專利名稱：治療豬鏈球菌和豬瘟混合感染的中藥注射劑及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種獸醫(yī)用藥品，具體的說是一種治療豬鏈球菌和豬瘟混合感染的中藥注射劑及其制備方法。
背景技術：
生態(tài)豬生產是我國畜牧業(yè)發(fā)展的一個主要產業(yè)之一，也是我國畜牧產品出口創(chuàng)匯的一個主要支柱，是在增加國民收入和提高人民生活水平方面、加快農牧業(yè)發(fā)展、調整農業(yè)產業(yè)化結構等方面的重要目標。近幾年來，在我國政府、科研部門和大型生態(tài)豬生產企業(yè)共同努力下，我國畜牧業(yè)發(fā)展迅速，特別是河北、山東等省畜牧業(yè)生產態(tài)勢良好，然而豬鏈球菌和豬瘟混合感染病有趨于嚴重的態(tài)勢。近年來，屢屢報導鏈球菌病和豬瘟混合感染，給養(yǎng)豬場造成了重大經濟損失。發(fā)病原因主要有疫苗免疫不到位或免疫程序不科學未做免疫，或疫苗運輸、保存、使用不當，造成免疫效果差或無效；消毒不到位鏈球菌病多由外傷感染引起，如器械、 環(huán)境消毒不嚴造成傷口感染，子豬的斷臍、斷尾，3、日齡的補鐵、補硒注射，閹割，疫苗的免疫注射等操作過程中消毒不嚴造成感染；防范不到位豬瘟病毒侵入豬場、患有免疫抑制性豬病、原蟲感染加之防治不到位，造成繼發(fā)感染等。臨床癥狀病豬突然精神不振，食欲減退或廢絕，先拉稀后便秘，臥地不愿站立，體溫升高為40.5°C 42°C，眼角有眼屎，喜扎堆，耳、腹部、四肢末端、肛門、尾巴，尤其是股內側、后腿叉上部有紫紅色或藍紫色出血斑，急性的全身發(fā)紅，突然倒地，陣發(fā)痙攣而死，稍緩和的后肢搖擺，站立不穩(wěn)，有的出現(xiàn)后肢軟癱，有的關節(jié)腫大，后期多數(shù)倒地出現(xiàn)神經癥狀， 如陣發(fā)性痙攣、四肢劃動、口吐白沫等，后期體溫降低，腹部皮下有紫紅色出血點，出血點后期變?yōu)楹稚?，乳頭變褐，全身皮毛黯淡無光，體溫低于常溫，衰竭而死。病理變化急性的全身表現(xiàn)敗血癥變化，往往來不及治療即死亡。慢性的眼瞼腫脹，切開有液體流出，淋巴結初期腫大，后期壞死，呈黑褐色，切面呈大理石花紋樣。剖開病死豬腹部皮膚，皮膚內側有零星的黑褐色點狀，肺臟充血、出血，有的胸腔積液，積液遇空氣呈膠凍樣，心肌面有彌漫性出血點，脾臟腫大，周邊有出血梗死或紫黑色壞死灶，肝臟表面有出血點及壞死，腎臟腫大，有出血點或出血斑，膀胱內壁有出血點，小腸、結腸有炎性變化，有的腦膜或腦實質出血，有的關節(jié)腫大，剖開有黃色膠凍樣液體物。臨床診斷一、發(fā)病前期多有外傷史；二、有豬瘟疫苗免疫不到位的情況；三、病豬腹部皮下有明顯出血點，后腿叉上部有出血斑；四、多數(shù)病豬后肢有站立不穩(wěn)現(xiàn)象；五、結合流行病學調查、臨床癥狀、病理解剖等綜合分析作出初步診斷，必要時通過實驗室診斷確診。豬鏈球菌與豬瘟混合感染發(fā)病特點為為急性，發(fā)病快，病程短，死亡率高，以高熱、敗血、神經癥狀和關節(jié)腫大為主，因多達11個血清群致病，有限幾個血清群或型(C、D、E 群和II型)的疫苗，對此病的預防根本無濟于事，加以其耐藥性強，耐藥譜廣，抗生素治療經常無效。當豬場爆發(fā)此病時，經常陷入無計可施的困境。
目前國家采用抗生素來防控，磺胺類藥、補液、強心；大劑量青霉素、磺胺類等，每天2次，連用3-4天；嚴重病例，靜注50%葡萄糖、0. 9%生理鹽水250毫升，10%安鈉咖10毫升、VC1500毫克，每天1次，連用3天；小諾霉素120毫克/頭、柴胡2毫升混合注射，每天 4次，連用2-3天；氯霉素25毫克/千克與5%葡萄糖氯化鈉混合靜注，每天2次；5%恩諾沙星3毫升+柴胡2毫升混合肌注，3次/天，用藥2-3天；氯丙嗪2毫克/千克肌注，每天 2次，連用2-3天；該病原對以上所用的化學藥品較敏感，但毒副作用大，有不同程度的致癌致畸?？股貧埩舫瑯?，生態(tài)豬出口在海關檢疫時而受阻，導致了生態(tài)豬出口難的現(xiàn)狀，制約了生態(tài)豬產業(yè)健康穩(wěn)定發(fā)展，尤其是加入WTO以后，外國政府往往以此為借口拒絕進口中國的生態(tài)豬產品，并且大量不符合出口標準的產品轉入國內消化，對我國人民的身體健康造成了潛在危害。農業(yè)部已制定出《無公害食品一豬肉》的行業(yè)標準(NY5(^9_2001)，規(guī)定了無公害豬肉的感官指標、理化指標、微生物指標等。2011年3月曝光的“瘦肉精”事件就能體現(xiàn)出人們對無公害豬肉的呼吁越來越高，化學藥品有毒副作用，對人的身體有極大危害。
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的就是提供一種療效好、療程短、用量少、成本低、殘留少的治療豬鏈球菌和豬瘟混合感染的中藥注射劑及其制備方法。為解決上述技術問題，本發(fā)明采取的技術方案是
一種治療豬鏈球菌和豬瘟混合感染的中藥注射劑，由下述重量份的中藥材經水提蒸餾醇沉法提取而制成注射液或者凍干粉針金銀花4-10份、黃芩3-9份、柴胡3-9份、地黃2-8 份、桅子2-5份和橘皮2-4份。優(yōu)選的，金銀花6-8重量份、黃芩5-7重量份、柴胡5-7重量份、地黃4_6重量份、 桅子2-4重量份和橘皮2-4重量份。更優(yōu)選的，金銀花7重量份、黃芩6重量份、柴胡6重量份、地黃5重量份、桅子3 重量份和橘皮3重量份。本發(fā)明還提供了一種治療豬鏈球菌和豬瘟混合感染的中藥注射劑的制備方法，其按照下述步驟進行
(1)將柴胡和金銀花經水蒸氣蒸餾，收集重蒸餾液，備用；
(2)將黃芩、地黃、桅子和橘皮與步驟(1)產生的藥渣及蒸餾后的水溶液合并，加水煎煮 3次，濾過，用乙醇沉淀，濾過，濾液回收乙醇后，加入步驟(1)所述重蒸餾液，然后按照常規(guī)方法制成注射液或者采用冷凍干燥的方法將其制成干粉注射制劑。上述技術方案是根據(jù)豬的生理特性及病患豬的病原分離、血清學調查和中獸醫(yī)理論，從擬訂的中藥組方、單味中藥或中藥有效成分，進行體內、體外防治試驗，篩選出的最佳組方。本發(fā)明治療豬鏈球菌和豬瘟混合感染的方解如下
金銀花味甘性寒，氣味芳，既可清氣分熱透疏表，又能解血分熱毒，且在清熱之中又有輕微宣散之功，尤為治陽性瘡瘍的藥?，F(xiàn)代報道為清熱解毒之首選藥。金銀花在試管內對金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、痢疾桿菌、肺炎雙球菌等均具較強的抑制作用。有效成份綠原酸(C16H18O9),有較強的抗病原微生物，有明顯的抗病毒作用。
黃芩苦，寒。入心、肺、膽、大腸、小腸經。功效清熱燥濕，瀉火解毒，瀉上焦之肺火，除腸中溫熱，現(xiàn)代報道，黃芩主要成份黃芩苷(C21H180n)。對傷寒桿菌、痢疾桿菌、綠膿桿菌、百日咳桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌、流感病毒等有抑制作用。柴胡性味苦、平。入心包絡、肝、三焦、膽經。功效能透表、退熱，疏肝解郁，又可升舉陽氣。具有抗炎、解熱與降溫，鎮(zhèn)靜，鎮(zhèn)痛，鎮(zhèn)咳，抗肝損害等作用。地黃甘、苦、寒。入心、肝、腎經。功效清熱涼血，生津。用于熱病熱邪入營，舌絳口渴，或身發(fā)斑疹，或陰虛火盛，咽喉掀腫，以及血熱妄行引起的衄血等癥一瀉火而涼血，氣清質潤，能清營血之邪熱、涼血滋陰、并且具有生津作用?，F(xiàn)代報道，主要成份含地黃素、甘露醇、葡萄糖、鐵質、維生素A等。桅子苦、寒。歸心、肺、三焦經。功效用于熱病心煩，黃疸尿赤，血淋澀痛，血熱吐衄，目赤腫痛，火毒瘡瘍，外治扭挫傷痛。橘皮辛苦，溫。入脾、肺經。功能主治理氣，調中，燥濕，化痰。治胸腹脹滿，不思飲食，嘔吐噦逆，咳嗽痰多。方義本方重用金銀花為君藥。金銀花既可清氣分熱透疏表，又能解血分熱毒，具在清熱之中又有輕微宣散之功，對溶血性鏈球菌有較強的抑制作用。黃芩為臣藥，黃芩“能治熱毒”、“解瘟疫”、“消痰利氣”。本方中柴胡、地黃、桅子、橘皮為佐、使藥；柴胡透表退熱， 疏肝解郁，升舉陽氣；地黃清熱涼血生津；桅子清熱瀉火，涼血解毒。能輕清上行，瀉肺火， 去肌表熱，又能瀉三焦火，涼血清心熱。橘皮理氣，調中，燥濕化痰。諸藥合用，共奏清熱解毒，抗菌，抗病毒，涼血祛瘟之功。經過幾年的試驗，經過對河北、山東、河南三省不同規(guī)模的豬場暴發(fā)的診斷為鏈球菌并發(fā)豬瘟的病例，經病原分離鑒定及體內外藥敏試驗，篩選出最佳配伍方案，其抗病毒、抗細菌并發(fā)豬瘟混合感染病的防治優(yōu)于大多數(shù)抗生素和抗病毒藥物。毒性試驗，將本發(fā)明治療豬鏈球菌和豬瘟混合感染的注射劑給40只小白鼠，注射 2mL藥液每千克，相當豬用量的20倍，觀察期間動物飲食正常，未見動物死亡，注射后，活動有所減少，但動物生存狀態(tài)良好，他后恢復正常，說明用該藥是安全的。采用上述技術方案產生的有益效果在于1)本發(fā)明為純中藥制劑，不含任何抗生素、化學激素等，無殘留、無毒副作用，安全性高，為綠色環(huán)保型制劑；2)經批量試驗證明 本發(fā)明藥物可治療豬鏈球菌和豬瘟混合感染，且治愈率高達90%，副作用小，可替代同類化藥，可防治豬鏈球菌和豬瘟混合感染，且肉質無毒害。本發(fā)明治療豬鏈球菌和豬瘟混合感染的純中藥制劑，商品名為“球瘟克注射液”。 使用該發(fā)明藥治愈率90%，效果明顯。
具體實施例方式實施例1
(1)稱取柴胡300g、金銀花350g，并將柴胡切斷，加水溫浸，經水蒸氣蒸餾，收集初始餾液，約800ml，餾液再重蒸餾，收集重蒸餾液約400mL，備用；
(2)將黃芩、地黃切片后，稱取黃芩300g、地黃250g，并稱取桅子150g和橘皮150g；然后將步驟(1)中產生的藥渣及蒸餾后的水溶液與黃芩、地黃、桅子和橘皮合并，加水于60°C 溫浸池后，煎煮三次，每次1. 5h,合并煎液，減壓濃縮至約600mL，用乙醇沉淀處理三次，含醇量分別為60%、70%、80%，每次均冷藏Mh以上，濾過，濾液回收乙醇后，加入上述重蒸餾液，攪勻，在105°C加熱45min，放冷，于0_4°C放置Mi以上，濾過，加注射用水至IOOOmL,用質量濃度為5%氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值至5. 5-7.5,濾過，灌封，滅菌，即得。本實施例制備的產品為棕黃色至棕紅色澄明液體。下面對本實施例所制備的產品進行鑒別和有效成分測定。一、鑒別
(1)取本品2mL，置水浴上蒸干，加甲醇2mL使溶解，濾過，濾液作為供試品溶液。另取綠原酸對照品，加甲醇制成每ImL含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10 μ L，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿一丙酮一甲酸(5 :4:2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三氯化鋁溶液，吹干，置紫外光燈(365nm)檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。(《中藥注射劑學》)
(2)取本品10mL，置水浴上蒸干殘渣加85%乙醇5mL使溶解，作為供試品溶液。另取黃芩苷對照品，加85%乙醇制成每ImL含0. Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液1 μ 1，點于同一聚酰胺薄膜上，以36%醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。(見《中藥注射劑學》)
測得本實施例PH值為5. 5-7. 5。二、含量測定
(1)綠原酸照高效液相色譜法(《中藥注射劑學》)測定
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇一水一冰醋酸 (20 80 1)為流動相，檢測波長為3Mnm。理論板數(shù)按綠原酸峰計算應不低于6000。對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品適量，置棕色量瓶中，加水制成每ImL 含0. (Mmg的溶液，即得。供試品溶液的制備精密量取本品:3mL，置50mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液10 μ L，供試品溶液10-20 μ L注入液相色譜儀， 測定，即得。本品每支IOmL含金銀花以綠原酸(C16H18O9)不得少于.3. Omgo(2)黃芩苷照高效液相色譜法(《中藥注射劑學》)測定
系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇一冰醋酸一水(48 1 52) (體積比)為流動相，檢測波長276nm。理論板數(shù)按黃芩苷峰計算，不低于1000。對照品溶液的制備精密稱取黃芩對照品，加50%甲醇制成ImL含0. 2mg的溶液。供試品溶液的制備取本品lmL，置50mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法精密吸取供試品溶液與對照品溶液8μ1，分別注入液相色譜儀，分別注入液相色譜儀，分別量取峰面積，外標計算含量，即得。本品含黃芩苷(C21H18O11)每mL不得少于3. Omgo本實施產品功效清熱解毒，瀉火燥濕，抗病毒、抗細菌、增強機體免疫功能，促進康復、防止繼發(fā)感染其他疾病，主要用于抑制和抵抗由鏈球菌病毒和豬瘟病毒引起的高燒不退、精神不振、食欲減退、身體出血等病。本實施例的用法與用量肌注一次量豬按每千克體重0. 05—0. lmL，一日2次，連用3天。本實施例IOmL/支，每mL含原生藥1. 5g。貯藏方法密封，避光，置陰涼處。本實施例產品與其它抗生素類藥物在治療豬鏈球菌和豬瘟混合感染的的試驗比對
1)本實施例產品按每千克體重0.05-0. lmL，連續(xù)肌注3天；
2)氨芐青毒素組每千克體重使用10-20mg，連續(xù)肌注5天；
3)磺胺間甲氧嘧啶鈉組每千克體重使用30-40mg，連續(xù)肌注5天；
4)阿莫西林組每千克體重使用8-Hmg，連續(xù)肌注5天；
5)對照組不使用任何藥物，按照與其他組相同的方法飼養(yǎng)管理。試驗期間試驗用陽性豬統(tǒng)一飼養(yǎng)管理。判定標準臨床癥狀消失，飲食恢復正常。治療效果比較 表1
分組試驗數(shù)治愈數(shù)顯效數(shù)無效死亡治愈率實施例1產品32552931324090. 05%實施例2產品938310089. 2%實施例3產品867610088. 4%實施例4產品1069412088. 7%氨芐青霉素組21182185. 71磺胺間甲氧嘧啶鈉組20162280. 00%阿莫西林組23182378.26%對照組611417%
臨床實驗癥明本實施例產品的實驗效果明顯優(yōu)于其他藥品，可以替代其他同類藥品， 且毒副作用少，肉無商檢之憂，有利于提高國民素質，有利于畜牧業(yè)健康發(fā)展。實施例2
與實施例1不同的是金銀花200g、黃芩150g、柴胡450g、地黃100g、桅子IOOg和橘皮 IOOg0水蒸餾醇沉淀后，濾過，濾液回收乙醇后，加入上述重蒸餾液，攪勻，然后采用常規(guī)的冷凍干燥的方法將其制成干粉注射制劑。便于存貯和運輸。參照實施例1的方法進行對照試驗，結果參見表1。從表1可以看出，本實施例制備的產品實驗效果明顯優(yōu)于其他藥品，可以替代其他同類藥品，且毒副作用少，肉無商檢之憂，有利于提高國民素質，有利于畜牧業(yè)健康發(fā)展。實施例3
與實施例1不同的是金銀花250g、黃芩225g、柴胡75g、地黃200g、桅子125g和橘皮
75g。參照實施例1的方法進行對照試驗，結果參見表1。從表1可以看出，本實施例制備的產品實驗效果明顯優(yōu)于其他藥品，可以替代其他同類藥品，且毒副作用少，肉無商檢之憂，有利于提高國民素質，有利于畜牧業(yè)健康發(fā)展。實施例4
與實施例1不同的是金銀花400份、黃芩200份、柴胡250份、地黃200份、桅子200g 和橘皮250g。
從表1可以看出，本實施例制備的產品實驗效果明顯優(yōu)于其他藥品，可以替代其他同類藥品，且毒副作用少，肉無商檢之憂，有利于提高國民素質，有利于畜牧業(yè)健康發(fā)展。綜上，在當今以回歸自然和以生命科學為中心的時代，一些發(fā)達國家提出從化學合成物中的方向轉向在天然中草藥尋找治療的藥物。本發(fā)明經過多年臨床試驗，用純中藥提取有效成分的方劑，多次小批量示范試驗，結果表明療效顯著、標本兼治、安全、無毒副作用，無殘留，肉質無商檢之憂，深受廣大養(yǎng)殖戶青睞，有利于提高國民身體素質，為廣大養(yǎng)殖企業(yè)保駕護航。本發(fā)明的創(chuàng)新點
1、根據(jù)祖國傳統(tǒng)中醫(yī)學理論，結合現(xiàn)代中藥學等知識，合理配伍協(xié)作增效，組建方劑及確定最佳劑型；
2、根據(jù)致病病原，直接選擇藥物，從天然物中提取活性抗豬鏈球菌和豬瘟混合感染物質，針對性強；
3、根據(jù)臨床癥狀，從分子生物學水平調節(jié)機體相關免疫活性細胞和細胞因子的動態(tài)變化，對該疾病的治療基本機理周密，效果顯著；
4、通過對藥物代謝動力學的研究，選定了最適合機體吸收的劑型，為針對型的最佳治療途徑和治療方法；
5、本品為純中藥制劑，不含任何抗生素，化學激素等，無殘留無毒副作用，安全性高，為綠色環(huán)保型制劑。
權利要求
1.一種治療豬鏈球菌和豬瘟混合感染的中藥注射劑，其特征在于其由下述重量份的中藥材經水提蒸餾醇沉法提取而制成注射液或者凍干粉針金銀花4-10份、黃芩3-9份、柴胡 3-9份、地黃2-8份、桅子2-5份和橘皮2-4份。
2.根據(jù)權利要求1所述的治療豬鏈球菌和豬瘟混合感染的中藥注射劑，其特征在于金銀花6-8重量份、黃芩5-7重量份、柴胡5-7重量份、地黃4-6重量份、桅子2_4重量份和橘皮2-4重量份。
3.根據(jù)權利要求1所述的治療豬鏈球菌和豬瘟混合感染的中藥注射劑，其特征在于金銀花7重量份、黃芩6重量份、柴胡6重量份、地黃5重量份、桅子3重量份和橘皮3重量份。
4.一種權利要求1所述的治療豬鏈球菌和豬瘟混合感染的中藥注射劑的制備方法，其特征在于按照下述步驟進行(1)將柴胡和金銀花經水蒸氣蒸餾，收集重蒸餾液，備用；(2)將黃芩、地黃、桅子和橘皮與步驟(1)產生的藥渣及蒸餾后的水溶液合并，加水煎煮 3次，濾過，用乙醇沉淀，濾過，濾液回收乙醇后，加入步驟(1)所述重蒸餾液，然后按照常規(guī)方法制成注射液或者采用冷凍干燥的方法將其制成干粉注射制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種純中藥治療豬鏈球菌和豬瘟混合感染的注射劑，由下述重量份的中藥材經水提蒸餾醇沉法提取而成金銀花4-10份、黃芩3-9份、柴胡3-9份、地黃2-8份、梔子2-5份和橘皮2-4份。本發(fā)明經多次實驗確定了上述中藥材及其組分含量，具有良好的藥物協(xié)同增效作用。對引起豬鏈球菌和豬瘟混合感染的病毒有強大的殺滅作用，并能迅速增強豬的機體免疫力，防止繼發(fā)感染及其他疾病，治愈率達90%，安全，毒副作用小，無抗藥性，可用以替代同類化藥，促進康復、清熱燥濕、瀉火解毒、涼血生津、療效確切。
文檔編號A61P31/14GK102258620SQ20111020519
公開日2011年11月30日 申請日期2011年7月21日 優(yōu)先權日2011年7月21日
發(fā)明者李志英, 王振海, 趙志敏, 趙鋒 申請人:李志英, 王振海, 趙志敏, 趙鋒