專利名稱：沙生蠟菊花提取物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥提取物，尤其涉及一種沙生蠟菊花提取物及其制備方法，本 發(fā)明還涉及該沙生蠟菊花提取物用于肥胖、高血脂、動(dòng)脈粥樣硬化及相關(guān)并發(fā)癥的輔助治 療中的用途，屬于沙生蠟菊花提取物的醫(yī)藥用途領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
高脂血癥是指血漿中的脂類物質(zhì)尤其是總膽固醇、甘油三酯的濃度超出正常的范 圍所引起的疾病。血脂升高主要是由于飲食不當(dāng)、臟氣衰減和肝腎陰虛所造成的脂肪、膽 固醇等物質(zhì)在體內(nèi)蓄積過(guò)多所致，可導(dǎo)致脂肪肝、肝硬化、膽石癥、周圍血管疾病以及高尿 酸血癥。動(dòng)脈粥樣硬化是指動(dòng)脈內(nèi)膜脂質(zhì)沉積、單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)以及低密度脂蛋 白被氧化、血管平滑肌細(xì)胞的遷移和增生等，形成泡沫細(xì)胞和纖維斑塊，進(jìn)而引起血管壁硬 化、官腔狹窄和血栓的形成。主要是由于環(huán)境因素與遺傳因素相互作用的多因素、多基因表 達(dá)異常所致。動(dòng)脈粥樣硬化是心及腦血管疾病的主要病理學(xué)基礎(chǔ)，可導(dǎo)致冠心病、腦溢血、 心肌梗塞等一系列心腦血管系統(tǒng)疾病。迄今為止，有關(guān)中藥沙生蠟菊花及其總提物的降血脂及抗動(dòng)脈粥樣硬化作用未見(jiàn) 文獻(xiàn)和史料記載。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的之一是提供一種中藥沙生蠟菊花提取物的一種新的醫(yī)藥用途。本發(fā)明目的之二是提供一種制備上述中藥沙生蠟菊花提取物的方法；本發(fā)明上述目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明通過(guò)大量的動(dòng)物試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)沙生蠟菊花提取物能有效降低動(dòng)物肝細(xì)胞中的 中性脂肪含量且呈一定的劑量依賴關(guān)系；沙生蠟菊花還能夠顯著降低高血脂大鼠血中總膽 固醇及甘油三酯的含量，具有降低血脂的功效?？诜成灳湛偺嵛锱c空白組比較，在不影 響大鼠進(jìn)食量的同時(shí)，能夠降低大鼠的體重增長(zhǎng)率；沙生蠟菊花總提物及各部分能夠顯著 性降低高血脂家兔血中Tc、TG的含量，證明沙生蠟菊花總提物及各餾分具有降血脂功效。 此外，沙生蠟菊花總提取物及各部分給藥組動(dòng)物主動(dòng)脈粥樣斑塊面積百分比顯著小于模型 組動(dòng)物，證明沙生蠟菊花具有抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。上述藥效學(xué)試驗(yàn)結(jié)果表明沙生蠟菊花提取物能用于肥胖、高血脂、動(dòng)脈粥樣硬化 及相關(guān)并發(fā)癥的輔助治療。本發(fā)明所述的“沙生蠟菊花提取物”可以是將沙生蠟菊花用醇類物質(zhì)進(jìn)行加熱回 流后所提取得到醇提取物；其中，所述的醇類物質(zhì)優(yōu)選是甲醇或乙醇，更優(yōu)選的，所述的甲 醇是濃度為100%的甲醇，所述的乙醇優(yōu)選是體積百分比為30-75%的乙醇；本發(fā)明所述的“沙生蠟菊花提取物”也可以是將上述醇提取物進(jìn)行如下處理后所 得到的提取物將醇提取物經(jīng)有機(jī)萃取物質(zhì)萃取脫脂分別得到有機(jī)萃取部分和水層部分； 其中，所述的有機(jī)萃取物質(zhì)可以是乙酸乙酯、氯仿或二氯甲烷等有機(jī)萃取物質(zhì)；本發(fā)明所述的“沙生蠟菊花提取物”還可以是將所得到水層部分進(jìn)行如下處理所 得到的提取物水層部分經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂吸附，分別以水和醇類物質(zhì)洗脫，收集醇洗脫物即 得；其中，所述的大孔吸附樹(shù)脂優(yōu)選為HP-20大孔吸附樹(shù)脂；所述的醇類物質(zhì)優(yōu)選為乙醇或 甲醇，更優(yōu)選為體積百分比為90%乙醇或100%甲醇。本發(fā)明所述的“沙生蠟菊花提取物”可以加入制備不同劑型時(shí)所需的各種輔料和 藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體后，以常規(guī)的中藥制劑方法制備成任何一種適宜的臨床制劑，例如可以是注射劑(粉針、凍干粉針、水針、輸液等)、片劑、口服液、顆粒劑、膠囊劑、軟 膠囊或滴丸等；其中，所述的輔料可以是抗氧絡(luò)合劑、填充劑、骨架材料等；所述的藥學(xué)上 可接受的載體是木糖醇、甘露醇、乳糖、果糖、葡聚糖、葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、低分子右旋 糖酐、氯化鈉、葡萄糖酸鈣或磷酸鈣中的一種或幾種。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而 更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù) 人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式 進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。實(shí)施例1沙生蠟菊花提取物的制備將沙生蠟菊干燥花用75%乙醇加熱回流提取得到乙醇提取物(即沙生蠟菊花 總提取物)，將乙醇提取物經(jīng)乙酸乙酯萃取脫脂后，分別得到乙酸乙酯萃取物部分和水層部 分；水層部分經(jīng)HP-20大孔吸附樹(shù)脂，分別以水和體積分?jǐn)?shù)為90%乙醇洗脫，得到90%乙醇 洗脫物。實(shí)施例2沙生蠟菊花提取物的制備將沙生蠟菊干燥花用30%乙醇加熱回流提取得到乙醇提取物(即沙生蠟菊花 總提取物)，將乙醇提取物經(jīng)乙酸乙酯萃取脫脂后，分別得到乙酸乙酯萃取物部分和水層部 分；水層部分經(jīng)HP-20大孔吸附樹(shù)脂，分別以水和體積分?jǐn)?shù)為90%乙醇洗脫，得到90%乙醇 洗脫物。實(shí)施例3沙生蠟菊花提取物的制備將沙生蠟菊干燥花用50%乙醇加熱回流提取得到乙醇提取物(即沙生蠟菊花 總提取物)，將乙醇提取物經(jīng)乙酸乙酯萃取脫脂后，分別得到乙酸乙酯萃取物部分和水層部 分；水層部分經(jīng)HP-20大孔吸附樹(shù)脂，分別以水和體積分?jǐn)?shù)為90%乙醇洗脫，得到90%乙醇 洗脫物。實(shí)施例4沙生蠟菊花提取物的制備將沙生蠟菊干燥花用100%甲醇加熱回流提取得到甲醇提取物(即沙生蠟菊花 總提取物)，將甲醇提取物經(jīng)氯仿萃取脫脂后，分別得到氯仿萃取物部分和水層部分；水層 部分經(jīng)HP-20大孔吸附樹(shù)脂，分別以水和體積分?jǐn)?shù)為100%甲醇洗脫，得到100%甲醇洗脫 物。實(shí)施例5沙生蠟菊花提取物的制備將沙生蠟菊干燥花用45%乙醇加熱回流提取得到乙醇提取物(即沙生蠟菊花 總提取物)，將乙醇提取物經(jīng)二氯甲烷萃取脫脂后，分別得到二氯甲烷萃取物部分和水層部 分；水層部分經(jīng)HP-20大孔吸附樹(shù)脂，分別以水和體積分?jǐn)?shù)為90%乙醇洗脫，得到90%乙醇 洗脫物。試驗(yàn)例1、沙生蠟菊花各提取物對(duì)小鼠肝臟中肝細(xì)胞中脂肪含量的影響試驗(yàn)一、試驗(yàn)材料1、供試樣品實(shí)施例1-5所制備的沙生蠟菊花總提取物；乙酸乙酯萃取物；醇洗脫 物和水層部分；
2、其它試驗(yàn)材料ddy系小鼠(35 40g)，雌雄不限。pH計(jì)(PHS-2ST，數(shù)顯酸度 計(jì))、離心機(jī)、二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱(NuAir, USA), 48孔培養(yǎng)板(Nunc, Denmark)，超聲儀 (MISONIX, Microson Ultrasonic cell disruptor)，酶標(biāo)儀(Tecan，Austria)，顯微鏡 (Leica, Germany)，流式細(xì)胞儀(BectonDickinson，USA)。戊巴比妥鈉，HEPES ((2- [4- (2-hyd roxyethyl) -1-piperazinyl] ethanesulfonic acid)，輕乙基哌嗪乙石黃酸)，EGTA (ethylene glycol bis ( β -aminoethyleaster) -N, N, N'，N' -tetraacetic acid，乙二醇雙(2_ 氨 基乙醚)四乙酸、膠原酶 IV(sigma-Aldrich)，F(xiàn)CS(胎牛血清，life technologies), Williams' E培養(yǎng)基(美國(guó)sigma公司)，甘油酸酯，盤尼西林(life technologies)。二、試驗(yàn)方法將ddy系雄性小鼠(35 40g)，用戊巴比妥鈉(50mg/ml)腹腔注射麻醉(0. Iml/ 只)，經(jīng)翻正反射消失證明麻醉后，開(kāi)腹，利用Seglen、Oka的膠原酶灌流法。門靜脈插管 后，在 37°C恒溫條件下用肝臟灌流液(pH 7. 2，137mMNaCl ；5. 4mM KCl ；0. 34mM Na2HPO4 ； 0. 44mM KH2PO4 ；4. 2mM NaHCO3 ； IOmMHEPES ；0. 5mM EGTA ；5. 6mM glucose ；56mM phenol red) 灌流，流速為5ml/min，在2min內(nèi)灌流使肝臟失血，然后用膠原酶溶液(pH 7. 5,0. 5mg/ml ； 137mM NaCl ；5. 4mM KCl ；0. 34mM Na2HPO4 ；0. 44mM KH2PO4 ；4. 2mM NaHCO3 ； IOmM HEPES ；0. 5mM CaCl2 ；5. 6mM glucose ；56mM phenol red)交換肝臟灌流液，當(dāng)肝臟開(kāi)始消化的時(shí)候停止灌 流，取出肝臟，得肝細(xì)胞置于含有10% FCS (胎牛血清)，100U/ml的青霉素和100 μ g/ml的 鏈霉素的Williams' E的培養(yǎng)基中，紗布濾過(guò)。將濾液中的肝細(xì)胞離心(700rpm，lmin, 4°C )，棄去上清液后，用IOml的培養(yǎng)液將 細(xì)胞清洗，離心，得到的細(xì)胞置于IOml細(xì)胞培養(yǎng)液中培養(yǎng)，細(xì)胞的存活是通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)活細(xì) 胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)的，將肝細(xì)胞液調(diào)成細(xì)胞密度為6. 67X 105cells/ml，然后將細(xì)胞接種 于48孔板中，每孔150μ l/well，37°C以5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時(shí)，然后將不同濃度樣 品的DMSO溶液在每孔添加50 μ 1，DMSO的濃度為0. 5% (ν/ν)。將加入待測(cè)樣品的培養(yǎng)板 置于5% CO2的培養(yǎng)箱中37°C培養(yǎng)20小時(shí)，除去上清液，每孔再加入100 μ 1的蒸餾水，超 聲，使細(xì)胞破碎，然后再在每孔中加入蒸餾水100μ 1(計(jì)200μ Ι/well)，所得細(xì)胞破碎液中 的脂肪濃度是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物甘油酸酯來(lái)定量的，給藥組的數(shù)值是用相對(duì)于對(duì)照組脂肪濃度的 百分比來(lái)表示的，利用Durmette法比較分析，ρ < 0. 05為顯著性差異。三、試驗(yàn)結(jié)果表1沙生蠟菊花各部分提取物對(duì)小鼠肝臟中甘油三酯(TG)含量的影響 (X 士S.E.M,n=4)
權(quán)利要求
沙生蠟菊花提取物用于制備輔助治療肥胖、肥胖并發(fā)癥、高血脂、高血脂并發(fā)癥、動(dòng)脈粥樣硬化或動(dòng)脈粥樣硬化并發(fā)癥的藥物中的用途。
2.按照權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述沙生蠟菊花提取物的制備方法包括 沙生蠟菊花用醇類物質(zhì)進(jìn)行加熱回流后所提取得到醇提取。
3.按照權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于所述醇類物質(zhì)是甲醇或乙醇。
4.按照權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于所述的甲醇是濃度為100%的甲醇，所述 的乙醇是體積百分比為30-75%的乙醇。
5.按照權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于還包括將醇提取物經(jīng)有機(jī)萃取物質(zhì)萃取 脫脂后分別得到有機(jī)物萃取部分和水層部分。
6.按照權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于所述的有機(jī)萃取物質(zhì)包括乙酸乙酯、氯仿 或二氯甲烷。
7.按照權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于，還包括將所得到水層部分進(jìn)行如下處理 水層部分經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂吸附，分別以水和醇類物質(zhì)洗脫，收集醇洗脫物即得。
8.按照權(quán)利要求7所述的用途，其特征在于所述的大孔吸附樹(shù)脂為HP-20大孔吸附 樹(shù)脂；所述的醇類物質(zhì)包括乙醇或甲醇。
9.按照權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于所述乙醇為體積百分比為90%乙醇；所 述甲醇為100%甲醇。
10.按照權(quán)利要求1-9任何一種所述的用途，其特征在于所述沙生蠟菊花提取物按照 中藥制劑方法制備成臨床上可接受的口服制劑或注射制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了沙生蠟菊花提取物及其制備方法和用途。本發(fā)明通過(guò)大量的動(dòng)物試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)沙生蠟菊花提取物能有效降低動(dòng)物肝細(xì)胞中的中性脂肪含量，還能夠顯著降低高血脂大鼠血中總膽固醇及甘油三酯的含量，具有降低血脂的功效。此外，沙生蠟菊花還具有抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。藥效學(xué)試驗(yàn)表明，沙生蠟菊花提取物能用于肥胖、高血脂、動(dòng)脈粥樣硬化及相關(guān)并發(fā)癥的輔助治療。本發(fā)明所述沙生蠟菊花提取物可以是將沙生蠟菊花用醇類物質(zhì)進(jìn)行加熱回流后所提取得到醇提取物，加入制備不同劑型時(shí)所需的各種輔料和藥學(xué)上可接受的載體后，可將其按常規(guī)的中藥制劑方法制備成任何一種適宜的臨床制劑。
文檔編號(hào)A61P3/04GK101972291SQ201010297578
公開(kāi)日2011年2月16日 申請(qǐng)日期2010年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月30日
發(fā)明者侯云龍, 吳立軍, 朱久新, 楊寶峰, 王立波 申請(qǐng)人:哈爾濱醫(yī)科大學(xué)