專利名稱：一種藍(lán)萼香茶菜總二萜的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種藍(lán)萼香茶菜總二萜的制備方法。
背景技術(shù)：
藍(lán)粵香茶菜 Rabdosia japonica (Burm. f. )Hara var. glau-cocalyxi (Maxin) Hara為唇形科香茶菜屬植物，又名山蘇子，廣布于我國北方，長(zhǎng)期以來，我國民間作為毛葉香茶菜用，具有健胃、清熱解毒、活血、抗菌消炎和抗癌活性。藍(lán)萼香茶菜還具有與劑量相關(guān)的心肌保護(hù)作用。其化學(xué)成分主要為二萜和三萜類化合物。沈曉丹等從藍(lán)萼香茶菜中分離得到藍(lán)萼甲素、藍(lán)萼乙素、藍(lán)萼丙素、齊墩果酸、熊果酸、海棠果醛、木栓酮等化合物。其中藍(lán)萼甲素、藍(lán)萼乙素、藍(lán)萼丙素、藍(lán)萼丁素、藍(lán)萼戊素、藍(lán)萼己素屬于貝殼杉烷型二萜類化合物，張濱等通過藥理研究發(fā)現(xiàn)藍(lán)萼甲素具有顯著抑制ADP，AA, PAF等誘導(dǎo)的兔血小板聚集。 中國專利申請(qǐng)?zhí)?00910044882. 0采用MTT法，用AM9、L0V0、6T_CEM、HL-60細(xì)胞株對(duì)藍(lán)萼甲素、藍(lán)萼乙素、藍(lán)萼丙素、藍(lán)萼丁素、藍(lán)萼戊素、藍(lán)萼己素進(jìn)行了細(xì)胞毒活性實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)它們均具有顯著的細(xì)胞毒活性，可用于制備抗癌藥物。中國專利申請(qǐng)?zhí)?00910044883. 6采用乙肝表面抗原(HBsAg)診斷試劑盒和乙肝核心抗原(HBeAg)診斷試劑盒對(duì)上述藍(lán)萼香茶菜二萜類化合物進(jìn)行了抗乙肝表面抗原和乙肝核心抗原試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)它們均具有顯著的抗乙肝病毒活性，可用于制備乙肝病毒的藥物?，F(xiàn)有技術(shù)中，從藥材藍(lán)萼香茶菜中提取二萜類化合物的方法多采用有機(jī)溶劑萃取、硅膠柱層析的方法分離純化，該方法存在分離周期長(zhǎng)、成本高等缺陷。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所述藍(lán)萼香茶菜總二萜是從藍(lán)萼香茶菜葉中提取分離的二萜類化合物的混合物。本發(fā)明的目的是提供一種藍(lán)萼香茶菜總二萜的制備方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
一種藍(lán)萼香茶菜總二萜的制備方法，其特征在于將藍(lán)萼香茶菜葉粉碎成粗粉，以乙醇或甲醇為提取溶媒進(jìn)行提取，將合并的提取液冷卻后過濾，濾液加活性炭攪拌、過濾，脫色液濃縮至相對(duì)密度為1. 05-1. 12，再通過3000-10000道爾頓的中空纖維超濾膜，操作壓力為0. 1-0. 3MPa，透過液經(jīng)預(yù)處理好的大孔吸附樹脂吸附，先用水洗脫，再以30-70%乙醇水溶液洗脫，洗脫用量為3-6BV，洗脫流速為0. 5-2BV/h，得到的洗脫液濃縮干燥即得藍(lán)萼香茶菜總二蔽。所述提取溶媒乙醇或甲醇的體積百分比為60-95%，提取方法為回流提取、索氏提取、浸漬提取、滲漉提取、微波提取的一種或幾種結(jié)合。所述活性炭為藥用活性炭，加入量為藥材量的0. 5-2%，脫色溫度為50-60°C。本發(fā)明方法具有操作簡(jiǎn)單、能耗低、產(chǎn)品質(zhì)量高等優(yōu)點(diǎn)，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
將藍(lán)萼香茶菜葉粉碎成粗粉，稱取Ikg置于提取罐中，加入6倍量的70%甲醇進(jìn)行加熱回流提取2小時(shí)，提取2次，合并兩次提取液放冷，過濾，濾液加1%的藥用活性炭加熱攪拌， 過濾，脫色過濾液濃縮至相對(duì)密度為1. 08，再通過截留分子量為6000道爾頓的中空纖維超濾膜系統(tǒng)中，調(diào)整操作壓力為0. 2MPa，收集透過液，將透過液上樣于預(yù)處理好的大孔吸附樹脂柱，飽和吸附后，依次用水、60%乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，干燥即得藍(lán)萼香茶菜總二萜，總二萜類的含量為76%，經(jīng)HPLC檢測(cè)，藍(lán)萼甲素、藍(lán)萼乙素、藍(lán)萼丙素、 藍(lán)萼丁素、藍(lán)萼戊素、藍(lán)萼己素的含量之和為46%。實(shí)施例2:
將藍(lán)萼香茶菜葉粉碎成粗粉，稱取Ikg置于提取罐中，加入10倍量的80%乙醇進(jìn)行微波提取1小時(shí)，提取3次，合并三次提取液放冷，過濾，濾液加1. 5%的藥用活性炭加熱攪拌， 過濾，脫色過濾液濃縮至相對(duì)密度為1. 12，再通過截留分子量為10000道爾頓的中空纖維超濾膜系統(tǒng)中，調(diào)整操作壓力為0. IMPa，收集透過液，將透過液上樣于預(yù)處理好的大孔吸附樹脂柱，飽和吸附后，依次用水、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，干燥即得藍(lán)萼香茶菜總二萜，總二萜類的含量為72%，經(jīng)HPLC檢測(cè)，藍(lán)萼甲素、藍(lán)萼乙素、藍(lán)萼丙素、藍(lán)萼丁素、藍(lán)萼戊素、藍(lán)萼己素的含量之和為43%。實(shí)施例3:
將藍(lán)萼香茶菜葉粉碎成粗粉，稱取2kg置于提取罐中，加入7倍量的60%乙醇進(jìn)行滲漉提取，至滲漉液色變淡，收集提取液放冷，過濾，濾液加2、的藥用活性炭加熱攪拌，過濾，脫色過濾液濃縮至相對(duì)密度為1.05，再通過截留分子量為3000道爾頓的中空纖維超濾膜系統(tǒng)中，調(diào)整操作壓力為0. 3MPa，收集透過液，將透過液上樣于預(yù)處理好的大孔吸附樹脂柱， 飽和吸附后，依次用水、30%乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，干燥即得藍(lán)萼香茶菜總二萜，總二萜類的含量為61%，經(jīng)HPLC檢測(cè)，藍(lán)萼甲素、藍(lán)萼乙素、藍(lán)萼丙素、藍(lán)萼丁素、藍(lán)萼戊素、藍(lán)萼己素的含量之和為40%。實(shí)施例4:
將藍(lán)萼香茶菜葉粉碎成粗粉，稱取5kg置于提取罐中，加入8倍量的95%甲醇進(jìn)行索氏提取3小時(shí)，提取3次，合并三次提取液放冷，過濾，濾液加0. 5%的藥用活性炭加熱攪拌，過濾，脫色過濾液濃縮至相對(duì)密度為1. 10，再通過截留分子量為4000道爾頓的中空纖維超濾膜系統(tǒng)中，調(diào)整操作壓力為0. 25MPa，收集透過液，將透過液上樣于預(yù)處理好的大孔吸附樹脂柱，飽和吸附后，依次用水、45%乙醇洗脫，收集45%乙醇洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，干燥即得藍(lán)萼香茶菜總二萜，總二萜類的含量為65%，經(jīng)HPLC檢測(cè)，藍(lán)萼甲素、藍(lán)萼乙素、藍(lán)萼丙素、 藍(lán)萼丁素、藍(lán)萼戊素、藍(lán)萼己素的含量之和為48%。實(shí)施例5:
將藍(lán)萼香茶菜葉粉碎成粗粉，稱取5kg置于提取罐中，加入10倍量的75%甲醇進(jìn)行浸漬提取12小時(shí)，過濾，濾渣再用8倍量的75%甲醇進(jìn)行浸漬提取8小時(shí)，合并兩次提取液放冷，過濾，濾液加1%的藥用活性炭加熱攪拌，過濾，脫色過濾液濃縮至相對(duì)密度為1. 09， 再通過截留分子量為8000道爾頓的中空纖維超濾膜系統(tǒng)中，調(diào)整操作壓力為0. 15MPa，收集透過液，將透過液上樣于預(yù)處理好的大孔吸附樹脂柱，飽和吸附后，依次用水、50%乙醇洗脫，收集50%乙醇洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，干燥即得藍(lán)萼香茶菜總二萜，總二萜類的含量為 73%，經(jīng)HPLC檢測(cè)，藍(lán)萼甲素、藍(lán)萼乙素、藍(lán)萼丙素、藍(lán)萼丁素、藍(lán)萼戊素、藍(lán)萼己素的含量之和為44%。
權(quán)利要求
1.一種藍(lán)萼香茶菜總二萜的制備方法，其特征在于將藍(lán)萼香茶菜葉粉碎成粗粉，以乙醇或甲醇為提取溶媒進(jìn)行提取，將合并的提取液冷卻后過濾，濾液加活性炭攪拌、過濾， 脫色液濃縮至相對(duì)密度為1.05-1. 12，再通過3000-10000道爾頓的中空纖維超濾膜，操作壓力為0. 1-0. 3MPa，透過液經(jīng)預(yù)處理好的大孔吸附樹脂吸附，先用水洗脫，再以30-70%乙醇水溶液洗脫，洗脫用量為3-6BV，洗脫流速為0. 5-2BV/h，得到的洗脫液濃縮干燥即得藍(lán)萼香茶菜總二萜。
2.如權(quán)利要求1所述的一種藍(lán)萼香茶菜總二萜的制備方法，其特征在于所述提取溶媒乙醇或甲醇的體積百分比為60-95%，提取方法為回流提取、索氏提取、浸漬提取、滲漉提取、 微波提取的一種或幾種結(jié)合。
3.如權(quán)利要求1所述的一種藍(lán)萼香茶菜總二萜的制備方法，其特征在于所述活性炭為藥用活性炭，加入量為藥材量的0. 5-2%，脫色溫度為50-60°C。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種藍(lán)萼香茶菜總二萜的制備方法，方法是采用溶劑提取和大孔樹脂富集結(jié)合的方法從藍(lán)萼香茶菜中提取制備總二萜類。其制備方法為將藍(lán)萼香茶菜葉粉碎成粗粉，加入溶媒提取，將合并的提取液冷卻后過濾，濾液加活性炭脫色，脫色液通過3000-10000道爾頓的超濾膜，透過液經(jīng)預(yù)處理好的大孔吸附樹脂吸附，乙醇水溶液洗脫，得到的洗脫液濃縮干燥即得藍(lán)萼香茶菜總二萜。本發(fā)明方法具有操作簡(jiǎn)單、能耗低、產(chǎn)品質(zhì)量高等優(yōu)點(diǎn)，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61P31/20GK102327317SQ20111026398
公開日2012年1月25日 申請(qǐng)日期2011年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月8日
發(fā)明者劉東鋒, 郭琴 申請(qǐng)人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司