專(zhuān)利名稱(chēng)：含有天然提取物的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種組合物，該組合物含有作為活性成分的、選自黃芪、三白草、甘草、 薔薇、大黃、刺五加和黃柏中的一種或多種提取物。
背景技術(shù)：
痤瘡?fù)ǔＪ怯尚坌约に厣傻脑黾邮蛊ぶ稍黾佣鸬?。具體地，雄性激素產(chǎn)生的皮脂和毛囊的角化過(guò)度會(huì)導(dǎo)致毛囊變窄或嚴(yán)重時(shí)會(huì)阻塞毛囊。當(dāng)毛囊變窄或阻塞時(shí)，毛囊不能分泌皮脂，產(chǎn)生微粉刺。在這種條件下，毛囊中生長(zhǎng)的厭氧細(xì)菌痤瘡丙酸桿菌可能引起炎癥。炎癥的結(jié)果會(huì)導(dǎo)致紅斑、瘙癢和腫脹，嚴(yán)重時(shí)會(huì)發(fā)生色素沉著過(guò)度。如果用力擠壓或按壓痤瘡，炎癥可能會(huì)惡化成粉刺破裂。同時(shí)，痤瘡疤痕很可能發(fā)展成為組織損傷。各種原因都可以導(dǎo)致炎癥性痤瘡。例如，當(dāng)化妝品的各種添加劑殘留在皮膚上時(shí)， 可以引起炎癥性痤瘡。同時(shí)，身體分泌的皮脂、汗液和紫外線等也可以引起皮膚炎癥。目前，研究人員的研究?jī)H集中在炎癥性痤瘡引起的炎癥的治療方面。然而，即使炎癥得到治療，紅斑或疤痕仍會(huì)存在并在外觀上起到消極作用。因此，本發(fā)明的發(fā)明人進(jìn)行了抑制和防止炎癥性痤瘡引起的色素沉著和疤痕的研究。
發(fā)明內(nèi)容
[技術(shù)問(wèn)題]
本發(fā)明旨在提供一種用于抑制痤瘡導(dǎo)致的色素沉著的組合物。本發(fā)明還旨在提供一種用于抑制痤瘡疤痕的組合物。本發(fā)明還旨在提供一種用于痤瘡后效的調(diào)養(yǎng)組合物。[技術(shù)方案]
一方面，本發(fā)明提供含有作為活性成分的、選自黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加和黃柏中的一種或多種提取物的組合物。[有益效果]
本發(fā)明組合物對(duì)抑制痤瘡導(dǎo)致的色素沉著和/或疤痕有效。
圖1-4展示了黃芪提取物對(duì)GM_CSF(粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子，圖1)、IL_1 α (白細(xì)胞介素Ια，圖2)、IL_8 (白細(xì)胞介素8圖3)和TNF-α (腫瘤壞死因子-α，圖4) 的炎癥細(xì)胞因子的抑制效果；
圖5-8展示了三白草提取物對(duì)GM-CSF (圖5)、IL-I α (圖6)、IL_8 (圖7)和TNF-a (圖8)的炎癥細(xì)胞因子的抑制效果；
圖9-12展示了甘草提取物對(duì)GM-CSF (圖9)、IL-I α (圖10)、IL_8 (圖11)和TNF-a (圖12)的炎癥細(xì)胞因子的抑制效果；圖 13-16 展示了薔薇提取物對(duì) GM-CSF(圖 13)、IL_1 α (圖 14)、IL_8(圖 15)和 TNF-a (圖16)的炎癥細(xì)胞因子的抑制效果；
圖 17-20 展示了大黃提取物對(duì) GM-CSF(圖 17)、IL_1 α (圖 18)、IL_8(圖 19)和 TNF-a (圖20)的炎癥細(xì)胞因子的抑制效果；
圖21- 展示了刺五加提取物對(duì)GM-CSF (，圖21)、IL-I α (圖22)、IL_8 (圖23)和 TNF-a (圖Μ)的炎癥細(xì)胞因子的抑制效果；
圖25- 是黃柏提取物對(duì)GM-CSF (圖25)、IL-I α (圖洸)、IL-8 (圖27)和TNF-a (圖觀)的炎癥細(xì)胞因子的抑制效果；
圖四展示了黃芪提取物對(duì)皮脂生成的抑制效果； 圖30展示了三白草提取物對(duì)皮脂生成的抑制效果； 圖31展示了甘草提取物對(duì)皮脂生成的抑制效果； 圖32展示了薔薇提取物對(duì)皮脂生成的抑制效果； 圖33展示了大黃提取物對(duì)皮脂生成的抑制效果； 圖34展示了刺五加提取物對(duì)皮脂生成的抑制效果； 圖35展示了黃柏提取物對(duì)皮脂生成的抑制效果； 圖36展示了黃芪提取物對(duì)痤瘡導(dǎo)致的色素沉著的抑制效果； 圖37展示了三白草提取物對(duì)痤瘡導(dǎo)致的色素沉著的抑制效果； 圖38展示了甘草提取物對(duì)痤瘡導(dǎo)致的色素沉著的抑制效果； 圖39展示了薔薇提取物對(duì)痤瘡導(dǎo)致的色素沉著的抑制效果； 圖40展示了大黃提取物對(duì)痤瘡導(dǎo)致的色素沉著的抑制效果； 圖41展示了刺五加提取物對(duì)痤瘡導(dǎo)致的色素沉著的抑制效果； 圖42展示了黃柏提取物對(duì)痤瘡導(dǎo)致的色素沉著的抑制效果； 圖43-45展示了黃芪提取物對(duì)痤瘡疤痕的抑制效果； 圖46-48展示了三白草提取物對(duì)痤瘡疤痕的抑制效果； 圖49-51展示了甘草提取物對(duì)痤瘡疤痕的抑制效果。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的組合物包含作為活性成分的、選自黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加和黃柏中的一種或多種提取物。含有選自黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加和黃柏中的一種或多種提取物的組合物具有抑制和阻止痤瘡導(dǎo)致的色素沉著和/或痤瘡疤痕的效果。在一個(gè)典型實(shí)施例中，本發(fā)明的組合物是用于抑制痤瘡導(dǎo)致的色素沉著的組合物，其包含作為活性成分的、選自黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加和黃柏中的一種或多種提取物。在另一個(gè)典型實(shí)施例中，本發(fā)明組合物是用于抑制痤瘡疤痕的組合物，其包含作為活性成分的、選自黃芪、三白草和甘草中的一種或多種提取物。黃芪是一種屬于殼斗目、蝶形花科的雙子葉多年生的草。它生長(zhǎng)于大山的巖石中， 約40-70厘米高，分布在韓國(guó)、日本、中國(guó)東北部和西伯利亞?wèn)|部等地。在東方醫(yī)學(xué)中，這種植物是在秋季收獲的，去掉頭和根須在太陽(yáng)下曬干后即可使用。三白草是一種屬于胡椒目、三白草科的雙子葉多年生的草。白色根莖橫向生長(zhǎng)在泥中。三白草有50-100厘米高，6-8月間開(kāi)花。這種植物主要生長(zhǎng)在潮濕的土壤中，因其根、葉和花均為白色而得中文名“三白草”。已知它可有效防止腳氣、黃疸病和肝炎等，分布在韓國(guó)、日本和中國(guó)。甘草 rah/^is)是一種屬于蝶形花科的雙子葉草本植物，廣泛用作藥用植物。除了韓國(guó)，它還分布在中國(guó)東北部、西伯利亞和蒙古。其有角的莖直，高約1 米。葉子是互生且成奇數(shù)羽狀復(fù)葉。7-8月間開(kāi)紫花，長(zhǎng)1.4-2. 5厘米。紅棕色根深深扎進(jìn)土壤中，根味甜，用作甜味劑或藥用植物。薔薇(薔薇屬)統(tǒng)指薔薇目、薔薇科的野生和培育的雙子葉植物。薔薇是一種開(kāi)花灌木，因它的美麗香氣而被培育。各種品種從北極到亞北極、北半球的溫帶和亞熱帶被廣泛培育。大黃(波葉大黃)指石竹目、蓼科的多年生的草。大黃主要生長(zhǎng)在山谷潮濕的土壤中，原產(chǎn)于中國(guó)。大黃有厚厚的黃根，直的柄高度達(dá)1米。它的主根主要用作藥品。將主根切開(kāi)并干燥用于藥用，或者去除樹(shù)皮和細(xì)根后用于藥用，或者直接用于藥用。它可被用作消炎瀉劑和許多其它用途。刺五加是一種五加科的落葉灌木，高約2-3米。刺五加具有長(zhǎng)的、細(xì)的刺和掌形的互生復(fù)葉。在刺五加的通用名稱(chēng)中，前綴荊指‘有刺的’和五加指‘萬(wàn)靈草藥’。也就是說(shuō)， 通用名稱(chēng)指‘萬(wàn)靈草藥有刺植物’。很早以前，這種植物已被廣泛用作治療神經(jīng)痛、關(guān)節(jié)炎、 高血壓、神經(jīng)衰弱和糖尿病，并作為一種補(bǔ)品。黃柏指入藥的黃柏樹(shù)皮。黃柏是一種蕓香科的落葉闊葉樹(shù)，高約10米。樹(shù)皮中富含軟木，樹(shù)皮內(nèi)層是黃色的。夏至前后剝下的樹(shù)皮，切碎并在陽(yáng)光下干燥后即可得到黃柏。 已知黃柏可降低血糖，抑制肺炎球菌、結(jié)核桿菌和金黃色葡萄糖球菌等的生長(zhǎng)，抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，并具有殺菌作用。已知黃柏可通過(guò)腭反射促進(jìn)胃液分泌從而增進(jìn)食欲?？筛鶕?jù)常用的方法獲得提取物，沒(méi)有特別地限制。在一個(gè)典型實(shí)施例中，可用蒸餾水或C1-C5的無(wú)水或含水低級(jí)醇等有機(jī)溶劑提取選自黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加和黃柏中的一種或多種的提取物。在另一個(gè)典型.實(shí)施例中，可用熱水提取得到提取物。 可通過(guò)設(shè)定真空和高壓條件改善熱水提取的提取效率。在另一個(gè)典型實(shí)施例中，選自黃芪、三白草和甘草中的一種或多種的提取物具有抑制明膠酶的作用。明膠酶是在各種霉菌和酵母菌中表達(dá)的蛋白水解酶，允許明膠液化。明膠酶的種類(lèi)沒(méi)有特別限制。在人體中表達(dá)的明膠酶包括基質(zhì)金屬蛋白酶-9 (MMP-9)和基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP_2)。在另一個(gè)典型實(shí)施例中，選自黃芪、三白草和甘草中的一種或多種的提取物具有抑制MMP-9和/或MMP-2的效果。本發(fā)明組合物可通過(guò)抑制明膠酶特別是 MMP-9和/或MMP-2，來(lái)抑制和預(yù)防痤瘡疤痕。本發(fā)明組合物可用于各種不同的應(yīng)用，而沒(méi)有特別的限制。例如，可將所述組合物制成用于外部皮膚涂敷的劑型，特別是化妝品或藥物組合物。本發(fā)明的用于外部皮膚涂敷的組合物可以是油性或水性介質(zhì)中的溶液劑型、混懸劑、乳液劑型或使用前可溶解于無(wú)菌水的干粉劑型?？墒褂么蠖孤蚜字忍烊划a(chǎn)生的磷脂、失水山梨醇單油酸酯等無(wú)水己糖醇、脂肪酸衍生酯、或聚氧乙烯失水山梨醇單油酸酯等無(wú)水己糖醇與具有環(huán)氧乙烷的脂肪酸衍生酯的縮合產(chǎn)物作為乳化劑，將活性成分乳化于油相，如橄欖油等植物油、液體石蠟等礦物油中，制得油包水型乳液。在另一個(gè)典型實(shí)施例中，本發(fā)明的用于外部皮膚涂敷的組合物可含有占組合物總質(zhì)量為0. l_20wt%，具體為0. 5-20wt%的黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加或黃柏的提取物。提取物含量過(guò)小，控制和改善皮膚狀況的效果很輕微。提取物含量過(guò)大，會(huì)降低添加提取物的效率且可能發(fā)生穩(wěn)定性問(wèn)題。本發(fā)明還提供含有所述組合物的化妝品組合物。當(dāng)將所述組合物制成化妝用組合物時(shí)，其可以用于抑制或改善痤瘡導(dǎo)致的色素沉著。同時(shí)，其也可用于抑制或改善痤瘡疤痕。所述化妝品組合物可以是任何劑型，沒(méi)有特殊限制。例如，所述化妝品組合物可以是潤(rùn)膚乳液、滋養(yǎng)乳液、按摩霜、滋養(yǎng)霜、面膜、凝膠或皮膚粘合型化妝品的劑型。所述化妝用組合物還可以是經(jīng)皮給藥的劑型，如乳液、軟膏、凝膠、霜、貼劑和噴霧。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可容易地根據(jù)每種劑型或化妝用組合物的類(lèi)型或用途添加其它成分。本發(fā)明還提供含有所述組合物的藥物組合物。含有本發(fā)明所述組合物的藥物組合物可以是用于改善和抑制痤瘡導(dǎo)致的色素沉著和/或痤瘡疤痕的組合物。當(dāng)本發(fā)明的組合物用于藥品時(shí)，可向組合物中添加有機(jī)或無(wú)機(jī)載體作為活性成分，以制備用于口服或腸胃外給藥的固體、半固體或液體劑型。用于口服給藥的劑型可以是片劑、丸劑、顆粒劑、硬或軟膠囊、粉劑、細(xì)粉劑、粉末、 乳液、糖漿、丹劑等。用于腸胃外給藥的劑型可以是注射、滴劑、軟膏、洗劑、噴霧、混懸劑、乳劑、栓劑等。根據(jù)常用方法，適當(dāng)?shù)厥褂帽砻婊钚詣?、賦形劑、著色劑、香精、防腐劑、穩(wěn)定劑、 緩沖劑、懸浮劑或其它常用的佐劑，可容易地制備這些劑型。本發(fā)明的藥物組合物可以口服給藥、直腸給藥、局部給藥、經(jīng)皮給藥、靜脈注射、肌肉注射、腹腔給藥或皮下給藥。所述活性成分的給藥劑量會(huì)因治療對(duì)象的年齡、性別和體重，治療的特定疾病或生理?xiàng)l件，疾病或生理?xiàng)l件的嚴(yán)重程度，給藥途徑和診斷的識(shí)別而不同?；谝陨弦蛩?，給藥劑量的確定在本領(lǐng)域的技術(shù)人員水平范圍內(nèi)。普通劑量為0.001-2000 mg/kg/天，更具體地為 0. 5-1500 mg/kg/ 天。本發(fā)明還提供調(diào)養(yǎng)組合物，該調(diào)養(yǎng)組合物含有活性成分或成分，其中含有選自黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加和黃柏中的一種或多種的提取物。更具體地，本發(fā)明還提供用于有計(jì)劃地治療痤瘡后效，如色素沉著和/或疤痕，并控制和改善皮膚狀況的調(diào)養(yǎng)組合物。在一個(gè)典型實(shí)施例中，本發(fā)明調(diào)養(yǎng)組合物可含有占所述組合物總質(zhì)量為0. 1-20 wt%，更具體為0. 5-20 wt%的黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加或黃柏的提取物。提取物含量過(guò)小，控制和改善皮膚狀況的效果很微弱。提取物含量過(guò)大，會(huì)降低添加的提取物的效率，也可能會(huì)發(fā)生穩(wěn)定性問(wèn)題。這里使用的術(shù)語(yǔ)‘調(diào)養(yǎng)’指用于控制和改善皮膚狀況的有計(jì)劃地后期處理。例如， 在河邊、海邊或山谷度假后或長(zhǎng)時(shí)間曬黑后，由于皮膚過(guò)度暴露于紫外線下皮膚可能發(fā)生炎癥。當(dāng)防曬霜或防曬油等中的含有各種添加劑殘留在皮膚上時(shí)，可能會(huì)誘導(dǎo)炎癥性痤瘡。 此外，日常生活中的各種原因均可引起包括炎癥性痤瘡在內(nèi)的皮膚問(wèn)題。調(diào)養(yǎng)總體上是指用于控制和改善皮膚狀況，以抵抗包括炎癥性痤瘡在內(nèi)的皮膚問(wèn)題的后期處理。并且所述調(diào)養(yǎng)組合物可以是一種用于調(diào)養(yǎng)的、粘附、沉積或涂敷在皮膚上的組合物。本發(fā)明還提供含有所述組合物的食品添加劑、功能性食品或保健食品組合物。具體地，所述組合物可以是用于改善和抑制痤瘡導(dǎo)致的色素沉著和/或疤痕的組合物。
本發(fā)明組合物可以是各種形式的食品添加劑或功能性食品組合物。可將其制成發(fā)酵牛奶、奶酪、酸奶、果汁、益生菌、膳食補(bǔ)充劑和各種食品添加劑。在一個(gè)典型實(shí)施例中，所述組合物中可含有其它成分，這些成分不會(huì)消極地影響本發(fā)明所需的效果，且可提供協(xié)同效果。例如，組合物中還可以含有用于改善物理性質(zhì)的香精、色素、消毒劑、抗氧化劑、防腐劑、保濕劑、增稠劑、礦物質(zhì)、乳化劑和合成高分子材料等。 此外，還可以含有水溶性維生素、油溶性維生素、多肽、多糖和海藻提取物等輔助成分。本領(lǐng)域的技術(shù)人員選擇這些成分毫無(wú)困難，添加量應(yīng)在對(duì)本發(fā)明所要達(dá)到的作用產(chǎn)生副作用的范圍內(nèi)。本發(fā)明組合物可以是各種劑型，包括溶液、乳液、粘稠的混合物、片劑和粉體等，也可以通過(guò)各種方式給藥，包括簡(jiǎn)單的飲用、注射、噴涂和擠壓等。
實(shí)施例下面將描述實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)。以下實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)僅用作說(shuō)明用途，并非為了限制本發(fā)明的范圍。[實(shí)施例1]黃芪提取物的制備
收獲8年生的黃芪，洗凈和干燥后粉碎。將黃芪與水混合，在真空高壓陶瓷設(shè)備中80°C 下提取6-8小時(shí)。離心和過(guò)濾產(chǎn)生的提取物，以去除雜質(zhì)。接著，加入1，3-丁二醇制備黃芪提取物。[實(shí)施例2]三白草提取物的制備
將三白草的根洗凈、晾干，接著在室溫下用10倍體積的乙醇提取7天。用250目 (3-μπι)的過(guò)濾器過(guò)濾提取物，再在60°C濃縮。將濃縮物溶解于水中，加入乙酸乙酯。相分離后，分離乙酸乙酯層，并在60°C濃縮。向濃縮物中加入二氯甲烷后，將生成的溶液在乙酸乙酯和正己烷的混合物中沉淀兩次，去除雜質(zhì)。柱分餾后，生成的餾分再在60°C反復(fù)濃縮， 接著在30°C的減壓條件下完全去除殘留的溶劑。接著，將產(chǎn)物溶解在丁二醇中使其濃度為 H進(jìn)一步過(guò)濾和沉淀產(chǎn)生的溶液，以制備三白草提取物。[實(shí)施例3]甘草提取物的制備
將甘草的根洗凈，用乙醇浸泡提取。過(guò)濾提取物，并減壓濃縮。用乙酸乙酯對(duì)濃縮提取物再次提取。用樹(shù)脂柱分離乙酸乙酯餾分，并對(duì)其進(jìn)行過(guò)濾、濃縮和干燥，以制備甘草提取物。[實(shí)施例4]薔薇提取物的制備
將薔薇花瓣洗凈，干燥，接著用熱水、丙二醇或它們的混合物提取。將產(chǎn)生的提取物在減壓條件下反復(fù)濃縮和噴霧干燥，直到完全去除殘留的溶劑，即可得到粉狀的薔薇提取物。[實(shí)施例5]大黃提取物的制備
將Ikg的大黃加入到20kg的純凈水中，并在25°C下提取M小時(shí)。將提取物在0-4°C 沉淀M小時(shí)后，用250目過(guò)濾器過(guò)濾提取物，并用活性炭對(duì)濾液進(jìn)行脫色和去味，進(jìn)一步反復(fù)過(guò)濾濾液，以制備大黃提取物。[實(shí)施例6]刺五加提取物的制備
將Ikg的刺五加加入到20kg的純凈水中，在25°C下提取M小時(shí)。將提取物在0-4°C 沉淀M小時(shí)后，用250目過(guò)濾器過(guò)濾提取物，并用活性炭對(duì)濾液進(jìn)行脫色和去味，進(jìn)一步反復(fù)過(guò)濾濾液，以制備刺五加提取物。[實(shí)施例7]黃柏提取物的制備
將Ikg的黃柏加入到20kg的純凈水中，在25°C下提取M小時(shí)。將提取物在0-4°C沉淀對(duì)小時(shí)后，用250目過(guò)濾器過(guò)濾提取物，并用活性炭對(duì)濾液進(jìn)行脫色和去味，進(jìn)一步反復(fù)過(guò)濾濾液，以制備黃柏提取物。[測(cè)試實(shí)施例1]細(xì)胞的培養(yǎng)
按照&ito等的方法(/ Invest Dermatol 2001, 117: 965-70)從5周大的雄性金倉(cāng)鼠的耳朵的皮脂腺中得到皮脂腺細(xì)胞。接著在培養(yǎng)皿中將皮脂腺細(xì)胞培養(yǎng)至2. 35xl04個(gè)細(xì)胞/cm2。向 DMEM/Ham，s F12 培養(yǎng)基(DMEM/F12) (1:1, Invitrogen, Carlsbad, CA)中加入10%的胎牛血清(JRH Bioscience, Tokyo, Japan)，接著加入0. 68mM的L-谷氨酰胺(Invitrogen)和 IOnM 重組人表皮生長(zhǎng)因子(rhEGF; Progen Biotechnik GmbH, Heidelberg, Germany)來(lái)制備培養(yǎng)基。將100 mg/mL的青霉素和100 mg/mL的鏈霉素(均來(lái)自Gibco，Milan, Italy)用作抗生素。倉(cāng)鼠皮脂腺細(xì)胞與培養(yǎng)皿完全粘合需要M小時(shí)。接著在37°C和5%的CO2條件下培養(yǎng)細(xì)胞。在DMEM 培養(yǎng)基anvitrogen, Carlsbad, CA)中，在 37°C和 5%C02 條件下，培養(yǎng)人角質(zhì)形成細(xì)胞株HaCaT。其中，DMEM培養(yǎng)基添加了 10%的胎牛血清(JRH Bioscience, Tokyo, Japan)、100 mg/mL的青霉素和100 mg/mL的鏈霉素(兩者均來(lái)自Gibco, Milan, Italy)。在RPMI-1640 培養(yǎng)基anvitrogen, Carlsbad, CA)中，在 37°C禾Π 10% 的(X)2 條件下，培養(yǎng)C57BL/6J小鼠產(chǎn)生的黑素細(xì)胞Melan-a細(xì)胞。其中，RPMI-1640培養(yǎng)基中添加了 10% 的胎牛血清(JRH Bioscience, Tokyo, Japan)、200nM 的十四酰佛波乙酯(ΤΡΑ)、100 mg/mL的青霉素和100 mg/mL的鏈霉素(所有均來(lái)自Gibco, Milan, Italy)。[測(cè)試實(shí)施例2]體外炎癥性痤瘡的抑制
將類(lèi)似于人體痤瘡環(huán)境的體外炎癥模型與皮脂腺細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞一起用于有效測(cè)試黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加和黃柏提取物對(duì)炎癥性痤瘡的抑制效果。將 HaCaT角質(zhì)形成細(xì)胞和金倉(cāng)鼠皮脂腺細(xì)胞種在24-孔培養(yǎng)板上，細(xì)胞數(shù)分別為3. 75xl04和 6. OxlO40允許所述細(xì)胞粘附在培養(yǎng)板的底部一天。通過(guò)向DMEM/Ham’ s F12培養(yǎng)基(1:1， Invitrogen, Carlsbad, CA)中添力口 10% 的胎牛血清(JRH Bioscience, Tokyo, Japan)，接著添加100 mg/mL的青霉素和100 mg/mL的鏈霉素(兩者均來(lái)自Gibco公司，米蘭，意大利) 來(lái)制備培養(yǎng)基。一天后，用50 μ M的亞油酸、50 μ M的花生四烯酸、IOnM的雙氫睪酮和0. 5%的痤瘡丙酸桿菌座麼)作為刺激劑誘導(dǎo)炎癥性痤瘡。同時(shí)，用黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加或黃柏提取物處理細(xì)胞，并研究它們對(duì)炎癥性痤瘡的抑制效果。將二甲基亞砜(DMSO) 用作陰性對(duì)照，將IOOnM用于治療痤瘡的處方藥異維甲酸用作陽(yáng)性對(duì)照。用刺激劑和提取物處理一天后，在50 培養(yǎng)基中通過(guò)多重基于微珠的細(xì)胞因子分析測(cè)定培養(yǎng)基中釋放的炎癥性細(xì)胞因子(粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF))、白細(xì)胞介素-la (IL-Ia 白細(xì)胞介素-8 (IL-8)和腫瘤壞死因子-a (TNF-a)的濃度。
具體地，步驟如下。用洗滌緩沖液潤(rùn)濕96-孔濾板后，用真空泵完全去除溶液。接著，細(xì)胞培養(yǎng)基與抗體-偶聯(lián)微珠反應(yīng)30min。反應(yīng)完成后，加入檢測(cè)抗體，繼續(xù)反應(yīng)30min。 然后，向每個(gè)孔中加入鏈霉親和素-藻紅蛋白(PE)。30分鐘后，用洗滌緩沖液去除殘留未附著的鏈霉親和素-藻紅蛋白，用Bio-Plex 200測(cè)定附著在微珠上的細(xì)胞因子的數(shù)量。黃芪提取物的結(jié)果如圖1 (GM-CSF)、圖2 (IL-1 α )、圖3 (IL-8)和圖4 (TNF-α ) 所示。參考圖1-4，黃芪提取物以濃度-依賴(lài)性方式抑制炎癥性細(xì)胞因子。具體地，由圖1 可知，黃芪提取物與處方藥-異維甲酸對(duì)GM-SCF具有同等的抑制效果。三白草提取物的結(jié)果如圖5(GM_CSF)、圖6(IL_1 α )、圖7(IL_8)和圖8(TNF-α ) 所示。參考圖5-8，三白草提取物以濃度-依賴(lài)性方式抑制炎癥性細(xì)胞因子。由圖6可知， 三百草提取物對(duì)IL-I α的抑制效果僅在50ppm以下比較高。甘草提取物的結(jié)果如圖9 (GM-CSF)、圖10 (IL-1 α )、圖11 (IL-8)和圖12 (TNF-α )所示。參考圖9-12，甘草提取物在25ppm時(shí)對(duì)展示了最好的炎癥性細(xì)胞因子的抑制效果。因此，可知即使在相對(duì)較低的濃度下，甘草提取物仍能有效地抑制炎癥性細(xì)胞因子。薔薇提取物的結(jié)果如圖13 (GM-CSF)、圖14 (IL-1 α )、圖15 (IL-8)和圖16 (TNF-α )所示。參考圖13-16，薔薇提取物以濃度-依賴(lài)性方式抑制炎癥性細(xì)胞因子。大黃提取物的結(jié)果如圖17 (GM-CSF)、圖18 (IL-1 α )、圖19 (IL-8)和圖20 (TNF-α )所示。參考圖17-20，大黃提取物以濃度-依賴(lài)性方式抑制炎癥性細(xì)胞因子。刺五加提取物的結(jié)果如圖21 (GM-CSF)、圖22 (IL-1 α)、圖23 (IL-8)和圖24 (TNF-α )所示。參考圖21-24，刺五加提取物以濃度-依賴(lài)性方式抑制炎癥性細(xì)胞因子。黃柏提取物的結(jié)果如圖25 (GM-CSF)、圖洸(IL-1 α )、圖27 (IL-8)和圖28 (TNF-α )所示。參考圖25-28，黃柏提取物以濃度-依賴(lài)性方式抑制炎癥性細(xì)胞因子。[測(cè)試實(shí)施例3]體外皮脂生成的抑制
將類(lèi)似于人體痤瘡環(huán)境的體外炎癥模型與皮脂腺細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞一起用于有效測(cè)試黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加和黃柏提取物對(duì)皮脂生成的抑制效果。將 HaCaT角質(zhì)形成細(xì)胞和金倉(cāng)鼠皮脂腺細(xì)胞種在24-孔培養(yǎng)板上，細(xì)胞數(shù)分別為3. 75xl04和 6. OxlO40允許細(xì)胞粘附在所述培養(yǎng)板的底部一天。通過(guò)向DMEM/Ham’ s F12培養(yǎng)基(1:1， Invitrogen, Carlsbad, CA)中添力口 10% 的胎牛血清(JRH Bioscience, Tokyo, Japan)，接著添加100 mg/mL的青霉素和100 mg/mL的鏈霉素(兩者均來(lái)自Gibco，Milan, Italy)來(lái)制備培養(yǎng)基。一天后，用50 μ M的亞油酸、50 μ M的花生四烯酸、IOnM的雙氫睪酮和0. 5%的痤瘡丙酸桿菌0°.座麼)作為刺激劑誘導(dǎo)炎癥性痤瘡。同時(shí)，分別用黃芪、三白草、甘草、薔薇、 大黃、刺五加或黃柏提取物處理細(xì)胞，并研究它們對(duì)皮脂生成的抑制效果。將二甲基亞砜 (DMSO)用作陰性對(duì)照，將IOOnM的用于治療痤瘡的處方藥異維甲酸用作陽(yáng)性對(duì)照。用刺激劑和提取物處理一天后，通過(guò)油紅0染色法測(cè)定細(xì)胞中產(chǎn)生的中性脂質(zhì)的數(shù)量。具體地，步驟如下。用PBS洗滌細(xì)胞，并將細(xì)胞在3. 7%的甲醛溶液中固著30min。 固著的細(xì)胞經(jīng)PBS洗滌3次和70%的乙醇洗滌1次，接著用油紅0溶液染色30min。將染色后的細(xì)胞再用70%的乙醇洗滌1次，用PBS洗滌3次。接著，用異丙醇溶解油紅0溶液，用分光光度計(jì)測(cè)定520nm處的吸光度。
黃芪提取物的結(jié)果如圖四所示。參考圖四，黃芪提取物可有效抑制皮脂生成。具體地，黃芪提取物在5ppm及以上濃度時(shí)，表現(xiàn)出了優(yōu)越的皮脂生成的抑制效果。三白草提取物的結(jié)果如圖30所示。參考圖30，三白草提取物以濃度-依賴(lài)性方式抑制皮脂生成。三白草提取物在50ppm及以上濃度表現(xiàn)出了對(duì)皮脂生成的明顯的抑制效果。甘草提取物的結(jié)果如圖31所示。參考圖31，即使在相對(duì)較低濃度，甘草提取物仍表現(xiàn)出了對(duì)皮脂生成的抑制效果。薔薇提取物的結(jié)果如圖32所示。參考圖32，薔薇提取物以濃度-依賴(lài)性方式抑制皮脂生成。大黃提取物的結(jié)果如圖33所示。參考圖33，大黃提取物以濃度-依賴(lài)性方式抑制皮脂生成。刺五加提取物的結(jié)果如圖34所示。參考圖34，刺五加提取物以濃度-依賴(lài)性方式抑制皮脂生成。黃柏提取物的結(jié)果如圖35所示。參考圖35，黃柏提取物以濃度-依賴(lài)性方式抑制皮脂生成。具體地，黃柏提取物在250ppm時(shí)表現(xiàn)出了對(duì)皮脂生成的明顯的抑制效果。[測(cè)試實(shí)施例4]體外痤瘡導(dǎo)致的色素沉著的抑制
將類(lèi)似于人體炎癥性痤瘡誘導(dǎo)的色素沉著環(huán)境的體外模型與黑素細(xì)胞一起用于有效測(cè)試黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加和黃柏提取物對(duì)痤瘡導(dǎo)致的色素沉著的抑制效果。在24-孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)5.0X10%elan-a黑素細(xì)胞。允許細(xì)胞粘附在培養(yǎng)板底部一天。 通過(guò)向 RPMI-1640 (Invitrogen, Carlsbad, CA)中添加 10% 的胎牛血清(JRH Bioscience, Tokyo, Japan)，接著添加200nM的十四酰佛波乙酯(ΤΡΑ)、100 mg/mL的青霉素和100 mg/ mL的鏈霉素(所有均來(lái)自Gibco Gibco，Milan, Italy)來(lái)制備培養(yǎng)基。一天后，用50 μ M的亞油酸、50 μ M的花生四烯酸、IOnM的雙氫睪酮和0. 5%的痤瘡丙酸桿菌座麼)作為刺激劑誘導(dǎo)痤瘡導(dǎo)致的色素沉著，培養(yǎng)5天。接著，分別用黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加或黃柏提取物處理細(xì)胞，并研究它們對(duì)痤瘡導(dǎo)致的色素沉著的抑制效果。將二甲基亞砜(DMSO)用作陰性對(duì)照，將1 μ M對(duì)苯二酚和200 ppm曲酸用作陽(yáng)性對(duì)照。對(duì)苯二酚是一種處方藥，用作黑色素抑制劑。曲酸具有美白效果，常用作化妝用組合物。然而，曲酸可對(duì)皮膚產(chǎn)生強(qiáng)烈刺激，且據(jù)最近報(bào)道其有導(dǎo)致各種癌癥的可能性。用提取物處理5天后，用IN NaOH處理來(lái)溶解黑色素，并用分光光度計(jì)測(cè)定405nm處的吸光度。黃芪提取物的結(jié)果如圖36所示。參考圖36，黃芪提取物以濃度-依賴(lài)性方式抑制色素沉著。5ppm時(shí)，其色素沉著的程度甚至低于用作處方藥的對(duì)苯二酚。特別是，25ppm 時(shí)，其色素沉著的程度甚至低于未用任何刺激劑處理的對(duì)照組。因此，可以看出黃芪提取物具有優(yōu)越的色素沉著抑制效果和皮膚美白效果。三白草提取物的結(jié)果如圖37所示。參考圖37，三白草提取物以濃度_依賴(lài)性方式抑制色素沉著。特別是5ppm時(shí)，其色素沉著抑制效果非常優(yōu)越，色素沉著程度甚至低于未用任何刺激劑處理的對(duì)照組。因此，可以看出三白草提取物具有優(yōu)越的色素沉著抑制效果和皮膚美白效果。甘草提取物的結(jié)果如圖38所示。參考圖38，甘草提取物以濃度-依賴(lài)性方式抑制色素沉著。特別是250ppm時(shí)，其色素沉著抑制效果非常優(yōu)越，色素沉著程度甚至低于未用任何刺激劑處理的對(duì)照組。因此，可以看出三白草提取物具有優(yōu)越的色素沉著抑制效果和皮膚美白效果。薔薇提取物的結(jié)果如圖39所示。參考圖39，薔薇提取物以濃度依賴(lài)性方式抑制色素沉著。特別是250ppm時(shí)，其色素沉著抑制效果非常優(yōu)越，色素沉著程度甚至低于未用任何刺激劑處理的對(duì)照組。因此，可以看出薔薇提取物具有優(yōu)越的色素沉著抑制效果和皮膚美白效果。大黃提取物的結(jié)果如圖40所示。參考圖40，大黃提取物以濃度-依賴(lài)性方式廣泛抑制色素沉著。50ppm時(shí)，其色素沉著抑制效果最好。因此，可以看出，即使在相對(duì)低濃度時(shí)，大黃提取物仍具有優(yōu)越的色素沉著抑制效果和明顯的皮膚美白效果。刺五加提取物的結(jié)果如圖41所示。參考圖41，刺五加提取物以濃度-依賴(lài)性方式廣泛抑制色素沉著。250ppm時(shí)，其色素沉著抑制效果最好。因此，可以看出刺五加提取物具有優(yōu)越的色素沉著抑制效果和皮膚美白效果。黃柏提取物的結(jié)果如圖42所示。參考圖42，黃柏以濃度-依賴(lài)性方式廣泛抑制色素沉著。250ppm時(shí)，其色素沉著抑制效果最好。因此，可以看出黃柏提取物具有優(yōu)越的色素沉著抑制效果和皮膚美白效果。[測(cè)試實(shí)施例5]體外痤瘡疤痕的抑制
將類(lèi)似于人體痤瘡環(huán)境的體外痤瘡疤痕模型用于測(cè)試黃芪、三白草和甘草提取物對(duì)痤瘡疤痕的抑制效果。在24-孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)6. OxlO4金倉(cāng)鼠皮脂腺細(xì)胞。允許細(xì)胞粘附在培養(yǎng)板底部一天。通過(guò)向DMEM/Ham，s F12培養(yǎng)基(1 :1，hvitrogen，Carlsbad，CA)中添加10%的胎牛血清(JRH Bioscience, Tokyo, Japan)，接著添加100 mg/mL的青霉素和100 mg/mL的鏈霉素(兩者均來(lái)自Gibco，Milan, Italy)來(lái)制備培養(yǎng)基。一天后，用50 μ M的亞油酸、50 μ M的花生四烯酸、IOnM的雙氫睪酮和0. 5%的痤瘡丙酸桿菌0°.座麼)作為刺激劑誘導(dǎo)炎癥性痤瘡。同時(shí)，用黃芪、三白草或甘草提取物處理細(xì)胞，并研究它們對(duì)痤瘡疤痕的抑制效果。將二甲基亞砜(DMSO)用作陰性對(duì)照，將IOOnM的用于治療痤瘡的處方藥異維甲酸用作陽(yáng)性對(duì)照。用刺激劑和提取物處理一天后，用明膠酶譜法測(cè)定溶解在培養(yǎng)基中的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)的明膠的降解活性。具體地，步驟如下。將5 μ L的細(xì)胞培養(yǎng)基與5 μ L的三甘氨酸樣品緩沖液 (Invitrogen, Carlsbad, CA)混合，并在150V，含有ang/mL明膠的10%的丙烯酰胺凝膠中電泳分離2小時(shí)。凝膠從框架(frame)中分離出后，使其與洗脫液反應(yīng)30min，接著室溫下與孵育液反應(yīng)30min，進(jìn)一步在37° C下，孵育液中孵化8小時(shí)。去除孵育液后，用PBS洗滌 3次，用SimplyBlue (Invitrogen，Carlsbad, CA)將凝膠染色1小時(shí)。用蒸餾水洗滌染色的凝膠，直到能從背景充分識(shí)別光譜帶(band)，并觀察。黃芪提取物的結(jié)果如圖43-45所示。從圖43可知，可識(shí)別出用電泳分離法分離的 MMP-9和MMP-2。從圖44可知，黃芪提取物具有MMP-9的抑制效果。從圖45可知，黃芪提取物比廣泛用于治療痤瘡的處方藥異維甲酸具有更好的MMP-2的抑制效果。三白草提取物的結(jié)果如圖46-48所示。從圖46可知，可識(shí)別出用電泳分離法分離的MMP-9和MMP-2。從圖47和48可知，三白草提取物具有MMP_9、MMP-2的抑制效果。其抑制效果可與廣泛用于治療痤瘡的處方藥異維甲酸的抑制效果相媲美。甘草提取物的結(jié)果如圖49-51所示。從圖49可知，可識(shí)別出用電泳分離法分離的MMP-9和MMP-2。從圖50和51展示了甘草提取物對(duì)MMP_9、MMP_2的抑制效果。具體地，甘草提取物具有優(yōu)越的MMP-2抑制效果。下面描述了所述組合物的劑型實(shí)施例，這些實(shí)施例僅用作說(shuō)明用途，并非為了限制本發(fā)明。[劑型實(shí)施例1]軟膠囊的制備
將80mg的黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加或黃柏提取物，9mg的維生素E，9mg的維生素C，2mg的棕櫚油，8mg的氫化植物油，^ig的黃蜂蠟和9mg的卵磷脂混合，按照常用的方法制成軟膠囊的填充溶液。向每個(gè)膠囊中裝填400mg填充溶液制備軟膠囊。單獨(dú)地，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為66wt%的明膠、的甘油和10wt%的山梨醇制備軟膠囊的包衣。然后，將填充溶液填充入所述軟膠囊包衣中，以制備含有400mg的本發(fā)明的組合物的軟膠囊。[劑型實(shí)施例2]片劑的制備
將80mg的黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加或黃柏提取物，9mg的維生素E，9mg的維生素C，200mg的寡聚半乳糖，60mg的乳糖和140mg的麥芽糖混合。使用硫化床干燥機(jī)造粒后，加入6mg的糖酯。按照常用的方法將得到的5(Mmg組合物制成片劑。[劑型實(shí)施例3]飲劑的制備
將80mg的黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加或黃柏提取物，9mg的維生素E，9mg的維生素C，IOg的葡萄糖，0. 6g的檸檬酸和25g的寡聚糖糖漿混合。向每個(gè)瓶子中裝入300ml 的純凈水和200ml產(chǎn)物。接著，通過(guò)在130°C消毒4_5秒制備飲劑。[劑型實(shí)施例4]顆粒劑的制備
將80mg的黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加或黃柏提取物，9mg的維生素E，9mg的維生素C，250mg的無(wú)水結(jié)晶葡萄糖和550mg的淀粉混合，用流化床干燥機(jī)造粒，并裝入在小袋中。[劑型實(shí)施例5]軟膠囊的制備
將40mg的黃芪提取物、40mg的三白草提取物、9mg的維生素E、9mg的維生素CJmg的棕櫚油、8mg的氫化植物油、％ig的黃蜂蠟和9mg的卵磷脂混合，按照常用的方法制成軟膠囊的填充溶液。向每個(gè)膠囊中裝入400mg填充溶液以制備軟膠囊。單獨(dú)地，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為66wt% 的明膠、2#1%的甘油和10wt%的山梨醇制備軟膠囊包衣。然后，將填充溶液裝入所述軟膠囊包衣，以制備含有400mg本發(fā)明的組合物的軟膠囊。[劑型實(shí)施例6]片劑的制備
將各20mg的黃芪、三白草、甘草和薔薇提取物與9mg的維生素E、9mg的維生素C、200mg 的寡聚半乳糖、60mg的乳糖和140mg的麥芽糖混合。使用硫化床干燥機(jī)造粒后，加入6mg的糖酯。按照常用的方法將得到的5(Mmg組合物制成片劑。[劑型實(shí)施例7]飲劑的制備
將等質(zhì)量的黃芪、三白草和甘草提取物混合，制成80mg的混合物。將該混合物與9mg 的維生素E、9mg的維生素C、IOg的葡萄糖、0. 6g的檸檬酸和25g的寡聚糖糖漿混合，并加入 300mL純凈水，然后向每個(gè)瓶子中裝入200mL所得產(chǎn)物。然后，在130°C消毒4_5秒，以制備飲劑。[劑型實(shí)施例8]顆粒劑的制備
將各20mg的薔薇、大黃、刺五加和黃柏提取物與9mg的維生素E、9mg的維生素C、250mg的無(wú)水結(jié)晶葡萄糖和^Omg的淀粉混合，用流化床造粒機(jī)造粒，并裝入小袋中。[劑型實(shí)施例9]潤(rùn)膚乳液(潤(rùn)膚乳液)的制備
將0. 3mg的黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加或黃柏提取物，6. Omg的丁二醇， 6. Omg的丙二醇，0. 3mg的聚羧乙烯，0. 6mg的PEG-12壬基苯基醚，1. 2mg的吐溫80，30. Omg 的乙醇，0. 3mg的三乙醇胺和255mg的純凈水與防腐劑、色素和香精(少量)混合，按照常用的方法，通過(guò)加入上述含量的每種成分并均勻混合制成潤(rùn)膚乳液。[劑型實(shí)施例10]滋養(yǎng)乳液(牛奶乳液)的制備
將0. 3mg的黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加或黃柏提取物，12. Omg的蜂蠟， 4. 5mg的吐溫60，4. 5mg的脫水山梨醇倍半油酸酯，1. 5mg的液體石蠟，15mg的蒙大納202 (Seppic), 9. Omg的甘油，9. Omg的丁二醇，9. Omg的丙二醇，0. 3mg的聚羧乙烯，0. 6mg的三乙醇胺和23%ig的純凈水與防腐劑、色素和香精(少量)混合，按照常用的方法，通過(guò)加入上述含量的每種成分并均勻混合，制成滋養(yǎng)乳液。[劑型實(shí)施例11]按摩霜的制備
將0. 3mg的黃I三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加或黃柏提取物，30. Omg的蜂蠟， 4. 5mg的吐溫60，6. Omg的PEG 60氫化蓖麻油，2. 4mg的脫水山梨醇倍半油酸酯，120. Omg的液體石蠟，15. Omg的異十三烷，12. Omg的蒙大納202(kppic)，15. Omg的甘油，12. Omg的丁二醇，12. Omg的丙二醇，0. 6mg的三乙醇胺和70mg的純凈水與防腐劑、色素和香精(少量) 混合，按照常用的方法，通過(guò)加入上述含量的每種成分并均勻混合，制成按摩霜。[劑型實(shí)施例12]面膜的制備
將0. 5mg的黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加或黃柏提取物，1. Omg的β -1，3-葡聚糖，13. Omg的聚乙烯醇，0. 2mg的羧甲基纖維素鈉，5. Omg的甘油，0. Img的尿囊素，6. Omg 的乙醇，0. 3mg的PEG-12壬基苯基醚，0. 3mg的吐溫60與防腐劑、色素和香精(少量)混合。 加入純凈水后，按照常用的方法，通過(guò)加入上述含量的每種成分并均勻混合，制成面膜。[劑型實(shí)施例13]凝膠的制備
將0. 05mg的黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加或黃柏提取物，0. Img的β-1，3-葡聚糖，0. 05mg的乙二胺乙酸鈉，5. Omg的甘油，0. 3mg的聚羧乙烯，5. Omg的乙醇，0. 5mg的 PEG-60氫化蓖麻油，0. 3mg的三乙醇胺與防腐劑、色素和香精(少量)混合。加入純凈水后， 按照常用的方法，通過(guò)加入上述含量的每種成分并均勻混合，制成凝膠。[劑型實(shí)施例14]潤(rùn)膚乳液(潤(rùn)膚乳液)的制備
將各0. Img的黃芪、三白草和甘草提取物，6. Omg的丁二醇，6. Omg的丙二醇，0. 3mg的聚羧乙烯，0. 6mg的PEG-12壬基苯基醚，1. 2mg的吐溫80，30. Omg的乙醇，0. 3mg的三乙醇胺和255mg的純凈水與防腐劑、色素和香精(少量)混合，按照常用的方法，通過(guò)加入上述含量的每種成分并均勻混合，制成潤(rùn)膚乳液。[劑型實(shí)施例15]滋養(yǎng)乳液(牛奶乳液)的制備
將各0. 15mg的黃芪和三白草提取物，12. Omg的蜂蠟，4. 5mg的吐溫60，4. 5mg的脫水山梨醇倍半油酸酯，1. 5mg的液體石蠟，15mg的蒙大納202 (Seppic),9. Omg的甘油，9. Omg的丁二醇，9. Omg的丙二醇，0. :3mg的聚羧乙烯，0. 6mg的三乙醇胺和23%ig的純凈水與防腐劑、 色素和香精(少量)混合，按照常用的方法，通過(guò)加入上述含量的每種成分并均勻混合，制成滋養(yǎng)乳液。
[劑型實(shí)施例16]按摩霜的制備
將各0. 075mg的薔薇、大黃、刺五加和黃柏提取物，30. Omg的蜂蠟，4. 5mg的吐溫60， 6. Omg的PEG 60氫化蓖麻油，2. ^ig的脫水山梨醇倍半油酸酯，120. Omg的液體石蠟，15. Omg 的異十三烷，12. Omg的蒙大納202(kppic)，15. Omg的甘油，12. Omg的丁二醇，12. Omg的丙二醇，0. 6mg的三乙醇胺和70mg的純凈水與防腐劑、色素和香精(少量)混合，按照常用的方法，通過(guò)加入上述含量的每種成分并均勻混合，制成按摩霜。[劑型實(shí)施例17]面膜的制備
將各0. 25mg的刺五加和黃柏提取物，1. Omg的β -1，3-葡聚糖，13. Omg的聚乙烯醇， 0. 2mg的羧甲基纖維素鈉，5. Omg的甘油，0. Img的尿囊素，6. Omg的乙醇，0. 3mg的PEG-12壬基苯基醚，0. 3mg的吐溫60與防腐劑、色素和香精(少量)混合。加入純凈水后，按照常用的方法，通過(guò)加入上述含量的每種成分并均勻混合，制成面膜。[劑型實(shí)施例18]凝膠的制備
將各0. Olmg的黃芪、三白草、甘草、薔薇和大黃提取物，0. Img的β _1，3-葡聚糖， 0. 05mg的乙二胺乙酸鈉，5. Omg的甘油，0. 3mg的聚羧乙烯，5. Omg的乙醇，0. 5mg的PEG-60 氫化蓖麻油，0. 3mg的三乙醇胺與防腐劑、色素和香精(少量)混合。加入純凈水后，按照常用的方法，通過(guò)加入上述含量的每種成分并均勻混合，制成凝膠。[劑型實(shí)施例19]用于外部皮膚涂敷的軟膏的制備
將2. Omg的黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加或黃柏提取物，10. Omg的β -1，3-葡聚糖，10. Omg的蜂蠟，5. Omg的吐溫60，2. Omg的PEG-60氫化蓖麻油，0. 5mg的脫水山梨醇倍半油酸酯，5. Omg的凡士林，10. Omg的液體石蠟，5. Omg的異十三烷，3. Omg的牛油果脂， 5. Omg的辛酸/癸酸甘油三酯，IOmg的甘油，10. 2mg的丙二醇，0. 2mg的三乙醇胺與防腐劑、 色素和香精(少量)混合。加入純凈水后，按照常用的方法，通過(guò)加入上述含量的每種成分并均勻混合，制成軟膏。[劑型實(shí)施例20]局部施用的貼劑的制備
將1. Omg的黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加或黃柏提取物，3. Omg的β -1，3-葡聚糖，20. Omg的己二醇，0. 7mg的二乙胺，l.Omg的聚丙烯酸(卡波姆934P)，0. Img的亞硫酸鈉，l.Omg的十二烷基聚氧乙烯醚(E.0 = 9)，l.Omg的聚羥乙烯十六烷基十八酯 (Cetomacrogol 1000)，2. 5mg 的粘性石蠟油，2. 5mg 的辛酸 / 癸酸酯(Cetiol LC), 3. Omg 的 PEG400與防腐劑、色素和香精(少量)混合。加入純凈水后，按照常用的方法，通過(guò)加入上述含量的每種成分并均勻混合，制成貼劑。[劑型實(shí)施例21]用于外部皮膚涂敷的軟膏的制備
將各1. Omg的黃芪和三白草提取物，10. Omg的β -1，3-葡聚糖，10. Omg的蜂蠟，5. Omg 的吐溫60，2. Omg的PEG-60氫化蓖麻油，0. 5mg的脫水山梨醇倍半油酸酯，5. Omg的凡士林， 10. Omg的液體石蠟，5. Omg的異十三烷，3. Omg的牛油果脂，5. Omg的辛酸/癸酸甘油三酯， IOmg的甘油，10. 2mg的丙二醇，0. 2mg的三乙醇胺與防腐劑、色素和香精(少量)混合。加入純凈水后，按照常用的方法，通過(guò)加入上述含量的每種成分并均勻混合，制成軟膏。[劑型實(shí)施例22]局部施用的貼劑的制備
將各0. 25mg的薔薇、大黃、刺五加和黃柏提取物，3. Omg的β -1，3-葡聚糖，20. Omg的己二醇，0. 7mg的二乙胺，1. Omg的聚丙烯酸(卡波姆934P)，0. Img的亞硫酸鈉，1. Omg的十二烷基聚氧乙烯醚(E.0 = 9)，l.Omg的聚羥乙烯十六烷基十八酯(聚乙二醇1000)，2. 5mg的粘性石蠟油，2. 5mg的辛酸/癸酸酯(Cetiol LC), 3. Omg的PEG400與防腐劑、色素和香精 (少量)混合。加入純凈水后，按照常用的方法，通過(guò)加入上述含量的每種成分并均勻混合， 制成貼劑。雖然本發(fā)明對(duì)具體實(shí)施例進(jìn)行了描述，在不偏離以下權(quán)利要求中限定的發(fā)明范圍和精神的前提下，可進(jìn)行各種變化和修改，這對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。[工業(yè)應(yīng)用]
本發(fā)明組合物在抑制痤瘡導(dǎo)致的色素沉著和/或有孔痤瘡方面有效，可以各種方式用于化妝品、食品和藥物領(lǐng)域。
權(quán)利要求
1.用于抑制痤瘡導(dǎo)致的色素沉著的組合物，所述組合物含有作為活性成分的、選自黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加和黃柏中的一種或多種提取物。
2.用于抑制痤瘡疤痕的組合物，所述組合物含有作為活性成分的、選自黃芪、三白草和甘草中的一種或多種提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于抑制痤瘡疤痕的組合物，其特征在于，所述選自黃芪、三白草和甘草中的一種或多種提取物可抑制明膠酶。
4.用于外部皮膚涂敷的組合物，所述組合物含有權(quán)利要求1或2所述的組合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于外部皮膚涂敷的組合物，其特征在于，所述組合物含有的所述選自黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加和黃柏中的一種或多種提取物占所述組合物總質(zhì)量的0. l-20wt%。
6.含有權(quán)利要求1或2所述的組合物的化妝品組合物。
7.用于抑制痤瘡導(dǎo)致的色素沉著或痤瘡疤痕的組合物，所述組合物含有權(quán)利要求1或 2所述的組合物。
8.用于調(diào)節(jié)痤瘡后效的調(diào)養(yǎng)組合物，所述組合物含有作為活性成分的、選自黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加和黃柏中的一種或多種提取物。
9.食品添加劑或保健食品組合物，所述組合物含有權(quán)利要求1、2和8中任意一項(xiàng)所述的組合物。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)一種含有活性成分或成分的組合物，該成分含有選自黃芪、三白草、甘草、薔薇、大黃、刺五加和黃柏中的一種或多種提取物。該組合物對(duì)抑制痤瘡樣色素沉著和/或有孔痤瘡有效，可通過(guò)各種途徑應(yīng)用于化妝品、食品和藥物領(lǐng)域。
文檔編號(hào)A61K36/78GK102573787SQ201080046468
公開(kāi)日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2010年8月13日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月14日
發(fā)明者徐姃我, 樸元錫, 樸鍾喜, 李昌根, 申洪柱, 金亨俊, 金度勛, 金正煥, 高現(xiàn)珠 申請(qǐng)人:株式會(huì)社愛(ài)茉莉太平洋