專利名稱：一種以葎草為主方的免疫增強(qiáng)劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種動(dòng)物用中藥免疫增強(qiáng)劑的復(fù)方，特別涉及一種以潷草主方的免疫 增強(qiáng)劑。
背景技術(shù)：
二十世紀(jì)初，隨著科學(xué)技術(shù)和飼料工業(yè)的發(fā)展，歐美一些國(guó)家出現(xiàn)飼料添加劑及 其工業(yè)，促進(jìn)了飼養(yǎng)及飼料工業(yè)的發(fā)展，并成為一個(gè)新興的行業(yè)。與此同時(shí)，相關(guān)技術(shù)隨之 滲入，尤其是化學(xué)合成物及其技術(shù)被大量采用，并在一個(gè)時(shí)期有取代天然物添加劑之勢(shì)。但 近幾十年來(lái)，人們逐漸發(fā)現(xiàn)化學(xué)合成藥物，特別是抗生素等飼料添加劑有毒副殘留，致使產(chǎn) 生耐藥性和“三變”(癌、畸、突變)等弊端，嚴(yán)重影響和危害人類健康，使我們深深感到化學(xué) 合成物類飼料添加劑只為增加動(dòng)物生產(chǎn)和產(chǎn)品，而缺少確保人體健康的因素。因而迫使人 們?cè)谡J(rèn)識(shí)上對(duì)天然物中草藥飼料添加劑有一個(gè)辯證的復(fù)歸，重新評(píng)價(jià)天然物中草藥飼料添 加劑，認(rèn)為是理想的添加劑。中草藥是我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的重要組成部分；有2000多年的應(yīng)用歷史，其原料來(lái)源廣 泛，種類繁多。據(jù)統(tǒng)計(jì)，具有明顯免疫增強(qiáng)作用的中草藥將近200多種。中藥免疫增強(qiáng)劑是 利用我國(guó)豐富的天然中藥，依據(jù)現(xiàn)代中獸醫(yī)藥理論科學(xué)組方。中藥的有效成分，可用于提高 或促進(jìn)動(dòng)物的免疫功能，預(yù)防繼發(fā)感染。因其具有獨(dú)特的免疫增強(qiáng)作用。中藥免疫增強(qiáng)劑 可顯著提高機(jī)體的抗病能力，已成為抗病藥物的研發(fā)熱點(diǎn)。潷草具有清熱解毒、具有益氣補(bǔ)血、扶正祛邪、滋陰助陽(yáng)、潤(rùn)三焦、消五谷、益五臟 等中藥作用，能夠調(diào)理胃腸道微生態(tài)平衡，尤其對(duì)胃腸道內(nèi)有益微生物有利，提高機(jī)體非特 異性免疫力，提高飼料報(bào)酬，降低料肉比等。如果伴隨疫苗使用，可提高特異性免疫力。目 前以潷草為主方的免疫增強(qiáng)劑卻未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的1、順應(yīng)當(dāng)前世界范圍內(nèi)興起的一股回歸自然、崇尚自然、重視生態(tài)安全與食品安 全，食用產(chǎn)品要求“高品質(zhì)、低藥物殘留、綠色無(wú)公害”的熱潮。2、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，本發(fā)明提供一種中藥免疫增強(qiáng)劑，因其資源豐富、作 用廣泛、標(biāo)本兼治、安全低毒、不易產(chǎn)生耐藥性、無(wú)污染、無(wú)殘留，能提高動(dòng)物免疫力、改善其 生長(zhǎng)性能，具有普遍推廣使用的廣闊前景。3、本發(fā)明能夠?qū)?dòng)物胃腸道微生態(tài)平衡起到改善的功能，具有健胃消食、提高飼 料利用率的作用。4、本發(fā)明能夠顯著地提高動(dòng)物的特異性和非特異性免疫力，增強(qiáng)動(dòng)物的抗病能 力。本發(fā)明為達(dá)到以上目的，是通過(guò)這樣的技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的一種以潷草為主方的 免疫增強(qiáng)劑，按重量份包含有效成分潷草黃酮80份和大豆黃酮20份。
所述的一種以潷草為主方的免疫增強(qiáng)劑，其特征在于5 30份有效成分和69 94份的載體及1份表面活性劑組成。所述的以潷草為主方的免疫增強(qiáng)劑，其特征在于載體為淀粉、無(wú)水葡萄糖、麥芽 糊精。所述的以潷草為主方的免疫增強(qiáng)劑，其特征在于表面活性劑為十二烷基硫鈉。所述的以潷草為主方的免疫增強(qiáng)劑應(yīng)用于免疫力低下、疫苗注射時(shí)等使用，可以 對(duì)病毒性傳染病及細(xì)菌性傳染病進(jìn)行防治。本發(fā)明主要從中藥潷草和大豆中提取黃酮成分，并將兩種提取物按一定的比例配 制成復(fù)合制劑，作為免疫增強(qiáng)劑和抗病毒抗菌藥物使用。至今，國(guó)內(nèi)外應(yīng)用植物黃酮作為免 疫增強(qiáng)劑的很少，但以潷草為主方的免疫增強(qiáng)劑還未見(jiàn)報(bào)道。本發(fā)明為首次使用。
具體實(shí)施例方式提供一種以釋草為主方的免疫增強(qiáng)劑，該增強(qiáng)劑的配方組分(按重量計(jì))為有效 成分5 30份，載體69 94份，表面活性劑1份。1、潷草黃酮的提取工藝(1)將新鮮潷草地上部分洗凈干燥后粉碎；(2)用水提醇 沉法提取得潷草提取液；(3)將上述提取液通過(guò)精密過(guò)濾裝置，除去固體雜質(zhì)得澄清濾液； (4)回收乙醇，濃縮提取液，70°C干燥，得到潷草浸膏；(5)通過(guò)真空微波干燥，即得潷草浸 膏粉。2、大豆黃酮的提取工藝(1)稱取定量豆粕，在80°C條件下，用60%乙醇，料液比 為1 20，提取2次，每次2h，合并提取液；(2)回收乙醇，濃縮提取液，70°C干燥，即得大豆 黃酮浸提膏；(3)通過(guò)真空微波干燥，即得大豆黃酮浸膏粉。3、所述的潷草黃酮浸膏粉和大豆黃酮浸膏粉，按以下具體配比混合均勻，得到的 粉劑能夠通過(guò)2號(hào)篩(24目)，烘干包裝，放在陰涼干燥處保存。本發(fā)明可通過(guò)以下實(shí)例方 案證實(shí)(參看表1)。表1有效成分制成粉劑實(shí)施方案 下面試驗(yàn)對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述。
1、潷草黃酮的性質(zhì)鑒定(如表2)表2潷草黃酮的性質(zhì)鑒定 顏色反應(yīng)與黃酮類化合物的顏色反應(yīng)相似，說(shuō)明潷草浸膏為黃酮類的化合物。2、潷草黃酮和大豆黃酮復(fù)方制劑的體內(nèi)藥效試驗(yàn)(1)潷草黃酮和大豆黃酮復(fù)方制劑對(duì)細(xì)菌腹瀉的作用大腸桿菌致腹瀉模型選用體重18 20g的SPF級(jí)小鼠50只，隨機(jī)分成5組，每 組10只；設(shè)空白組、模型組、復(fù)方高、中、低劑量組。除空白組外，其余組動(dòng)物均按0. 3ml/10g 劑量腹腔注射大腸桿菌菌液(濃度為lX109CFU/ml)，造成嚴(yán)重腹瀉模型，空白組腹腔注射 等量生理鹽水。3h后，空白組和模型組小鼠灌胃生理鹽水(0.2ml/10g)；治療組小鼠灌胃 復(fù)方制劑高、中、低劑量(0. 4ml/只，0. 2ml/只，0. Iml/只，Iml相當(dāng)于Ig生藥)，觀察腹腔 注射大腸桿菌注射液3h內(nèi)小鼠腹瀉情況及給藥后3h內(nèi)模型組和治療組、對(duì)照組小鼠腹瀉 情況(包括稀便次數(shù)、總便次數(shù)、稀便級(jí))，并計(jì)算出腹瀉指數(shù)(腹瀉指數(shù)=稀便率X稀便 級(jí))。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析應(yīng)用SPSS11. 0統(tǒng)計(jì)軟件做數(shù)據(jù)處理，所有數(shù)據(jù)采用χ士s表示，采用t檢驗(yàn)，P <0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果如表3表3復(fù)方制劑對(duì)小鼠大腸桿菌腹瀉的影響 注*表示差異顯著(P < 0. 05)，**表示差異極顯著(P < 0. 01)，下表同。(2)潷草黃酮和大豆黃酮復(fù)方制劑對(duì)小鼠小腸推進(jìn)率的作用選用體重18 20g的SPF級(jí)小鼠40只，隨機(jī)分成4組，每組10只，設(shè)空白組和復(fù) 方制劑高、中、低劑量組。每組小鼠空腹24h后，空白組灌胃生理鹽水(0.2ml/10g)，高、中、 低劑量組灌胃復(fù)方制劑((0. 4ml/只，0. 2ml/只，0. Iml/只，Iml相當(dāng)于Ig生藥)，30min后， 每組小鼠灌胃墨汁(用生理鹽水稀釋10倍，0. 5ml/只)，30min后脫臼處死，取小腸(上段 至幽門，下段至盲腸端)，量取小腸全長(zhǎng)及墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度，求出推進(jìn)率。
推進(jìn)率(％ )=(墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度/小腸全長(zhǎng))X 100%數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析應(yīng)用SPSS11. 0統(tǒng)計(jì)軟件做數(shù)據(jù)處理，所有數(shù)據(jù)采用χ士s表示，采用t檢驗(yàn)，P <0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果如表4
表4復(fù)方制劑對(duì)小鼠小腸的推進(jìn)率的影響
別組 動(dòng)物數(shù) 小腸總長(zhǎng)(cm) 碳墨推進(jìn)率(％) (3)潷草黃酮和大豆黃酮復(fù)方制劑對(duì)小鼠免疫功能的影響對(duì)小鼠免疫器官的影響取體重18 20g的小鼠40只，雌雄兼有，隨機(jī)分為四組， 設(shè)空白對(duì)照組和試驗(yàn)組，試驗(yàn)組按250mg/kg、500mg/kg、750mg/kg的劑量將復(fù)方制劑添加 到小鼠飼料中，飼喂28d，于末次飼喂后次日，脫白處死，剝?nèi)バ叵?、脾臟天平稱重，臟器重量 以(mg/10g體重)χ 士SD表示，隨后進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，比較組間差異的顯著性。對(duì)小鼠吞噬細(xì)胞功能的影響取體重18 20g的小鼠40只，雌雄兼有，隨機(jī)分為 四組，分為空白對(duì)照組和試驗(yàn)組，試驗(yàn)組按250mg/kg、500mg/kg、750mg/kg的劑量將復(fù)方制 劑添加到小鼠飼料中，飼喂28d，于末次飼喂后次日，尾靜脈注射墨汁(用生理鹽水稀釋10 倍)0. 05ml/10kg體重，注射后分別于2min、20min用微量采血管(先用肝素液潤(rùn)濕)從眶后 靜脈叢取血20ul，溶于2ml0. 1% Na2CO3溶液中搖勻，置VIS-723G可見(jiàn)分光光度計(jì)在620nm 處比色，測(cè)定光密度(OD)，最后將小鼠頸椎脫白致死，分別取肝、脾稱重。按以下公式計(jì)算廓 清指數(shù)K或校正廓清指數(shù)α。K = (IogOD1-IogOD2) / (、-、)或 α = χ"3* 體重 / (肝重 + 脾重)式中ODp OD2為不同時(shí)間所取血樣，Vt1為取兩血樣的時(shí)間差。以X±SE表示各 組的K值，進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，比較差異的顯著性。若肝脾重量差異不太大時(shí)，只記算K值亦可。對(duì)小鼠溶血素的影響取體重18 20g的小鼠40只，雌雄兼有，隨機(jī)分為四組， 分為空白對(duì)照組和試驗(yàn)組，試驗(yàn)組按250mg/kg、500mg/kg、750mg/kg的劑量將復(fù)方制劑添 加到小鼠飼料中，飼喂28d，于末次飼喂后次日，每鼠腹腔注射5%生理鹽水雞紅細(xì)胞懸液 0. 2ml進(jìn)行免疫，免疫后7天，摘眼球取血，離心，取血清，用生理鹽水稀釋100倍，取稀釋血 清1ml，與5%雞紅細(xì)胞懸液0. 51111、10%補(bǔ)體0. 5ml混合，在37°C恒溫箱中保溫30min，0°C 冰箱中終止反應(yīng)。離心，取上清液于VIS-723G可見(jiàn)分光光度計(jì)540nm處比色，測(cè)錄光密度(OD)。另 設(shè)不加血清的空白對(duì)照，取其上清液作為比色時(shí)調(diào)“ θ ”的基準(zhǔn)。以光密度(OD)讀數(shù)為判 定血清溶血素的指標(biāo)，比較各組的差異。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析應(yīng)用SPSS11. O統(tǒng)計(jì)軟件做數(shù)據(jù)處理，所有數(shù)據(jù)采用χ士s表示，采用t檢驗(yàn)，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果如表5表5復(fù)方制劑對(duì)小鼠免疫制劑的影響 (4)結(jié)果分析有表3看出，給藥組的中、高劑量對(duì)大腸桿菌在體內(nèi)有極顯著的抑制作用(ρ <0.01)，說(shuō)明該復(fù)方制劑可有效的預(yù)防細(xì)菌性腹瀉。而表4結(jié)果表明空白組與給藥組比 較，給藥0. 2mL、0. 4mL能夠顯著(P < 0. 05)抑制小腸的推進(jìn)率，給藥0. ImL能抑制小腸推 進(jìn)率，但與空白組比較差異不顯著；說(shuō)明該復(fù)方制劑能夠抑制小腸液蠕動(dòng)，從而達(dá)到止瀉的 作用。表5 明飼料中添加 250mg/kg、500mg/kg、750mg/kg(分別相當(dāng)于 1. 175g、2. 35g、 3.53g生藥)的復(fù)方制劑可使小鼠胸腺增重，但無(wú)顯著差別；用雞紅細(xì)胞免疫后，給藥組可 極顯著(P < 0. 01)提高抗雞紅細(xì)胞抗體(溶血素IgM)的產(chǎn)生，給藥組與對(duì)照組相比，能極 顯著提高單核吞噬細(xì)胞的吞噬功能，但給藥組之間差別不顯著。(5)小結(jié)復(fù)方制劑可有效地防治大腸桿菌引起的腹瀉，也可抑制小腸蠕動(dòng)，從而也可達(dá)到 止瀉的目的。復(fù)方制劑可極顯著地提高小鼠的免疫功能。3、潷草黃酮和大豆黃酮復(fù)方制劑對(duì)羔羊體液免疫指標(biāo)的影響選擇體重、胎次相近，健康的3-4月齡的湖羊羔羊32只(雌雄各半)，根據(jù)體重、 性別隨機(jī)分為4組，設(shè)對(duì)照組和試驗(yàn)組，每組2個(gè)重復(fù)，每重復(fù)4只，采取舍飼，自由采食、飲 水，投喂基礎(chǔ)日糧，預(yù)飼1周后進(jìn)行試驗(yàn)，測(cè)定復(fù)方制劑對(duì)羔羊部分免疫功能的影響，試驗(yàn) 期28天。對(duì)照組和試驗(yàn)組羔羊平均體重經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析檢驗(yàn)，組間差異不顯著(P > 0. 05)。各組羔羊試驗(yàn)開(kāi)始前均用阿維菌素常規(guī)劑量皮下注射驅(qū)蟲(chóng)，并對(duì)羊舍進(jìn)行消 毒。試驗(yàn)羔羊舍飼，每只羔羊日均喂精料補(bǔ)充料350g，復(fù)方制劑添加量根據(jù)提取物中總黃酮 的百分含量添加，試驗(yàn)組分別按5. 0g/kg、7. 5g/kg、10. Og/kg的量添加到精料中，為保證提 取物與精料均勻地在混合，先將其預(yù)混合，而后再混至精料中，每天分兩次飼喂。分別于每 日8:30和16:30進(jìn)行等量飼喂，早上自由采食青貯玉米秸，下午自由采食花生秧(均為少 量多次添加)，自由飲水。試驗(yàn)期間由同一飼養(yǎng)員進(jìn)行飼養(yǎng)，每天清掃圈舍。試驗(yàn)期間室內(nèi) 溫度1.6 10. 5°C、室外溫度-2.0 12°C、相對(duì)濕度43. 5% 49. 7%。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析應(yīng)用SPSS11. 0統(tǒng)計(jì)軟件做數(shù)據(jù)處理，所有數(shù)據(jù)采用χ士s表示，采用t檢驗(yàn)，P <0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果如表6
表6復(fù)方制劑對(duì)羔羊體液免疫指標(biāo)的影響 結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，添加復(fù)方制劑的低、中劑量組能顯著提高IgA水平，高 劑量組則極顯著低于對(duì)照組，隨著飼喂時(shí)間的推移，低、中劑量組的IgG、IgM水平變化趨勢(shì) 相同，與對(duì)照組及高劑量組相比差異性極顯著，且均在第二周達(dá)到最大值，第四組則在第三 周達(dá)到峰值。結(jié)果提示，復(fù)方制劑對(duì)羔羊體液免疫指標(biāo)的影響差異性顯著，能提高羔羊的免 疫能力。需要注意的是，上述的參照實(shí)例對(duì)一種以潷草為主方的免疫增強(qiáng)劑及其制備方法 進(jìn)行的詳細(xì)描述，只是說(shuō)明性的而不是限定性的，也就是說(shuō)本發(fā)明不限于以上實(shí)例，還可有 多種變形，因此在本發(fā)明公開(kāi)的發(fā)明思想下的變形或修改，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明以潷草為主方的免疫增強(qiáng)劑，選用的都是最常見(jiàn)的原料，安全無(wú)毒、且價(jià)格 低，能最大限度的控制生產(chǎn)成本。特別是潷草，在我國(guó)資源豐富、價(jià)格低廉，具有營(yíng)養(yǎng)豐富、 功效多，對(duì)病原菌有抑制作用，可增進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，提高機(jī)體免疫力，有止瀉保健功能。本發(fā)明 是一種以潷草為主的免疫增強(qiáng)劑，不會(huì)使動(dòng)物產(chǎn)生抗藥性，可全部或大部分代替飼料中的 抗生素。
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權(quán)利要求
一種以葎草為主方的免疫增強(qiáng)劑，按重量份包含有效成分葎草黃酮80份和大豆黃酮20份。
2.如權(quán)利要求1所述的一種以潷草為主方的免疫增強(qiáng)劑，其特征在于5 30份有效 成分和69 94份的載體及1份表面活性劑組成。
3.如權(quán)利要求2所述的以潷草為主方的免疫增強(qiáng)劑，其特征在于載體為淀粉、無(wú)水葡 萄糖、麥芽糊精。
4.如權(quán)利要求2所述的以潷草為主方的免疫增強(qiáng)劑，其特征在于表面活性劑為十二 烷基硫酸鈉。
5.如權(quán)利要求1、2、3所述的以潷草為主方的免疫增強(qiáng)劑應(yīng)用于免疫力低下、疫苗注射 時(shí)等使用，可以對(duì)病毒性傳染病及細(xì)菌性傳染病進(jìn)行防治。
全文摘要
本發(fā)明公布了一種以葎草為主方的免疫增強(qiáng)劑。近年來(lái)，人們逐漸發(fā)現(xiàn)化學(xué)合成藥物，特別是抗生素等有毒副殘留，致使產(chǎn)生耐藥性和“三變”(癌、畸、突變)，畜牧業(yè)生產(chǎn)和人類受到嚴(yán)重的威脅。本發(fā)明提供一種以葎草為主方的免疫增強(qiáng)劑。包含的有效成分按重量份葎草黃酮80份和大豆黃酮20份。按重量份5～30份的有效成分和69～94份的載體及1份表面活性劑組成。載體為淀粉、無(wú)水葡萄糖、麥芽糊精；表面活性劑為十二烷基硫酸鈉。所述的一種以葎草為主方的免疫增強(qiáng)劑應(yīng)用于動(dòng)物免疫力低下、疫苗注射時(shí)配合使用，可以對(duì)病毒性傳染病及細(xì)菌性傳染病進(jìn)行防治。本發(fā)明為首次以葎草為主方的免疫增強(qiáng)劑。
文檔編號(hào)A61P37/04GK101904902SQ20101024011
公開(kāi)日2010年12月8日 申請(qǐng)日期2010年7月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月29日
發(fā)明者劉太宇, 劉延鑫, 劉楊, 周桂平, 李曉翠, 李夢(mèng)云, 鄧紅雨, 鄒素華, 鄭立 申請(qǐng)人:鄭州牧業(yè)工程高等專科學(xué)校