專利名稱：二聚兔耳風(fēng)萜a在制備細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子抑制劑藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物，具體涉及大頭兔耳風(fēng)提取物在制藥中的應(yīng)用，尤其涉及化合物二聚兔耳風(fēng)萜A在制備細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子抑制劑藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
NF- κ B細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子最早是從B細(xì)胞的核抽提物中發(fā)現(xiàn)的一種能與免疫球蛋白κ鏈基因的增強(qiáng)子κΒ序列(GGGACTTTCC)特異性結(jié)合的核蛋白因子，因而稱為NF-κ B。 此因子與κ序列的特異性結(jié)合后，促進(jìn)κ輕鏈基因的表達(dá)。但后來越來越多的證據(jù)表明， 這一因子可啟動(dòng)眾多基因轉(zhuǎn)錄。調(diào)節(jié)包括細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)在內(nèi)的眾多蛋白質(zhì)表達(dá)，從而參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理、病理反應(yīng)。NF-KB的異常激活和很多疾病相關(guān)，例如惡性腫瘤、白血病、自身免疫性疾病、腎臟疾病、心腦血管疾病、各種炎癥、神經(jīng)變形性疾病、眼科疾病發(fā)生時(shí)，其病變細(xì)胞均存在 NF- κ B的異常激活。因此NF- κ B已成為一個(gè)重要的藥物作用靶點(diǎn)。針對(duì)NF- κ B激活途徑中的不同環(huán)節(jié)為靶點(diǎn)進(jìn)行拮抗，可以治療與之相關(guān)的疾病。在白血病、實(shí)體瘤等的細(xì)胞中，NF-K B往往通過遺傳學(xué)改變或信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)異常而持續(xù)性激活。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，NF-K B在白血病、實(shí)體瘤等的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要且復(fù)雜的作用?？偟膩碚f，NF-K B的異常激活可導(dǎo)致一系列與惡性腫瘤相關(guān)基因的異常表達(dá)，從而抑制惡性細(xì)胞凋亡、促進(jìn)腫瘤新生血管形成、誘導(dǎo)惡性腫瘤細(xì)胞耐藥等。NF-K B已成為抗腫瘤、白血病藥物研究的一個(gè)重要靶點(diǎn)，NF-κ B抑制劑的研究為白血病治療提供了一種新的選擇，將NF- κ B抑制劑和傳統(tǒng)放化療配合應(yīng)用。由于其本身即有的抗白血病活性，又能顯著降低白血病細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性，因而，在白血病治療方面有著很好的應(yīng)用前景。兔耳風(fēng)屬(AinsliaeaDC)植物是菊科(Compositae)帚菊木族(Mutisieae Cass) 中的一屬，全世界70余種，中國(guó)有44種4變種，約占總數(shù)的37. 5%，主要分布在長(zhǎng)江流域及西南華南各省。兔耳風(fēng)屬植物藥用種類較多，已廣泛用于治療感冒咳喘、風(fēng)濕痹痛、跌打損傷、泌尿系統(tǒng)疾病等癥?！渡虾Ｊ兴幉臉?biāo)準(zhǔn)》、《江西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》、《云南省藥品標(biāo)準(zhǔn)》、《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》均有收載。對(duì)兔耳風(fēng)屬植物的化學(xué)成分研究始于20世紀(jì)80年代，主要集中在杏香兔耳風(fēng)和械葉兔耳風(fēng)上。但對(duì)大頭兔耳風(fēng)(Ainsliaea macrocephala)化學(xué)成分的研究幾乎沒有。據(jù)報(bào)道兔耳風(fēng)屬植物主要含有倍半萜內(nèi)酯、倍半萜苷、留體、三萜類化合物， 研究表明倍半萜內(nèi)酯具有很好的抗腫瘤活性。且現(xiàn)代藥理及臨床應(yīng)用表明該屬植物有很好的抗炎作用。大頭兔耳風(fēng)產(chǎn)于中國(guó)云南西北部和四川西南部，生于山坡林緣、針葉林下或山脊灌叢中，海拔沈00 3100米，為多年生草本。《中國(guó)植物志》對(duì)大頭兔耳風(fēng)的形態(tài)特征進(jìn)行了詳細(xì)的描述?；衔锒弁枚L(fēng)萜A(Ainsliaidimer A)是從生長(zhǎng)于中國(guó)云南麗江的
大頭兔耳風(fēng)中提取分離得到的，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式I如下
權(quán)利要求
1. 二聚兔耳風(fēng)萜A在制備細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子抑制劑藥物中的應(yīng)用，其特征在于，二聚兔耳風(fēng)萜A的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述二聚兔耳風(fēng)萜A通過下列方法制備(1)提取將大頭兔耳風(fēng)全草，粉碎，以80 95%乙醇回流提取1 3次，每次1 2 小時(shí)，提取液減壓濃縮成流浸膏，加水稀釋后先以石油醚萃取，再以乙酸乙酯萃取，得到乙酸乙酯部位；(2)分離將上述乙酸乙酯部位應(yīng)用硅膠柱層析，以體積比為20 0 4 1的氯仿-甲醇系統(tǒng)梯度洗脫，薄層層析檢測(cè)，收集含二聚兔耳風(fēng)萜A的流分，再經(jīng)葡聚糖凝膠柱層析，以體積比為1 1的氯仿-甲醇洗脫，最后經(jīng)C18反相柱層析，以體積比為4 6 6 4的甲醇-水進(jìn)行洗脫，薄層層析檢測(cè)，得二聚兔耳風(fēng)萜A。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物是由二聚兔耳風(fēng)萜A作為活性成分與藥用載體組成的藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明提供了化合物二聚兔耳風(fēng)萜A在制備細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子抑制劑藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明人采用凝膠遲滯電泳分析(EMSA)檢測(cè)NF-κB的活性、免疫發(fā)光法檢測(cè)NF-κB在細(xì)胞中的分別、Western blot法檢測(cè)二聚兔耳風(fēng)萜A作用HL-60細(xì)胞中NF-κB的表達(dá)、Western blot法檢測(cè)二聚兔耳風(fēng)萜A作用后淋巴瘤細(xì)胞CA46細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)、ELISA法檢測(cè)二聚兔耳風(fēng)萜A對(duì)HL-60細(xì)胞分泌VEGF的影響等實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，二聚兔耳風(fēng)萜A對(duì)腫瘤細(xì)胞異常激活的NF-κB活性有很好的抑制作用。因此，可以作為活性成分，用于制備細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子抑制劑藥物。本發(fā)明所述藥物可作為治療NF-κB因子異常激活引起動(dòng)物和人的白血病、自身免疫性疾病、腎臟疾病、心腦血管疾病、各種炎癥、神經(jīng)變形性疾病、眼科疾病的新用途，為治療這些疾病提供了新的途徑，有較大的臨床應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號(hào)A61K31/365GK102319239SQ20111019110
公開日2012年1月18日 申請(qǐng)日期2011年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月8日
發(fā)明者劉慧 , 單磊, 張衛(wèi)東, 徐?？? 李慧梁, 柳潤(rùn)輝, 沈云亨, 蘇娟 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)