專利名稱：一種提取銀杏葉有效成分的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提取植物中有效成分的生產(chǎn)方法，特別涉及一種提取能治療心腦血管疾病的銀杏葉有效成分的生產(chǎn)方法，屬于中藥制備領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
銀杏是世界上最古老的孑遺植物，素有“活化石”和“植物界的熊貓”之稱，我國是銀杏的故鄉(xiāng)，銀杏含量占世界總量的70%以上。銀杏樹的果實(shí)和葉子均有很高的藥用價值和食用價值。據(jù)《本草綱目》記載，銀杏“熟食溫肺益氣，定喘嗽，縮小便，止白濁；生食降痰、 消毒、殺蟲"。目前銀杏葉提取物廣泛用于改善心腦血管功能。銀杏是最早被國外研究者認(rèn)識和被廣泛認(rèn)同的中草藥之一，其制劑是世界上最暢銷的植物藥。銀杏葉中含量最高的是黃酮類物質(zhì)，萜內(nèi)酯是銀杏特有的結(jié)構(gòu)復(fù)雜的化合物，從銀杏葉中提取的黃酮類和萜內(nèi)酯類等有效成分對治療冠心病、腦血栓心腦血管疾病有明顯效果。目前，銀杏黃酮化合物的提取方法有水提取、有機(jī)溶劑提取、超臨界流體提取等方法。 水提法成本低，但提取率差，原料采用率不高；有機(jī)溶劑提取成本高，雜質(zhì)含量高；超臨界流體法雖提取率高，但因設(shè)備昂貴，普及受限制，CN101708195A專利于2010年5月19日公開了一種銀杏提取物的生產(chǎn)工藝，但這種工藝仍然存在銀杏葉有效成分提取率不高，不環(huán)保等缺陷，且這種工藝提取銀杏葉有效成分黃酮類物質(zhì)的含量最高只能達(dá)到24. 5%，因此， 急需一種能有效提高銀杏葉中黃酮類物質(zhì)含量的生產(chǎn)方法。
發(fā)明內(nèi)容
為克服現(xiàn)有技術(shù)存在的提取銀杏葉有效成分提取率低、不環(huán)保等缺點(diǎn)，本發(fā)明提供了一種能有效提高銀杏葉有效成分提取比率的生產(chǎn)方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案一種提取銀杏葉有效成分的生產(chǎn)方法，其特征在于包括以下步驟(1)酶解銀杏葉將銀杏葉原料粉碎成粗粉后，與酶解液混合均勻，在30 60°C的溫度下酶解1 2天；(2)提取銀杏葉有效成分將酶解好的銀杏粉加入乙醇，在70 85°C的溫度下回流提取1次，再加入轉(zhuǎn)苷酶和相應(yīng)糖基配體物質(zhì)，然后加入乙醇，在50-60°C的溫度下回流提取1次，過濾，合并兩次的提取液后回收乙醇，脫脂；合并兩次的提取液后回收乙醇，脫脂；(3)上柱層析將脫脂后的提取液通過大孔吸附樹脂柱層析，然后依次用水洗脫一次，用乙醇洗脫至少三次，用鹽酸鎂粉試驗(yàn)洗脫液成陽性段后，合并洗脫液，回收乙醇，濃縮成膏狀后干燥。將銀杏葉原料粉碎成顆粒后，增大了物料與酶解液及提取溶劑接觸的比表面積， 使原料充分溶解于溶劑中，能提高提取率。溫度對酶具有雙重影響，因而合適的溫度能夠使酶發(fā)揮其最大活性，同時也能保持其較好的穩(wěn)定性，對細(xì)胞壁進(jìn)行裂解，致使溶劑溶解黃酮類化合物向細(xì)胞表面擴(kuò)散時，阻力減小，有利于向溶劑主體擴(kuò)散，提高銀杏總黃酮的提取率，在30 60°C的溫度下進(jìn)行酶解，有利于在保持酶的穩(wěn)定性的同時使酶發(fā)揮最大活力，使浸提效果達(dá)到最佳；浸提溫度與浸提速率成正比，溫度升高能減小乙醇溶劑的粘度，從而提高銀杏黃酮的提取效率；但是溫度太高有可能破壞黃酮的熱穩(wěn)定性，雜質(zhì)溶出的概率也增大，反而會降低浸提效果，因此保持合適的溫度就變得很重要，本發(fā)明將溫度控制在70 85°C是最佳的浸提溫度。進(jìn)一步的，所述步驟(1)中的酶解液為水和酶的混合物，水和酶的質(zhì)量比為 100 1 ；酶解液的水與銀杏葉粉的質(zhì)量比為2 1。優(yōu)選的，所述的酶為轉(zhuǎn)苷酶或纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、復(fù)合酶中的一種與轉(zhuǎn)苷酶的混合物。銀杏葉中的黃酮類化合物和萜內(nèi)酯主要包裹在以纖維素為主構(gòu)成的細(xì)胞壁內(nèi)，單獨(dú)的乙醇提取法無法使細(xì)胞壁完全破裂，致使銀杏葉有效成分的溶出存在相當(dāng)?shù)淖枇?，?dǎo)致提取效果受到很大的影響。將銀杏葉進(jìn)行酶預(yù)處理，酶能破壞銀杏葉的細(xì)胞壁，使細(xì)胞壁松散、破裂，因而能減小銀杏葉有效成分化合物的溶出阻力，使銀杏葉的有效成分充分溶解，縮短提取時間，增強(qiáng)有效成分的提取效果。轉(zhuǎn)苷酶可使銀杏葉中一些酯溶性有效成分轉(zhuǎn)化為帶糖基的親水性成分而提高收得率。在30 60°C的溫度下對銀杏葉進(jìn)行酶解處理，能使纖維素酶或半纖維素酶或果膠酶或復(fù)合酶與轉(zhuǎn)苷酶的混合物保持良好的活性，達(dá)到酶解處理的預(yù)期效果。酶解后的銀杏葉粉在經(jīng)過乙醇提取后，相對于其它方法得到的提取液，大分子物質(zhì)相對較少，便于過濾，使樹脂孔內(nèi)雜質(zhì)減少，在層析過程中不會堵塞樹脂孔，使層析更充分，雜質(zhì)分離更徹底。進(jìn)一步的，所述的回流提取工藝，第一次用30 70%的乙醇提取2小時，第二次用30%的乙醇提取1.5小時；乙醇與銀杏葉粉質(zhì)量比第一次為5 1，第二次為3 1;加入的轉(zhuǎn)苷酶和相應(yīng)糖基配體物質(zhì)與銀杏葉粉的質(zhì)量比為1 2 100;所述的相應(yīng)糖基配體物質(zhì)為麥芽糖或葡萄糖。第一次用30 70%乙醇在70°C-85°C的溫度下進(jìn)行提取，目的是有利于銀杏葉中有效成分的充分萃取，并便于第二次加酶處理，第二次回流提取中使用轉(zhuǎn)苷酶和糖基配體物質(zhì)對銀杏葉進(jìn)行處理，能提高黃酮苷元的極性，在此基礎(chǔ)上再使用30%乙醇進(jìn)行第二次提取，進(jìn)一步提高黃酮苷的收率。優(yōu)選的，所述的步驟O)中回流提取采用多功能提取罐對料液進(jìn)行提取，能進(jìn)一步增大提取率。進(jìn)一步的，所述的用乙醇分別洗脫三次是指第一次用30%乙醇、第二次用60%乙醇、第三次用80%乙醇分別洗脫。提取液過柱后，用純化水洗脫至洗脫液澄清，以除去在大孔樹脂層析柱中的大分子物，清除雜質(zhì)，再分別用乙醇進(jìn)行三次梯度洗脫，使吸附在樹脂柱上的銀杏葉有效成分充分與樹脂柱分離，增強(qiáng)了提取的純度。優(yōu)選的，所述的步驟(3)中的大孔吸附樹脂柱層析采用ADX-16型大孔吸附樹脂柱，該樹脂為美國羅門哈斯生產(chǎn)，對銀杏黃酮及內(nèi)酯選擇性強(qiáng)，能有效降低銀杏酸的含量.本發(fā)明的有益效果如下1、將銀杏葉在浸提前酶解預(yù)處理，使銀杏葉中的有效成分充分溶出，極大的提高了浸提效力；2、本發(fā)明采用多次浸提，純水洗脫后再用不同純度的乙醇三次梯度洗脫的方法， 有利于完全溶出和充分解析銀杏葉的有效成分，使提取的有效成分含量大大的提高；3、本發(fā)明的酶解預(yù)處理、多次浸提、酶解、層析、分步洗脫都能分別提高銀杏葉的有效成分的提取率，綜合各步驟的技術(shù)方案，有效控制各個階段的工藝，最后能使銀杏葉提取物中有效成份的含量提高43% 65% ；4、本發(fā)明的生產(chǎn)方法操作簡單、環(huán)保無毒，生產(chǎn)成本低。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明一種提取銀杏葉有效成分的生產(chǎn)方法，包括以下步驟(1)首先將銀杏葉原料1000克粉碎成粗粉，然后將20克酶與2000克水混合，攪拌均勻配成酶解液，再加入粉碎的銀杏粉，在30 60°C的溫度下酶解1 2天；(2)將上述酶解好的銀杏葉粉加入5000克30%的乙醇(生產(chǎn)過程中加入的乙醇濃度可以在30 70%之間選擇)，在70 85°C的溫度下用多功能提取罐回流提取2小時后過濾，再加入12ml Suhong475轉(zhuǎn)苷酶和80g/L的麥芽糖，用3000克30%乙醇在50_60°C 的溫度下回流提取1. 5小時后過濾，收集兩次的提取液后回收乙醇，脫脂；生產(chǎn)過程中，糖基配體物質(zhì)還可以用葡萄糖；轉(zhuǎn)苷酶和相應(yīng)糖基配體物質(zhì)與銀杏葉粉的質(zhì)量比為1 2 100，生產(chǎn)中根據(jù)銀杏葉原材料的質(zhì)量，相應(yīng)的添加轉(zhuǎn)苷酶和糖基配體物質(zhì)，在1 2 100的范圍內(nèi)合理調(diào)配轉(zhuǎn)苷酶和糖基配體物質(zhì)的質(zhì)量；(3)上柱層析將脫脂后的提取液通過ADX-16型大孔吸附樹脂柱層析，然后依次用水洗脫一次，再用30 %乙醇、60%乙醇、80 %乙醇分別洗脫，用鹽酸鎂粉試驗(yàn)洗脫液成陽性段后，合并三次的洗脫液，回收乙醇，濃縮成膏狀后干燥。以下為各實(shí)施例的具體工藝參數(shù)對照表
權(quán)利要求
1.一種提取銀杏葉有效成分的生產(chǎn)方法，其特征在于包括以下步驟(1)酶解預(yù)處理將銀杏葉原料粉碎成粗粉后，與酶解液混合均勻，在30 60°C的溫度下酶解1 2天；(2)提取銀杏葉有效成分將酶解好的銀杏粉加入乙醇，在70 85°C的溫度下回流提取1次，再加入轉(zhuǎn)苷酶和相應(yīng)糖基配體物質(zhì)，然后加入乙醇，在50 60°C的溫度下回流提取 1次，過濾，合并兩次的提取液后回收乙醇，脫脂；(3)上柱層析將脫脂后的提取液通過大孔吸附樹脂柱層析，然后依次用水洗脫一次， 用乙醇洗脫至少三次，用鹽酸鎂粉試驗(yàn)洗脫液成陽性段后，合并洗脫液，回收乙醇，濃縮成膏狀后干燥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取銀杏葉有效成分的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述的步驟(1)中的酶解液為水和酶的混合物，水和酶的質(zhì)量比為100 1;所述的酶解液的水與銀杏葉粉的質(zhì)量比為2 1。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種提取銀杏葉有效成分的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述的酶為轉(zhuǎn)苷酶或纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、復(fù)合酶中的一種與轉(zhuǎn)苷酶的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取銀杏葉有效成分的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述的步驟O)中的回流提取工藝，第一次用30 70%的乙醇提取2小時，第二次用30%的乙醇提取1.5小時；所述的乙醇與銀杏葉粉質(zhì)量比第一次為5 1，第二次為3 1;所述加入的轉(zhuǎn)苷酶和相應(yīng)糖類物質(zhì)與銀杏葉粉的質(zhì)量比為1 2 100 ；所述的相應(yīng)糖基配體物質(zhì)為麥芽糖或葡萄糖。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取銀杏葉有效成分的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述的步驟O)中回流提取采用多功能提取罐對料液進(jìn)行提取。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取銀杏葉有效成分的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述的步驟(3)中用乙醇分別洗脫三次是指第一次用30%乙醇、第二次用60%乙醇、第三次用 80%乙醇分別洗脫。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提取銀杏葉有效成分的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述的步驟(3)中的大孔吸附樹脂柱層析采用ADX-16型大孔吸附樹脂柱。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種提取銀杏葉有效成分的生產(chǎn)方法，包括以下步驟酶解預(yù)處理→加入乙醇回流提取1次→加入轉(zhuǎn)苷酶和相應(yīng)糖基配體物質(zhì)后再加入乙醇回流提取1次→將過濾后的提取液后回收乙醇，脫脂→上柱層析，用水和乙醇洗脫→將洗脫液回收乙醇，濃縮成膏狀后干燥得到提取物。使用本發(fā)明的方法提取銀杏葉，最后能使有效成份的含量提高43％～65％，且本發(fā)明的生產(chǎn)方法操作簡單、環(huán)保無毒，生產(chǎn)成本低。
文檔編號A61P9/00GK102293791SQ201110238230
公開日2011年12月28日 申請日期2011年8月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月18日
發(fā)明者姜新宇, 羅帆, 趙守明 申請人:湖南麓山天然植物制藥有限公司