專利名稱：毛蕊異黃酮在制備抗血管性癡呆的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及毛蕊異黃酮的應(yīng)用，具體地說，涉及毛蕊異黃酮在制備抗血管性癡呆的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
血管性癡呆(Vascular Dementia, VD)是指因各種腦血管疾病引起的腦功能障礙而產(chǎn)生的獲得性智能損害綜合癥。以記憶、認(rèn)知功能缺損為主，可伴有言語、運(yùn)動(dòng)、視空間及人格障礙為主要臨床表現(xiàn)的ー組神智異常癥候群。在各種腦血管疾病中，缺血性腦病的發(fā)病率最高，也是血管性癡呆最主要的致病因素。研究表明，腦缺血引起的遲發(fā)性神經(jīng)元損傷以細(xì)胞凋亡為主，而大腦海馬區(qū)神經(jīng)元凋亡與學(xué)習(xí)記憶密切相關(guān)，是導(dǎo)致學(xué)習(xí)、記憶障礙的重要因素，這也是目前研究血管性癡呆的 熱點(diǎn)之一。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，凋亡的發(fā)生既是凋亡相關(guān)基因表達(dá)的結(jié)果，又受許多內(nèi)外因素的調(diào)節(jié)?？赡芘c以下幾個(gè)因素有夫①缺血缺氧本身激活了凋亡發(fā)生基因；②腦缺血再灌注后產(chǎn)生大量自由基對(duì)神經(jīng)細(xì)胞造成嚴(yán)重?fù)p傷的同時(shí)，也誘導(dǎo)了凋亡的發(fā)生Ca2+超載激活一系列鈣依賴性酶促反應(yīng)，促進(jìn)了凋亡的發(fā)生。目前，血管性癡呆的治療以改善血管功能、控制癡呆癥狀為主要治療目的。常用的治療藥物包括①胞ニ磷膽堿，促進(jìn)葡萄糖吸收、代謝，繼發(fā)擴(kuò)張腦血管，改善腦細(xì)胞營養(yǎng)代謝；②氫化麥角堿，直接擴(kuò)張大腦血管；③金剛烷胺，促進(jìn)多巴胺釋放，抑制其重?cái)z取；
④高泛酸鈣，促進(jìn)葡萄糖的腦內(nèi)吸收和代謝，増加腦組織內(nèi)5-羥色胺濃度和腦血流量； 卵磷脂，屬于こ酰膽堿前體藥物，増加こ酰膽堿系統(tǒng)的功能毒扁豆堿，屬于膽堿脂酶抑制劑，増加こ酰膽堿系統(tǒng)的功能 ’⑦神經(jīng)肽，屬于神經(jīng)營養(yǎng)藥物，提高老年人認(rèn)識(shí)、記憶能力·’⑧甲硫達(dá)嗪，控制血管性癡呆患者急躁和過激行為；⑨利他林，改善血管性癡呆患者抑郁癥狀；⑩安定，改善血管性癡呆患者焦慮癥狀。毛蕊異黃酮，提取于豆科草本植物膜莢黃苗[Astragalus membranaceus(Fisch. ) Bge.]、內(nèi)蒙負(fù)民[Astragalus membranaceus (Fiscn.) Bge. ver. Mongholicus(Bge.) Hsiao]的根。C16H12O5,分子量:284. 26，CAS 登錄號(hào)=20575-57-9,英文名稱/-hydroxy-3-(3_hydroxy-4- methoxyphenyl)-4H-chromen-4-one, InChI= I/C16H1205/cl- 20-14-5-2 -9(6-13 (14)18)12—8—2卜15-7—10 (17)3-4-11(15)16 (12)19/h2-8，17-18H, 1H3。我們研究發(fā)現(xiàn)，毛蕊異黃酮可以有效抑制血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈及大腦海馬區(qū)椎體細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，提高大腦基底動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)，增強(qiáng)血管性癡呆大鼠的認(rèn)知、學(xué)習(xí)和記憶能力，明顯減輕血管性癡呆癥狀。治療效果優(yōu)于麥角新堿、胞ニ磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供毛蕊異黃酮在制備抗血管性癡呆的藥物方面的新用途。具體地說，本發(fā)明涉及毛蕊異黃酮在制備抗血管性癡呆的藥物中的應(yīng)用。
其中，所述血管性癡呆，其特征在于，因各種腦血管疾病引起的腦功能障礙而產(chǎn)生的獲得性智能損害綜合癥，以記憶、認(rèn)知功能缺損為主，可伴有言語、運(yùn)動(dòng)、視空間及人格障礙為主要臨床表現(xiàn)的ー組神智異常癥候群。本發(fā)明所述毛蕊異黃酮提取于豆科草本植物膜莢黃芪[Astragalusmembranaceus (Fisch. ) Bge.]、內(nèi)蒙黃運(yùn)[Astragalus membranaceus (Fisch. ) Bge.ver. Mongholicus (Bge. ) Hsiao]的豐R0本發(fā)明所述藥物是指以毛蕊異黃酮為主要活性成分，與可藥用載體制成的醫(yī)療上可接受的制劑，如片劑、丸劑或膠囊劑等。本發(fā)明所述藥物，其服用量以毛蕊異黃酮計(jì)成人，2(T25mg/次，3次/日；兒童，
O.2^0. 25mg/kg 次，3次/日，即可達(dá)到抑制血管性癡呆臨床癥狀的效果，特別地，孕婦等特殊人群服用時(shí)需遵醫(yī)囑。本發(fā)明所述毛蕊異黃酮可以直接通過市售得到，也可以通過植物提取得到。本發(fā)明通過大鼠跳臺(tái)試驗(yàn)、大鼠避暗試驗(yàn)證明了天然產(chǎn)物毛蕊異黃酮可以有效增強(qiáng)血管性癡呆大鼠的認(rèn)知、學(xué)習(xí)、記憶能力，治療效果優(yōu)于麥角新堿、胞ニ磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂。本發(fā)明通過離體血管環(huán)試驗(yàn)證明了天然產(chǎn)物毛蕊異黃酮可以増加血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)。本發(fā)明通過光鏡觀察發(fā)現(xiàn)，血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈血管內(nèi)膜出現(xiàn)明顯斷裂痕跡，內(nèi)膜皺褶增多，脂質(zhì)于內(nèi)皮下沉積；血管內(nèi)膜下平滑肌層細(xì)胞排列紊亂，肌層出現(xiàn)明 顯斷裂、融合現(xiàn)象，延續(xù)性較差，肌細(xì)胞間纖維組織增生；肌層下纖維結(jié)締組織疏松，肌層與結(jié)締組織界限不清楚。天然產(chǎn)物毛蕊異黃酮明顯抑制血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈血管內(nèi)膜的形態(tài)學(xué)變化。本發(fā)明通過電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞膜出現(xiàn)破裂現(xiàn)象，平滑肌細(xì)胞延伸入內(nèi)皮細(xì)胞胞漿；內(nèi)皮基膜斷裂，斷裂處有大量膠原纖維組織增生；內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)高爾基體增多，線粒體腫脹、嵴融合或缺失。天然產(chǎn)物毛蕊異黃酮明顯抑制血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。本發(fā)明通過光鏡觀察發(fā)現(xiàn)，血管性癡呆大鼠大腦海馬區(qū)三層錐體細(xì)胞排列紊亂、錐體細(xì)胞腫脹、炎細(xì)胞浸潤、星形膠質(zhì)細(xì)胞增生、部分錐體細(xì)胞胞體變小或呈三角形、頂樹突延長、核固縮和破裂、胞漿嗜伊紅色、基質(zhì)疏松伴微空泡形成、血管周圍有紅細(xì)胞滲出等形態(tài)學(xué)改變。天然產(chǎn)物毛蕊異黃酮明顯抑制血管性癡呆大鼠大腦海馬區(qū)錐體細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。本發(fā)明通過電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，血管性癡呆大鼠大腦海馬區(qū)錐體細(xì)胞胞核固縮、染色質(zhì)聚集、異染色質(zhì)增多、核周高電子密度團(tuán)塊出現(xiàn)、線粒體嵴融合等形態(tài)學(xué)改變。天然產(chǎn)物毛蕊異黃酮明顯抑制血管性癡呆大鼠大腦海馬區(qū)錐體細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。本發(fā)明的有益效果在干
I、本發(fā)明提供了天然產(chǎn)物毛蕊異黃酮的新用途，其對(duì)血管性癡呆癥狀有很好的抑制作用。毛蕊異黃酮可以有效抑制血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈及大腦海馬區(qū)皮層椎體細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，提高大腦基底動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)，增強(qiáng)血管性癡呆大鼠的認(rèn)知、學(xué)習(xí)和記憶能力，明顯減輕血管性癡呆癥狀。治療效果優(yōu)于氫化麥角堿、胞ニ磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂。
2、本發(fā)明采用的毛蕊異黃酮提取來自純天然原料，化學(xué)結(jié)構(gòu)和分子量明確，質(zhì)量可控，符合國際市場第三代中藥產(chǎn)品的要求，有廣闊的市場前景。如果研究成功，將提高我國傳統(tǒng)中藥的國際地位，對(duì)保障人類健康及提高老年人生活質(zhì)量做出貢獻(xiàn)。
圖I 毛蕊異黃酮對(duì)血管性癡呆大鼠跳臺(tái)、避暗試驗(yàn)潛伏期的影響(
i ±s)(與血管性癡呆模型組比較，*P〈0. 05 ;與高劑量毛蕊異黃酮組比較，#<0. 05)。試驗(yàn)
結(jié)果顯示，毛蕊異黃酮明顯提高血管性癡呆大鼠跳臺(tái)、避暗試驗(yàn)潛伏期，并且具有顯著的劑量依賴性；與氫化麥角堿、胞ニ磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂對(duì)照組比較，有明顯差異(P < O. 05)。
圖2毛蕊異黃酮對(duì)血管性癡呆大鼠跳臺(tái)、避暗試驗(yàn)錯(cuò)誤次數(shù)的影響Gi 土s)(與血管性癡呆模型組比較，*P〈0.05 ;與高劑量毛蕊異黃酮組比較，#〈0.05)。試驗(yàn)結(jié)果顯示，毛蕊異黃酮明顯減少血管性癡呆大鼠跳臺(tái)、避暗試驗(yàn)錯(cuò)誤次數(shù)，并且具有顯著的劑量依賴性；與氫化麥角堿、胞ニ磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂對(duì)照組比較，有明顯差異(P< O. 05)。圖3 毛蕊異黃酮對(duì)血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)的影響(與血管性癡呆模型組比較，*p〈0. 05 ;與氫化麥角堿組比較，#<0. 05)。試驗(yàn)結(jié)果顯示，毛蕊異黃酮明顯增加血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)；與氫化麥角堿對(duì)照組比較，有明顯差異(P < O. 05)。圖4 毛蕊異黃酮對(duì)血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈內(nèi)膜形態(tài)學(xué)的影響(光鏡400X )。血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈血管內(nèi)膜出現(xiàn)明顯斷裂痕跡，內(nèi)膜皺褶增多，脂質(zhì)于內(nèi)皮下沉積；血管內(nèi)膜下平滑肌層細(xì)胞排列紊亂，肌層出現(xiàn)明顯斷裂、融合現(xiàn)象，延續(xù)性較差，肌細(xì)胞間纖維組織增生；肌層下纖維結(jié)締組織疏松，肌層與結(jié)締組織界限不清楚。天然產(chǎn)物毛蕊異黃酮明顯抑制血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈血管內(nèi)膜的形態(tài)學(xué)變化。圖5 毛蕊異黃酮對(duì)血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈內(nèi)膜形態(tài)學(xué)的影響(電鏡8000X )。血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞膜出現(xiàn)破裂現(xiàn)象，平滑肌細(xì)胞延伸入內(nèi)皮細(xì)胞胞漿；內(nèi)皮基膜斷裂，斷裂處有大量膠原纖維組織增生；內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)高爾基體增多，線粒體腫脹、嵴融合或缺失。天然產(chǎn)物毛蕊異黃酮明顯抑制血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。圖6 毛蕊異黃酮對(duì)血管性癡呆大鼠大腦海馬區(qū)錐體細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響(光鏡400X)。血管性癡呆大鼠大腦海馬區(qū)三層錐體細(xì)胞排列紊亂；部分錐體細(xì)胞腫脹，并有炎細(xì)胞浸潤，星形膠質(zhì)細(xì)胞增生；部分錐體細(xì)胞胞體變小或呈三角形，頂樹突延長，有核固縮和破裂現(xiàn)象，胞漿呈均勻嗜伊紅色；部分錐體細(xì)胞胞核變淺，基質(zhì)疏松伴微空泡形成；血管周圍有紅細(xì)胞滲出，個(gè)別可見小血管增生。天然產(chǎn)物毛蕊異黃酮明顯抑制血管性癡呆大鼠大腦海區(qū)錐體細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。圖7 毛蕊異黃酮對(duì)血管性癡呆大鼠大腦海馬區(qū)錐體細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響(電鏡8000X)。血管性癡呆大鼠大腦海馬區(qū)錐體細(xì)胞胞核固縮，染色質(zhì)聚集成團(tuán)、邊集，異染色質(zhì)增多，核周可見高電子密度團(tuán)塊；線粒體腫脹，有嵴融合并出現(xiàn)空泡變性。毛蕊異黃酮明顯抑制血管性癡呆大鼠大腦海區(qū)錐體細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。
具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施例及試驗(yàn)例來進(jìn)ー步闡述本發(fā)明的毛蕊異黃酮的新用途及其有益效果，但不用來限制本發(fā)明的范圍。試驗(yàn)例I :檢測毛蕊異黃酮對(duì)大鼠跳臺(tái)、避暗試驗(yàn)的影響。I、藥物毛蕊異黃酮(上海科興商貿(mào)有限公司)、氫化麥角堿(上海華太藥業(yè)股份有限公司)、胞ニ磷膽堿(蘇州天馬精細(xì)化學(xué)品股份有限公司)、高泛酸鈣(上海佳倫生物科技有限公司)、金剛烷胺(石家莊市三和藥業(yè)有限公司)、卵磷脂(廣州邦利生物科技有限公司)。2、儀器大鼠跳臺(tái)記錄系統(tǒng)(淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司)、大鼠避暗儀(淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司)。 3、動(dòng)物Sprague-Dawley (SD)大鼠,6周齡、雄性、18(T220g、清潔級(jí)(河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。4、實(shí)驗(yàn)分組分組 ①空白對(duì)照組健康SD大鼠20只，每天清晨空腹三蒸水灌胃(灌胃容量為10ml/kg)，連續(xù)灌胃8周 級(jí)血管性癡呆模型組2V0法制備血管性癡呆大鼠模型20只低劑量毛蕊異黃酮組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹毛蕊異黃酮溶液灌胃(灌胃濃度O. 5mg/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續(xù)灌胃8周；④中劑量毛蕊異黃酮組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹毛蕊異黃酮溶液灌胃(灌胃濃度1.0mg/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續(xù)灌胃8周； 高劑量毛蕊異黃酮組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹毛蕊異黃酮溶液灌胃(灌胃濃度2. Omg/kg,灌胃容量為IOml/kg)給藥，連續(xù)灌胃8周； 氫化麥角堿組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹氫化麥角堿溶液灌胃(灌胃濃度2. Omg/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續(xù)灌胃8周 ’⑦胞ニ磷膽堿組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹胞ニ磷膽堿溶液灌胃(灌胃濃度I. Omg/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續(xù)灌胃8周；⑧高泛酸鈣組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹高泛酸鈣溶液灌胃(灌胃濃度2mg/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續(xù)灌胃8周金剛烷胺組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹金剛烷胺溶液灌胃(灌胃濃度O. 5mg/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續(xù)灌胃8周；⑩卵磷脂組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹卵磷脂溶液灌胃(灌胃濃度O. 2mg/kg,灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續(xù)灌胃8周。5、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容大鼠跳臺(tái)試驗(yàn)、大鼠避暗試驗(yàn)。6、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差Ge 士 S)表示。組間差異比較用ANOVA及Newman-Student多重比較；t檢驗(yàn)分析，由SPSS 13. O統(tǒng)計(jì)軟件完成,雙側(cè)P < O. 05認(rèn)為差異有顯著性。7、結(jié)果
7. I 毛蕊異黃酮對(duì)血管性癡呆大鼠跳臺(tái)試驗(yàn)的影響試驗(yàn)結(jié)果顯示，毛蕊異黃酮明顯提高血管性癡呆大鼠跳臺(tái)試驗(yàn)潛伏期、減少錯(cuò)誤次數(shù)，并且具有顯著的劑量依賴性；與氫化麥角堿、胞ニ磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂對(duì)照組比較，存在明顯的差異(P<0.05)。(結(jié)果見表I)注與血管性癡呆模型組比較，*Ρ〈0. 05 ;與高劑量毛蕊異黃酮組比較，#<0. 05。7. 2 毛蕊異黃酮對(duì)血管性癡呆大鼠避暗試驗(yàn)的影響試驗(yàn)結(jié)果顯示，毛蕊異黃酮明顯提高血管性癡呆大鼠避暗試驗(yàn)潛伏期，減少錯(cuò)誤次數(shù)，并且具有顯著的劑量依賴性；與氫化麥角堿、胞ニ磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂對(duì)照組比較，存在明顯的差異(P<0.05)。(結(jié)果見表2)
表2毛蕊異黃酮對(duì)血管性癡呆大鼠避暗試驗(yàn)的影響(土 s)注與血管性癡呆模型組比較，*Ρ〈0. 05 ;與高劑量毛蕊異黃酮組比較，#<0. 05。7. 3 毛蕊異黃酮對(duì)血管性癡呆大鼠跳臺(tái)、避暗試驗(yàn)潛伏期的影響試驗(yàn)結(jié)果顯示，毛蕊異黃酮明顯提高血管性癡呆大鼠跳臺(tái)、避暗試驗(yàn)潛伏期，并且具有顯著的劑量依賴性；與氫化麥角堿、胞ニ磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂對(duì)照組比較，存在明顯的差異(P < 0.05)。(結(jié)果見圖I)
7.4 毛蕊異黃酮對(duì)血管性癡呆大鼠跳臺(tái)、避暗試驗(yàn)錯(cuò)誤次數(shù)的影響試驗(yàn)結(jié)果顯示，毛蕊異黃酮明顯減少血管性癡呆大鼠跳臺(tái)、避暗試驗(yàn)錯(cuò)誤次數(shù)，并且具有顯著的劑量依賴性；與氫化麥角堿、胞ニ磷膽堿、高泛酸鈣、金剛烷胺、卵磷脂對(duì)照組比較，存在明顯的差異(P < 0.05)。(結(jié)果見圖2)
試驗(yàn)例2 :檢測毛蕊異黃酮對(duì)大鼠大腦基底動(dòng)脈依賴性舒張反應(yīng)的影響。I、藥物毛蕊異黃酮(上?？婆d商貿(mào)有限公司)。2、儀器RM6240B/C生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)(淮北正華生物儀器設(shè)備有限公司)。3、動(dòng)物SD大鼠，6周齡、雄性、18(T220g、清潔級(jí)(河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。4、實(shí)驗(yàn)分組分組 ①正常對(duì)照組健康SD大鼠20只，每天清晨空腹三蒸水灌胃(灌胃容量為10ml/kg)，連續(xù)灌胃8周 級(jí)血管性癡呆模型組2V0法制備血管性癡呆大鼠模型20只毛蕊異黃酮組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹毛蕊異黃酮溶液灌胃(灌胃濃度2. Omg/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續(xù)灌胃8周氫化麥角堿組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹氫化麥角堿溶液灌胃(灌胃濃度2. Omg/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續(xù)灌胃8周。5、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)檢測。6、結(jié)果
毛蕊異黃酮(2. Omg/kg)明顯增加血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)，與血管性癡呆模型組比較，存在明顯差異(P < O. 05);與氫化麥角堿組比較，存在明顯差異(P < O. 05)。說明毛蕊異黃酮能夠明顯抑制血管性癡呆大鼠的血管功能減退，效果優(yōu)于氫化麥角喊。(結(jié)果見圖3)
試驗(yàn)例3 :檢測毛蕊異黃酮對(duì)大鼠大腦基底動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)影響。I、藥物毛蕊異黃酮(上?？婆d商貿(mào)有限公司)。2、儀器=TSlOOO尼康顯微鏡，HT7700日立透射電子顯。3、動(dòng)物SD大鼠，6周齡、雄性、18(T220g、清潔級(jí)(河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。4、實(shí)驗(yàn)分組分組 ①正常對(duì)照組健康SD大鼠20只，每天清晨空腹三蒸水灌胃(灌胃容量為10ml/kg)，連續(xù)灌胃8周 級(jí)血管性癡呆模型組2V0法制備血管性癡呆大鼠模型20只毛蕊異黃酮組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹毛蕊異黃酮溶液灌胃(灌胃濃度2. Omg/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續(xù)灌胃8周；
5、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容光鏡及電鏡下形態(tài)學(xué)觀察。6、結(jié)果
6.I毛蕊異黃酮對(duì)血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈內(nèi)膜形態(tài)學(xué)的影響(光鏡400X)。血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈血管內(nèi)膜出現(xiàn)明顯斷裂痕跡，內(nèi)膜皺褶增多，脂質(zhì)于內(nèi)皮下沉積；血管內(nèi)膜下平滑肌層細(xì)胞排列紊亂，肌層出現(xiàn)明顯斷裂、融合現(xiàn)象，延續(xù)性較差，肌細(xì)胞間纖維組織增生；肌層下纖維結(jié)締組織疏松，肌層與結(jié)締組織界限不清楚。天然產(chǎn)物毛蕊異黃酮明顯抑制血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈血管內(nèi)膜的形態(tài)學(xué)變化。(結(jié)果見圖4)
6.2 毛蕊異黃酮對(duì)血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈內(nèi)膜形態(tài)學(xué)的影響(電鏡8000X )。血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞膜出現(xiàn)破裂現(xiàn)象，平滑肌細(xì)胞延伸入內(nèi)皮細(xì)胞胞漿；內(nèi)皮基膜斷裂，斷裂處有大量膠原纖維組織增生；內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)高爾基體增多，線粒體腫脹、嵴融合或缺失。天然產(chǎn)物毛蕊異黃酮明顯抑制血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。(結(jié)果見圖5)
試驗(yàn)例4 :檢測毛蕊異黃酮對(duì)大鼠海馬區(qū)錐體細(xì)胞形態(tài)學(xué)影響。I、藥物毛蕊異黃酮(上?？婆d商貿(mào)有限公司)。2、儀器=TSlOOO尼康顯微鏡，HT7700日立透射電子顯。3、動(dòng)物SD大鼠，6周齡、雄性、18(T220g、清潔級(jí)(河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。4、實(shí)驗(yàn)分組分組(I)正常對(duì)照組健康SD大鼠20只，每天清晨空腹三蒸水灌胃(灌胃容量為10ml/kg)，連續(xù)灌胃8周；(2)血管性癡呆模型組2V0法制備血管性癡呆大鼠模型20只；(3)毛蕊異黃酮組血管性癡呆模型大鼠20只，每天清晨空腹毛蕊異黃酮溶液灌胃(灌胃濃度2. Omg/kg，灌胃容量為10ml/kg)給藥，連續(xù)灌胃8周；
5、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容光鏡及電鏡下形態(tài)學(xué)觀察。6、結(jié)果
6.I毛蕊異黃酮對(duì)血管性癡呆大鼠大腦海馬區(qū)錐體細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響(光鏡400X)。血管性癡呆大鼠大腦海馬區(qū)三層錐體細(xì)胞排列紊亂；部分錐體細(xì)胞腫脹，并有炎細(xì)胞浸潤，星形膠質(zhì)細(xì)胞增生；部分錐體細(xì)胞胞體變小或呈三角形，頂樹突延長，有核固縮和破裂現(xiàn)象，胞漿呈均勻嗜伊紅色；部分錐體細(xì)胞胞核變淺，基質(zhì)疏松伴微空泡形成；血管周圍有紅細(xì)胞滲出，個(gè)別可見小血管增生。天然產(chǎn)物毛蕊異黃酮明顯抑制血管性癡呆大鼠大腦海區(qū)錐體細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。(結(jié)果見圖6)
6.2 毛蕊異黃酮對(duì)血管性癡呆大鼠大腦海馬區(qū)錐體細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響(電鏡8000X)。血管性癡大鼠大腦海馬區(qū)錐體細(xì)胞胞核固縮，染色質(zhì)聚集成團(tuán)、邊集，異染色質(zhì)增多，核周可見高電子密度團(tuán)塊；線粒體腫脹，有嵴融合并出現(xiàn)空泡變性。毛蕊異黃酮明顯抑制血管性癡呆大鼠大腦海區(qū)錐體細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。(結(jié)果見圖7)。
權(quán)利要求
1.毛蕊異黃酮在制備抗血管性癡呆的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的毛蕊異黃酮，其特征在干，提取于豆科草本植物膜莢黃芪[Astragalus membranaceus (Fisch. ノ Bge.]、內(nèi)蒙^' 民[Astragalus membranaceus(Fisch.) Bge. ver. Mongholicus (Bge.) Hsiao]的ネB。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的毛蕊異黃酮，其特征在于，分子式=C16H12O5，分子量284.26，CAS 登錄號(hào)20575-57_9，英文名稱7-hydroxy-3-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)-4H_chromen-4-one， InChI= l/C16H1205/cl-20-14-5-2_9(6-13(14)18)12-8-21-15-7-10(17)3-4-ll(15)16(12)19/h2-8，17-18H，1H3，分子結(jié)構(gòu)式
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的血管性癡呆，其特征在干，因各種腦血管疾病引起的腦功能障礙而產(chǎn)生的獲得性智能損害綜合癥，以記憶、認(rèn)知功能缺損為主，可伴有言語、運(yùn)動(dòng)、視空間及人格障礙為主要臨床表現(xiàn)的ー組神智異常癥候群。
全文摘要
本發(fā)明提供了天然產(chǎn)物毛蕊異黃酮在制備抗血管性癡呆的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)驗(yàn)證，毛蕊異黃酮可以有效抑制血管性癡呆大鼠大腦基底動(dòng)脈內(nèi)膜及大腦海馬區(qū)椎體細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，提高大腦基底動(dòng)脈內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)，增強(qiáng)血管性癡呆大鼠的認(rèn)知、學(xué)習(xí)和記憶能力，明顯減輕血管性癡呆癥狀。
文檔編號(hào)A61P25/28GK102657641SQ20121015581
公開日2012年9月12日 申請(qǐng)日期2012年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月20日
發(fā)明者尹雅玲, 律海峽, 李鵬, 王倩倩, 賈巖龍, 馬麗娟, 高利潔, 高建輝 申請(qǐng)人:新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院