苷、黃酮的提取及藥理學(xué)應(yīng)用。中國專利200410070104.6公開了一種從胡蘆巴提取物，其包括多糖、總黃酮、皂苷三種有效成分，同時(shí)記載了其提取物中總黃酮含量低于15%。中國專利200610066235.6公開了一種胡蘆巴提取物，其中記載了一種總黃酮的提取方法，但未提及總黃酮的含量。中國專利200410029927.4公開了一種從胡蘆巴中提取黃酮的方法，其中未記載黃酮的含量。中國專利201110375609.3公開了一種通過超聲波提取，大孔樹脂分離純化得到黃酮的方法，其總黃酮含量低于30%。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)中報(bào)道的從胡蘆巴中提取得到的總黃酮含量都低于30%，達(dá)不到中藥5類的標(biāo)準(zhǔn)。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]為了解決現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明人提出一種新的從胡蘆巴中提取總黃酮的方法，包括以下步驟:
[0006]a、將胡蘆巴種子按常規(guī)方法粉碎后過二號(hào)篩；
[0007]b、將胡蘆巴粗粉用醇水溶液滲漉提?。?br>
[0008]C、將滲漉液濃縮至無醇得到濃縮液，濃縮液用其體積1/2~1/5的乙酸乙酯萃取I~3次，以便除去其中所含的脂；
[0009]d、萃取過的濃縮液濃縮至無乙酸乙酯，得液體I ;
[0010]e、液體I經(jīng)大孔樹脂(徑高比1: 9~1: 15)純化，洗脫順序?yàn)?
[0011]2~5個(gè)柱體積的水洗脫；
[0012]2~5個(gè)柱體積20%~40%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥得總黃酮。
[0013]本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選方案是步驟b中所述的醇水為甲醇的水溶液、乙醇的水溶液、丙醇的水溶液、異丙醇的水溶液中的一種或幾種的混合，優(yōu)選乙醇的水溶液。
[0014]本發(fā)明先用乙酸乙酯萃取提取液中的脂溶性成分，有利于后續(xù)純化，提高總黃酮有效部位的含量。
[0015]本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選方案是步驟e中所用的大孔樹脂優(yōu)選HPD600型大孔樹脂。
[0016]本發(fā)明的又一個(gè)優(yōu)選方案是步驟e中所述的徑高比優(yōu)選1: 10。[0017]本發(fā)明的又一個(gè)優(yōu)選方案是步驟e中所述的20%~40%醇水洗脫液為甲醇的水溶液、乙醇的水溶液、丙醇的水溶液、異丙醇的水溶液中的一種或幾種，進(jìn)一步優(yōu)選25%~35%的乙醇水溶液。
[0018]本發(fā)明的又一個(gè)優(yōu)選方案是按上述方法所得到的提取物中總黃酮含量在60%以上。
[0019]本發(fā)明的目的還在于提供一種含有從胡蘆巴中提取得到的總黃酮的藥物或食品。
[0020]本發(fā)明所述的含有總黃酮的藥物具有治療糖尿病的作用。
[0021]本發(fā)明所述的含有總黃酮的食品用于改善糖尿病人的病癥。
[0022]本發(fā)明所述的胡蘆巴提取物與醫(yī)藥上可接受的輔料按常規(guī)制劑方法制成口服制劑，優(yōu)選片劑、膠囊劑。
[0023]胡蘆巴提取物中總黃酮含量的測定，胡蘆巴當(dāng)中的黃酮類物質(zhì)主要為黃酮苷，以葒草素為其標(biāo)示性成分，通過HPLC法測定。
[0024]HPLC檢測條件:用C18柱測定，流動(dòng)相乙腈:異丙醇:水=8: 4: 88，流動(dòng)相用磷酸調(diào)節(jié)PH值等于3.2，檢測波長為334nm，理論板數(shù)按葒草素計(jì)算應(yīng)不低于3000。
[0025]本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):提取工藝簡單，提取時(shí)間短，大孔樹脂純化工藝簡單，從胡蘆巴中提取得到的總黃酮含量大于60%，符合中藥有效部位入藥標(biāo)準(zhǔn)。
【具體實(shí)施方式】
[0026]實(shí)施例1
[0027]本發(fā)明葫蘆巴總黃酮有效部位的制備:
[0028]稱取500克粉碎的葫蘆巴，過二號(hào)篩，加入滲漉桶中，以60%乙醇浸潰、滲漉，滲漉速度3mL/min，收集IOL滲漉液，濃縮至無醇得濃縮液，用濃縮液體積1/2的乙酸乙酯萃取兩次后，濃縮液濃縮至無乙酸乙酯，得液體I。液體I上HPD600大孔樹脂(徑高比1: 9)，依次用4個(gè)柱體積的水，3個(gè)柱體積的30 %乙醇洗脫，收集合并30 %的乙醇洗脫液，濃縮、干燥得葫蘆巴總黃酮提取物，含總黃酮65%。
[0029]實(shí)施例2
[0030]稱取500克粉碎的葫蘆巴，過二號(hào)篩，加入滲漉桶中，以60%乙醇浸潰、滲漉，滲漉速度3mL/min，收集IOL滲漉液，濃縮至無醇得濃縮液，用濃縮液體積1/3的乙酸乙酯萃取一次后，濃縮液濃縮至無乙酸乙酯，得液體I。液體I上HPD600大孔樹脂(徑高比1: 12)，依次用3個(gè)柱體積的水，2個(gè)柱體積的40 %乙醇洗脫，收集合并40 %的乙醇洗脫液，濃縮、干燥得葫蘆巴總黃酮提取物，含總黃酮70%。
[0031]實(shí)施例3
[0032]稱取500克粉碎的葫蘆巴，過二號(hào)篩，加入滲漉桶中，以60%丙醇浸潰、滲漉，滲漉速度3mL/min，收集IOL滲漉液，濃縮至無醇得濃縮液，用濃縮液體積1/5的乙酸乙酯萃取兩次后，濃縮液濃縮至無乙酸乙酯，得液體I。液體I上D201大孔樹脂(徑高比1: 15)，依次用4個(gè)柱體積的水，3個(gè)柱體積的20 %丙醇洗脫，收集合并20 %的丙醇洗脫液，濃縮、干燥得葫蘆巴總黃酮提取物，含總黃酮62%。
[0033]實(shí)施例4
[0034]稱取500克粉碎的葫蘆巴，過二號(hào)篩，加入滲漉桶中，以60%乙醇浸潰、滲漉，滲漉速度3mL/min，收集IOL滲漉液，濃縮至無醇得濃縮液，用濃縮液體積1/4的乙酸乙酯萃取三次后，濃縮液濃縮至無乙酸乙酯，得液體I。液體I上NKA-9大孔樹脂(徑高比1: 10)，依次用5個(gè)柱體積的水，5個(gè)柱體積的30 %乙醇洗脫，收集合并30 %的乙醇洗脫液，濃縮、干燥得葫蘆巴總黃酮提取物，含總黃酮68%。
[0035]實(shí)施例5
[0036]片劑制備:從胡蘆巴中提取得到的總黃酮提取物180g，羥丙基甲基纖維素160g，微粉硅膠58g，硬脂酸鎂2g，混合均勻，過80目篩，干壓法制粒，用20目篩整粒，壓片。
[0037]實(shí)施例6
[0038]膠囊劑制備:胡蘆巴中提取的總黃酮提取物200g，加入預(yù)膠化淀粉80g，以95%乙醇作為黏合劑，過20目篩制軟材，60°C干燥，整粒，干顆粒加入過100目的交聯(lián)CMC-Nal2g和微粉硅膠3g混勻，測定顆粒中指標(biāo)成份的含量，裝膠囊，制得膠囊劑。
[0039]實(shí)施例7
[0040]葫蘆巴總黃酮有效部位對(duì)糖尿病大鼠的降血糖作用研究實(shí)驗(yàn):
[0041]選體重170~200g的Wistar健康大鼠，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)組大鼠單次腹腔注射鏈脲佐菌素50mg/kg(溶于0.lmol/L檸檬酸緩沖液，pH = 4.2)制備糖尿病模型。注射鏈脲佐菌素3天后檢測血糖和尿糖。尿糖> 3+，血糖> 16.7mmol/L列入糖尿病研究對(duì)象。對(duì)照組同時(shí)腹腔注射等體積上述緩沖液。
[0042]實(shí)驗(yàn)方法一:將成模的糖尿病大鼠隨機(jī)分為糖尿病組、陽性對(duì)照組和葫蘆巴提取物高、中、低劑量組，另設(shè)正常對(duì) 照組。葫蘆巴提取物高、中、低劑量治療組灌胃給予葫蘆巴提取物1.5mL/100g體重(分別相當(dāng)于葫蘆巴提取物400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg體重)。陽性對(duì)照藥洛汀新灌胃給予15mg/kg體重(1.5mL/100g體重)，對(duì)照組合糖尿病組僅灌胃給予1.5mL/100g體重飲用水。每日灌胃I次，共12周。
[0043]實(shí)驗(yàn)方法二:將成模的糖尿病大鼠隨機(jī)分為糖尿病組和葫蘆巴提取液治療組，另設(shè)正常對(duì)照組。葫蘆巴提取液治療組灌胃給予葫蘆巴提取液1.5mL/100g體重(相當(dāng)于葫蘆巴提取物400mg/kg體重)。對(duì)照組和糖尿病組僅灌胃給予1.5mL/100g體重飲用水。實(shí)驗(yàn)共6周。
[0044]統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:數(shù)據(jù)結(jié)果以X±S表示，組間比較采用方差分析。
[0045]1.葫蘆巴提取物對(duì)糖尿病大鼠血糖影響的時(shí)效關(guān)系
[0046]按實(shí)驗(yàn)方法一,于給藥前及給藥后的第3周、4周、6周、8周和12周各檢測血糖含量，結(jié)果見表1。
[0047]表1葫蘆巴提取物對(duì)糖尿病大鼠血糖影響的時(shí)效關(guān)系(f±SD)
[0048]
【權(quán)利要求】
1.一種從胡蘆巴種子中提取總黃酮有效部位的方法，其特征在于提取包括以下步驟: a、將胡蘆巴種子按常規(guī)方法粉碎后過二號(hào)篩； b、將胡蘆巴粗粉用醇水溶液滲漉提取； C、將滲漉液濃縮至無醇得到濃縮液，濃縮液用其體積1/2~1/5的乙酸乙酯萃取I~3次； d、萃取過的濃縮液濃縮至無乙酸乙酯，得液體I; e、液體I經(jīng)大孔樹脂(徑高比1: 9~1: 15)純化，洗脫順序?yàn)? 2~5個(gè)柱體積的水洗脫； 2~5個(gè)柱體積20%~40%的醇水洗脫，收集醇水洗脫液，濃縮干燥得胡蘆巴提取物，其中總黃酮含量在60%以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中e步驟所述，其特征在于優(yōu)選HPD600大孔樹脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1中e步驟所述，其特征還在于優(yōu)選3~4個(gè)柱體積水洗脫。
4.根據(jù)權(quán)利要求1中e步驟所述，其特征還在于優(yōu)選3~4個(gè)柱體積20%~40 %的醇水洗脫。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述，其特征在于醇水濃度優(yōu)選25%~35%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1中`的e步驟所述，其特征在于醇水為甲醇的水溶液、乙醇的水溶液、丙醇的水溶液、異丙醇的水溶液中的一種或幾種的混合，優(yōu)選乙醇的水溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于得到的總黃酮用于制備治療糖尿病、高血脂的藥物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于得到的總黃酮用于制備改善糖尿病、高血脂的食品。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或7所述，其特征在于從胡蘆巴種子中提取得到的總黃酮與藥學(xué)上可接受的輔料按照常規(guī)制劑方法制成口服制劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述，其特征在于口服制劑優(yōu)選片劑、膠囊劑。
【文檔編號(hào)】A61P3/06GK103505498SQ201210232186
【公開日】2014年1月15日 申請(qǐng)日期:2012年6月29日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月29日
【發(fā)明者】顏克序, 李冠業(yè) 申請(qǐng)人:北京星昊醫(yī)藥股份有限公司