專利名稱：一種用于化療減毒增效的烏骨雞肽的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于化療減毒增效的烏骨雞肽的制備方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
全球癌癥發(fā)病率持續(xù)升高，死亡率也逐年攀升。除了癌癥本身，放化療副作用是導(dǎo)致癌癥死亡率逐年攀升的重要原因?；熢跉[瘤細(xì)胞的同時，也將正常細(xì)胞一同殺滅。故化療引起的正常細(xì)胞損傷已經(jīng)成為放化綜合治療實施的障礙，甚至?xí)娱L治療周期，影響治療效果，縮短腫瘤病人的壽命。烏骨雞是我國特有珍禽，被列為國家級珍貴品種資源。烏骨雞不僅是一種營養(yǎng)豐富的滋補食品，還是一種特有的藥用雞種，具有食用安全性，被歷代醫(yī)家延用。烏骨雞肽的制備方法也有報道。如授權(quán)公告號為CN 100569794C的《一種烏骨雞活性肽的制備方法》以烏骨雞為原料，通過酶解、初濾、精濾、超濾或超濾和納濾，制得分子量小于6000 Da的烏骨雞多肽。其制備烏骨雞多肽的步驟繁瑣，能耗大。授權(quán)公告號為CN1168394C的《一種烏雞營養(yǎng)成分的提取工藝》將烏雞去毛及內(nèi)臟后，加3 4倍量水煮沸2小時，降溫至5(T60 °C，調(diào)pH值5. 5^7. 0，加木瓜蛋白酶對烏雞肉糜酶解，酶解時間為5小時，而后滅酶，去渣，蟲蠟去脂，活性炭脫苦，過濾，加防腐劑，得營養(yǎng)液。該方法將烏雞加水煮沸后，以烏雞肉糜為酶解底物，底物復(fù)雜多樣，大大降低了酶解效率。且步驟繁瑣，生產(chǎn)周期長，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。以上傳統(tǒng)酶解方法均是對烏骨雞肉糜實施酶解，得率較低，因此，研究生產(chǎn)流程簡單，產(chǎn)物得率高、活性高的適合工業(yè)化生產(chǎn)的烏骨雞肽的制備方法具有重要經(jīng)濟(jì)意義。目前，已有文獻(xiàn)報道烏骨雞肽具有某些生理功能，但其在化療減毒增效方面的作用還未見報道。臨床上也未見烏骨雞肽用于腫瘤化療輔助治療的報道。
發(fā)明內(nèi)容
針對上述現(xiàn)有情況，本發(fā)明提供一種用于化療減毒增效的烏骨雞肽的制備方法，由此方法得到的烏骨雞肽，以及該烏骨雞肽在化療減毒增效中的應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)方案為以烏骨雞為原料，采用蒸煮的方法提取烏骨雞可溶性蛋白，對可溶性蛋白實施控制酶解，酶解液濃縮、干燥處理，得烏骨雞肽。其具體步驟為(1)烏骨雞可溶性蛋白提取烏骨雞宰殺，去毛、內(nèi)臟、頭、爪，洗凈，用絞肉機制成肉泥。取烏骨雞肉泥，蒸煮處理。蒸煮后，將可溶性蛋白與剩余固形物分離，除油，得烏骨雞可溶性蛋白。(2)控制酶解對分離后的可溶性蛋白實施酶解。酶解后升溫滅酶，得酶解液。(3)干燥酶解液濃縮、干燥，得烏骨雞肽。步驟(1，烏骨雞可溶性蛋白的提取可以是如下兩種方法，但不限于此
第一種，將烏骨雞宰殺，去毛、內(nèi)臟、頭、爪，洗凈，用絞肉機制成肉泥。取一定量烏骨
雞肉泥，按固液比1:廣1:5的比例加水，置于高壓鍋內(nèi)，在100 0C ^135 °C溫度下，高壓20mirTl20 min。分離可溶性蛋白與剩余固形物，除油，可溶性蛋白收集備用。按此方法共高壓提取r4次。第二種，將烏骨雞宰殺，去毛、內(nèi)臟、頭、爪，洗凈，用絞肉機制成肉泥。取一定量烏骨雞肉泥，按固液比1:廣1:5的比例加水，于普通鍋中，在80 0C 100°C溫度下，水煮20mirTl20 min。分離可溶性蛋白與剩余固形物，除油，可溶性蛋白收集備用。按此方法共水煮提取廣4次。步驟(I)中，可以采用真空抽濾、板框過濾分離可溶性蛋白與剩余固形物，采用管式離心除油，得可溶性蛋白，但不限于此。 步驟(2)采用復(fù)合酶解的方式，具體地采用木瓜蛋白酶、復(fù)合蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶兩兩組合的復(fù)合酶解方式。加酶量為可溶性蛋白質(zhì)量的0.5 %廣5 %。，兩種酶的質(zhì)量份數(shù)比為10%:90% 90%:10%，酶解溫度為40 0C "65 °C，酶解時間為I 8 h。酶解后升溫滅酶，得酶解液。步驟(3)干燥可以采用真空干燥或噴霧干燥或冷凍干燥，濃縮可以采用多級閃蒸，但不限于此。由步驟(I)制備烏骨雞可溶性蛋白，其平均提取率為10. 45%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于傳統(tǒng)酶解方法制備烏骨雞肽8%左右的提取率。對比活性試驗證實，本發(fā)明方法制備的烏骨雞肽是確定能夠起到化療減毒增效作用的。具體表現(xiàn)為能夠有效減輕化療藥物一5-氟尿嘧啶對人成纖維細(xì)胞的損傷、抑制多種癌細(xì)胞的增殖、協(xié)同5-氟尿嘧啶抑制多種癌細(xì)胞的增殖。傳統(tǒng)酶解方法制得的烏骨雞肽以及可溶性蛋白提取剩余固形物酶解產(chǎn)物在對比活性試驗中沒有顯示出化療減毒增效作用。本發(fā)明方法制備的烏骨雞肽氨基酸組成中含量較高的前6種氨基酸質(zhì)量占氨基酸總質(zhì)量的72. 18%，含量從高到低依次為甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸。傳統(tǒng)酶解方法制備的烏骨雞肽、可溶性蛋白提取剩余固形物酶解產(chǎn)物以及烏骨雞鮮肉氨基酸組成中含量較高的前6種氨基酸質(zhì)量分別占氨基酸總質(zhì)量的59. 82%,60. 00%、58. 30%。本發(fā)明方法制備的烏骨雞肽中，甘氨酸谷氨酸脯氨酸丙氨酸精氨酸天冬氨酸為31% 20% 16% 12% 11% 10% ;傳統(tǒng)酶解方法制備的烏骨雞肽中，谷氨酸亮氨酸賴氨酸甘氨酸天冬氨酸丙氨酸為23% :18% :16% 15% 15% 13% ;可溶性蛋白提取剩余固形物酶解產(chǎn)物中，谷氨酸甘氨酸亮氨酸天冬氨酸精氨酸丙氨酸為24% :19% :17% 16% 12% 12% ;烏骨雞鮮肉中谷氨酸脯氨酸賴氨酸天冬氨酸甘氨酸亮氨酸為24% 18% 16% 15% :14% :13%。本發(fā)明方法制備的烏骨雞肽氨基酸組成中含量較高的前6種氨基酸分別占氨基酸總質(zhì)量的百分比如表I。測定5個不同批次制備的烏骨雞肽，結(jié)果顯示甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸質(zhì)量分別占氨基酸總質(zhì)量的23. 54±2. 27%，
14.51 ±2. 14%, 12. 00 ±2. 52%, 8. 51 ± I. 88%, 8. 35 ±2. 04%, 7. 63 ±2. 21%。表I本發(fā)明方法制備的烏骨雞肽氨基酸組成測定結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種用于化療減毒增效的烏骨雞肽的制備方法，包括以下三個步驟(1)烏骨雞可溶性蛋白提??；(2)控制酶解對分離后的可溶性蛋白進(jìn)行酶解，酶解后升溫滅酶，得酶解液；(3)干燥酶解液濃縮、干燥，得烏骨雞肽；其特征是步驟(I)中烏骨雞可溶性蛋白提取的方法為將烏骨雞宰殺，去毛、內(nèi)臟、頭、爪，洗凈，用絞肉機制成肉泥，取一定量烏骨雞肉泥，按固液比1:廣1:5的比例加水，置于高壓鍋內(nèi)，在100 0C ^135 °C溫度下，高壓20mirTl20 min,分離可溶性蛋白與剩余固形物，除油，可溶性蛋白收集備用，按此方法共高壓提取廣4次。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種用于化療減毒增效的烏骨雞肽的制備方法，其特征是步驟(2)控制酶解，采用木瓜蛋白酶、復(fù)合蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶兩兩組合的復(fù)合酶解，加酶量為可溶性蛋白質(zhì)量的0. 5 %0 5 %。，兩種酶的質(zhì)量份數(shù)比為10%:90% 90%:10%，酶解溫度40V 65 °C，酶解時間I 8 h。
3.—種權(quán)利要求I所述的一種用于化療減毒增效的烏骨雞肽的應(yīng)用，其特征是烏骨雞肽用于化療減毒增效。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種用于化療減毒增效的烏骨雞肽的制備方法，其特征是制備烏骨雞可溶性蛋白還可以為將烏骨雞宰殺，去毛、內(nèi)臟、頭、爪，洗凈，用絞肉機制成肉泥，取一定量烏骨雞肉泥，按固液比1:廣1:5的比例加水，于普通鍋中，在80 0C ^lOO °〇溫度下，水煮20 mirTl20 min，分離可溶性蛋白與剩余固形物，除油，可溶性蛋白收集備用，按此方法共水煮提取f 4次。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種用于化療減毒增效的烏骨雞肽的制備方法，其特征是所得烏骨雞肽氨基酸組成中，甘氨酸質(zhì)量占氨基酸總質(zhì)量的23. 54±2. 27%，谷氨酸質(zhì)量占氨基酸總質(zhì)量的14. 51 ±2. 14%，脯氨酸質(zhì)量占氨基酸總質(zhì)量的12. 00±2. 52%，丙氨酸質(zhì)量占氨基酸總質(zhì)量的8. 51 ± I. 88%，精氨酸質(zhì)量占氨基酸總質(zhì)量的8. 35±2. 04%，天冬氨酸質(zhì)量占氨基酸總質(zhì)量的7. 63±2. 21%。
全文摘要
一種用于化療減毒增效的烏骨雞肽的制備方法及其應(yīng)用，在于包括以下三個步驟(1)烏骨雞可溶性蛋白提??；(2)控制酶解；(3)干燥。本發(fā)明涉及的烏骨雞肽制備方法首先提取烏骨雞可溶性蛋白，進(jìn)而對可溶性蛋白實施酶解。其中可溶性蛋白提取得率顯著高于傳統(tǒng)方法。本發(fā)明方法制備的烏骨雞肽氨基酸組成中，甘氨酸質(zhì)量占氨基酸總質(zhì)量的23.54±2.27%，谷氨酸質(zhì)量占氨基酸總質(zhì)量的14.51±2.14%，脯氨酸質(zhì)量占氨基酸總質(zhì)量的12.00±2.52%，丙氨酸質(zhì)量占氨基酸總質(zhì)量的8.51±1.88%，精氨酸質(zhì)量占氨基酸總質(zhì)量的8.35±2.04%，天冬氨酸質(zhì)量占氨基酸總質(zhì)量的7.63±2.21%。
文檔編號A61K38/01GK102618612SQ201210097950
公開日2012年8月1日 申請日期2012年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月6日
發(fā)明者張麗, 王春艷, 田穎剛, 謝明勇 申請人:南昌大學(xué)