專利名稱：蟬花新用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及生物技術領域，具體涉及蟬花的新用途。
背景技術：
骨質疏松是一種常見的與增齡密切相關的代謝性骨病，現(xiàn)代醫(yī)學認為骨質疏松癥的發(fā)生與成骨細胞((osteoblast，0B)和破骨細胞的偶聯(lián)失衡有關。OB具有合成、分泌組成骨基質膠原和糖蛋白的作用，在維持機體內環(huán)境穩(wěn)定，生理機制調節(jié)和骨代謝疾病中發(fā)揮主要作用。促進成骨細胞增殖是中藥防治骨質疏松癥的主·要途徑，體外培養(yǎng)成骨細胞是藥效評價和新藥開發(fā)的重要研究手段。中藥蝶花(Cordycepes cicadea),是一種與冬蟲夏草類似的藥用蟲生真菌,為蝶擬青霉(Paecilomyces cicadae)寄生在某些蝶若蟲上形成的菌蟲復合體,為我國傳統(tǒng)名貴中藥材，在我國的認識和利用已有悠久的歷史。醫(yī)家認為蟬花是一種與冬蟲夏草相近的珍貴藥材?，F(xiàn)代研究表明，蟬花具有多方面藥理作用，能夠增強機體免疫功能，調節(jié)神經系統(tǒng)，解熱鎮(zhèn)痛，改善腎功能，調節(jié)脂類代謝，抗疲勞、抗應激，抗腫瘤作用等。但無論是天然蟬花還是人工培養(yǎng)的蟬花，均未有其治療骨質疏松的研究與報道。
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供蟬花(Cordyc^pes cicadea)或蟬花的子實體在制備骨細胞增殖藥物中的用途。進一步的，所述骨細胞增殖藥物為治療骨質疏松癥的藥物。所述蟬花可以為天然蟬花或人工蟬花。天然蟬花也稱蟬菌蟬蛹草，是一種具有動物和植物特征的奇妙生物，根是蟬蛹或山蟬的幼蟲體，花是從單個或是2-3個蟬幼蟲頭部生長出來的，約一寸多長，從頂端開花分枝。據(jù)有關的研究提出，蟬花屬于生物病態(tài)現(xiàn)象，是一種蟲菌相依的組合體。秋季來臨，蟬鉆入土中，逐漸變成蟬蛹，在羽化前被冬蟲夏草菌類寄生，當生活備件適宜時，就開始萌發(fā)成菌絲體，吸收蟲體的營養(yǎng)，最終蟲體被菌絲體完全占有而只剩下一個軀殼。萬物復蘇時節(jié)，菌絲體又從營養(yǎng)階段轉化為有性階段，漸漸從頂端開花分枝，故而得名蟬花。人工蟬花是將從天然蟬花中分離出來的蟬擬青霉經發(fā)酵獲得的發(fā)酵產物，包括菌質和子實體，成分及功效與天然蟬花近似。本發(fā)明所述蟬花或蟬花的子實體是指即可以為完整的蟬花，也可以僅為蟬花的子實體。本發(fā)明所指蟬花或蟬花的子實體在制藥中的用途，既可以將蟬花或蟬花的子實體直接入藥，也可以將蟬花或蟬花的子實體采用常規(guī)的方法提取有效成分后(如常規(guī)的煎煮、水提醇沉法、醇提水沉法、鹽析法等)入藥。本發(fā)明經研究發(fā)現(xiàn),蟬花或其子實體對骨細胞具有增殖的功效，該實驗意味著蟬花可以被用于治療骨質疏松癥。蟬花用于治療骨質疏松癥的劑量可以為50mg-100mg/kg，本發(fā)明為蟬花的應用開辟了新的途徑。
具體實施例方式實施例I蟬花及蟬花子實體對MG63骨細胞增殖的作用I、實驗材料與方法I. I實驗材料體外培養(yǎng)人骨細胞MG63(中國細胞庫典藏細胞中心)；DMEM培養(yǎng)基(Gibco，美國)；胎牛血清(天津灝洋生物制品)；胰蛋白酶(Amresco，美國)；地塞米松、β —甘油磷酸鈉、磷酸化抗壞血酸(ASAP)、噻唑蘭(Mrrr)、胰蛋白酶、II型膠原酶、一萘基磷酸鈉(Sigma公司)；蟬花(天然蟬花)及蟬花子實體(為人工培養(yǎng)的蟬花)(上海泛亞生命科學 研究院提供)。實驗前用適量水提取，過濾，濃縮成lg/ml的濃度，使用前進行稀釋。I. 2 方法I. 2. 1MG63細胞的培養(yǎng)從液氮中取出凍存的MG63細胞，迅速放人37°C溫水中，輕輕搖動凍存管令其內容物盡快融化。用吸管吸出細胞懸液至離心管，加入新鮮培養(yǎng)基10mL，輕吹懸浮細胞，1000r/min離心5min，去上清，再用培養(yǎng)液重復洗I次。將MG63細胞以5 X 10個/mL密度接種于含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100IXg/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，置于含5% 0)2、371、飽和濕度的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2411后換液I次。當細胞生長狀態(tài)良好，至覆蓋培養(yǎng)瓶底80%時，以0. 25%胰蛋白酶消化，進行傳代。I. 2. 2細胞增殖的測定將成骨細胞按5 X 10接種于96孔板，每孔接種0. 2mL。待細胞貼壁后，吸棄培養(yǎng)液，分別加入IOOmL終濃度為0. 1,0. 3、lmg/mL的蟬花水提物，蟬花子實體水提物，陰性對照液加入等體積的DMEM培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48h。吸出培養(yǎng)液，用MTT法測定細胞增殖情況，酶聯(lián)免疫檢測儀測定各孔的吸光度值(OD)，測定波長為570nm。I. 2. 3統(tǒng)計學處理應用SPSSlI. O軟件包對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，組間比較采用單因素方差分析，實驗組與對照組比較采用Dunnett-t檢驗。2結果見下表
權利要求
1.蟬花或蟬花的子實體在制備骨細胞增殖藥物中的用途。
2.如權利要求I所述蟬花或蟬花的子實體的用途，其特征在于，所述骨細胞增殖藥物為治療骨質疏松癥的藥物。
3.如權利要求I所述蟬花或蟬花的子實體的用途，其特征在于，所述蟬花為天然蟬花或人工蟬花。
全文摘要
本發(fā)明涉及蟬花的新用途，具體為蟬花或蟬花的子實體在制備骨細胞增殖藥物中的用途。本發(fā)明為蟬花的應用開辟了新的研究方向，為骨質疏松患者帶來了福音。
文檔編號A61K36/066GK102846675SQ20111017827
公開日2013年1月2日 申請日期2011年6月28日 優(yōu)先權日2011年6月28日
發(fā)明者王玉芹, 譚悠久, 蓋悅, 金趙燕, 孫長勝 申請人:上海泛亞生命科技有限公司