專利名稱：重組促胰島素分泌肽藥物微球的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，尤其涉及一種重組促胰島素分泌肽藥物微球的制備方法。
背景技術(shù)：
促胰島素分泌肽是一種能夠促進(jìn)胰島β細(xì)胞分泌胰島素功能的活性多肽，早期 是在非洲毒蝎中發(fā)現(xiàn)具有生物學(xué)活性的多肽，由于這個(gè)多肽具有非常特異性的促進(jìn)胰島β 細(xì)胞分泌胰島素，對(duì)治療由于胰島素缺乏而引起的糖尿病患者具有非常顯著的療效，但是 由于活性多肽穩(wěn)定性差，體內(nèi)半衰期短，生物利用度低，對(duì)于臨床治療由一定的局限性。采 用藥物緩釋傳速系統(tǒng)是目前最有實(shí)際意義的方法，應(yīng)用體內(nèi)可生物降解的高分子材料制備 成微球，通過(guò)微球內(nèi)部的孔道以及高分子材料的融蝕降解來(lái)調(diào)控在體內(nèi)外的釋放，從而提 高生物利用度，達(dá)到治療的目的。國(guó)內(nèi)外有許多以聚乳酸類高分子材料聚乳酸_羥基乙酸 共聚物(PLGA)為微球形成劑廣泛應(yīng)用于藥物給藥系統(tǒng)的研究。PLGA具有可生物降解性、無(wú) 毒、無(wú)免疫原性、組織相容性好等優(yōu)點(diǎn)，經(jīng)美國(guó)FDA批準(zhǔn)作為注射用微球、微囊、植入劑等制 劑的材料。PLGA通過(guò)材料的表面融蝕(surface erosion)和內(nèi)部蝕解(bulkerosion)兩 種機(jī)制控制藥物釋放。通過(guò)調(diào)節(jié)PLGA分子中乳酸(LA)和羥基乙酸(GA)的比例和分子量 (Mw)的大小，得到不同生物降解速率的載體材料。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有促胰島素分泌肽藥物劑型存在著體內(nèi)半衰期短、生物 利用度低的問(wèn)題，提供一種能使促胰島素分泌肽藥物的生物利用度得到提高的重組促胰島 素分泌肽藥物微球的制備方法。本發(fā)明的重組促胰島素分泌肽藥物微球的制備方法，是采用水/油/固法即S/0/ W法制備重組促胰島素分泌肽藥物微球。作為較佳方案，本發(fā)明的方法包括如下步驟(1)先將聚乳酸-羥基乙酸共聚物溶于二氯甲烷溶液中，聚乳酸-羥基乙酸共聚物 的濃度為180-200mg/ml 二氯甲烷；(2)然后將聚乳酸-羥基乙酸共聚物重量的1-2%的重組促胰島素分泌肽的微粉 加入上述溶有聚乳酸_羥基乙酸共聚物的二氯甲烷有機(jī)溶劑中，冰水浴800-1000rpm高速 攪拌8-10分鐘，然后超聲混懸10-15分鐘，獲得混懸液；(3)將所得混懸液加入到聚乙烯醇水溶液中，混懸液與聚乙烯醇水溶液的 重量比為1 (l-5)，800-1000rpm高速攪拌乳化8-10分鐘，并將其立即用蒸餾水以 (1 10)-(1 40)的體積比稀釋，400-500rpm低速攪拌3-4h，離心收集微球，蒸餾水洗滌 3次，冷凍干燥24小時(shí)。所述聚乳酸-羥基乙酸共聚物優(yōu)選平均分子量為14，000。作為優(yōu)選方案，所述重組促胰島素分泌肽的蛋白微粉的用量為聚乳酸-羥基乙酸 共聚物重量的1-2%;所述聚乙烯醇水溶液的濃度為2-4%。采用優(yōu)選方案制得的重組促胰島素分泌肽藥物微球的載藥量為1-2%，粒徑為43. 12士 1. 86 (見(jiàn)附圖2)，包封率為46. 9%。本發(fā)明是用體內(nèi)可生物降解的高分子材料聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)為載 體制備重組促胰島素分泌肽微球，發(fā)明了以重組促胰島素分泌肽為藥物的S/0/W(水/油 /固)法制備重組促胰島素分泌肽藥物微球，制備的載藥微球形態(tài)均勻，藥物包封率可達(dá) 46. 9%。經(jīng)差示熱掃描分析，重組促胰島素分泌肽載藥微球玻璃化溫度Tg45. 05°C而空白微 球的Tg是35. 54°C。本發(fā)明通過(guò)微球內(nèi)部的孔道以及高分子材料的融蝕降解來(lái)調(diào)控重組促 胰島素分泌肽在體內(nèi)的釋放速度，同時(shí)提高了藥物活性，達(dá)到治療糖尿病的目的。本發(fā)明的主要特征為(1)本發(fā)明采用S/0/W法制備重組促胰島素分泌肽藥物微球，使用干粉藥物無(wú)水 一步乳化的方法，避免了蛋白質(zhì)類藥物在具有兩親性油水界面容易聚集、變性，提高了藥物 的穩(wěn)定性，粒徑較易控制，包封率高，保持了蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性。(2)本發(fā)明制備的微球其突釋效應(yīng)均在10%左右，體外35天的累積釋放，因此延 長(zhǎng)了藥物在體內(nèi)的半衰期(見(jiàn)附圖3)。(3)多肽在無(wú)水的情況下，三維結(jié)構(gòu)得不到伸展，而使多肽的結(jié)構(gòu)受外界的影響較
圖1是實(shí)施例一和實(shí)施例二制備的重組促胰島素分泌肽藥物微球在光學(xué)顯微鏡 下觀察的微球形態(tài)圖。圖2是實(shí)施例一和實(shí)施例二制備的重組促胰島素分泌肽藥物微球經(jīng)激光粒度分 析儀測(cè)定的粒徑分布曲線。圖3是實(shí)施例一和實(shí)施例二制備的重組促胰島素分泌肽藥物微球的體外釋放曲 線。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例均是采用S/0/W法制備重組促胰島素分泌肽藥物微球。具體如下所 述。實(shí)施例一先將1. SgPLGA溶于IOml 二氯甲烷溶液12小時(shí)中，將聚乳酸-羥基乙酸共聚物重 量的2%的重組促胰島素分泌肽的微粉0. 036g加入到溶有PLGA的有機(jī)溶劑二氯甲烷中，冰 水浴SOOrpm高速攪拌10分鐘，然后超聲混懸10分鐘，獲得混懸液，將混懸液加入到濃度為 4%的PVA冰水溶液12ml中，冰水浴800rpm高速攪拌乳化10分鐘，并將其立即用500ml蒸 餾水稀釋，400rpm低速攪拌3小時(shí)，離心收集微球，蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥24小時(shí)，即得 重組促胰島素分泌肽藥物微球，也稱重組促胰島素分泌肽載藥微球，見(jiàn)附圖1。實(shí)施例二 先將2. OgPLGA溶于IOml 二氯甲烷溶液12小時(shí)中，將聚乳酸-羥基乙酸共聚物重 量的的重組促胰島素分泌肽的微粉0. 02g加入溶有PLGA的有機(jī)溶劑二氯甲烷中，冰水 浴IOOOrpm高速攪拌8min，超聲混懸15分鐘，獲得混懸液，將混懸液加入到濃度為2%的 PVA水溶液24ml中，IOOOrpm高速攪拌乳化8min，并將其立即用600ml蒸餾水稀釋，500rpm
4低速攪拌4h，離心收集微球，蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥24h，即得重組促胰島素分泌肽載藥 微球(見(jiàn)附圖1)。上述實(shí)施例中PLGA的GA = 50 50，粘度為0. 19dl/g，Mw = 14，000，購(gòu)自美國(guó) Birmingham公司。重組促胰島素分泌肽的微粉購(gòu)自北京啟維益成科技有限公司。聚乙烯醇 (PVA)購(gòu)自美國(guó)Birmingham公司。上述實(shí)施例制得的重組促胰島素分泌肽藥物微球的載藥量為1_2%，粒徑為 43. 12士 1.86 (見(jiàn)附圖2)，包封率為46.9%。
權(quán)利要求
一種重組促胰島素分泌肽藥物微球的制備方法，其特征在于采用水/油/固法即S/O/W法制備重組促胰島素分泌肽藥物微球。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組促胰島素分泌肽藥物微球的制備方法，其特征在于包括 如下步驟(1)先將聚乳酸-羥基乙酸共聚物溶于二氯甲烷溶液中，聚乳酸-羥基乙酸共聚物的濃 度為180-200mg/ml 二氯甲烷；(2)然后將聚乳酸-羥基乙酸共聚物重量的1-2%的重組促胰島素分泌肽的蛋白微粉 加入上述溶有聚乳酸_羥基乙酸共聚物的二氯甲烷有機(jī)溶劑中，冰水浴800-1000rpm高速 攪拌8-10分鐘，然后超聲混懸10-15分鐘，獲得混懸液；(3)將所得混懸液加入到聚乙烯醇水溶液中，混懸液與聚乙烯醇水溶液的重 量比為1 (l-5)，800-1000rpm高速攪拌乳化8-10分鐘，并將其立即用蒸餾水以 (1 10)-(1 40)的體積比稀釋，400-500rpm低速攪拌3-4h，離心收集微球，蒸餾水洗滌 3次，冷凍干燥24小時(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的重組促胰島素分泌肽藥物微球的制備方法，其特征在于所 述聚乳酸_羥基乙酸共聚物的平均分子量為14，000。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的重組促胰島素分泌肽藥物微球的制備方法，其特征在于 所述重組促胰島素分泌肽的蛋白微粉的用量為聚乳酸-羥基乙酸共聚物重量的1-2% ；所 述聚乙烯醇水溶液的濃度為2-4% ；所述重組促胰島素分泌肽藥物微球的載藥量為1_2%， 粒徑為43. 12士 1. 86，包封率為46. 9%0
全文摘要
本發(fā)明為一種重組促胰島素分泌肽藥物微球的制備方法，先將聚乳酸-羥基乙酸共聚物溶于二氯甲烷溶液中，然后將重組促胰島素分泌肽的微粉加入上述溶有聚乳酸-羥基乙酸共聚物的二氯甲烷有機(jī)溶劑中，冰水浴高速攪拌，然后超聲混懸，將所得混懸液加入到PVA水溶液中，高速攪拌乳化，并將其立即用蒸餾水稀釋，低速攪拌，離心收集微球，蒸餾水洗滌，冷凍干燥，即得重組促胰島素分泌肽藥物微球。本發(fā)明制備的緩釋藥物劑型延長(zhǎng)了重組促胰島素分泌藥物在體內(nèi)的半衰期，同時(shí)提高了藥物活性。
文檔編號(hào)A61K9/16GK101947206SQ20101027238
公開(kāi)日2011年1月19日 申請(qǐng)日期2010年9月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月2日
發(fā)明者任政華, 陳壽 申請(qǐng)人:深圳市通產(chǎn)麗星股份有限公司;深圳市格林朗寧生物技術(shù)有限公司