專(zhuān)利名稱(chēng)：化合物6-芐氨基嘌呤用于制備抑制肝組織氧化損傷組合物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種化合物6-芐氨基嘌呤用于制備抑制肝組織氧化損傷組合物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
氧化損傷的積累是引起機(jī)體衰老及疾病 發(fā)生的主要原因。氧的毒性不是由于氧分子本身的反應(yīng)能力，而是由于氧分子還原成水過(guò)程中產(chǎn)生的許多中間產(chǎn)物，包括超氧陰離子、過(guò)氧化氫分子、羥自由基、氫過(guò)氧基、氫過(guò)氧化物、烷氧基、烷過(guò)氧基和單線態(tài)氧，這些中間產(chǎn)物習(xí)慣被稱(chēng)為自由基。由于自由基是具有不配對(duì)電子的原子、分子或離子，具有得到或失去電子的傾向，因此其性質(zhì)特別活潑，具有很高的反應(yīng)活性，極易與其它物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)生成新的自由基或氧化物。在有機(jī)體的生命活動(dòng)過(guò)程中，自由基的產(chǎn)生、淬滅、利用和損傷作用是幾乎同時(shí)進(jìn)行的對(duì)立統(tǒng)ー過(guò)程。在生理狀況下，機(jī)體內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生和清除處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，動(dòng)物體內(nèi)有一套完整的防御系統(tǒng)來(lái)保護(hù)機(jī)體不受自由基的傷害。但在病態(tài)和衰老的情況下，機(jī)體不能有效清除產(chǎn)生的氧自由基，這些過(guò)剩的自由基主要通過(guò)脂質(zhì)過(guò)氧化作用損傷蛋白質(zhì)與核酸等生物分子致使組織損傷而發(fā)生疾病。肝臟是人體內(nèi)最大的、功能最多的實(shí)質(zhì)性腺體器官，被喻為“人體最大的化工廠”，它參與體內(nèi)消化、代謝、排泄、解毒和免疫等過(guò)程，是機(jī)體內(nèi)代謝極為活躍的重要臟器。因此，肝臟一方面耗氧量大，產(chǎn)生的氧自由基多；另一方面肝臟在藥物(或外源性藥物)的代謝和處置中起著重要作用，許多藥物和毒物經(jīng)細(xì)胞色素P450氧化后可形成不成對(duì)的電子的代謝物，即自由基。肝內(nèi)產(chǎn)生過(guò)多的自由基，將會(huì)造成氧化損傷，而氧化應(yīng)激是許多肝臟疾病的共同發(fā)病機(jī)制。如環(huán)境應(yīng)激物及代謝應(yīng)激物通過(guò)對(duì)肝細(xì)胞線粒體的損傷產(chǎn)生自由基，在細(xì)胞因子等共同作用下引發(fā)脂肪性肝炎；病毒性肝炎的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全闡明，但越來(lái)越多的研究表明氧化損傷是重要的影響因素，因?yàn)椴《拘愿窝谆颊叩母闻K中促氧化/抗氧化系統(tǒng)處于嚴(yán)重失衡狀態(tài)。因此，肝臟氧化損傷是動(dòng)物和人體所面臨的ー個(gè)非常常見(jiàn)和嚴(yán)重的問(wèn)題，它可引起動(dòng)物和人體的衰老和其他疾病的發(fā)生，加重機(jī)體的衰老和病變。目前，市場(chǎng)上有許多抗肝臟氧化損傷的物質(zhì)，但是大多數(shù)都有不易提取獲得、純度不高、有效成分不明確、價(jià)格高等缺點(diǎn)，給應(yīng)用帶來(lái)了很大的麻煩。由此，開(kāi)發(fā)ー種來(lái)源廣，純度高，成分明確，效果好，安全無(wú)毒無(wú)害的抗肝臟氧化損傷的物質(zhì)將是非常迫切且具有重要意義的任務(wù)。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供ー種化合物6-芐氨基嘌呤用于制備抑制肝組織氧化損傷組合物的應(yīng)用。所述的組合物為食品、藥物或保健品。所述的肝組織氧化損傷是由自由基導(dǎo)致的。
所述的肝組織氧化損傷為由CCl4引起肝索結(jié)構(gòu)紊亂的損傷。所述的6-芐氨基嘌呤用于提高氧化損傷肝組織中的T-SOD活性。
所述的6-芐氨基嘌呤用于提高氧化損傷肝組織中的GSH-Px活性。所述的6-芐氨基嘌呤用于降低氧化損傷肝組織中的MDA含量。6_ 節(jié)氨基嘌呤(6-Benzylaminopurine, 6_BA), I952 年美國(guó) Wellcome research實(shí)驗(yàn)室合成，六十年代日本將其商品化，是第一個(gè)人工合成的細(xì)胞分裂素。6-BA分子式為C12H11N5，結(jié)構(gòu)式如下 ⑴ぶH
N^N純品為白色結(jié)晶，エ業(yè)品為白色或淺黃色，無(wú)臭，熔點(diǎn)235°C，在酸、堿中穩(wěn)定，光、熱不易分解。水中溶解度小，為60毫克/升，在こ醇、酸中溶解度較大。它具有抑制植物葉內(nèi)葉綠素、核酸、蛋白質(zhì)的分解，保綠防老；將氨基酸、生長(zhǎng)素、無(wú)機(jī)鹽等向處理部位調(diào)運(yùn)等多種效能，具有穩(wěn)定、廉價(jià)和易于使用等特點(diǎn)，且是ー種對(duì)人、畜安全的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，因此廣泛用在農(nóng)業(yè)、果樹(shù)和園藝作物從發(fā)芽到收獲的各個(gè)階段。6-BA在植物方面的抗氧化損傷和抗衰老的作用是非常明顯的，在動(dòng)物和人體上的應(yīng)用還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本申請(qǐng)以大量的實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)證實(shí)了 6-BA對(duì)動(dòng)物肝組織也具有抗氧化損傷作用?？梢宰鳛榭垢谓M織氧化損傷的活性物質(zhì)，添加到藥物、食品或保健品當(dāng)中，抑制肝組織氧化損傷，提高免疫カ和抗衰老，增強(qiáng)肝組織抗氧化損傷能力。其中藥物可以采用醫(yī)學(xué)上可接受的任何劑型，用量為姆日900mg/kg. b. w左右。
圖I是實(shí)施例I對(duì)照組(I組)的肝臟組織切片顯微鏡400倍照片；圖2是實(shí)施例I模型組(II組)的肝臟組織切片顯微鏡400倍照片；圖3是實(shí)施例16-BA低劑量組(III組)的肝臟組織切片顯微鏡400倍照片；圖4是實(shí)施例16-BA高劑量組(IV組)的肝臟組織切片顯微鏡400倍照片。
具體實(shí)施例方式以下采用實(shí)施例來(lái)進(jìn)ー步說(shuō)明化合物6-芐氨基嘌呤在制備抗肝組織氧化損傷藥物上的應(yīng)用。實(shí)施例通過(guò)試驗(yàn)動(dòng)物及損傷模型來(lái)試驗(yàn)6-芐氨基嘌呤在提高肝組織抗氧化損傷能力方面的作用，四氯化碳(CCl4)會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物肝組織中自由基的產(chǎn)生，是ー種自由基誘發(fā)劑，攝入小鼠體內(nèi)會(huì)使肝組織產(chǎn)生自由基從而構(gòu)建小鼠體內(nèi)的肝組織氧化損傷環(huán)境，利用攝入6-芐氨基嘌呤測(cè)試其對(duì)抑制肝組織氧化損傷的作用。本實(shí)施例僅用以說(shuō)明而非限定本發(fā)明的用途，對(duì)于其它自由基誘發(fā)劑或自然因素的肝組織氧化損傷會(huì)起到相同的作用。I.試驗(yàn)藥品和試劑6_芐氨基嘌呤(6-BA)，購(gòu)于廈門(mén)星隆達(dá)化學(xué)試劑有限公司，由美國(guó)Sanland公司生產(chǎn)，用O. 06mol/L的鹽酸配制成1000mg/L、2000mg/L的儲(chǔ)備液；丙ニ醛(MDA)檢測(cè)試劑盒、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)檢測(cè)試劑盒、總超氧化物歧化酶(T-SOD)檢測(cè)試劑盒和考馬斯亮蘭試劑盒，均為南京建成生物工程研究所生產(chǎn)。2.試驗(yàn)動(dòng)物及損傷模型復(fù)制健康昆明系小白鼠，雄性，體重(20. 0±2. 0)g，購(gòu)自河南科技大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院；6-BA灌胃給藥，給藥量分別按照20和40mg/kg. b. w計(jì)算，每天一次，連續(xù)一周；末次給藥兩小時(shí)腹腔注射CCl4溶液，復(fù)制小鼠肝臟組織氧化損傷模型。3.小鼠分組及處理將小鼠隨機(jī)分為4組，具體分組和處理方法如下，I組空白對(duì)照組，灌胃O. 06mol/L鹽酸O. 4ml，每天一次，連續(xù)一周，末次灌胃兩小時(shí)腹腔注射溶劑油溶液(新鮮無(wú)菌植物油)O. 2ml，隨后動(dòng)物禁食。II組模型組，灌胃O. 06mol/L鹽酸O. 4ml,每天一次，連續(xù)一周，末次灌胃兩小時(shí)腹腔注射3. 2% CCl4的注射溶劑油溶液(新鮮無(wú)菌植物油)O. 2ml，復(fù)制小鼠肝臟組織氧化損傷模型 ，隨后動(dòng)物禁食。III組6-BA低劑量保護(hù)組，灌胃1000mg/L 6-BA藥液O. 4ml，給藥劑量為20mg/kg. b. w，每天一次，連續(xù)一周，末次灌胃兩小時(shí)腹腔注射3. 2% CCl4油溶液(新鮮無(wú)菌植物油)O. 2ml，復(fù)制小鼠肝臟組織氧化損傷模型，隨后動(dòng)物禁食。IV組6-BA高劑量保護(hù)組灌胃2000mg/L 6-BA藥液O. 4ml，給藥劑量為40mg/Kg.b.w，每天一次，連續(xù)一周，末次灌胃兩小時(shí)腹腔注射3. 2% CCl4的注射溶劑油溶液(新鮮無(wú)菌植物油)O. 2ml，復(fù)制小鼠肝臟組織氧化損傷模型，隨后動(dòng)物禁食。4.待測(cè)樣本采集和處理相應(yīng)處理結(jié)束后，從每組隨機(jī)抽取10只小鼠，禁食24小時(shí)后脫頸椎處死。取出肝組織，用冷生理鹽水漂洗后制成10 %的肝勻漿，離心，取上清液，準(zhǔn)備檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)。另每組隨機(jī)抽取3只小鼠，準(zhǔn)備制作石蠟切片。4. I總蛋白的測(cè)定按說(shuō)明書(shū)的要求，在測(cè)定抗氧化酶和MDA之前，先測(cè)定10%肝勻漿的總蛋白含量，以考馬斯亮蘭法，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在540nm處測(cè)定各管吸光度(A)值，按下列公式計(jì)算各管的蛋白含量。蛋白含量(g/L)=(測(cè)定管A值/標(biāo)準(zhǔn)管A值)*標(biāo)準(zhǔn)管濃度(g/L)4. 2T-S0D活力測(cè)定取10%肝臟組織勻漿，用生理鹽水稀釋成1%組織勻漿后通過(guò)黃嘌呤氧化酶法參照試劑盒說(shuō)明，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在550nm處比色，測(cè)定吸光度，計(jì)算T-SOD活力。4. 3GSH-PX活性測(cè)定取10%肝臟組織勻漿用生理鹽水稀釋成O. 8%的勻漿液后，參照試劑盒說(shuō)明，通過(guò)DTNB法參照試劑盒說(shuō)明，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在412nm處比色，測(cè)定吸光度，計(jì)算GSH-Px活力。4. 4MDA含量測(cè)定取10%肝臟組織勻漿用生理鹽水稀釋成5%勻漿液后通過(guò)TBA法參照試劑盒說(shuō)明，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在532nm處比色，測(cè)定吸光度，計(jì)算MDA活力。4. 5組織切片的制作取肝臟組織，截取3mmX 4mm大小方形塊，放在10%甲醛溶液中固定24 48小吋。隨后經(jīng)沖洗、脫水、透明、浸臘和包埋后，用切片機(jī)做連續(xù)冠狀切片，厚度7 8 μ m。之后脫蠟行HE染色，再經(jīng)脫水封片后用顯微鏡觀察并拍照。4. 6數(shù)據(jù)分析試驗(yàn)結(jié)果均以X土SD表示，并采用SPSS11. 5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，組間差異顯著性采用Duncan檢驗(yàn)法。本專(zhuān)利的X，指的是平均值，SD指標(biāo)準(zhǔn)差。5.試驗(yàn)結(jié)果5. I肝臟組織勻漿T-SOD活力的測(cè)定結(jié)果肝勻漿T-SOD活力的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表I。II組小鼠T-SOD的活力比I組(對(duì)照組)顯著降低，證明模型復(fù)制成功，III和IV組肝勻漿T-SOD的活力均顯著高于II組。表明6-BA具有提高小鼠肝臟組織中T-SOD活性的能力。表I各組小鼠肝臟組織勻漿中T-SOD活力(X土S)
權(quán)利要求
1.ー種化合物6-芐氨基嘌呤用于制備抑制肝組織氧化損傷組合物的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的組合物為食品、藥物或保健品。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的肝組織氧化損傷是由自由基導(dǎo)致的。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的肝組織氧化損傷為由CCl4引起肝索結(jié)構(gòu)紊亂的損傷。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的6-芐氨基嘌呤用于提高氧化損傷肝組織中的T-SOD活性。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的6-芐氨基嘌呤用于提高氧化損傷肝組織中的GSH-Px活性。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的6-芐氨基嘌呤用于降低氧化損傷肝組織中的MDA含量。
8.根據(jù)權(quán)利要求5或6或7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述氧化損傷肝組織是由CCl4引起的。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種化合物6-芐氨基嘌呤用于制備抑制肝組織氧化損傷組合物的應(yīng)用。本申請(qǐng)以大量的實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)證實(shí)了6-BA對(duì)動(dòng)物肝組織也具有抗氧化損傷作用?？梢宰鳛榭垢谓M織氧化損傷的活性物質(zhì)，添加到藥物、食品或保健品當(dāng)中，抑制肝組織氧化損傷，提高免疫力和抗衰老，增強(qiáng)肝組織抗氧化損傷能力。其中藥物可以采用醫(yī)學(xué)上可接受的任何劑型，用量為900mg/kg.b.w左右。
文檔編號(hào)A61K31/52GK102670614SQ20121000098
公開(kāi)日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2012年1月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月4日
發(fā)明者劉玉梅, 呂瓊霞, 張自強(qiáng), 鄧雯, 陳曉光 申請(qǐng)人:河南科技大學(xué)