專利名稱：一種長循環(huán)紫杉醇納米粒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種長循環(huán)紫杉醇納米粒及其制備方法。
背景技術(shù)：
紫杉醇是紅豆杉屬植物中的一種復(fù)雜的次生代謝產(chǎn)物，是目前臨床應(yīng)用的一線藥物之一。主要適用于卵巢癌和乳腺癌，對(duì)肺癌、大腸癌、黑色素瘤、頭頸部癌、淋巴瘤、腦瘤也都有一定療效。但傳統(tǒng)紫杉類藥物由于溶解度低很難于臨床給藥，需要使用輔助溶劑，但大多輔助溶劑有毒副作用，比如聚氧乙烯蓖麻油被報(bào)道能產(chǎn)生超敏反應(yīng)、腎毒性、神經(jīng)毒性和心臟毒性等副作用。這明顯增加了藥物的毒性，嚴(yán)重限制了該類藥物的療效提高和安全應(yīng)用。近年來使用聚合物材料制備納米粒作為抗癌藥物載體收到人們廣泛的關(guān)注，主要包括聚乳酸(polylactice acid, PLA)、聚乳酸-羥基乙酸共聚物 (poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)等。聚合物載體具有緩慢釋放藥物，降低藥物毒性，促進(jìn)藥物在腫瘤部位的吸收，高的穿越生物膜屏障的能力從而達(dá)到靶向和緩釋藥物的作用。其中PLA無毒、無刺激性，具有良好的生物相容性，可生物分解和吸收。由于PLA優(yōu)良的生物相容性，其降解產(chǎn)物能參與人體代謝，以被美國食品和藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)作醫(yī)用手術(shù)縫合線、注射用膠囊、微球、納米粒及埋植劑等。PLGA是一種可降解的功能高分子有機(jī)化合物，具有良好的生物相容性、無毒、良好的成囊和成膜的性能，被廣泛應(yīng)用于制藥、 醫(yī)用工程材料和現(xiàn)代化工業(yè)領(lǐng)域。在美國PLGA通過FDA認(rèn)證，被正式作為藥用輔料收錄進(jìn)美國藥典。但由于PLA和PLGA納米粒易于被巨噬細(xì)胞識(shí)別和吞噬，在體內(nèi)循環(huán)時(shí)間較短，不能發(fā)揮足夠的藥效。使用聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)修飾使納米粒逃避體內(nèi)的調(diào)理作用來增加納米粒體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間成為近年來的制備長循環(huán)納米粒的一個(gè)熱點(diǎn)，但目前在這方面的技術(shù)并不成熟，尚沒有一種成熟的制備工藝能夠制備出理想(在體內(nèi)滯留時(shí)間長、效果好)的納米粒，并能夠用于大規(guī)模生產(chǎn)。
發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明采用PLA-PEG和PLGA-PEG做為材料，提供了一種作用強(qiáng)而持久、療效高、毒副作用低、可供靜脈注射或靜脈滴注的長循環(huán)紫杉醇納米粒，及其制備方法，本發(fā)明制備的紫杉醇納米粒能夠達(dá)到長循環(huán)的效果，從而增加納米粒在體內(nèi)的滯留時(shí)間，增加納米粒的治療效果。一種長循環(huán)紫杉醇納米粒，是由以下重量份的原料制成的紫杉醇1份，載體材料 5 20份，乳化劑34 132份；納米粒的粒徑范圍為50 450nm ；所述載體材料為PLA-PEG(聚乳酸-聚乙二醇)或PLGA_PEG(聚乳酸/羥基乙酸-聚乙二醇)，其中，PLA-PEG或PLGA-PEG中的PLA或PLGA嵌段的分子量為25000 80000，PEG嵌段的分子量為2000 5000 ；
所述乳化劑為普郎尼克F-68。一種長循環(huán)紫杉醇納米粒的制備方法，工藝如下將載體材料和紫杉醇共同溶解于有機(jī)溶劑中作為油相，乳化劑溶解于雙蒸水中作為水相；然后將油相與水相按照一定比例混合，高速剪切得到乳白色的初乳；將初乳使用高壓乳勻機(jī)進(jìn)行乳勻，得到乳勻后液體； 低速攪拌3 5小時(shí)使有機(jī)溶劑完全揮發(fā)，即得到長循環(huán)紫杉醇納米粒；所述有機(jī)溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷或乙酸乙酯中的一種或任何兩種或兩種以任意比例的混合物；所述油相中載體材料的濃度為10 100mg/mL，油相中紫杉醇的濃度為0. 2 20mg/mL ；所述水相中乳化劑普郎尼克F-68的質(zhì)量濃度為0. 1 5% ；所述油相和水相混合時(shí)油相和水相的體積比為1 (5 40)。所述高速剪切的速度為14000 33000r/min，剪切時(shí)間為1 5min。所述采用高壓乳勻機(jī)乳勻的次數(shù)為5 20次，乳勻壓力范圍為300 1500bar，最終乳勻的壓力為800 1500bar。所述低速攪拌的速度為300 700r/min。本發(fā)明的長循環(huán)紫杉醇納米粒，由于本身粒徑在50 450nm，可用于靜脈注射和靜脈滴注。所使用的載體材料為生物可降解高分子材料，本身無毒，代謝產(chǎn)物為(X)2和水，其中間產(chǎn)物也是人體正常的代謝產(chǎn)物。無刺激性，具有良好的生物相容性。由于載體材料中的 PLA或PLGA段能夠緩慢降解，從而緩慢釋放藥物，達(dá)到延長給藥時(shí)間的作用；PEG嵌段能夠減少血液對(duì)納米粒的調(diào)理作用，從而延長循環(huán)時(shí)間。且不使用輔助溶劑聚氧乙烯蓖麻油等從而避免其產(chǎn)生的超敏反應(yīng)、腎毒性、神經(jīng)毒性和心臟毒性等副作用，給藥方便，增加患者適應(yīng)性。目前現(xiàn)有技術(shù)中制備納米粒的方法包括液中干燥法、自動(dòng)乳化法、乳化聚合法、噴霧干燥法和高壓乳勻法等。其中高壓乳勻法制備工藝簡單、穩(wěn)定，可應(yīng)用于大規(guī)模生產(chǎn)，是一種具有廣泛應(yīng)用前景的制備方法。本方法即采用高壓乳勻法制備長循環(huán)紫杉醇納米粒， 制備工藝簡單、穩(wěn)定；本發(fā)明還優(yōu)選了制備的具體工藝流程。雖然現(xiàn)有技術(shù)中制備納米粒的材料很多，組合也很多，但是對(duì)于紫杉醇來說，并非每種組合都能適用，并非與每種組合結(jié)合都能制備得到納米粒，即使制備得到納米粒，也并不是都能起到理想的效果；本發(fā)明是發(fā)明人經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)篩選后得出的最佳配比和工藝條件，采用本發(fā)明的配比和工藝條件制備得到的納米粒可顯著增加紫杉醇在體內(nèi)的滯留時(shí)間，增強(qiáng)治療效果，且毒副作用低，生物相容性良好?？梢?，本發(fā)明選用了紫杉醇、載體材料和乳化劑的特定組合和特定制備工藝，起到了理想的效果，具備創(chuàng)造性。
圖1為實(shí)施例1中制備得到的長循環(huán)紫杉醇納米粒透射電鏡照片(XMK)；圖2為實(shí)施例1中制備得到的長循環(huán)紫杉醇納米粒粒度分布圖；圖3為紫杉醇的高效液相色譜圖；圖4為長循環(huán)紫杉醇納米粒組(■)和臨床紫杉醇注射劑組(·)的血藥濃度-時(shí)間曲線。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例及試驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但不以任何形式限制本發(fā)明。實(shí)施例1 長循環(huán)紫杉醇納米粒的制備MOmgPLA-PEG和27mg紫杉醇共同溶解于IOmL 二氯甲烷中作為油相，2g F68溶解于IOOmL雙蒸水中作為水相；將油相與水相混合(油相水相比為1 10)，20000rpm高速剪切IOmin得到乳白色的初乳；將初乳使用高壓乳勻機(jī)300bar乳勻5次、600bar乳勻10次、 IOOObar乳勻20次得到乳勻后液體；使用磁力攪拌300rpm攪拌3小時(shí)，使有機(jī)溶劑完全揮發(fā)，得到長循環(huán)紫杉醇納米粒，其透射電鏡照片如圖1所示，其粒度分布圖如圖2所示。實(shí)施例2 長循環(huán)紫杉醇納米粒的制備5.4，LA-PEG和270mg紫杉醇共同溶解于IOOmL 二氯甲烷中作為油相，20g F68溶解于IOOOmL雙蒸水中作為水相；將油相與水相混合(油相水相比為1 10)，33000rpm高速剪切IOmin得到乳白色的初乳；將初乳使用高壓乳勻機(jī)300bar乳勻5次、600bar乳勻10 次、1200bar乳勻5次、1500bar乳勻20次得到乳勻后液體；使用磁力攪拌500rpm攪拌5小時(shí)，使有機(jī)溶劑完全揮發(fā)，得到長循環(huán)紫杉醇納米粒。實(shí)施例3 長循環(huán)紫杉醇納米粒的制備MOmgPLA-PEG和Mmg紫杉醇共同溶解于5mL 二氯甲烷中作為油相，5g F68溶解于IOOmL雙蒸水中作為水相；將油相與水相混合(油相水相比為1 20)，HOOOrpm高速剪切5min得到乳白色的初乳；將初乳使用高壓乳勻機(jī)300bar乳勻5次、600bar乳勻10次、 IOOObar乳勻15次、1500bar乳勻20次得到乳勻后液體；使用磁力攪拌700rpm攪拌3小時(shí)，使有機(jī)溶劑完全揮發(fā)，得到長循環(huán)紫杉醇納米粒。實(shí)施例4 長循環(huán)紫杉醇納米粒的制備135mgPLA-PEG和27mg紫杉醇共同溶解于20mL 二氯甲烷中作為油相，2g F68溶解于IOOmL雙蒸水中作為水相；將油相與水相混合(油相水相比為1 5)，20000rpm高速剪切aiiin得到乳白色的初乳；將初乳使用高壓乳勻機(jī)300bar乳勻5次、600bar乳勻10次、 1200bar乳勻20次得到乳勻后液體；使用磁力攪拌400rpm攪拌3小時(shí)，使有機(jī)溶劑完全揮發(fā)，得到長循環(huán)紫杉醇納米粒。實(shí)施例5 長循環(huán)紫杉醇納米粒的制備270mgPLGA-PEG和27mg紫杉醇共同溶解于IOmL 二氯甲烷中作為油相，2g F68溶解于IOOmL雙蒸水中作為水相；將油相與水相混合(油相水相比為1 10)，20000rpm高速剪切IOmin得到乳白色的初乳；將初乳使用高壓乳勻機(jī)300bar乳勻5次、600bar乳勻10 次、SOObar乳勻20次得到乳勻后液體；使用磁力攪拌500rpm攪拌3小時(shí)，使有機(jī)溶劑完全揮發(fā)，得到長循環(huán)紫杉醇納米粒。試驗(yàn)例1 長循環(huán)紫杉醇納米粒載藥量及包封率的測(cè)定采用高效液相色譜測(cè)定紫杉醇的含量色譜柱=Hypersil ODS柱(大連依利特科學(xué)儀器有限公司；250mmX4. 6mm, 10 μ m)；流動(dòng)相乙腈-蒸餾水(60 40，V/V)；檢測(cè)波長 227nm ；流速1. OmL/min ；進(jìn)樣量20 μ L ；柱溫室溫；理論塔板數(shù)不低于6000。分別取濃度為0. 25 25 μ g/ml的紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按照色譜條件進(jìn)行測(cè)試，以峰面積對(duì)紫杉醇濃度進(jìn)行擬合，建立回歸方程。
將得到的納米?；鞈乙?實(shí)施例1制備)使用0. 45 μ m的微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液200 μ L，加入800 μ L甲醇，渦旋3min，超聲5min，按照高效液相色譜測(cè)定紫杉醇的含量 (高效液相色譜圖如圖3所示)，得到納米粒包封藥物的量。同時(shí)取未過濾的納米?；鞈乙?00 μ L，加入800 μ L甲醇，渦旋3min，超聲5min，按
照高效液相色譜測(cè)定紫杉醇的含量，得到總藥物的量。載藥量<%=(納米粒包封藥物的量/投入載體材料質(zhì)量+納米粒包封藥物的量)X 100%包封率<% =(納米粒包封藥物的量/總藥物的量)X 100%所得微球的平均包封率為60 99%，載藥量為0. 5 20%。試驗(yàn)例2 長循環(huán)紫杉醇納米粒外觀形態(tài)、zate點(diǎn)位、粒徑大小和分布的測(cè)定使用透射電子顯微鏡觀察納米粒(實(shí)施例1制備)的外觀形態(tài)，如圖1所示，采用激光粒度分析儀可測(cè)定納米粒的粒徑分布及zeta電位，如圖2所示。得到的納米粒外觀圓整，粒徑在50 450nm，分布均勻。試驗(yàn)例3 長循環(huán)紫杉醇納米粒家兔體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)考察使用健康雄性新西蘭大白兔，隨機(jī)分為兩組，每組3只，分別給藥長循環(huán)紫杉醇納米粒(實(shí)施例1制備)和臨床紫杉醇注射劑(泰素■，紫杉醇濃度為6mg/mL，使用時(shí)使用生理鹽水稀釋至0. 6mg/mL)，紫杉醇給藥劑量為3mg/kg，分別于給藥后Omin、15min、30min、lh、 2h、4h、6h、8h、12h、24h 和 48h 耳緣靜脈取血，4000r/min 離心 IOmin,取上清(血清)200 μ L, 加入500 μ L甲醇，渦旋3min, 8000r/min離心IOmin,取上清液過0. 22 μ m微孔濾膜，使用高效液相法測(cè)定濾液中紫杉醇的濃度，計(jì)算血液中紫杉醇的濃度，繪制長循環(huán)紫杉醇納米粒組和臨床紫杉醇注射劑組血藥濃度-時(shí)間曲線(如圖4所示)，計(jì)算動(dòng)力學(xué)參數(shù)(如表1 所示)。長循環(huán)紫杉醇納米粒能夠顯著延長紫杉醇在血液中的半衰期(t1/2)、增加藥物-時(shí)間曲線下面積(AUC(tl_t)，AUC(O))，證明所制備的納米粒具有長循環(huán)作用。表1長循環(huán)紫杉醇納米粒組和臨床紫杉醇注射劑組藥動(dòng)學(xué)參數(shù)
權(quán)利要求
1.一種長循環(huán)紫杉醇納米粒，其特征在于，是由以下重量份的原料制成的紫杉醇1 份，載體材料5 20份，乳化劑34 132份；納米粒的粒徑范圍為50 450nm ；所述載體材料為PLA-PEG或PLGA-PEG，其中，PLA-PEG或PLGA-PEG中的PLA或PLGA嵌段的分子量為25000 80000，PEG嵌段的分子量為2000 5000 ； 所述乳化劑為普郎尼克F-68。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種長循環(huán)紫杉醇納米粒的制備方法，其特征在于，工藝如下將載體材料和紫杉醇共同溶解于有機(jī)溶劑中作為油相，乳化劑溶解于雙蒸水中作為水相；然后將油相與水相按照一定比例混合，高速剪切得到乳白色的初乳；將初乳使用高壓乳勻機(jī)進(jìn)行乳勻，得到乳勻后液體；低速攪拌3 5小時(shí)使有機(jī)溶劑完全揮發(fā)，即得到長循環(huán)紫杉醇納米粒；所述有機(jī)溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷或乙酸乙酯中的一種或任何兩種或兩種以任意比例的混合物；所述油相中載體材料的濃度為10 100mg/mL，油相中紫杉醇的濃度為0. 2 25mg/mL ；所述水相中乳化劑普郎尼克F-68的質(zhì)量濃度為0. 1 5% ； 所述油相和水相混合時(shí)油相和水相的體積比為1 (5 40)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的長循環(huán)紫杉醇納米粒的制備方法，其特征在于所述高速剪切的速度為14000 33000r/min，剪切時(shí)間為1 5min。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的長循環(huán)紫杉醇納米粒的制備方法，其特征在于所述采用高壓乳勻機(jī)乳勻的次數(shù)為5 20次，乳勻壓力范圍為300 1500bar，最終乳勻的壓力為 800 1500bar。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的長循環(huán)紫杉醇納米粒的制備方法，其特征在于所述低速攪拌的速度為300 700r/min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種作用強(qiáng)而持久、療效高、毒副作用低、可供靜脈注射或靜脈滴注的長循環(huán)紫杉醇納米粒，是由以下重量份的原料制成的紫杉醇1份，載體材料5～20份，乳化劑34～132份；納米粒的粒徑范圍為50～450nm；所述載體材料為PLA-PEG或PLGA-PEG。其制備方法如下將載體材料和紫杉醇共同溶解于有機(jī)溶劑中作為油相，乳化劑溶解于雙蒸水中作為水相；然后將油相與水相按照一定比例混合，高速剪切得到乳白色的初乳；將初乳使用高壓乳勻機(jī)進(jìn)行乳勻，得到乳勻后液體；低速攪拌3～5小時(shí)使有機(jī)溶劑完全揮發(fā)，即得到長循環(huán)紫杉醇納米粒。
文檔編號(hào)A61K47/34GK102247325SQ201110156078
公開日2011年11月23日 申請(qǐng)日期2011年6月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月28日
發(fā)明者劉永軍, 張娜, 張鵬 申請(qǐng)人:山東大學(xué)