專利名稱：鱟素肽在制備抗血栓藥物和保健品的應(yīng)用及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種鱟素肽(tachyplesin)在制備抗血栓藥物和保健品的應(yīng)用及其制備方法。
背景技術(shù)：
血栓性疾病是一種常見病，常表現(xiàn)為心肌梗死、缺血性腦梗死、靜脈血栓栓塞。每年每千人中有ι 3人發(fā)生不同形式的血栓性疾病，這是一類嚴(yán)重影響健康的疾病。目前臨床上治療血栓性疾病的藥物主要分為抗血小板類藥物、抗凝血藥物和溶血栓藥物?？寡“孱愃幬锞哂幸种蒲“宓恼掣健⒕奂歪尫殴δ?，從而防止血栓形成?？寡“逅幬锟梢杂行У胤乐剐难芗膊〉陌l(fā)生，并可延長患者的生存期，抗血小板藥物在臨床應(yīng)用日益廣泛。從天然活性物質(zhì)中尋找新的抗血小板藥物是篩選新型抗血小板聚集藥物或藥物前體的一個(gè)重要策略。鱟也稱馬蹄蟹，屬肢口綱(Merostomata)劍尾目(Xiphosura)的海洋節(jié)肢動(dòng)物，共 4種，分布于亞洲和北美東海岸，具有很高的藥用價(jià)值。鱟的血液中含有銅離子，它的血液是藍(lán)色的。這種藍(lán)色血液的提取物——“鱟試劑”，可以準(zhǔn)確、快速地檢測人體內(nèi)部組織是否感染細(xì)菌；在制藥和食品工業(yè)中，可用它對毒素污染進(jìn)行監(jiān)測。鱟的肉、卵均可食用，其殼、 尾、卵、肉和血均可入藥。鱟素肽來源于鱟血細(xì)胞提取物，是含有17個(gè)氨基酸殘基的多肽，氨基酸序列NH 2-k-w-c-f-r-v-c-y-r-g-i-c-y-r-r-c-r-conh2。含兩對二硫鍵第三位半胱氨酸殘基與第十六個(gè)半胱氨酸殘基，第七位半胱氨酸殘基與第十二個(gè)半胱氨酸殘基各形成一對二硫鍵。 化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，耐高溫。各種研究資料顯示鱟素肽具有強(qiáng)烈抗菌作用，抑制革蘭氏陰性菌， 革蘭氏陽性菌，真菌生長，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)鱟素具有抗腫瘤作用，國內(nèi)外均有文獻(xiàn)報(bào)道對白血病細(xì)胞，肺癌細(xì)胞，肝癌細(xì)胞，胃癌細(xì)胞具有抑制作用，毒副作用低。我們用自己建立的提取純化方法從鱟血細(xì)胞或鱟試劑生產(chǎn)廢料中純化鱟素肽，并發(fā)現(xiàn)獲得的鱟素肽具有顯著的抗血小板聚集，延長出血時(shí)間及凝血時(shí)間，防止血栓形成的功效。經(jīng)檢索發(fā)現(xiàn)，目前暫無文獻(xiàn)報(bào)道鱟素肽抗血栓的功能，在國內(nèi)外均未發(fā)現(xiàn)用鱟血細(xì)胞來源的鱟素肽作抗血栓藥物或保健品使用的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種鱟素肽的新用途抗血小板聚集，抗血栓。這種鱟素肽可用鱟血細(xì)胞或鱟試劑生產(chǎn)廢料制備，這種多肽能夠顯著地抑制血小板聚集，防止血栓形成。本發(fā)明的另一目的是提供一種鱟素肽的制備方法。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是鱟素肽在制備抗血小板聚集、抗血栓藥物和保健品中的應(yīng)用，或作為抗血小板聚集、抗血栓藥物和保健品組分，或利用鱟素肽作為抗血小板聚集、抗血栓藥物前體改造。
鱟素肽的制備方法，其工藝步驟如下(1)從鱟血細(xì)胞的裂解產(chǎn)物或鱟試劑生產(chǎn)的廢料中用20mmol/L HCl溶液勻漿制備成粗制液；(2)將步驟(1)所得粗制液用8000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，收集上清液，將上清液用三層紗布過濾，用葡聚糖G-50(S印hadex G-50) (1. 5cmX90cm)分離，20mmol/L HCl溶液洗脫，流速1. OmL/分鐘，洗脫峰有三組，收集第三組洗脫產(chǎn)物，調(diào)節(jié)溶液至pH6. 0 7. 0， 10000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，上清液冷凍干燥備用；經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)證實(shí)是單一電泳條帶，分子量約在2KDa。鱟素肽具有很好的抗血小板聚集，延長出血時(shí)間(BT)和凝血時(shí)間(CT)的作用，本發(fā)明可以用于涉及利用該成分制備抗血栓的藥物或藥物組分或藥物前體?？寡▽?shí)驗(yàn)過程簡介1.鱟素肽對全血血小板聚集的影響兔血用塑料管收集和用A⑶(86mmol/L檸檬酸鈉，lllmmol/L葡萄糖，53mmol/L 檸檬酸)0. 15體積比抗凝，取全血0. 5ml與藥物孵育5分鐘，然后用凝血酶(500U/L)或 20ymol/L腺苷二磷酸(ADP)處理，用全血血小板聚集儀記錄聚集情況，記錄數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。表1.鱟素肽對凝血酶誘導(dǎo)的兔全血血小板聚集的影響(n = 4)
權(quán)利要求
1.鱟素肽在制備抗血小板聚集、抗血栓藥物和保健品中的應(yīng)用。
2.鱟素肽在制備抗血小板聚集、抗血栓藥物和保健品組分的應(yīng)用。
3.鱟素肽在作為抗血小板聚集、抗血栓藥物的前體改造中的應(yīng)用。
4.一種鱟素肽的制備方法，其工藝步驟如下(1)從鱟血細(xì)胞的裂解產(chǎn)物或鱟試劑生產(chǎn)的廢料中用20mmol/LHCl溶液勻漿制備成粗制液；(2)將步驟(1)所得粗制液用8000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，收集上清液，將上清液用三層紗布過濾，用葡聚糖G-50分離，20mmol/L HCl溶液洗脫，流速1. OmL/分鐘，洗脫峰有三組，收集第三組洗脫產(chǎn)物，調(diào)節(jié)溶液至PH6. 0 7. 0，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，上清液冷凍干燥備用；經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳證實(shí)是單一電泳條帶，分子量約在 2KDa。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述鱟素肽的制備方法，其特征在于所述葡聚糖G-50的層析柱長 90厘米，直徑1.5厘米。
全文摘要
本發(fā)明屬于一種鱟素肽在制備抗血栓藥物和保健品的應(yīng)用及其制備方法。鱟素肽在制備抗血小板聚集、抗血栓藥物和保健品中的應(yīng)用，或作為抗血小板聚集、抗血栓藥物和保健品組分，或利用鱟素肽作為抗血小板聚集、抗血栓藥物前體改造。這種鱟素肽用鱟血細(xì)胞或鱟試劑生產(chǎn)廢料制備，能夠顯著地抑制血小板聚集，防止血栓形成，具有很好的抗血小板聚集，延長出血時(shí)間(BT)和凝血時(shí)間(CT)的作用。
文檔編號A61K38/10GK102188691SQ20111010133
公開日2011年9月21日 申請日期2011年4月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月19日
發(fā)明者劉 文, 張海濤 申請人:廣東醫(yī)學(xué)院