專利名稱：輔助抗腫瘤藥物、中藥合劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗腫瘤藥物領(lǐng)域，尤其是一種輔助抗腫瘤藥物、中藥合劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
目前全球腫瘤疾病狀況日趨嚴重，中國現(xiàn)狀更加嚴峻和突出。世界腫瘤患者人數(shù)4000萬，年增腫瘤患者1030萬，年死亡人數(shù)630萬；我國腫瘤患者450萬，年增腫瘤患者220萬，年死亡人數(shù)170萬。雖然我國腫瘤患者雖僅占全球的11. 2%，但年癌癥死亡人數(shù)卻占全球的27. 0%，可見我國腫瘤患者死亡率之高。而且，我國年癌癥死亡人數(shù)占腫瘤患者總數(shù)和年新增腫瘤患者的比例，也分別高出世界平均值的22和16個百分點，這說明我國腫瘤患者還未得到有效治療，主要原因就是進口腫瘤治療藥物價格昂貴，大多數(shù)國民尚無經(jīng)濟能力支付。進入21世紀，我國迫切需要從祖國醫(yī)藥中開發(fā)出高效低廉的抗腫瘤藥物，使患者得到及時有效救治，惠及千千萬萬中低收入階層腫瘤患者。目前抗腫瘤中成藥分為兩大類一為治療類抗腫瘤中成藥，如鴉膽子油、欖香烯、復(fù)方紅豆杉膠囊、蟾酥注射液等；另一為輔助類抗腫瘤中成藥,如參芪扶正、香菇多糖、人參多糖注射液等。它們都被廣泛應(yīng)用于臨床，是肺癌、胃癌、肝癌等惡性腫瘤的治療和輔助治療藥品，極受市場歡迎。然而，由于癌癥細胞存在變異性和耐藥性，因此市場永遠都在呼喚療效更優(yōu)、品質(zhì)更好的抗腫瘤新藥面市，以滿足一線醫(yī)務(wù)工作者的臨床需要和腫瘤患者的治療需要。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種具有升高白細胞、提高免疫力等作用的輔助抗腫瘤藥物，以及由此開發(fā)出的中藥合劑——抗毒升白合劑及其制備方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案輔助抗腫瘤藥物，包含以下重量份的原料黃芪100 150克、人參20 50克、雞血藤50 100克、淫羊藿60 100克、丹參30 50克、當(dāng)歸40 80克、阿膠10 15克。上述輔助抗腫瘤藥物包含以下重量份的原料黃芪120克、人參30克、雞血藤80克、淫羊藿80克、丹參30克、當(dāng)歸50克、阿膠15克。上述輔助抗腫瘤藥物制成的中藥合劑。上述中藥合劑的制備方法先將黃芪、人參、雞血藤、淫羊藿、丹參、當(dāng)歸6味藥分別干燥后打粉，過40目篩，然后將過篩后的藥粉混合；混合后的藥粉與水按重量比1:10
I 12混合，浸泡20 30分鐘，煮沸提取兩次，每次100 150分鐘，過濾，將兩次提取濾液合并，將濾液濃縮至比重為I. 05 I. 10 ;濃縮液中加入I. 5 2. 5倍體積的95%的乙醇，靜置24小時，再次濾除沉淀，濾液加熱至沸，熱融阿膠，濃縮至1000毫升即得中藥合劑。干燥的溫度為46 70°C，干燥的時間為3 7小時。中藥合劑灌裝至100毫升合劑瓶中，封口包裝。
本發(fā)明的抗毒升白合劑起輔助抗腫瘤、升高白細胞、扶正、祛邪、減毒之功效，對于腫瘤免疫低下等癥有較好的療效。使用方法腫瘤病患者使用時先將合劑瓶蓋旋開，然后倒取20毫升合劑口服。發(fā)明人在長期的整理方劑和醫(yī)療實踐中，利用民間治療經(jīng)驗和驗方，進行反復(fù)比較和試驗，挖掘了本發(fā)明組分獨特、療效顯著的輔助抗腫瘤藥物，它由黃芪、人參、雞血藤、淫羊藿、當(dāng)歸、丹參和阿膠等名貴中藥組成，有扶正、祛邪、減毒、增效作用，達到陰中求陽、陽中求陰、陰陽雙補功效。各中藥原料在中國藥典中記載如下黃苗豆科植物蒙古黃苗 Astragalus membranaceus (Fisch. )Bge. var.monghoicus (Bge) Hsiao 或膜莢黃苗 Astragalus membranaceus (Fisch. ) Bge.的干燥根。人參五加科植物人參Panax ginseng C. A. Mey.的干燥根。雞血藤豆科植物密花豆Sptholobus suberectus Dunn的干燥藤莖。 淫羊藿小檗科植物淫羊藿(Epimedium brevicornum Maxim.)、箭葉淫羊藿(Epimedium sagittatum Maxim.)、柔毛淫羊藿(Epimedium pubescens Maxim.)、或車月鮮淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai )的干燥葉。當(dāng)歸傘形科植物當(dāng)歸 Angelica sinensis (Oliv. ) Diels 的根。丹參雙子葉植物唇形科鼠尾草屬植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖。阿膠馬科動物驢Equus asinus L.及其他驢皮經(jīng)煎煮濃縮制成的固體膠。使用該組方經(jīng)現(xiàn)代制劑技術(shù)研制成了方便服用的口服制劑——抗毒升白合劑，藥理研究表明其安全可靠且療效顯著，具有升高白細胞、提高免疫力等作用，可作為輔助抗腫瘤方劑。與現(xiàn)有其他腫瘤疾病常用劑型相比，抗毒升白合劑具有以下優(yōu)點<1>合劑經(jīng)口服給藥，可提高制劑的生物利用度，發(fā)揮治療全身的功效；<2> 口服形式給藥起效快速、療效顯著，未見不良反應(yīng)，且攜帶使用方便，患者順應(yīng)性好；<3>合劑制備工藝簡單，原材料來源廣泛，適宜大批量工業(yè)化生產(chǎn)。
圖I是抗毒升白合劑作用人肝癌細胞H印G-2和BEL-7404曲線圖(24小時)。圖2是抗毒升白合劑作用人肝癌細胞H印G-2和BEL-7404曲線圖(48小時)。圖3是抗毒升白合劑作用人肝癌細胞H印G-2和BEL-7404曲線圖(72小時)。圖中I人肝癌細胞H印G-2是，2是人肝癌細胞BEL-7404。
具體實施例方式一、抗毒升白合劑的制備實施例I原料黃芪100克、人參20克、雞血藤80克、淫羊藿80克、丹參30克、當(dāng)歸50克、阿膠15克。制備方法先將黃芪、人參、雞血藤、淫羊藿、丹參、當(dāng)歸6味藥分別干燥(46 70°C,3小時)后打粉,過40目篩,然后將過篩后的藥粉混合；混合后的藥粉與水按重量比I 10混合，浸泡30分鐘，煮沸提取兩次，每次100分鐘，過濾，將兩次提取濾液合并，將濾液濃縮至比重為I. 05 ;濃縮液中加入2倍體積的95%的乙醇，靜置24小時，再次濾除沉淀，濾液加熱至沸，熱融阿膠，濃縮至1000毫升，灌裝至100毫升合劑瓶中，封口包裝。實施例2原料黃芪150克、人參50克、雞血藤100克、淫羊藿100克、丹參50克、當(dāng)歸80克、阿膠15克。制備方法先將黃芪、人參、雞血藤、淫羊藿、丹參、當(dāng)歸6味藥分別干燥(46 70°C, 5小時)后打粉,過40目篩,然后將過篩后的藥粉混合；混合后的藥粉與水按重量比I 12混合，浸泡30分鐘，煮沸提取兩次，每次120分鐘，過濾，將兩次提取濾液合并，將濾液 濃縮至比重為I. 05 ;濃縮液中加入I. 5倍體積的95%的乙醇，靜置24小時，再次濾除沉淀，濾液加熱至沸，熱融阿膠，濃縮至1000毫升，灌裝至100毫升合劑瓶中，封口包裝。實施例3原料黃芪120克、人參30克、雞血藤80克、淫羊藿80克、丹參30克、當(dāng)歸50克、阿膠15克。制備方法先將黃芪、人參、雞血藤、淫羊藿、丹參、當(dāng)歸6味藥分別干燥(46 70°C, 7小時)后打粉,過40目篩,然后將過篩后的藥粉混合；混合后的藥粉與水按重量比I 10混合，浸泡30分鐘，煮沸提取兩次，每次150分鐘，過濾，將兩次提取濾液合并，將濾液濃縮至比重為I. 05 ;濃縮液中加入2. 5倍體積的95%的乙醇，靜置24小時，再次濾除沉淀，濾液加熱至沸，熱融阿膠，濃縮至1000毫升，灌裝至100毫升合劑瓶中，封口包裝。實施例4原料黃芪120克、人參40克、雞血藤60克、淫羊藿60克、丹參40克、當(dāng)歸40克、阿膠12克。制備方法先將黃芪、人參、雞血藤、淫羊藿、丹參、當(dāng)歸6味藥分別干燥(46 70°C,6小時)后打粉,過40目篩,然后將過篩后的藥粉混合；混合后的藥粉與水按重量比I 10混合，浸泡20分鐘，煮沸提取兩次，每次130分鐘，過濾，將兩次提取濾液合并，將濾液濃縮至比重為I. 02 ;濃縮液中加入2倍體積的95%的乙醇，靜置24小時，再次濾除沉淀，濾液加熱至沸，熱融阿膠，濃縮至1000毫升，灌裝至100毫升合劑瓶中，封口包裝。實施例5原料黃芪140克、人參20克、雞血藤80克、淫羊藿80克、丹參30克、當(dāng)歸60克、阿膠10克。制備方法先將黃芪、人參、雞血藤、淫羊藿、丹參、當(dāng)歸6味藥分別干燥(46 70°C,4小時)后打粉,過40目篩,然后將過篩后的藥粉混合；混合后的藥粉與水按重量比I 10混合，浸泡30分鐘，煮沸提取兩次，每次120分鐘，過濾，將兩次提取濾液合并，將濾液濃縮至比重為I. 10 ;濃縮液中加入2倍體積的95%的乙醇，靜置24小時，再次濾除沉淀，濾液加熱至沸，熱融阿膠，濃縮至1000毫升，灌裝至100毫升合劑瓶中，封口包裝。實施例6原料黃芪120克、人參30克、雞血藤50克、淫羊藿70克、丹參40克、當(dāng)歸70克、阿膠12克。
制備方法先將黃芪、人參、雞血藤、淫羊藿、丹參、當(dāng)歸6味藥分別干燥(46 70°C,4小時)后打粉,過40目篩,然后將過篩后的藥粉混合；混合后的藥粉與水按重量比I 10混合，浸泡30分鐘，煮沸提取兩次，每次110分鐘，過濾，將兩次提取濾液合并，將濾液濃縮至比重為I. 08 ;濃縮液中加入2倍體積的95%的乙醇，靜置24小時，再次濾除沉淀，濾液加熱至沸，熱融阿膠，濃縮至1000毫升，灌裝至100毫升合劑瓶中，封口包裝。采用實施例I至6的抗毒升白合劑做相關(guān)藥學(xué)實驗研究，由于實驗結(jié)果大體相近，故列舉實施例3的實驗結(jié)果為據(jù)論述如下二、抗毒升白合劑毒理學(xué)研究采用一日最大給藥量法進行測定。
實驗表明抗毒升白合劑一日最大給藥量相當(dāng)于生藥材4. Sg，根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局1999年《中藥新藥藥理毒理研究的技術(shù)要求》的有關(guān)規(guī)定以及毒理學(xué)研究的一般原貝U，單次給藥量大于20g/kg體重而實驗動物不出現(xiàn)死亡者，可以認為該藥是安全的。實驗證實，該制劑的最大耐受量大于240g/kg體重，從而證明該制劑屬于較安全的制劑。實驗結(jié)果表明，抗毒升白合劑急性毒性很小，通過灌胃給藥無法測出LD5tlt5 —天兩次灌胃給予小鼠抗毒升白合劑濃縮液，給藥后，抗毒升白合劑組與對照組(生理鹽水)小鼠精神狀態(tài)均無異常，各組小鼠活動正常。連續(xù)觀察7天，小鼠毛色光潔、二便正常，鼻、眼、口腔無異常分泌物，未出現(xiàn)不良情況，也未有小鼠死亡。給藥組體重增長正常，與對照組相比無明顯差異，且未發(fā)現(xiàn)因抗毒升白合劑蓄積而對動物產(chǎn)生毒性反應(yīng)。肝臟病理切片顯示，肝細胞排列成條索狀，胞漿紅染，核均質(zhì)藍染，肝竇均勻，靜脈圓形，完整，與對照組相比無明顯病理變化。三、抗毒升白合劑藥效學(xué)研究(一)抗毒升白合劑體外抗腫瘤活性研究采用MTT法評價抗毒升白合劑的細胞毒作用，根據(jù)現(xiàn)有的實驗條件等因素選擇了Bele-7404、H印G-2兩種人肝癌腫瘤細胞進行初步的研究，結(jié)果如圖I至圖3。在倒置相差顯微鏡下觀察各組細胞形態(tài)，結(jié)果表明，經(jīng)抗毒升白合劑作用后各組細胞均有不同程度的態(tài)改變，可導(dǎo)致細胞的壞死或凋亡，證實了其對腫瘤細胞增殖的抑制作用。在優(yōu)化的實驗條件下，采用順鉬做陽性對照，通過對人肝癌細胞H印G2和BEL7404細胞的MTT實驗，結(jié)果顯示抗毒升白合劑能夠使顯著抑制體外培養(yǎng)的BEL7404和H印G2細胞株，與陰性對照組比兩者各濃度組均有非常顯著性差異(P〈0. 05)，且在此濃度范圍內(nèi)細胞毒作用呈現(xiàn)劑量依賴性；進一步通過比較相同劑量對兩種細胞的抑制率，得出抗毒升白合劑對人肝癌細胞Bele7404較為敏感，即抗毒升白合劑抗腫瘤具有一定的選擇性。(二)抗毒升白合劑體內(nèi)抗腫瘤研究I.小鼠S180肉瘤模型實驗I. I實驗材料I. I. I 藥物抗毒升白合劑濃縮液廣西藥用植物園中藥制劑中心提供。注射用環(huán)磷酰胺山西普德藥業(yè)有限公司批號04100902I. I. 2動物及瘤株KM小鼠SPF級，體重18 22g，^性。廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，合格證號26-2010A004。小鼠S180細胞株購于中科院上海細胞庫。I. 2實驗方法I. 2. I造模方法 無菌條件下，選取飼養(yǎng)7天的腹部明顯膨隆的S180移植瘤小鼠，腹部皮膚消毒，用一次性無菌注射器抽取腹水，放入無菌燒杯，I 3加入生理鹽水，反復(fù)沖打，水平振搖以充分混勻，于顯微鏡下細胞計數(shù)，并用生理鹽水稀釋細胞濃度至I X 107/mL,每只小鼠左側(cè)腋下皮下接種瘤細胞混懸液0. 2mL。從抽取腹水開始，到移植完最后一只小鼠的時間控制在2小時內(nèi)。I. 2. 2分組方法次日，將接瘤小鼠隨機分為模型組，環(huán)磷酰胺組，抗毒升白合劑高、中、低劑量組，環(huán)磷酰胺抗毒升白聯(lián)用組，每組15只，并取同批正常小鼠15只做為正常對照組。I. 2. 3給藥方法每日固定時間段，小鼠給藥，連續(xù)15天。給藥方法及計量如下正常對照組每日灌胃給予生理鹽水，0. 4 mL/20g體重模型組每日灌胃給予生理鹽水，0. 4 mL/20g環(huán)磷酰胺組腹腔注射環(huán)磷酰胺，20mg/kg,連續(xù)7天抗毒升白高劑量組每日灌胃給予抗毒升白濃縮液，0. 4 mL/20g (相當(dāng)于生藥材
0.8g/20g)抗毒升白中劑量組每日灌胃給予抗毒升白濃縮液稀釋液，0. 4 mL/20g (相當(dāng)于生藥材 0. 6g/20g)抗毒升白低劑量組每日灌胃給予抗毒升白濃縮液稀釋液，0.4 mL/20g (相當(dāng)于生藥材 0. 4g/20g)聯(lián)合用藥用組腹腔注射注射環(huán)磷酰胺，10mg/kg，連續(xù)7天，每日灌胃給與抗毒升白合劑中劑量。以上各組均在相同條件下飼養(yǎng)，自由覓食飲水。I. 2. 4記錄及取材方法記錄小鼠的活動狀況及體重，動物荷瘤第16天，游標(biāo)卡尺測量瘤體長徑(a)寬徑(b)。后將小鼠處死取胸腺、脾臟、肝臟、剝離瘤體，胸腺、脾臟、瘤體稱重。后將脾臟、肝臟、瘤體置10%福爾馬林中固定，制作病理切片。腫瘤體積=a*b2/2。腫瘤抑制率(%) = [1_ (平均試驗組瘤重/平均對照組瘤重)]X 100%。胸腺指數(shù)=胸腺平均重量(mg)/平均體重(g)；脾臟指數(shù)=脾臟平均重量(mg)/平均體重(g)。荷瘤小鼠腫瘤、肝臟、脾臟組織切片及HE染色方法。I. 2. 5切片制作方法荷瘤小鼠死亡后經(jīng)解剖，獲取腫瘤、肝臟、脾臟的組織標(biāo)本，甲醛浸泡固定，經(jīng)石蠟包埋切片。切片經(jīng)過二甲苯I、II、III梯度脫蠟，然后放入100%、95%、90%、80%、70%梯度乙醇液中，每次均為5分鐘，再放入蒸餾水中水化3min。切片放入蘇木精中染色約30min，自來水沖洗約15min。將處理過的切片放入I %的鹽酸乙醇液(鹽酸I份+70%乙醇100份)中褪色，約30s后見切片見紅，顏色較淺即可。再放入自來水中使其恢復(fù)藍色，在低倍鏡下見細胞核呈藍色、結(jié)構(gòu)清晰；細胞質(zhì)或結(jié)締組織纖維成分無色為標(biāo)準。然后放入蒸餾水中漂洗一次。切片置入50%、70%、80%乙醇中各51^11脫水。0. 5%伊紅乙醇液對比染色5min,切片放入95%乙醇中洗去多余的紅色,然后放入無水一寸中5min。最后用吸水紙吸去多余的乙醇。處理后的切片放入二甲苯一乙醇等量混合液中約5min，然后放入純二甲苯
1、11中各51^11。中性樹膠封片。HE染色后于X400高倍鏡下觀察并拍照。I. 2. 6統(tǒng)計方法
采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件，實驗指標(biāo)計量資料組間比較應(yīng)用成組T檢驗，以P〈0. 05為顯著性差異。I. 3實驗結(jié)果I. 3. I各組小鼠一般狀況觀察模型對照組小鼠接種后第3天開始出現(xiàn)黃豆樣隆起。小鼠飲食、飲水量減少，被毛疏松，精神較差，呆臥少動?？苟旧缀蟿└邉┝拷M小鼠體重較其他各組增長均快，被毛有些疏松，行動較遲緩。接種后第四天開始出現(xiàn)輕微蓬隆?？苟旧缀蟿┲袆┝拷M小鼠體重增長速度適中，飲食運動均良好，被毛順滑，有光澤。接種后第三天開始出現(xiàn)輕微蓬隆。抗毒升白合劑小劑量組小鼠體重增長較空白對照組不明顯，飲食行動尚可，被毛較順滑。接種后第三天開始出現(xiàn)輕微蓬隆。。陽性對照藥小鼠服用CTX后，呆臥少動，被毛疏松，精神差，飲食減少，與對空白比較體重增加緩慢，腋下荷瘤目測體積明顯小于對照組。I. 3. 2各組抑瘤率比較表I 各組小鼠瘤重及抑瘤率的比較
權(quán)利要求
1.一種輔助抗腫瘤藥物，其特征在于包含以下重量份的原料黃芪100 150克、人參.20 50克、雞血藤50 100克、淫羊藿60 100克、丹參30 50克、當(dāng)歸40 80克、阿膠10 15克。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的輔助抗腫瘤藥物，其特征在于包含以下重量份的原料黃芪.120克、人參30克、雞血藤80克、淫羊藿80克、丹參30克、當(dāng)歸50克、阿膠15克。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2任一所述輔助抗腫瘤藥物制成的中藥合劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述中藥合劑的制備方法，其特征在于先將黃芪、人參、雞血藤、淫羊藿、丹參、當(dāng)歸6味藥分別干燥后打粉，過40目篩，然后將過篩后的藥粉混合；混合后的藥粉與水按重量比1:10 1:12混合，浸泡20 30分鐘，煮沸提取兩次，每次100 150分鐘，過濾，將兩次提取濾液合并，將濾液濃縮至比重為I. 05 I. 10 ;濃縮液中加入I. 5 2. 5倍體積的95%的乙醇，靜置24小時，再次濾除沉淀，濾液加熱至沸，熱融阿膠，濃縮至1000毫升即得中藥合劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述中藥合劑的制備方法，其特征在于所述干燥的溫度為46 .70°C，干燥的時間為3 7小時。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述中藥合劑的制備方法，其特征在于所述中藥合劑灌裝至100毫升合劑瓶中，封口包裝。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種輔助抗腫瘤藥物，它由黃芪、人參、雞血藤、淫羊藿、當(dāng)歸、丹參和阿膠等名貴中藥按一定配比組成，有扶正、祛邪、減毒、增效作用，達到陰中求陽、陽中求陰、陰陽雙補功效。使用該組方經(jīng)現(xiàn)代制劑技術(shù)研制成了方便服用的口服制劑——抗毒升白合劑，藥理研究表明其安全可靠且療效顯著，具有升高白細胞、提高免疫力等作用，可作為輔助抗腫瘤方劑用于腫瘤免疫低下等癥。
文檔編號A61P35/00GK102641331SQ20121015508
公開日2012年8月22日 申請日期2012年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月18日
發(fā)明者周小雷, 王碩, 繆劍華, 蘇杭, 袁經(jīng)權(quán), 韋范 申請人:廣西壯族自治區(qū)藥用植物園